Biolstica

Tcnica que lleva a cabo la transformacin gentica, disparando el ADN transformante adherido a un vehculo fsicamente capaz de atravesar la pared celular donde se produzcan orificios tan pequeos que las clulas no pierdan su viabilidad, ni su capacidad de divisin.

La transformacin de plantas depende de la introduccin estable de los transgenes dentro del genoma vegetal. Se han desarrollado diferentes mtodos de transformacin gentica, que se pueden dividir en dos clases de acuerdo con el mecanismo utilizado para la transferencia: Sistemas de transferencia de ADN basados en vectores biolgicos. Sistemas de transferencia directa de ADN.

Aunque la transferencia gnica mediada por Agrobacterium resulta efectiva en varias especies, las plantas monocotiledneas, incluidos los principales cereales (arroz, maz y trigo) no son transformadas fcilmente por Agrobacterium tumefaciens. Estas dificultades en la transformacin de determinadas especies vegetales crean la necesidad de desarrollar otros procedimientos alternativos para la transferencia gnica. Comienza as el desarrollo de las tcnicas de transferencia gnica directa.

Y todo comenzo .
Universidad de Cornell John Sanford Edward Wolf Surge la idea de bombardear clulas vegetales con ADN Enganchndola a micropartculas metalicas( Tugsteno,Oro)

En las primeras pruebas se empleo micropartculas de Tugsteno de 0.4 micrometros Las micropartculas se proyectaron al tejido vegetal por un impulso de una explosin de plvora

En presencia de cloruro de calcio y espermidina el ADN queda adherido por interacciones no covalentes

Una vez dentro el ADN se desprende de las micropartculas debido a las modificaciones del entorno inico.

 Parmetros fsicos y qumicos que influyen en la transferencia del ADN - Mtodo de aceleracin de las micropartculas - Naturaleza qumica y fsica, densidad y volumen de las micropartculas - Naturaleza, preparacin, adherencia y concentracin del ADN - Vaco y distancias de bombardeo - Dimetro de apertura de la placa de retencin -Nmero de bombardeos

Parmetros

relacionados con la construccin gentica utilizada

- Vector, promotores, intrones, genes reporteros y genes marcadores de seleccin

Parmetros relacionados con el tejido o clulas Blanco

-Tipo y capacidad de regeneracin in vitro de los explantos

- Preparacin y condiciones de cultivo de los explantos pre- y post-bombardeo

- Requerimientos de temperatura, fotoperodo y humedad de la planta donante de explantos, y del tejido bombardeado

 La aceleracin de las micropartculas puede generarse por: - Explosin qumica de plvora seca - Descarga de helio a alta presin - Descarga de aire, CO2 o N2 comprimido - Descarga elctrica de alto voltaje y baja capacitancia o bajo voltaje y alta capacitancia - Flujo de partculas o flujo de helio a baja presin por aspersin - Flujo de helio con can de precisin

Preparacin de las muestras 1. Remocin del soporte e insercin del disco de ruptura

Preparacin de las muestras

2. Cargado de la muestra de micropartculas recubiertas de ADN

3. Ensamblaje del lanzador de microproyectiles

Mecanismo de disparo de un can impulsado por He a alta presin (PDS 1000/He) Estado del disco de ruptura,macroproyectil y malla de retencin luego del bombardeo

Y en la actualidad.