Dra.

Blanca Esthela Bravo

En los suelos tropicales los bajos niveles de fosforo no estn disponibles para el crecimiento de las plantas lo que condicionan la productividad de los cultivos; especialmente en las regiones a temperaturas altas como El Chaco, por lo que es muy poco soluble..

El problema radica en los sustratos que son fuente de fsforo y que deben pasar a hacer fuente disponible, pasando de fsforo orgnico a inorgnico, por que las plantas solo pueden tomarlos como in ortofosfato, esto se logra mediante hidrlisis por enzimas fosfatasas, pues el fsforo soluble es un nutriente limitado en un ecosistema natural..

La muestra del suelo se tomo en la provincia del Napo en la zona del Chaco, el sector de estudio abarca 1 hectrea y va a ser destinada para uso agrcola.
Provincia del Napo

IMPORTANCIA DEL FOSFORO

Luego del Nitrgeno, el Fsforo es un fertilizante esencial para el desarrollo y el crecimiento de las plantas como para microorganismos. El fsforo soluble es un nutriente limitado para produccin de biomasa en un ecosistema natural. Dependiendo del tipo de suelo, se puede decir que entre un 50-60% corresponde a la fraccin orgnica, mientras que el resto se encuentra en forma inorgnica.

Las plantas absorben el fsforo en forma inorgnica en estado soluble, pero cuando se introduce al suelo, ms del 90% de esta pasa rpidamente a formas solubles no disponibles.
De esta manera, gran parte de los fertilizantes fosfatados que se aplican no son utilizados por las plantas, sino que se almacenan en el suelo. Las plantas deben absorber el elemento del suelo, donde se encuentra en muy baja concentracin.

Estos ndices bajos del nutriente se deben a que el fsforo soluble reacciona con iones como el calcio, el hierro o aluminio que provocan su precipitacin o fijacin, disminuyendo su disponibilidad para los vegetales.

IMPORTANCIA DEL pH La disponibilidad del Fsforo depende del pH del suelo, porque solo puede ser tomado como ion ortofosfato, para esto el pH ptimo es alrededor de 6.5 pues la precipitacin de los fosfatos de aluminio y calcio disminuye. El pH del medio es importante para el crecimiento de los microorganismos, la mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro

Objetivo General
Aislar

y seleccionar microorganismos solubilizadores de fosfatos a partir de un suelo para uso agrcola de la provincia del Napo.

Objetivos Especficos
Aislar

en medios de cultivo: SMRS y un medio diseado, microorganismos solubilizadores de fosfatos a partir de suelo para uso agrcola de la provincia del Napo. Disear un medio de cultivo con una solucin de fosfato. Evaluar la actividad fosfatasa mediante la tcnica p- nitrofenilfosfato

Toma de la muestra
Se toma 5 muestras, cada una de 500 g, mediante muestreo aleatorio simple; se depositan en bolsas plsticas selladas. Se almacenan a temperatura ambiente para su transporte y luego se conservan bajo condiciones de refrigeracin a 4C hasta su procesamiento en el laboratorio.

Determinacin de pH

Se realiza la medicin de pH de las muestras de suelo por el mtodo de pasta de saturacin segn el ICONTEC.

150 rpm 35 C 72 horas

10g suelo 90 ml agua de peptona 0.5g goma arbiga 0.5g CaHPO4.2H2O

0.5 mL

0.05mL

0.05mL

0.05mL

10-1

10-2
4.5mL 4.95mL

10-4

10-6

10-8 4.95mL 4.95mL

Agua de peptona
4.95mL

30C ; 2 a 7 das
Siembra por extensin Por duplicado

SELECCIN DE CEPAS POR HALO DE SOLUBILIZACION

La identificacin macroscpica de las colonias se realiza teniendo en cuenta caractersticas como tamao, color y textura, se identifica la morfologa microscpica realizando tincin Gram y tincin azul algodn de lactofenol.

Se modifico la formulacin del medio SMRS reemplazando el fosfato triclcico por una solucin de fosfato, utilizando goma arbiga y CaHPO4.2H2O

TABLA I. Medio De SMRS

TABLA

II. Medio Diseado

REACTIVO

CANTIDAD (g/l) Glucosa 10.0 Fosfato triclcico 5.0 Cloruro de sodio 0.2 Sulfato de amonio 0.5 Sulfato de magnesio 0.3 Extracto de levadura 0.5 Cloruro de potasio 0.2 Sulfato de Hierro 0.004

REACTIVO

CANTIDAD (g/l) Glucosa 10.0 Solucin de fosfato Cloruro de sodio 0.2 Sulfato de amonio 0.5 Sulfato de magnesio 0.3 Extracto de levadura 0.5 Cloruro de potasio 0.2 Sulfato de Hierro 0.002 Sulfato de manganeso 0.004 Cloranfenicol 0.1

Se basa en el uso del sustrato p-nitro fenil fosfato el que es hidrolizado por fosfatasas para obtener HPO4. La actividad de la fosfatasa basta con ajustar el pH del medio, el sustrato es incoloro y por accin de la fosfatasa se transforma en p-nitrofenol a partir del cual se genera p-nitrofenolato que produce color amarillo.

Medir a 450 nm con un espectrofotmetro, es un indicador del nivel en el que el sustrato es hidrolizado por la fosfatasa. (Tcnica)

RESULTADOS

En un anlisis previo de fsforo en el suelo se obtuvo 159.23 mg/kg de fsforo total; 4.08 mg/kg de fsforo soluble, por lo tanto 155.15 mg/kg corresponde al fsforo insoluble lo que representa a una alta cantidad de fsforo que no puede ser aprovechado por las plantas para crecer..

1.Pesar aprox. 500 g de suelo.

2.Colocar en un recipiente apropiado y aada agua destilada en pequeas cantidades, mezclar bien despus de cada adicin hasta lograr su saturacin (sin quedar agua libre en la superficie del suelo).
3.Proceda a tomar la lectura del pH en el potencimetro, introduciendo con cuidado el electrodo.

Curva patrn de p nitro fenol Preparar una solucin de p nitro fenil de 1 umol/ml en buffer fosfato pH 7.0 a partir de esta y utilizando la ecuacin C1V1 = C2V2 Medir a 450 nm en un espectrofotmetro, colocando 3 ml del blanco y 3 ml de cada concentracin, realizar lecturas por triplicado. Realizar regresin lineal donde r > 0.9. Concentraciones para la curva de calibracin 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0 mol/ml