Pruebas Bioqumicas

Conjunto de pruebas que ponen de manifiestos las caractersticas bioqumicas de las bacterias permitiendo identificar gneros y especies. La identificacin primaria de las bacterias consiste en la determinacin de su morfologa microscpica (GRAM y forma) y la morfologa macroscpica o colonial. En este punto somos capaces de poder identificar el gnero bacteriano, pero recordemos que el reporte final del aislamiento de una bacteria patgena siempre debe incluir la especie. Las pruebas bioqumicas nos permiten reconocer especies bacterianas. La seleccin de las pruebas bioqumicas a utilizar depender del tipo de bacterias aislada, en el caso de los GRAM positivos la aplicacin de tres pruebas pueden resultar suficientes en la identificacin de algunas cepas de estafilococos, mientras que para los GRAM negativos se requiere un nmero mayor de pruebas para identificar una enterobacteria al nivel de especie.

Prueba de la Oxidasa
El objetivo de la prueba Oxidasa es buscar la presencia de la enzima Citocromo C oxidasa. Se trata de un enzima que oxida el citocromo C de la cadenatransportadora de e-. Este se detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la citocromo C oxidasa. En estado reducido es incolora, pero cuando se oxida vira a prpura. Esta prueba da como resultado la presencia de E. coli () P. aeruginosa(+)

Procedimiento
Con un pequeo papel de filtro aadimos reactivo de Kovacs, lo impregnamos y a partir del tubo con la bacteria problema tomamos un poco con el asa de platino y ponemos en el papel. Tras unos 30 segundos, observamos si ha ocurrido algn cambio. Las bacterias que dan positivo a esta prueba tienen generalmente un ciclo respiratorio oxidativo. Se considera positiva esta prueba cuando toma un color prpura la muestra.

PRUEBA DE LA CUAGULASA.
*Principio._ Se basa en la capacidad de las bacterias de coagular el plasma por efecto de la enzima coagulasa. Se utiliza de manera especifica para identificar especies dentro del grupo de los staphylococcus: *Staphyococcus subesp. Anaerobious, S. aureus subesp. Aureus, S. Schleiferi subesp. Schleiferi coagulans, todos son positivos para la estafilocoagulasa (coagulasa libre, prueba en tubo). *S. aureus subesp. aureus, S. lugdunensis y S. schleiferi subesp. schleiferi todos son positivos para el factor de agregacion (coagulasa ligada, prueba en portaobjetos). Un resultado positivo de la prueba de coagulasa constituye un diagnostico definitivo para la identificacion de S. aureus y con frecuencia se utiliza para indicar la virulencia o patogenicidad.

BIOQUIMICA
La estafilocoagulasa es excretada al medio extracelular por el S. aureus),es relativamente estable al calor y se inactiva con facilidad por las enzimas proteolticas (proteasas). In vitro, la coagulasa aumenta la velocidad de coagulacin, del plasma, lo que produce la formacin de un coagulo de fibrina. La coagulasa ligada se detecta en la prueba en portaobjetos, la prueba de agregacin del plasma. La coagulasa ligada o el factor de agregacin (CF) es responsable de la absorcin del fibringeno y lo altera del modo tal que precipita sobre los estafilococos y causa la agregacin de estos, lo que produce la aglutinacin rpida de las clulas. El factor de agregacin convierte el fibringeno en fibrina de manera directa.

Coagulasa libre._ la prueba de la coagulasa en tubo detecta ambas coagulasas, la libre y la ligada, siendo la nica distincin entre ambas la antignica. La coagulasa libre extracelular reacciona con una sustancia en el plasma denominado factor de agregacin de la coagulasa (CRF), una sustancia termoestable similar a la trombina. Este complejo reacciona de manera indirecta convirtiendo el fibringeno en fibrina. La diferencia principal es que el CRF que reacciona con la coagulasa no requiere iones de calcio para formar un coagulo y es insensible a la heparina.


I.

Interpertacion
Procedimiento en portaobjeto
I. POSITIVO (+) Marcada agregacion dentro de los 5-20 seg. S. aureus cepa virulenta Positivo Tardio Cualquier agrefacion o granulacion despues de 20 seg y hasta 1 mnuto S. Aureus cepa virulenta Dudoso Cualquier granulacion despues de 1 minuto Repetir si el resultado es identico, confirmar por prueba en tubo antes de informar el resultado

II.

III.

IV. Negativo (-) Sin cambios; la suspension permanece homognea Confirmar por prueba de tubo antes de informar el resultado S. epidermis, S. saprphyticus u otro microorganismo

Procedimiento en tubo
I. Fomacion de coagulo o filamentos de fibrina separados Completo: Coagulo en todo el tubo Parcial: El cuagulo no se extiende a todo lo largo de la columna liquida. Cualquier grado de coagulacion es considerado positivo

II.

Negativo (-)
Ausencia de formacion del coagulo, la suspension permanece homogenea (igual que el tubo inoculado) S. espidermis, S. saprophyticus u otro microorganismo

PRUEBAS DE CATALASA Y PEROXIDA

Principio de esta prueba es probar la presencia de las enzimas catalasa y peroxidasa. *Estas enzimas son considerada hidroperoxidasas. *El centro activo de la catalasa son un tipo de protenas hemo denominadas citocromos. *El H2O2 (perxido de hidrogeno) si se acumula es toxico para las bacterias y produce su muerte. La catalasa puede descomponer el perxido de hidrogeno u oxidar sustratos secundarios pero no tiene accin contra otros perxidos. *La descomposicin del H2O2 solo puede darse por la presencia de dos enzimas la catalasa y la peroxidasa. Para la descomposicin cataltica esta involucrada la reduccin del hierro trivalente, a su forma reducida el hierro bivalente, y la reoxidacin de este ultimo a oxigeno. La catalasa puede funcionar de dos modos distintos: En el catabolismo del perxido de oxigeno o en la oxidacin peroxidativa de pequeos sustratos como el alcohol etilico, el alcohol metilico, o el mercurio elemental.

1)La prueba de la catalasa es utilizada para diferenciar principalmente entre los gneros: *Streptococcus (-) entre los Micrococcus (+) o de sthaphylococcus (V+) *Bacillus (+) de los Clostridium (V-) *Listeria Monocytogenes (+), especies de Kurthia (+), Corynebacterium (+) de otros Microorganismos que pueden ser similares desde el punto de vista morfologico por ejemplo: Especies de Lactobacillus (V-), especies de Enterococcus (V-) y Streptococcus del grupo B (-). 2)La diferenciacin de especies de microorganismos: *Gram Positivos por ejemplo: Aerococcus Urinae (+) de Aerococcus Viridans (-) *Gram Negativos por ejemplo: Moraxella Bovis (variable) y especies de Kingella (-) de otras especies de Moraxella (+)

PRUEBA DE LA CATALASA
Para esta prueba los reactivos que se utilizan son: *Perxido de Hidrogeno al 30% *Buffer fosfato M/15, pH 7.0 *Tween 80, 10% Algunos procedimientos para las pruebas de catalasa rutinaria a temperatura ambiente (22-25 C) El primero es el mtodo en portaobjetos, este es el mas recomendable El otro consiste es el mtodo en tubo. Tambin existen las pruebas de catalasa para la diferenciacin de Mycobacterium. Para esta prueba existen tres mtodos: Prueba de la mancha (mtodo de la gota) Prueba semicuantitativa Prueba de la catalasa termoestable

PRUEBA DE LA CATALASA INTERPRETACION

*Prueba coagulasa rutinaria: 1._Positivo (+), burbujeo inmediato, observado con facilidad: formacin de O2 2._Negativa (-), ausencia de burbujas, ausencia de O2 *Pruebas de catalasa para mico bacterias: 1._ prueba de la mancha: positivo (+), aparicin de burbujas alrededor de las colonias dentro de 4-5 seg. Algunas colonias pueden ser positivas y otras negativas. Rpido: fuertemente positivo (+) Lento: positivo dbil (+) 2._ prueba semicuantitativa: medicion de altura de columna de burbujas >45-50 mm. fuertemente positivo (+) 20-50 mm. positivo debil (+) a positivo (+) < 20mm. negativo (-) 3._ Catalasa termoestable._ observar el burbujeo inmediato (liberacion de gas), los tubos negativos deberan de mantenerse 20 min. para poder ser reportados como negativos, verificar de manera cuidadosa ya que unas cuantas burbujas da resultado positivo.

PRUEBA DE CITRATO

Principio La prueba de citrato se utiliza para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar el citrato como nica fuente de carbono para el metabolismo y el crecimiento con alcalinidad resultante. Objetivo Ayuda a diferenciar entre gneros, en especial entre los miembros de la familia Enterobacteriaceae , de microorganismos Gramnegativos relacionados y de bacterias no fermentadoras. Escherichia coli, por lo general (-) y especies de Shigella (-) Edwardsiella (-) de Salmonella (por lo general +) Serratia proteamaculans (+) de Yersinia Pseudotuberculosis (-) y Yersinia enterocolitica ( por lo general -)

Ayuda a la diferenciacion de especies Leminorella grimontii (+) de Leminorella richardi (-) Acidovorax delafieldii (+) de A. facilis (-) y A. temperans ()

Medio utilizado
Citrato de Simmons

Interpretacin
Positivo (+): Crecimiento con un intenso color azul en el pico de la flauta Negativo (-): Ausencia de crecimiento y ningn cambio en el color (verde)

PRUEBA DE UREASA

Principio:
Determinar la capacidad de un microorganismo de hidrolizar la urea en dos molculas de amonaco por la accin de la enzima ureasa, con la resultante alcalinidad.

Objetivo:

Desde un principio esta actividad enzimtica fue caracterstica de todas las especies Proteus y se le utiliz sobre todo para diferenciar los microorganismos Proteus rpidamente, ureasa positivos de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae; los otros gneros pueden dar una reaccin positiva tarda Ayuda a la diferenciacion de especies: Enterobacter dissolvens (+), E. gergoviae (+), E. hormaechae, ( V. por lo comn +) E. cloacae (V) de otras especies de Enterobacter (-) Ayudar a la identificacion de
1. 2. 3. 4. Vibrio Parahaemolyticus ureasa variable, por lo comn + Helicobacter cinaedi rpidamente ureasa + Especies de Mycobacterium (V) Especies de Cryptococcus (levaduras) (+, 1-2 dias)

Bioqumica

La urea es hidrolizada por una enzima llamada ureasa para dar dos molculas de amonaco. La ureasa es una importante enzima relacionada con la descomposicin de los compuestos orgnicos.

Medio utilizado Urea de Christensen

Se utiliza para detectar la actividad de ureasa por todos los microorganismos Proteus rpidamente ureasa positivos. Las especies de Enterobacter pueden utilizar la urea como nica fuente de nitrgeno. El medio de Christensen elimina la necesidad de que un microorganismo utilice el amoniaco como su nica fuente de nitrgeno y permite la deteccin de la hidrlisis de la urea por otros miembros de la familia Enterobacteriaceae cuya actividad de ureasa es leve y tarda . La velocidad de la hidrlisis de la urea diferencia los microorganismos de la subfamilia Proteeae que producen ureasa rdamente , los microorganismos ureasa positivo tardos como las especies de Klebsiella o de Enterobacter varan en su velocidad de hidrlisis de la urea.

Interpretacin
Positivo (+): Color rosa-rojo (rojo-violeta) intenso en el pico de flauta. El color puede penetrar en el interior del agar; la extensin del color indica la velocidad de la hidrlisis de la urea a) Grado de la hidrlisis 4+; todo el tubo rosa- rojo 2+; pico de flauta rosa, fondo sin cambios. + dbil; la parte superior del pico de la flauta rosa, el resto sin cambios.

b)
c)

Positivo rpido: 1-6 horas para todos los microorganismos Proteeae positivos.
Positivo tardo: 24 horas a 6 das de incubacion (Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter)

Negativo (-): Sin cambios de color (color piel a amarillo plido)

PRUEBA DE PRINCIPIO MOVILIDAD A. Determinar si un microorganismo es mvil o inmvil

B. Las bacterias son mviles por medio de flagelos. Los flagelos aparecen sobre todo entre los bacilos; sin embargo, unas pocas formas cocoides son mviles. Las bacterias mviles pueden contener un nico flagelo o muchos flagelos y su ubicacin vara segn las especias bacterianas y las condiciones de cultivo. En ocasiones, las bacterias mviles producen variantes inmviles que parecen estables y en raras oportunidades revierten a las formas mviles. Los microorganismos inmviles carecen de flagelos. OBJETIVO A. Incubacin: 37C 1.- Ayudar a diferenciar entre gneros a) Enterobacter de klebsiella (-) b)Vibrio (por lo comn +) de Actinobacillus (-) c)Aeromonas media (-) y Aeromonas salmonicida (-) de otras especies de Aeromonas y Plesiomonas shigelloides (+)

2.- Ayudar a diferenciar entre especies a) Escherichia coli aergena (+) de la variedad anaergena (inactiva) de E. coli b) Bacillus anthracis (-) y B. mycoides (-) de otras especies de bacillus c) Bordetella bronchiseptica (+) y B. avium (+) de B. parapertussis (-) y B. Pertussis B. Incubacin: 22-25C (temperatura ambiente) 1.- Ayudar a diferenciacin entre gneros: Listeria monocytogenes (+) de especies de corynebacterium (por lo comn -) 2.- Ayudar a la diferenciacion de especies a) Corynebacterium aquaticum (+)y C. matruchotti (+) de otras especies de corynebacterium (por lo comn variable b) Yersinia enterocolitica (+) d otras especies de Yersinia (-) MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS MEDIO PARA LA PRUEBA DE MOVILIDAD (SEMISLIDO) MIO o SIM

 INTERPRETACION MACROSCOPICA A. Medio para la movilidad 1.- Resultado positivo(mvil): microorganismos mviles que migran desde la lnea de siembra y difunden en el medio, lo que produce turbidez. Pueden mostrar estras de crecimiento velloso 2.- Resultado negativo (inmvil): crecimiento bacteriano acentuado a la largo de la lnea de siembra; el medio que la rodea permanece claro 3.- Medio de control(no inoculado), Medio control: sin crecimiento, el medio permanece claro e incolora

PRUEBA DE INDOL
PRINCIPIO Determinar la cantidad de un microorganismo para producir indol a partir de triptfano. OBJETIVO A. Ayudar a la diferenciacin entre gneros 1.- Separacin se Escherichia coli (+) de los miembros de los gneros klebsiella (por lo comn -), Enterobacter (V-), Hafnia (-), Serratia (V-) y una especie de Pantoea, Pagglomerans (-) 2.- Cardiobacterium hominis (+ dbil) de Eikenella corrodens (-), de especies de kingella (-) y de suttonella indologenes (-) B. Ayudar en la difernciacin de especies junto con otras pruebas bioqumicas 1.- Paenibacillus alvei (+) de otras especies de bacilos 2.- Escherichia coli (+) , E. hermanii (+) y E. fergusonii (+) de E. vulneris (-) y E. blattae (-)

 MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS MIO, SIM INTERPRETACION A. Positivo (+): en segundos, aparece un anillo rojo (fucsia brillante) en la interface del medio con la porcin inferior de la fase alcohlica, sobre el medio. B. Negativo (-): no hay ningn desarrollo de color en la capa de alcohol o parece un anillo turbio C. Variable (+,-): un color anaranjado en la superficie del medio, debido al escatol, un compuesto metilado que puede ser un precursor de formacin del indol.

Prueba de Voges-Proskauer

Principio
Se usa para determinar la capacidad de algunos microorganismos para producir un producto final neutro, acetil-metilcarbinol, a partir de la fermentacin de la glucosa

Objetivo
1.-Ayuda a la diferenciacin de gneros: Klebsiella pneumoniae subesp. pneumoniae (+) y Enterobacter (por lo comn +) de Escherichia coli (-). Staphylococcus (por lo comun +) de Micrococcus (-) 2.-Ayuda a la diferenciacin de especies: Klebsiella pneumoniae subesp. pneumoniae (+), K. oxytoca (+),K.planticola (+) y K. terrigena (+) de K. pneumoniae subesp. Ozaenae (-) y K.pneumoniae subesp. Rhinoscleromatis (-) 3.- Ayuda a la identificacin de: Hafnia alvei: 22-25C(+);37C(V) Yersinia enterocolitica: 22-25C(V, por lo comn +), 37C(-)

Listeria monocytogenes(20) a.- Reactivos Coblentz (+)

b.- Reactivo OMeara (-)

4.- Ambos: rojo de metilo (MR+) y Voges- Proskauer(VP+) Todas las especies de Listeria (MR+/VP+) Brochothrix campestris y B. thermosphacta (ambos MR+/vp+). Medio Utilizado: Medio de Clark y Lubs modificado (Caldo MR/VP) El medio MR/VP comercial es una modificacin del medio de Clark y Lubs. Clark y Lubs utilizaron una concentracin al 1% de peptona y glucosa, pero una concentracin de no menos de 0.5% es el mnimo satisfactorio, de modo que la concentracin de iones de hidrgeno limitante no es alcanzada por los microorganismos rojo de metilo negativos. Una concentracin de 0.5% de peptona otorga menos color al medio, lo que facilita la interpretacin de la reaccin.

Agregar los reactivos de Voges-Proskauer directamente a una alcuota incubada antes de intentar realizar la interpretacin. Reactivos empleados: 3 opciones A.- Reactivos VP de Barritt (2.5ml) B.-Reactivos VP de Coblentz (2ml) C.- Reactivo VP nico de OMeara(modificado) (1ml)

Interpretacin: VP positivo (+): color rosado-rojo en la superficie del medio

(acetona presente).

VP negativo (-): color amarillo en la superficie del medio

(igual color que el reactivo). Puede formarse un color cobrizo, pero es un resultado negativo (debido a la reaccin de los reactivos cuando se mezclan)

NEGATIVO

Positivo

Prueba de Rojo de Metilo

Principio

Probar la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los productos finales cidos a partir de la fermentacin de la glucosa y para vencer la capacidad buffer del sistema. Esta es una prueba cuantitativa para la produccin del cido (determinacin de pH); algunos microorganismos producen mas cidos que otros.

Objetivo
Los resultados de rojo de metilo son caractersticas valiosas para la identificacin de especies bacterianas que producen cidos fuertes a partir de la glucosa A.-Ayuda a la diferenciacin entre gneros o a la diferenciacin de especies dentro de un gnero de la familia Enterobacteriacaea. La prueba de rojo de metilo es parte de la batera de pruebas del IMViV (indol-rojo de metilo-Voges-Proskauer-citrato). 1. Escherichia coli (MR+) de Enterobacter aerogenes (MR-) y Enterobacter cloacae (MR-) 2. Especies de Yersinia (V, variable, por lo comn +) de otros bacilos gramnegativos no estricos (MR-). 3. Diferenciar Edwardsiella ictaluri (MR-) de E. hoshinae (MR+) y E. tarda del biogrupo 1 (MR+)

4. Diferenciar Leminorella richardii (MR-) de L.grimontii(MR+). 5. Diferenciar Klebsiella oxytoca y K. pneumoniae subesp. pneumoniae (ambas V, por lo comn MR-) y K. terrigena (V) de otras especies o subespecies de Klebsiella (MR+). 6.Budvicia aquatica (MR+) de otros miembros de la familia Enterobacteriacaea con resultados KIA/TSI cido/cido, HS2. B.- Otros microorganismos que son rojo de metilo positivos. 1. Aerococcus urinae (MR+) de A. viridans (MR-) 2.Todas las especies de Shigella (MR+) 3. Ewingella americana (MR+) 4. Especies de Kluyvera (MR+) 5. Leclercia adecarboxylata (MR+) 6. Especies de Citrobacter (MR+) 7. Buttiauxella agrestis (MR+) C.- Las pruebas de rojo de metilo y Voges-Proskauer se utilizan para ayudar en la identificacin de: 1. Aeromonas hydrophila (MR+/VP+) 2. Aeromonas salmonicida subesp.masoucida(MR+/VP+) 3. Aeromonas veronii (MR+/VP+) 4. Especies de Listeria (MR+/VP+) 5. Vibrio metschnikovii(MR+/VP+)

Medio de cultivo empleado:

Medio de Clark y Lubs (Caldo rojo de metilo/voges-proskauer, clado MR/VP) Rectivo utilizado: Indicador de pH Rojo de metilo

Interpretacin:
MR positivo (+):el cultivo es suficientemente cido para permitir que el reactivo rojo de metilo permanezca con un color distintivo rojo brillante, estable (pH4.4), en la superficie del medio. Los microorganismos MR-positivos producen mas cidos con un pH resultante terminal bajo. Ellos vencen el sistema buffer fosfato y mantienen una acidez en el medio (pH 4.2 o menor)

MR negativo (-):color amarillo (pH6) en la superficie del medio

Reaccin tarda(+/-):el color naranja rojizo indica que el microorganismo produce menos cido a partir del sustrato de prueba. Continuar la incubacin hasta 4 das y repetir la prueba

Fermentacin de Hidratos de Carbono

Principio: Determinar la capacidad de un microrganismo para fermentar un hidrato de carbono especifico incorporado en un medio basal y producir acido o acido con gas visible Objetivo: Los patrones de fermentacin por lo general son caractersticos para grupos bacterianos especficos todos enterobacterias, Ayuda en la diferenciacin entre gneros Proteus penneri (xilosa A (acido)} de especies de Providencia (xilosa -)

Los patrones de utilizacin de los hidratos de carbono pueden ayudar a la diferenciacin de muchas especies Grampositivos, Gramnegativos y enterobacteriaceae Staphilococcus aureus, Alcaligenes xylosondans, Kingella kingae (maltosa A) , Escherichia fegusonii, Haemophilus ducreyi (glucosa -) Proteus vulgaris entre otras.

Medio Utilizado
Caldo Rojo de Fenol con campana de Durham

Interpretacin:
1. Positivo (A/F) Acido: color amarillo, pH 6,8. Produccin de gas variable (1) Positivo para el gas (a) Aergeno: CO2+h2 presentes. (b) Burbujas de gas presentes en el tubo de Durham insertado o medio completamente desplazado por el gas que deja una porcin incolora en el tubo de Durham. (c) Una nica burbuja en el tubo de Durham es significativa; registrar como produccin de gas (d) Registrar como produccin de acido y gas

(2) Negativo para el gas (a) Anaergeno (b) Ausencia de burbujas de gas y el medio en los tubos de Durham insertados permanece amarillo (c) Registrar como produccin de acido solamente 2. Tardo: color anaranjado. Si es inseguro, comparar con un tubo no inoculado y reincubar 3. Negativo a. color rosa rojizo b. peptonas con la resultante alcalinidad, pH 8,4.

(-)

(+)

Lactosa Glucosa Sacarosa Kligler y TSI

PRINCIPIO: Determinar la capacidad de un microrganismo de para atacar un hidrato de carbono especifico en un medio de desarrollo basal con produccin de gas o no junto con la determinacin de la posible produccin de acido sulfhdrico OBJETIVO: La produccin de H S y/o los patrones de fermentacin por general son caractersticas particulares de grupos bacterianos especficos genero y especies sobre todo en la familia enterobacteriaceae

Medio Utilizado: TSI (triple azcar hierro) y Klinger

Fermenten o no glucosa. Fermenten o no lactosa o sacarosa. Produzcan o no cido sulfhdrico. Produzcan o no gas. Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son: Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio permanecer de color rojo. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su superficie volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuar de color rojo. Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales de hierro), se presentar un ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentacin de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de gas.

TSI Gracias a su composicin es uno de los medio de cultivo ms empleados para la diferenciacin de enterobacterias segn:
1. 2. 3. 4.

1.

2.

3.

4.

*en el kliger se obtiene los mismos resultados difiere en la ausencia de sacarosa

Resultados positivos por ruptura del medio por gas y viraje por cambio de pH

Prueba de acido sulfhdrico

Principio: determinar si se ha liberado enzimticamente acido sulfhdrico gaseoso a partir de los aminocidos azufrados para producir una reaccin coloreada visible, negra en presencia de un sistema indicador de acido sulfhdrico Objetivo: Ayuda a la diferenciacin de especies e identificacin Bioqumica: La proteolisis de las protenas produce aminocidos individuales; ciertas bacterias heterotrficas pueden liberar enzimticamente el azufre de los diversos aminocidos azufrados produciendo acido sulfhdrico gaseoso

Medio utilizado: KIA, TSI. SIM Interpretacin: A. Positivo(+): Cualquier ennegrecimiento del medio. 1. a lo largo de la lnea de siembra. El ennegrecimiento se ve primero donde la fermentacin es mxima, a lo largo de la lnea de siembra

Lisina
Determina la capacidad enzimtica de un microrganismo de descarboxilar un aminocido para formar una amina con la resultante alcalina.

Lisina descarboxilasa.1.-ayuda a la diferenciacin entre gneros. Edwardsiella(+) y salmonella (por lo comn +) de las especies de citrobacter(-). escherichia coli (+) de las especies de shigella(-).
2.- Ayuda a la diferenciacin de las especias. Enterobacter aerogenesis(+) gergoviae(+), Hafnia alvei(+) alvei del biogrupo 1(+) de las otras especies de Enterobacter(-) y Pantoea agglomerans(-). Pseudomonas cepacia(+) y pseudoalcalidenes(+) Klebsiella pneumoniae subesp. rhinoscleromatis(-) y ozaenae(variable) Burkholderia cepacia(+), gladioli(-), mallei(-) y pseudomallei(-).

Lisina Hierro Agar

-Medio de cultivo utilizado para diferenciar microrganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilacin /desaminacin de la lisina y en la produccin de cido sulfhdrico. Fraccionar en cantidades de 4ml.(en tubos de prueba 13*100mm);extremo inferior profundo, con una aguja de inoculacin, estriar el pico de flauta corto. y punzar el fondo del medio 2 veces, encubar de 18 a 24 hrs a 35c Resultados 1-Decarboxilacin de la lisina: -Prueba Positiva: Pico violeta /fondo violeta. -Prueba Negativa: Pico violeta /fondo amarillo. 2-Desaminacin de la lisina: -Pico rojizo /fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp. 3-Produccindecidosulfhdrico: -Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico y fondo)

Ornitina descarboxilasa
1.-Ayuda a la diferenciacin entre gneros. Enterobacter(por lo comn +) de Klebsiella(-). Morganella morganii de los biogrupos 1 y 2(+) de especies de Providencia(-). 2.-ayuda a la diferenciacin de las especies.

Salmonella typhi(-), y Salmonella choleraesuis serovariedad gallinarum(-, 24hr)(30) de otras especies de Salmonella(+).
Shigella sonnei(+) de otras especies de Shigella(-). Proteus mirabilis(+) de otra especies de Proteus(-). Aeromonas veronii(+) de las otra especies de Aeromonas(-) aisladas con mas frecuencia.

MIO Medio
Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su movilidad, actividad de Ornitina descarboxilasa y produccin de indol.

Resultados
1-Movilidad: Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra. Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra. 2-Ornitina descarboxilasa: Resultado positivo: color prpura. Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio. 3-Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de Ornitina. Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador. Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.

CASO CLINICO

http://www.nietoeditores.com.mx/down load/med%20interna/septiembreoctubre%202007/Med%20Int-44757.pdf