MICROBIOLOGIA TEMA: REOVIRIDAE PROFESOR: ALFONSO GUZMAN GRUPO: H

ITZEL GUADALUPE CHANONA DE LA CRUZ MEDICO CIRUJANO

REOVIRIDAE
El nombre de esta familia se debe a que no se asociaban a enfermedades conocidas y se aislaban de l aparato respiratorio y gastrointestinal.

Reovirus

Respiratory enteric orphan viruses.

El rotavirus es el reovirus con mas importancia en salud publica.

1973, Australia. Ruth Bishop y colaboradores descubren rotavirus del grupo A. Detectan partculas virales en biopsias de intestino delgado de nios con diarrea severa no bacteriana.

Los rotavirus son conocidos como el principal agente etiolgico de las gastroenteritis virales en cras de especies animales , incluido el hombre.

Descubrimiento

Mortalidad

Morbilidad

Se estima que en los pases en desarrollo cada ao causa la muerte de 3.5 millones de nios en edad preescolar.

Clasificacin

Caractersticas principales
Las partculas virales tienen una geometra icosaedrica.

No estn envueltos por una membrana lipdica.

Contienen un genoma compuesto por segmentos de RNA de doble cadena.

El RNA genmico no es infeccioso per se en ausencia de las protenas virales.

La partcula viral contiene todas las enzimas necesarias para la produccin de sus mRNAs

La replicacin viral se lleva acabo exclusivamente en el citoplasma de la clula.

Estructura de las partculas virales

Tienen una cpside organizada en dos o tres capas concntricas de protenas. Pueden tener un dimetro de 60 a 80 nm. Los virus pertenecientes a los gneros Aquareovirus, Cipovirus, Fijivirus, Ortoreovirua y Orizavirus se distinguen por tener estructuras tipo torretas, en la capa mas interna, formadas por pentmeros de una protena con actividad de guanilil-metiltransferasa. La capa interna de protenas de los gneros Rotavirus, Orbivirus, Coltivirus, Fitoreovirus y Seadornavirus, no presentan estas torretas y tienen apariencia lisa.

Protenas
Las partculas virales estn formados por:

6 a 9 protenas diferentes llamadas protenas Estructurales. Ordenadas en 2 o 3 capas rodeando el genoma viral. Algunas tienen actividad enzimtica RNA polimerasa y otras enzimas (sntesis de los RNAm virales y formacin de estructura de CAP) Forman la estructura del virin entre 80 y 85 % del peso del virin. Tambin son codificadas protenas no estructurales importantes en la replicacin del virus dentro de la clula.

Protenas

Lpidos
Solo en el caso de los Coltivirus, Rotavirus y Orbivirus, existe Intracelularmente una envoltura lipdica, que se pierde durante la maduracin de la partcula viral virones infecciosos.

Estructura y organizacin del genoma

Genoma formado por: 10, 11 o 12 segmentos de RNAdc dependiendo el gnero.

RNA representa del 15 al 20% del peso total del virin.

La hebra positiva de cada duplex equivale al mRNA, tiene en su extremos 5 una estructura tipo CAP. Ninguna de las dos hebras de RNA estn poliA en su extremo 3. Cada segmento de RNA es monocistrnico. Las protenas estn codificadas solamente en la hebra positiva del RNAdc.

Pasos de la infeccin del virus en la clula

1. Fijacin, penetracin y prdida de las envolturas. Unin de la partcula viral a una clula. y la entrada del virus al citoplasma. Se pierde la capa externa de protenas dando lugar a una partcula transcripcionalmente activa, donde se llevan acabo la sntesis de protenas virales y sirven RNA(+) 2. Transcripcin y traduccin.

Pasos de la infeccin del virus en la clula

Unin de la partcula viral a la superficie celular Entrada del virus al citoplasma Da lugar a una partcula con capacidad de sintetizar los mRNAs virales.

Los RNAs sintetizados salen a travs de canales.

La partcula viral pierde la capa mas externa de protenas.

Se traducen para sintetizar las protenas virales (mRNA) Sirven de molde ARN(+) para la hebra negativa RNA(-)

Genoma viral no se expone al citoplasma celular.

Estas partculas no se desensamblan durante la transcripcin.

Pasos de la infeccin del virus en la clula

Durante la replicacin se forman viroplasmas Ocurre la replicacin del genoma del virus
Involucra la sntesis de RNAs(-) para dar lugar a ARNdc genmico.

Virus de estudio: Reovirus, orbivirus y rotavirus

La capa mas interna de protenas se ensambla y da lugar a una cpside vaca.

El RNA se introduce a travs de los canales localizados en los 12 vrtices de los ejes.

El ARN polimerasa sintetiza la hebra complementaria el RNA (-) para dar lugar a ARNdc

Transcripcin y traduccin

Tienen secuencias terminales que sirven como seales de reconocimiento para la ARN polimerasa

Los segmentos de RNAdc se encapsidan de forma equimolar

Pasos de la infeccin del virus en la clula

4. Ensamblaje. Ms protenas son sintetizadas y eventualmente las cpsides inmaduras yeman hacia el lumen del retculo endoplsmico. Al hacer esto, adquieren una envoltura transitoria que se pierde a medida que maduran. Esta es una caracterstica peculiar de los rotavirus. 4. liberacin. Ocurre por lisis celular.

Gnero Rotavirus
Su clasificacin depende de sus caractersticas antignicas. Se han descrito 6 grupos del A al F. Los virus A, B y C se han encontrado tanto en animales como humanos mientras que D, E y F se han aislado solo en animales. El grupo A es el de mayor relevancia desde el punto de vista mdico y veterinario.

Existen antgenos comunes entre cepas de un mismo grupo, pero no entre grupos diferentes.

Clasificacin
Rotavirus del grupo A

Serotipos G (glicoprotena)

VP7

Serotipos P (por ser sensible a proteasas)

Contiene determinantes antignicos blancos importantes del sistema inmune humoral y celular

VP4

VP7 (14) G1 a G6, G8 a G10, G12 VP4 (14) P1 a P5, P7, P8, P11, P12 En humanos.

Los Ac neutralizan la infectividad del virus y su especificidad se utiliza para clasificarlos en serotipos.

Se clasifican en 4 subgrupos con base en presencia o ausencia de determinantes antignicos en la protena VP6

Subgrupo I epitopo I Subgrupo II epitopoII Subgrupo I+IIambos Subgrupo noI-noII ninguno

VP6 tiene determinantes antignicos de grupo (grupo A).

Caractersticas de la partcula viral

Existen tres tipos de partculas virales: i) La partcula que tiene 3 capas de protenas TLP ii) La partcula con 2 capas proteicas DLP iii) La partcula con una sola capa de protenas nucleocpside.

Densidad TLP: 1.36 g/cm3 DLP: 1.38 g/cm3 Nucleocpsides: 1.44 g/cm3

Permite separarlas mediante gradientes de cloruro de sodio

Tiene diferentes Coeficientes de Sedimentacion En sacarosa.

Por su tamao pueden ser separadas mediante electroforesis en geles de agarosa.

Los rotavirus son partculas estables. Viabilidad en un rango de pH de 3 a 9 Estables por meses a 4 grados C y aun a 20 grados C en presencia de calcio. Mantiene su infectividad ante solventes orgnicos: ter, cloroformo o fren. Pierde su infectividad con desinfectantes como: formalina, cloro, betapropiolactona y etanol al 95%.

Estructura de la partcula viral

Tienen 75 nm de dimetro Geometra icosaedrica con simetra de T=13/. El virin maduro tiene 3 capas de protenas que envuelven el genoma.

Capa externa formada por 780 molculas de VP7. Apariencia lisa Se proyectan 60 espculas de ~12 nm de longitud (dmeros de VP4). La base de estos dmeros interacciona con VP6. Capa intermedia Formada por 260 trmeros de VP6. Constituye el 50% de la protena total. Capa interna (nucleocapside) Formada por 60 dmeros de la protena VP2 La VP2 envuelve al genoma viral (formado por 11 segmentos de RNAdc). En el interior de la nucleocapside se encuentran 12 copias de VP1 y VP3.

Contiene 132 canales acuosos, clasificados en 3 tipos (I,II,II). Estos canales atraviesan la partcula viral.

Estructura y organizacin del genoma

El genoma de los rotavirus esta constituido por 11 segmentos de RNAdc (600 pb-3300pb) El genoma viral desnudo no es infeccioso, necesita para transcribirse de un RNA polimerasa que puede utilizar RNAdc como templado. Tienen en los extremos 5 y 3 secuencias que no se traducen. La longitud de secuencias es variable: 9 a 49 nucletidos en 5 y entre 17 y 182 nucletidos en 3. Los 1ros 10 nucletidos del 5 y los ltimos 8 del 3, estn conservados en los 11 genes. Se han identificado 2 regiones adicionales que funcionan como reguladores positivos de las sntesis virales en la transcripcin.

Protenas virales

Estructurales: VP1 a VP4, VP5 y VP6 No estructurales: NSP1 a NSP6

Protenas de la capa externa VP7 glicoprotena de 326 aminocidos, codificada por el segmento de RNA 7, 8 o 9. VP4 protena de 776 aminocidos codificada por el segmento 4 de RNA. A travs de ella los virus se unen inicialmente a la clula hospedera. Protenas de la capa intermedia VP6 codificada por el segmento 6 de RNA, constituye la capa intermedia del virus. Formada por 397 aminocidos. Se ensambla como trmeros y tiene papel estructural importante. VP1 la ARN polimerasa del virus. Depende de RNAdc para su actividad. Formada por 1088 aminocidos.

12 --------- NSP6

Protenas virales
VP2 producto del gene 2, de 881 aminocidos. La protena mas abundante de la nucleocapside y constituye la capa mas interna. VP3 protena de 835 aminocidos, codificada por el segmento 3 de RNA. Es bsica y minoritaria, se encuentra en 12 copias por virin. Protenas no estructurales Codificadas por los segmentos 5 (NSP1), 7 (NSP3), 8 (NSP2), 10 (NSP4) y 11 (NSP5 y NSP6). Se sintetizan en el citoplasma de la clula durante la infeccin. Funciones relacionadas con: Control de sntesis de protenas (virales y celulares). Replicacin del genoma Empaquetamiento de los genes virales. Maduracin de la partcula viral.

12 --------- NSP6

Pasos de la infeccin del virus a la clula

Patognesis
Los rotavirus afectan principalmente a los enterocitos maduros de las vellosidades del intestino delgado. Se ha involucrado sitios extraintestinales en las infecciones por rotavirus: tracto respiratorio, hgado, rin, ndulos linfticos y SNC. La diarrea causado por otro virus es consecuencia de la combinacin de varios factores: 1.- La replicacin del virus destruye los enterocitos. 2.- reemplazo de las clulas epiteliales maduras con los enterocitos inmaduros de las criptas intestinales. 3.- La diarrea es causada por la protena NSP4, que estimula la secrecin transepitelial de cloro, por una va dependiente del Ca. 4.- se ha involucrado al SN enterico como responsable de inducir la salida aumentada de fluido y electrolitos de las cel. De las criptas intestinales. La diarrea por rotavirus sigue siendo tema de estudio.

Inmunidad
VP4 y VP7 poseen determinantes antigenicos que representan blancos importantes del sistema inmune.

Esta infeccion induce una respuesta de Ac sericos e intestinales

Ac intestinales IgA se relacionan con resolucin de infeccin primaria y prevencin de inf. Secundaria.

Cuando la infeccin se da por un rotavirus de serotipo diferente, la infeccin no se previene pero se atena, probablemente por Linfocitos T.

Cuadro clnico
Subclnica Diarrea moderada o severa deshidratacin muerte Periodo de incubacin 24 a 72 hrs

Sintomatologa Diarrea severa ( + de 8 evacuaciones por da) Vomito Fiebre (37.8-39 grados C) Letargo Confusin Irritabilidad Colapso vascular
Duracin Aproximadamente 3 a 8 das (5 promedio)

Diagnstico
Manifestaciones clnicas

Deteccin de antgenos o genoma viral mediante mtodos de laboratorio.

Mtodos originales de diagnostico: Deteccin de partculas virales por microscopia electrnica Deteccin de RNA por electroforesis en gel.

Mtodos comercialmente disponibles: Aglutinacin de partculas ltex Ensayos inmunoenzimaticos en fase solida (EIA) Mtodos basados en la inmunocromatografia Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Epidemiologa
Transicin epidemiolgica de las enfermedades diarreicas en Mxico Hasta antes de 1991 el pico de incidencia de morbilidad, hospitalizacin y mortalidad por diarreas se presentaba en los meses calientes de ao. Despus de la llegada del clera a Per se implementaron programas, que incluan cloracin del agua. Esto tuvo gran impacto. Para 1994 el patrn era totalmente diferente. As el pico de mayor incidencia de morbilidad y mortalidad se presentaba en los mese de otoo-invierno.

Importancia medica y epidemiolgica de los rotavirus Los rotavirus del grupo A son la principal causa de diarreas deshidratantes en nios <2 aos.

Epidemiologa
Se ha observado que a la edad de 5 aos el 95% de los nios ya han sido infectados. La incidencia mas alta es en los nios de entre 3 y 24 meses de edad. Los rotavirus son responsables del 12-72% en nios hospitalizados en ese rango de edad. En los primeros 2 o 3 meses de vida en especial en neonatos, un porcentaje alto (>70%) de las infecciones son asintomticas. La principal ruta de transmisin es la va oral-fecal. Los virus pertenecientes a los serotipos G1-G4 son responsables de mas del 90% de las infecciones.

Una vacuna efectiva puede evitar alrededor de 600,000 muertes de infantes cada ao

Prevencin
La OMS considera una necesidad disponer de una vacuna contra el rotavirus del grupo A.

Clsica Jenneriana o Jenneriana modificada la primera induce inmunidad contra el virus y la segunda utiliza recombinantes entre virus de origen animal y humanos.
Se aprobaron dos vacunas para uso humano: Rotateq (Merck) vacuna pentavalente basada en virus recombinantes derivadas de la rotavirus bovino WC3. Rotarix vacuna monovalente, basada en una cepa atenuada de origen humano.

En 1998 en EU sali al mercado una vacuna contra la infeccin tetravalente e inducia la inmunidad y prevena la diarrea severa. Se retiro por casos de intususcepcin.

Prevencin
En Mxico se introdujo la vacuna Rotarix al programa de vacunacin en 2006. La administracin de la vacuna redujo en 35% (11.8 vs 18.1 muertes al ao por cada 100,000 nios) la mortalidad en los nios menores de 5 aos y 41% ( 36 vs 61.5 muertes al ao por cada 100,000 nios) la mortalidad de menores de un ao.

Otras vacunas, basadas en cepas recombinantes entre virus de animales y humanos, o en cepas aisladas de infecciones asintomticas de neonatos estn en fase de evaluacin.