Historia de la Cromatografia. En 1906, Martin Tswett publico un articulo sobre la Cromatografia.

Tswett separ los componentes de la Clorofila utilizando Carbonato de Calcio como Absorbente y Eter de Petrleo como eluyente. En 1931, Kuhn y sus colaboradores aislaron y carotenos de la zanahoria, empleando el mismo mtodo de Tsweet.

Historia de la Cromatografia. Por los aos de 1940, Martin y Synge trabajaron en las bases Tericas de la Cromatografia, lo cual hizo posible definir Mtodos que habilitan la eficiencia de la separacin cromatografica. Ello hizo posible que la Cromatografia tuviera una amplia aceptacin. En la decada de 1950, el mtodo cromatografico fue aplicado a la Cromatografia de Gases. En 1957, Golay propuso el uso de Columnas Capilares para la Cromatografia de Gases.

Historia de la Cromatografia. En la decada de 1960, naci la Cromatografia Lquida. En 1975, En la decada de 1950, Small y sus colaboradores propusieron la Cromatografia de Intercambio Ionico de Alta Performance. En 1979, Gierde y sus colaboradores desarrollaron el sistema de Cromatografia de iones sin supresores.

Introduccin a la Cromatografia
Que es la Cromatografia?
La Cromatografia es una Tcnica de separacin (al igual que la destilacin).
El proposito de la Cromatografia es Separar y Cuantificar analitos en mezcla (por lo general en matrices complejas).

Ventajas de la Cromatografia:
1. Anlisis Simultaneos. 2. Alta Resolucin. 3. Alta Sensibilidad (niveles de ppm - ppb)

4. Pequeos Volumenes de Inyeccin (de 1 a 100 uL).

Tipos de Cromatografia:
1. Cromatografia de Capa Fina (Thin-layer Chromatography TLC). 2. Cromatografia de Columna (Column Chromatography). 3. Cromatografia de Gases (Gas Chromatography - GC). 4. Cromatografia Lquida de Alta Performance (High performance liquid Chromatography - HPLC). 5. Cromatografia de Fluido Supercrtico (Supercritical Fluid Chromatography - SFC). 6. Electroforesis Capilar (Capillary electrophoresis - CE). CC? TLC? SFC? GC? HPLC? CE?

Como es que ocurre la separacin en Cromatografia?

La separacin ocurre por migracin de los analitos en mezcla a diferentes velocidades a lo largo del sistema cromatogrfico. La velocidad de migracin esta gobernada por diferentes interacciones entre la muestra (conducida por un lquido o gas en movimiento) y el Absorbente (slido o lquido). Definimos as a la Fase Mvil y la Fase Estacionaria.

Como es que ocurre la separacin en Cromatografia?

Como se ha podido observar, la separacin se ha realizado como resultado de una diferencia entre la interaccin entre los analitos y la fase estacionaria.

Que es un Cromatograma?
Un Cromatograma es el registro de los componentes de una mezcla (en forma de un Pico y en funcin del tiempo). Los componentes (separados por la columna), pasan a travs de un detector, el cual registra la seal de cada componente en forma de un pico.

tR2
Intensidad de la Seal

tR1

Compuesto 1

Compuesto 2

Inyeccin de la muestra

t (min)

Que caractersticas presenta un Cromatograma?

Un Cromatograma debe de presentar Picos de forma simtrica y bien definidos. Debe de presentar alturas de Pico dentro de la escala de registro. Debe de tener una lnea base consistente. No debe de presentar bandas anchas.

Para obtener Picos bien definidos deben de controlarse una serie de factores, en caso contrario ocurrirn los ensanchamientos de bandas.

Que informacin me da un Cromatograma? Un Cromatograma nos da dos tipos de informacin: 1. Informacin Cualitativa: El Tiempo de Retencin casi siempre es constante bajo las mismas condiciones cromatogrficas. Esto nos sirve como un parametro de identificacin de sustancias. Informacin Cuantitativa: El Area del Pico de cada componente es proporcional a la concentracin del componente en la mezcla, y este valor es utilizado para realizar clculos de concentracin.

2.

Que informacin me da un Cromatograma?

Un Cromatograma tambien puede utilizarse para evaluar la eficiencia de separacin y la performance de la columna.
Los Principales Parametros de evaluacin son:

Factor de Capacidad: k. Selectividad: Nmero de Platos Tericos: N Platos Tericos Equivalentes: HETP Resolucin: Rs

Factor de Capacidad (k)

Que es el Factor de Capacidad?
El Factor de Capacidad es un valor nmerico que nos indica el grado de separacin que puede tener una columna en funcin del volumen retenido de un analito y el volumen retenido del solvente. El factor de capacidad se expresa en funcin del volumen por que: El tiempo de retencin depende de la razn de flujo y las dimensiones de la columna, por ello no es un valor apropiado para la comparacin de Cromatogramas. El Factor de Capacidad es independiente de la razn de flujo y de las dimensiones de la columna. El valor de el Factor de Capacidad utilizando razones de Volumen por lo general debe de oscilar entre 1 a 5 (preferentemente).

Factor de Capacidad (k)

Vr - V0 k' = V0
Vr = Volumen de Retencin del Pico de un Soluto.
V0 = Volumen del Solvente (Pico no retenido) V0 Vr

El tiempo de Retencin puede utilizarse para fijar el Volumen de Retencin.

Injeccin

Vo
k = 0

Factor de Capacidad (k)

10 min (t1) 2 min (t0)

k' = 4

6.0 mm ID x 150 mm L. (1 mL/min) 12 min (t1) 4 min (t0)

k' = 2

4.6 mm ID x 250 mm L. (0.6 mL/min)

El nmero de Platos Tericos (N)

Que es el Nmero de Platos Tericos?
El Nmero de Platos Tericos es un indice nmerico que nos indica el grado de eficiencia de la columna cromatogrfica.

N = 15000

N = 2500

Columna con buena eficiencia, alto valor de N

Columna con pobre eficiencia, bajo valor de N

El nmero de Platos Tericos (N)

Que es el Nmero de Platos Tericos?
Cromatograficamente, el nmero de Platos Tericos es la

relacin entre el tiempo de retencin del soluto y el ancho de la banda del mismo (el incremento del ancho del pico del analito).

Consideraciones:
Los picos de los analitos deben de ser simtricos y de bandas delgadas. Los Picos de los analitos que presenten bandas anchas y que adems se encuentren muy cercanos entre si no podrn ser resueltos y sern coeluidos.

El nmero de Platos Tericos (N)

Matematicamente y en funcin de los siguientes parametros cromatograficos:

t
r
Area

El nmero de Platos Teoricos se expresa como:

Ecuacin Original: N = 16 (tr / W )2
H
W1/2

Ecuacin Modificada para las mediciones actuales: N = 5.54 ( tr / W1/2 )2

H1/2 W

Altura Equivalente a un Plato Terico (HETP)

Que es una HETP?
Una altura Equivalente a un Plato Terico es otro indice nmerico que nos indica el grado de eficiencia de la columna cromatogrfica. Matematicamente se expresa como:

HETP = L / N
L = Longitud de la Columna N = Nmero de Platos Tericos El valor de una HETP se traduce como el Plato Terico mas corto que puede colocarse dentro de la longitud de columna. Esto significa que mientras mas pequeo sea una HETP, podemos colocar mas HETP y la eficiencia de la columna sera mayor.