12.

Introduccin al estudio de las Protenas

Introduccin al estudio de las protenas

Mulder (1838): Describe un material presente en todos los seres vivos, con la siguiente composicin porcentual en peso:

C: 55 %

H: 6.5 %

O: 22 %

N: 15 %

S: 0.5 %

Dado el contenido en azufre (0.5 %) el peso molecular mnimo de dicho material debera ser 32*100/0.5 = 6400

Hoppe-Seyler (1864): Cristaliz por primera vez una protena, la hemoglobina La hemoglobina cristalizada contiene invariablemente un 0.35 % de hierro. Aplicando el razonamiento de Mulder, el peso molecular mnimo de la hemoglobina ser de 100*55.8/0.35 = 15942 (aprox. 16000) Posteriormente se ha determinado que en la hemoglobina hay cuatro tomos de hierro; por tanto su peso molecular es de aprox. 64000

Las protenas son susceptibles de hidrlisis cida: HCl 6N, 90C, 18 horas En el hidrolizado aparecen aminocidos, compuestos que contienen una funcin amino -NH2 y una funcin carboxilo, -COOH En las protenas hay 20 aminocidos distintos: los llamados aminocidos proteicos Hay asimismo muchos otros aminocidos que no forman parte de protenas, los aminocidos no proteicos Con frecuencia los aminocidos proteicos aparecen modificados: son las modificaciones postraduccionales

Teora del Enlace Peptdico

H H2N C COOH R1 H R1 H R2 H H2N C COOH R2 H R3 H H2N C COOH R3

H2N C CO NH C CO NH C COOH + 2H2O

N-trmino

R1

H N

O H C C Ri

Rn C N H COOH H n-2 C-trmino

C H 2N H C O

Teora del Enlace Peptdico - Pruebas experimentales, 1

1. Las protenas nativas tienen relativamente pocos grupos cido-base titulables. A medida que progresa su hidrlisis, van apareciendo grupos -NH2 y -COOH en cantidad equimolar 2. En hidrolizados parciales se encuentran di- y tripptidos cuya estructura puede determinarse directamente
3. Las enzimas que hidrolizan protenas (tripsina, quimotripsina, pepsina, papana) atacan al enlace -CO-NH-, tal como puede observarse en compuestos sintticos (p.e. BAPNA) 4. Las protenas dan positiva la reaccin de biuret

Hidrlisis de BAPNA por tripsina

H C N O HC C N H HN
+

Enlace atacado

NO2

H2 N

C NH
Benzoil L-arginina 4-nitroanilida (BAPNA)

Teora del enlace peptdico - Pruebas experimentales, 2

5. Espectro infrarrojo: banda caracterstica de enlace C-N que desaparece con la hidrlisis de la protena

6. Cristalografa de rayos X: determinacin de la estructura

7. Sntesis completa de ribonucleasa

t-BOC-aminocido
CH3 O R1 O

Resina de poliestireno
R

CH3 C O C N C C OH + Cl CH2 CH3 H H

CH3 CH3

R1 O R H H

CH3 C O C N C C O CH2

Sntesis de pptidos, 1

CH3 CH3

R1 O R H H
CH2 CH3 C CH3

CH3 C O C N C C O CH2

F3C COOH

CO2 +

R1 O H2N C C O CH2 H R

Sntesis de pptidos, 2

CH3 CH3

R2 O

R1 O

CH3 C O C N C C OH H H

H2N C C O CH2 H

DCCI
CH3 CH3 O R2 O H H H R1 O C C O CH2 H R CH3 C O C N C C N

Sntesis de pptidos, 3

Rn O H

Ri O H H

R1 O R H H n-2

H2N C C N C C N C C O CH2

HF

Rn O H

Ri O H H

R1 O H H n-2

H2N C C N C C N C C OH

Sntesis de pptidos, 4

Funciones biolgicas de las protenas

- Biocatalizadores (enzimas) - Receptores de seales qumicas - Transportadores - Estructurales (citoesqueleto, colgeno) - Defensa (inmune, restriccin bacteriana, etc.) - Motilidad (motores moleculares) - Transduccin - Adherencia celular y organizacin tisular - Plegamiento correcto de otras protenas - Otras: anticongelante

Interaccin estereoqumica, 1

Aglutinina de Galanthus nivalis con su ligando, un manopiransido

Interaccin estereoqumica, 2

Unin del substrato (ciclohexamilosa) al centro activo de la b-amilasa

Interaccin estereoqumica, 3

Neuraminidasa con cido silico unido al centro activo

Interaccin estereoqumica, 4

Desoxirribonucleasa I con su substrato, DNA

100

80

Magnitud del efecto

60

40

20

0 0 5 10 15 20

Concentracin de ligando

k cat e0 s Vmax s v Km s Km s

100

80

Magnitud del efecto

60

40

20

0 0 5 10 15 20

Concentracin de receptor

v kcat e

Clasificacin de las protenas

I. Segn solubilidad (obsoleta): Albminas, Globulinas, Prolaminas, Gliadinas, Escleroprotenas, etc. II. Segn presencia o no de un grupo prosttico: Protenas simples y Protenas conjugadas Holoprotena = Apoprotena + Grupo prosttico III. Segn presencia o no de subunidades: Protenas monomricas y protenas oligomricas IV. Segn estructura global: Protenas fibrosas y protenas globulares