Introduo a Espectrometria

de Absoro Molecular
no Ultravioleta/Visvel
Universidade Federal de Pernambuco
Departamento de Qumica Fundamental
Qumica Analtica 12A (Instrumental)
Introduo a Espectrometria de
Absoro Molecular no Ultravioleta/Visvel
Medida de transmitncia e absorbncia
Lei de Beer
Efeitos do rudo instrumental em anlises
espectrofotomtricas
Instrumentao
A espectroscopia de absoro molecular est baseada na
medida da Transmitncia, T ou absorbncia, A
de solues contidas em clulas transparentes
tendo um caminho ptico b em cm.
Medidas de Transmitncia e Absorbncia
0 solvente
soluo
P
P
P
P
T = =
P
P
P
P
A
0
soluo
solvente
~ = log
P
0
e P referem-se s potncias
da radiao aps a passagem
atravs de clulas contendo
respectivamente o solvente e
o analito.
soluo
solvente
Lei de Beer
(*) Descoberta independentemente e de diferentes
maneiras por:

Pierre Bouguer em 1729,
Johann Heinrich Lambert em 1760
August Beer em 1852.
A bc
P
P
0
= = log
Lei de Beer
Bloco de material
absorvente
(slido lquido ou gs)
No percurso b,
contm n tomos,
ons ou molculas
absorventes
A potncia decresce
de P
0
para P devido
absoro
dS
dx
No percurso dx,
contm dn tomos,
ons ou molculas
absorventes
Razo entre a rea de
captura e a rea total = dS/S
P
x
a frao do feixe
que atinge a frao dS
dPx a quantidade de
potencia absorvida
dentro da seo
Px
Lei de Beer
S
dS
P
dP
x
x
= adn dS =
} }
=
n
0
P
P
x
x
S
adn
P
dP
0
n de partculas
Seo de choque
de captura = cte
S
an
P
P
ln
0
=
2,303S
an
P
P
log
0
=
2
cm
b
V
S =
2,303V
anb
P
P
log
0
=
Frao
absorvida
de Px
Frao da seo
onde ocorre a
absoro de Px
Lei de Beer
/mol partculas 6,02x10

mols de n
23
n
=
V
mols de n
c =

n

n
c mol/L
6,02x10
1000
cm
/L 1000cm
x mol
6,02x10
23 3
3
23
V V
= =

0 2,303x1.00
6,02x10
log
23
abc
P
P
0
=
A bc
P
P
0
= = log
2,303V
anb
P
P
log
0
=
n de partculas
Aplicao Lei de Beer a Misturas
Quando no houver interaes entre os
componentes da mistura
A
total
= A
1
+ A
2
+ ... A
n
= c
1
bc
1
+ c
2
bc
2
+ ...+ c
n
bc
n
As absorbncias dos componentes da mistura devem ser aditivas.
Cada componente deve obedecer a Lei de Beer em todos os comprimentos
de onda escolhidos para medidas.
O nmero de comprimentos de onda escolhidos para a anlise deve ser
no mmimo igual ao nmero de componentes (ex. n comprimentos de
onda para n componentes).
O primeiro comprimento de onda escolhido para a medida deve ser aquele
onde o componente 1 absorve mais fortemente que o 2. O segundo escolhido
aquele onde o componente 2 absorve mais fortemente que o 1.
Aplicao Lei de Beer a Misturas
271
275
Aplicao Lei de Beer a Misturas
Para o o-xileno (componente 1):
271 nm () c
1
= 0,90/0,40 = 2,25 dm
3
g
-1
cm
-1
275 nm () c
1
= 0,10/0,40 = 0,25 dm
3
g
-1
cm
-1
Para o p-xileno (componente 2):
271 nm () c
2
= 0,34/0,17 = 2,0 dm
3
g
-1
cm
-1
275 nm () c
2
= 1,02/0,17 = 6,0 dm
3
g
-1
cm
-1
(1) 0,47 = 2,25c
1
+ 2,0c
2
(2) 0,54 = 0,25c
1
+ 6,0c
2
c
1
= 0,13 g dm
3
c
2
= 0,084 g dm
3
A = cbc
Limitaes da Lei de Beer
Existem poucas excees para a generalizao de que A o b
M M
Em concentraes < 0,01M as molculas (M) responsveis pela
absoro esto mais afastadas
A distribuio de carga de M no interfere em M
Limitaes da Lei de Beer
Limitaes Reais
M M
A distribuio de carga de M interfere em M
Em concentraes > 0,01M as molculas (M) responsveis pela
absoro esto prximas:
[AM] = 10
-5
M 10
-2
M
c
436 nm
aumenta 88 %
Ex.: Azul de metileno (AM):
A Lei de Beer no obedecida
M E
Interaes eletrostticas entre os ons de E
e M, interferem na absortividade molar de M
Molculas absorvedoras (M) em baixa concentrao em meio contendo
alta concentrao de eletrlitos (E):
Limitaes Reais
Insignificante
quando [M]<0,01M
Razovel entre alguns ons ou
molculas orgnicas grandes
Limitaes da Lei de Beer
Quando as variaes da concentrao causam variaes
no ndice de refrao do meio
Limitaes da Lei de Beer
Desvios Qumicos Aparentes
Quando o analito se dissocia , associa ou reage com um solvente
para dar um produto que tem um espectro de absoro diferente
do analito.
HIn H
+
+ In
-
Desvios Instrumentais Aparentes com Radiao Policromtica
A lei restrita a radiao monocromtica. A seleo do comprimento
de onda (filtros, rede de difrao,....) limita outros comprimentos de onda
Limitaes da Lei de Beer
Seleo de comprimento de onda especfico
Desvios Instrumentais Aparentes com Radiao Policromtica
Limitaes da Lei de Beer
bc
P
P
l A
'
'
'
0
'
c = = og
bc
'
'
0
'
P
P
10 =
bc - '
0
'
'
P P 10 =
bc - "
0
"
"
P P 10 =
) P (P
) P (P
A
" '
"
0
'
0
m
+
+
= log
) P (P
) P (P
A
bc " bc '
"
0
'
0
m " '

+
+
=
10 10
log
0 0
Desvios Instrumentais Aparentes com Radiao Policromtica
Limitaes da Lei de Beer
Quando,
"
'
c c =
bc A
m
'
c =
) P (P - ) P (P A
bc " bc ' "
0
'
0 m
" '

+ + = 10 10 log log
0 0
Desvios Instrumentais Aparentes com Radiao Policromtica
Limitaes da Lei de Beer
Os desvios no so apreciveis desde que a radiao usada no
englobe uma regio espectral na qual o absorvente exiba variaes
grandes de absoro em funo do comprimento de onda
Desvios Instrumentais na Presena de Radiao
Espria (espalhada)
Limitaes da Lei de Beer
) P (P
) P (P
A
S
S 0
'
+
+
= log
Potncia da radiao
espria no absorvida
Efeito do Rudo Instrumental
em Anlises Espectrofotomtricas
Rudo Instrumental como funo da
Transmitncia
Ajuste do 0 % de T
Ajuste do 100 % de T
Medida da % de T com amostra
Os rudos associados s etapas das medidas
espectrofotomtricas se combinam para dar uma
incerteza efetiva para o valor final obtido para T
T
b
T
b
c ln
0,434
log
1
= =
bT T
c 0,434
=
c
c
2
2
2
2
2
0,434
T T c

bT

T
c

|
.
|

\
|

=
|
.
|

\
|
c
c
=
Rudo Instrumental como funo da Transmitncia
Relaco entre o rudo na medida da transmitncia T
e a incerteza na concentrao, c
Relacionar os desvios-padro na concentrao, o
c
e
transmitncia, o
T

Aplicao na eq. de propagao de incerteza considerando
uma nica varivel experimental (T) :
T T

T T

T T c
log
0,434
ln
= =
|
.
|

\
|
T T c
T c
S S
log
0,434
=
Desvios-padro de
amostragem de c e
de T
Fontes de Rudo Instrumental
Caso I -
Caso III -
Caso II -
f v A o
rms
f Ie i A = 2
rms
f
N
(f) S
p
p
=
Rudo Johnson*
Rudo Shot***
Rudo flicker**
(*) = trmico; (**) = juno; (***) = diodos de C, contatos de chaves e rels
Fontes de Rudo Instrumental
Fontes de Rudo Instrumental
Incertezas relativas de concentraes originadas por diferentes
categorias de rudo instrumental
Efeito da Abertura de
Fenda em Medidas de
Absorbncia
Aberturas estreitas (fendas) so
necessrias para resolver
espectros complexos
Efeito da Abertura de Fenda em Medidas de Absorbncia
Em espectros de picos estreitos as absorbncias mximas aumentam
significantemente medida que a abertura diminui.
A largura da banda diminui tambm com a diminuio da
fenda
Problema: Reduo quadrtica
da potncia da energia radiante
Resoluo: Reduo da fenda at
altura dos picos fiquem constantes
Efeito da Radiao Espalhada em Comprimentos
de Onda Limites de um Instrumento
Nos comprimentos de onda limite de um instrumento,
a radiao espalhada pode levar ao aparecimento de falsos picos
Abaixo de 380 nm, as janelas, clula e prisma
comeam a absorver radiao, reduzindo a
energia que atinge o transdutor
Num espectrofotmetro para UV-VIS com
sistema ptico de vidro, lmpada de tungstnio
e clula fotovoltica como detector
Cubeta
de vidro
Cubeta
de quartzo
Instrumentao
Componentes dos Instrumentos
Fonte
Seletores de comprimento de onda (filtros ou monocromadores)
Recipiente para amostra
Transdutores de Radiao
Processadores de Sinal e de Sada
Amostra Transdutor
Processador
de sinal
Filtro ou
monocromador
Fonte
Instrumentao
Fontes
Lmpada de Deutrio e Hidrognio
D
2
+ E
e
D
2
* D + D + hv
Energia fornecida
pela lmpada
Molcula de
deutrio excitada
E
e
= E
D2
= E
D
+ E
D
+ hv
Balano de Energia do
processo global
E
D2
energia fixa quantizada de D
2
*
E
D
e E
D
energias cintica dos dois tomos de deutrio
Faixa til:160-350 nm
(UV-visvel)
Instrumentao
Fontes
Lmpada de Filamento de Tungstnio ( a mais utilizada)
Lmpada de Arco de Xennio
Distribuio de energia se aproxima de um corpo negro.
Espectro contnuo na faixa de 350-2500 nm (Visvel-IR).
As lmpadas de tungstnio/halognio contm I
2
no encapsulamento.
O WI
2
(voltil) formado regenera o W ao atingirem o filamento aquecido.
Tempo de vida o dobro das lmpadas comuns.

Produzida pela passagem de corrente
em atmosfera de xennio
Espectro contnuo na faixa de 200-1000
nm (UV-Visvel-IR).

Seletores de Comprimento de Onda
Filtros de absoro (VIS)
Filtros de interferncia (UV-VIS e IR)
Filtros Fotmetros e
Colormetros
Monocromadores Espectrofotmetros
Projetados para varredura espectral
Fornecem bandas bem mais estreitas
Sada de um seletor de
comprimento de onda tpico
Filtros de absoro
So restritos regio do visvel
Seletores de Comprimento de Onda
Filtros de absoro
Seletores de Comprimento de Onda
Larguras de bandas efetivas
para dois filtros de absoro
Comparao de vrios tipos de filtros
para a radiao visvel
Seletores de Comprimento de Onda
Filtros de Interferncia ou Filtro de Fabry-Perot
So utilizados nas regies do UV-Visvel e Infravermelho
(CaF
2
ou MgF
2
)

Caracterstica de transmisso de filtros de
interferncia
Monocromador
(Czerney-Turney)
(Bunsen)
Seletores de Comprimento de Onda
Rede
Prisma
Componentes
Uma banda espectral (
1
ou
2
) selecionada pela
rotao do elemento dispersor (prisma ou rede) ou pelo
movimento do plano focal.
Os primeiros instrumentos utilizavam prismas, todavia
hoje as redes de reflexo so mais utilizadas, devido a:
serem mais baratas;
fornecerem melhor separao de
dispersarem a radiao linearmente ao longo do
plano focal.
Monocromador
Seletores de Comprimento de Onda
Disperso em prismas e redes
Seletores de Comprimento de Onda
Disperso linear
Disperso
no-linear
Prisma como elemento dispersor
Prisma tipo
Cornu de
quartzo
Prisma tipo
Littrow
A disperso da radiao se baseia nos processos de
refrao diferente para cada .

Na escolha de um monocromador a base de prisma,
deve-se levar em conta a disperso e absoro da
radiao pelo material.

Regio do visvel: Vidro ou vidro Flint (dopado com
chumbo), que apresenta maior variao do ndice de
refrao com o . Absorvem na regio UV.

Regio do ultravioleta/visvel: Quartzo
Dispositivo constitudo de uma superfcie plana com uma srie de ranhuras
muito prximas, paralelas e eqidistantes, traadas sobre uma placa de
vidro (rede de transmisso). ou placa com metal depositado (rede de
reflexo).
rede: de 3 a 10 cm
Rede como elemento dispersor
Rede mestre: Construda sobre uma superfcie polida e riscada com
ponta de diamante. So caras, pois requerem equipamentos de alta
preciso para sua construo. (300 a 2000 linhas/mm. 1.200 a 1.440,
normalmente)
Redes replicadas: So formadas a partir da rede mestre por um
processo de deposio de resina. Em seguida, alumnio, ouro ou
platina depositado para se tornar reflexiva.
Redes hologrficas: Construda com lasers. Grande perfeio no
que diz respeito forma e perfeio das linhas. (6.000 linhas/mm a um
custo relativamente baixo)
Redes cncavas: Permite a confeco de monocromadores sem o
uso de espelhos ou lentes de focalizao. vantajoso em termos de
custo.
Rede como elemento dispersor
Mecanismo de disperso em redes de reflexo
A disperso em uma rede um processo que resulta da difrao e
subsequente interferncia.
Resoluo dos Monocromadores (R)
Em monocromadores com prisma A muda com o .
Em monocromadores com rede, A cte. Desta forma, por definio
usa-se
max
no lugar do , para caracterizar o monocromador.
Monocromador de rede tpico UV-Visvel R = 10
3
a 10
4
.
Aumenta com o aumento do nmero de linhas por milmetro:

R =
= comprimento de onda mdio de
duas imagens distintas
A = variao do comprimento de
onda
n = ordem de difrao
N = nmero de linhas iluminadas da rede
R = n.N
Fendas dos Monocromadores
Duas peas de metal
Uma faixa espectral em particular pode ser posta em foco na
fenda de sada girando-se o elemento dispersor.
A abertura pode ser fixa ou varivel.
Papel importante no desempenho dos monocromadores
Ajuste da Largura da Fenda
A largura efetiva de banda depende da disperso da rede ou
do prisma, bem como da largura das fendas de entrada e
sada.
Largura estreita maior resoluo
menor intensidade
(menor S/N)
Abaixo de uma certa largura da fenda,
no h estreitamento da largura efetiva
da banda,e ainda, h diminuio da
potncia do feixe.
Efeito da Largura da Fenda sobre os Espectros
Efeito da largura da fenda
Figura - Efeito da largura da fenda no detalhamento espectral para o vapor do
benzeno
Diferentes materiais, formas e caminhos pticos
(selecionados para se evitar valores muito altos ou baixos de
absorbncia).
Deve ser transparente regio espectral de interesse.
Ultravioleta, visvel e parte do infra-vermelho Quartzo ou slica fundida
Visvel e parte do infra-vermelho Vidros de silicato
Visvel Plstico
Instrumentao
Recipientes para amostra
Celas, cubetas ou clulas.
Instrumentao
Recipientes para amostra
Celas, cubetas ou clulas.
Instrumentao
Recipientes para amostra
Caractersticas
Instrumentao
Tipos de Instrumento
Feixe nico
Feixe duplo
espacial
Feixe duplo
temporal
Multicanal
Instrumentao
Tipos de Instrumento
Fotmetros
Alguns tipos de Instrumentos

Anlises de absoro simples
e de baixo custo
Alta emisso de energia radiante
Quantificao por intensidade de luz, no necessariamente
mantendo a informao espectral. Usam filtros para a seleo
do comprimento de onda
Espectrofotmetros
Medidas de substncias qumicas baseadas em informao espectral
de um conjunto de ftons. Usam redes de difrao para seleo do
comprimento de onda.
Existem equipamentos para a regio do visvel, para regio
UV- visvel e infrevermelho prximo (185-3000 nm).
Boa relao sinal/rudo
Robustos
Fceis de manipuar
Alguns tipos de Instrumentos
Fotmetros no Vsvel
Fotmetros
Alguns tipos de Instrumentos
Fotmetros tipo Sonda
A transmisso da luz da fonte feita
por fibra ptica, para uma camada
de soluo entre a selagem de vidro
na ponta da fibra e um espelho.
Selagem de vidro
Espelho
Alguns tipos de Instrumentos
Seleo dos filtros na regio do visvel
A cor da luz absorvida o complemento
da cor da prpria soluo
/ nm cor cor complementar
380-420 violeta
420-440
440-470
470-500
500-520
520-550
550-580
580-620
620-680
680-780
absorvida transmitida
verde-amarelo
verde-amarelo
amarelo
amarelo
violeta
violeta
violeta-azul
violeta-azul
azul
azul
azul-verde
azul-verde
verde
verde
laranja
laranja
vermelho
vermelho
prpura
prpura
/ nm cor cor complementar
380-420 violeta
420-440
440-470
470-500
500-520
520-550
550-580
580-620
620-680
680-780
absorvida transmitida
verde-amarelo verde-amarelo
verde-amarelo verde-amarelo
amarelo amarelo
amarelo amarelo
violeta violeta
violeta violeta
violeta-azul violeta-azul
violeta-azul violeta-azul
azul azul
azul azul
azul-verde azul-verde
azul-verde azul-verde
verde verde
verde verde
laranja laranja
laranja laranja
vermelho vermelho
vermelho vermelho
prpura prpura
prpura prpura
Fotmetros
Alguns tipos de Instrumentos
So usados como detectores em cromatografia lquida de alta
eficincia
Monitoram continuamente a concentrao de um ou mais fluxos
de lquidos ou gases em instalaes industriais
Os instrumentos so de feixe duplo espacial e freqentemente
usam uma linha de emisso do mercrio (254 nm), previamente
isolada por um sistema de filtros
A aplicaes tpicas incluem a determinao de fenol em guas,
cloro, mrcrio, aromticos em gases e H
2
S/SO
2
na atmosfera
Seleo dos filtros na regio do Ultravioleta
Fotmetros
Alguns tipos de Instrumentos
Feixe Duplo

Disperso Dupla

Arranjo de Diodos
Espectrofotmetros para
a regio Visvel e Ultravioleta/Visvel
Feixe nico
Regio do Visvel

Regio Ultravioleta/Visvel
Convencional
Computadorizados
Alguns tipos de Instrumentos
Espectrofotmetros de Feixe nico
Visvel
Varredura de 380-800 nm
Feixe nico e rede de difrao
Baixo custo

Verso modificada
do espectrofotmetro
Spectronic 20, modelo
de 1950
Alguns tipos de Instrumentos
Ultravioleta/Visvel
Convencional
Instrumento no realiza varredura mas pode ser usado na regio ultravioleta
e visvel.
Limite inferior: 190-210 nm
Limite superior: 800-2000 nm
Computadorizados
Instrumento realiza varredura no intervalo entre 190 a 800 ou 900 nm.
Dados so armazenados e processados pelo computador.
Realiza varreduras da ordem de 1200 nm/min (timo para cintica).
Espectrofotmetros de Feixe nico
Alguns tipos de Instrumentos
Espectrofotmetros de Feixe Duplo Manual
Alguns tipos de Instrumentos
Espectrofotmetros de Feixe Duplo
Alguns tipos de Instrumentos
Espectrofotmetros de Disperso Dupla
Alguns tipos de Instrumentos
Espectrofotmetros com Arranjo de Diodos