Instituto Politcnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas Ingeniera en Sistemas Ambientales

Microbiologa Ambiental
Prctica 9 Procesos Microbianos del Ciclo del Nitrgeno.
Alcntara Salinas Viridiana Oribe Aguilar Kitzia Irina Equipo: 3 5AV1

Introduccin

Desnitrificacin Simbiotica Libre, ecosistemas

Nitrificacin

Mtodo

Proteolsis
10g suelo+90ml de agua realizar diluciones hasta 104 sembrar de 101 103 en cajas de Petri con Agar Leche Incubar a 28C 48 h. Halo transparente

Amonificacin
Inocular tubos con medio de Stuart con 1 ml de diluciones 102 104

3 tubos por c/dilucin. Incubar a 28C 7 das.

Desarrollo de color anaranjado a rojo intenso.

Nitritacin
En tubos con medio para nitrificantes inocular con diluciones 102 104

Nitratacin
Adicionar Granalla de Zinc a los tubos que dieron negativo la prueba anterior

Desnitrificacin
En tubos con medio para desnitrificadores inocular con diluciones 102 104 3 tubos por c/dilucin. Incubar a 28C 7 das.

3 tubos por c/dilucin. Incubar a 28C 14 das. Reactivo Griess A y B, 3 gotas c/u. Color rosa

Rojo intenso.

Gas en la campana Durham

Objetivos
Determinar experimentalmente los principales procesos metablicos involucrados en el ciclo del nitrgeno. Enumerar formas fisiolgicas de bacterias involucradas en estos procesos en diferentes muestras de suelo.

Resultados
Estacin %H

B.S 0.73 0.1 0.72 0.7 0.5 0.84

Amonificacin

Nitritacin

Nitratacin

Desnitrificacin

1 2 3 5 6 7

0.27 0.9 0.28 0.3 0.5 0.16

479.45 3500.00 486.11 500.00 700.00 416.67

1027.40 7500.00 1100.00 1071.43 1500.00 892.86

0.00 600.00 83.33 0.00 0.00 0.00

589.04 1100.00 1100.00 3428.57 4800.00 2857.14

Nmero de microorganismos representantes de los procesos del ciclo del nitrgeno en la zona de muestreo (NMP o UFC/g de suelo en Base seca) Medio de cultivo
Agar leche
Stuart Nitritacin Nitratacin Con asparagina

Proceso
Protelisis
Amonificacin Nitrificacin Desnitrificacin

Estacin 1 2 3 5 6
Mayor a 104 700 1500 0 4800

7
Mayor a 104 416.67 892.86 0 2857.14

Mayor a Mayor a Mayor a 1.36x106 4 4 4 10 10 10 479.45 1027.40 0 589.04 3500 7500 600 <1100 486.11 <1100 83.33 <1100 500 1071.42 0 3428.57

Informe
Protelisis
Debido a que en todos los equipos salieron datos incontables, es decir mayores a 104, no se graficaron.

Amonificacin
4000.00 3500.00 3000.00 2500.00 2000.00 1500.00 1000.00 500.00 0.00 0 1 2 3 4 Estacin 5 6 7

NMP/g en B.S.

Amonificacin Grfica 1. Reportada en NMP/g en base seca vs estaciones.

Nitrificacin
Grfica 2. Reportada en NMP/g en base seca vs estaciones.

*Nota: aquellos mayores a 1100, para fines prcticos se graficaron como si su valor fuese de 1100.

Grfica 3. Reportada en NMP/g en base seca vs estaciones.

Nitritacin
8000.00 7000.00 6000.00 5000.00 4000.00 3000.00 2000.00 1000.00 0.00 0 1 2 3 4 5 6 7

700.00 600.00 500.00 400.00

Nitratacin

300.00
200.00 100.00 0.00

Desnitrificacin Grfica 4. Reportada en NMP/g en base seca vs estaciones.

Desnitrificacin
6000.00 5000.00 4000.00

3000.00
2000.00 1000.00 0.00 0 1 2 3 4 5 6 7

*Nota: aquellos mayores a 1100, para fines prcticos se graficaron como si su valor fuese de 1100.

Distribucin de las estaciones de muestreo en las Cascadas de Atlihuetzia.

Discusin
La realizacin de esta prctica nos permiti identificar mediante cuenta en placa los organismos pertenecientes al gremio de la protelisis, despus de haber sido sembrado en agar leche, mientras que los gremios de amonificacin, nitrificacin y desnitrificacin se realiz mediante cultivos lquidos, utilizando las tablas de NMP/g B.S. Los datos obtenidos fueron demasiado altos (incontables) para el caso de la protelisis, por ello tuvimos que haber utilizado una dilucin mayor para conocer el nmero real de estos microorganismos en nuestro suelo; en amonificacin los datos mas altos los presento estacin 2 con 3500, siendo un valor sumamente grande, con lo cual podemos concluir que en esta zona exista gran cantidad de materia orgnica, que los microorganismos descomponan hasta su forma inorgnica; en la nitrificacin se divida en dos procesos: nitritacin cuyos datos ms altos fueron en la estacin 2 y 6 con 7500 y 1500 respectivamente y nitratacin de donde solo se encontraron dos equipos que tuvieron a este gremio, el 2 y el 3, siendo el 2 el de mayor incidencia (600); por ltimo la desnitrificacin obtuvo valores bastante altos en todas las estaciones, suponiendo que se realiza con frecuencia en esta zona la reduccin desasimilatoria de nitratos para convertirse a N2, por lo cual conocemos que las condiciones de oxgeno son pobres en el suelo, o que la mayora se realiza utilizando mecanismos con barreras permeables al oxgeno. Los datos del equipo 2 nos resultan peculiarmente altos, lo cual nos hace considerar sus condiciones, que fueron aquellos que se encontraban en la interfase de una zona de cultivo y una cada de agua, por lo que nos lleva a la suposicin de que la cantidad de materia orgnica arrastrada era muy grande favoreciendo el desarrollo de los microorganismos que participan en el ciclo del Nitrgeno; sin embargo en la estacin 1 no se hallaron valores altos debido a que al aadir fertilizantes inhiben la actividad de estos gremios, pues se encuentra el Nitrgeno en su forma disponible.

Conclusin

 Se lograron evidenciar de manera experimental los principales procesos metablicos en el ciclo del nitrgeno, pese a que no se observaran de la manera ptima .
El ciclo del nitrgeno es un ciclo biogeoqumico gaseoso que se realiza con rapidez y depende en gran manera de los microorganismos, ya que estos con la finalidad de poderlo asimilar, realizan distintas estrategias metablicas en las que lo convierten en amonio para ser de esta manera incorporado a algn ciclo y obtener el Nitrgeno necesario. Estas vas tomadas no solo las benefician a ellas sino tambin a plantas que crecen en estos suelos y que tampoco pueden asimilarlo como nitrgeno atmosfrico, ya que lo fijan al suelo y de esta manera queda disponible. Los microorganismos que intervienen en estos procesos son : bacterias y hongos. Sin embargo tambin se han de conocer los efectos adversos de la realizacin excesiva y por lo tanto desequilibrada de cualquiera de estos procesos, como en el caso de la acumulacin de NH4+ que produce una alcalinizacin del suelo por ejemplo.

Cuestionario

1. Qu factores pueden alterar el nmero de microorganismos involucrados en el ciclo del nitrgeno? Las condiciones ambientales, como temperatura, pH del suelo, disposicin de oxgeno, relacin C:N. Sabemos que los microorganismos tienden a tener un crecimiento ptimo a ciertas temperaturas y pH, dependiendo de cada especie, lo cual puede o no permitir que se desarrollen. En el caso de la relacin C:N, por ejemplo cuando C:N> 20 se favorece la asimilacin, y cuando C:N < 20, se favorece la mineralizacin por lo cual habr ms de aquellos que realicen esta accin. Las condiciones de oxgeno afectan directamente en la fase de desnitrificacin, que debe ser bajo condiciones anxicas y en la nitrificacin es bajo condiciones xicas.

2. La adicin de fertilizantes nitrogenados puede tener consecuencias en los procesos globales de contaminacin. Indique cuales considerara que son estas consecuencias. Los microorganismos nitrificantes quimiolitotrofos transforman el amonio de los fertilizantes en nitratos y nitritos, estos aniones se lixivian fcilmente, acumulndose en las aguas subterrneas, lo cual es peligroso ya que a concentraciones altas son txicos, tambin pueden formar nitrosaminas que son cancergenas. 3. Cules son las ecuaciones qumicas que se llevan a cabo en cada uno de los procesos biolgicos analizados? Proteolisis: N2 + 8H+ + 16 ATP 2NH3 + H2 + 16ADP + 16 Pi Amonificacin: CH3 -CHNH2-COOH + 1/2 O2 CH3-CO-COOH + NH3

Nitritacin: 2 NH3 + 3 O2 2 HNO2 + 2 H2O

Nitratacin: HNO2 + 1/2 O2 HNO3 Desnitrificacin: NO3- NO2- NO N2O N2

CH3COOH + 2NO3- 5/2 CO2 + N2 + 2OH- + 3/2 H2O

Bibliografa
http://www.ciceana.org.mx/recursos/ciclo%20del%20nitrogeno.pdf "El Ciclo del Nitrgeno, De Microbios y de Hombres" . John Arthur Harrison, Ph.D. Consultado el 20 de Octubre del 2013 en: http://www.visionlearning.com/library/module_viewer.php?mid=98&l=s

"Ingeniera Ambiental", Henry Glynn y Heinke Gary. Segunda edicin. Pearson Educacin. Mxico 1999. pp. 389-391. Consultado el 20 de Octubre del 2013 en: http://books.google.com.mx/books?id=ToQmAKnPpzIC&printsec=frontcov er&hl=es#v=onepage&q&f=false