Espectroscopa de Absorcin

En los mtodos de absorcin la base de informacin es la magnitud del poder radiante proveniente de una fuente externa que es absorbido por la especie analizada. Aqu la absorcin de radiacin por la especie, va acompaada por la excitacin del analito.

Espectroscopa de Absorcin
Es el fenmeno que ocurre cuando una radiacin electromagntica interacta con la materia traspasando parte de su energa a los tomos o molculas presentes en la materia que pasan de un estado energtico menor a estados de mayor energa, o estados excitados.

Ejercicio
en cuntos kJ/mol aumenta la energa de OZ cuando absorbe radiacin UV de longitud de onda de 147 nm?

Desarrollo
E = h c / l 2.998 x 10 m/s -34 = (6,626 x 10 Js) --------------------
8

(147 nm) (10-9 m/nm)

= 1.35 x 10-18 J/molcula = (1.35 x 10-18 J/molcula) (6.022 x 1023 molculas/ mol) = 814 kJ/mol

Esta energa es suficiente para romper el enlace O=O del oxgeno.

Absorcin de la Luz
Cuando una molcula absorbe un fotn, su energa aumenta. Se dice que ha pasado a un estado excitado. Si una molcula emite un fotn, su energa disminuye El estado de mnima energa de una molcula se llama estado fundamental

Medida espectrofotomtrica
Cuando una muestra absorbe luz, la potencia radiante del haz de luz disminuye. La potencia radiante, P, es la energa por segundo y por unidad de rea del haz de luz La luz se hace pasar a travs de un monocromador para seleccionar una longitud de onda. La radiacin es monocromtica. La luz monocromtica con una potencia radiante P0 , incide en una muestra de longitud b. la potencia radiante del haz que emerge por el lado opuesto de la muestra es P. Como la muestra puede haber absorbido algo de luz, P P0

Transmitancia
La transmitancia, T, se define como la fraccin de la luz incidente que pasa a travs de la muestra. P Transmitancia: T = ----P0

T puede valer de 0 a 1 El porcentaje de transmitancia es simplemente 100 T y puede valer desde 0 a 100 %.

Absorbancia
A = - log10 ---- = - log T
P0 P

Relacin entre transmitancia y absorbancia T= P/P0 1 0,1 0,01 % T = T*100 100 10 1 A 0 1 2

Cual, A o T, es directamente proporcional a la concentracin?

Absorbancia
Cuando no se absorbe luz,
P= P0 y A=0

Si se absorbe el 90 % y se transmite el 10 %,
P= P0/10 y A= 1

Si solamente se transmite el 1 % de luz,

A= 2
La Absorbancia a veces tambin se llamaba densidad ptica

Absorbancia
La absorbancia es importante porque es directamente proporcional a la concentracin, c, de la especie que absorbe la luz en la muestra.

Leyes de la Absorcin
Cuando un haz de radiacin monocromtica, con una potencia P0, incide sobre una cubeta conteniendo una solucin, puede ocurrir que:

Leyes de la Absorcin
Po
= Pt

+ Pd + Pa
Cubeta

Pd Po Pt Pt < Po

Pa

Leyes de la Absorcin
Parte del haz de radiacin sea absorbido por el medio que est siendo analizado. Parte de la radiacin incidente sea reflejada:
dependiendo de la especie absorbente o, de las diferencias entre del medio de propagacin de la radiacin y el del medio que esta siendo analizado.

Leyes de la Absorcin
Parte de la radiacin incidente sea dispersada:
Dependiendo del medio: no sea transparente ni homogneo

Parte de la radiacin incidente sea transmitida, siendo su potencia menor a la potencia de la radiacin inicial o incidente.

Potencia Reflejada
Puede ser minimizada:
Uso de medidas relativas y, Cubetas con paredes homogneas, de menor espesor y de caras paralelas
Una cubeta conteniendo la muestra y otra cubeta conteniendo todos los componentes de la cubeta anterior menos la sustancia de inters.

Potencia Reflejada
La medida del haz transmitido por la segunda cubeta servir de referencia para calibrar el instrumento, antes de la medida de la potencia transmitida por la cubeta que contiene el material a analizar.

Potencia Reflejada Como vemos es necesario usar:

Cubetas prcticamente idnticas De espesor reducido y De caras paralelas

Potencia Dispersada
Normalmente los procedimientos involucrados en la absorcin de luz, son realizados en soluciones homogneas y transparentes, de modo que la potencia de la radiacin dispersada puede despreciarse

Leyes de la Absorcin
Por lo anterior podemos considerar que: PO = Pa + Pt Las potencias incidente y transmitida pueden ser medidas directamente, y La potencia absorbida puede determinarse como la diferencia entre P 0 y P t.

Pa = Po - Pt

Leyes de la Absorcin
Investigaciones sobre la relacin entre las potencias de radiacin incidente y transmitida fueron realizadas por Pierre BOUGUER (1729) y por Johann H. LAMBERT (1760), llegando a enunciar dos leyes fundamentales que caracterizan al proceso de absorcin:

Leyes de la Absorcin La intensidad o potencia de luz monocromtica transmitida por un medio homogneo es proporcional a la intensidad o potencia de luz incidente
Pt = k P o ( I t = k Io )

Leyes de la Absorcin: Ley de Lambert

La intensidad o potencia de luz
monocromtica transmitida disminuye exponencialmente al aumentar aritmticamente el espesor del medio absorbente

Pt = Po e-kb ( It = Io e-kb )

Leyes de la Absorcin: Ley de Lambert

Pt = P o e

-kb

b = espesor del medio absorbente k = constante para la longitud de onda y el medio absorbente, denominada coeficiente de absorcin

Leyes de la Absorcin: Ley de Lambert

Pt Pt

= =

Po e-kb -0.4343 kb Po 10

k = k/2.3206 = k * 0.4343

Pt = Po 10-kb

Leyes de la Absorcin: Ley de Lambert

Pt = Po 10- kb

Pt k 'b = 10 PO

Leyes de la Absorcin: Ley de Lambert

- log

Pt =k'b PO

Pt / Po = Transmitancia, fraccin de la
luz incidente transmitida por un espesor b

Ley de Lambert - Bouguer

Cuando una radiacin monocromtica proveniente de una onda plana pasa a travs de un medio capaz de absorber radiacin, de concentracin constante, la potencia radiante disminuye logartmicamente a medida que la longitud del paso ptico aumenta aritmticamente.

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer

August Beer (1852) estudi la influencia de la concentracin del componente absorbente en la transmisin y absorcin de la luz. Descubri que existe la misma relacin entre la transmisin y la concentracin que la descubierta por Lambert entre la transmisin y el espesor del medio absorbente:

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer La intensidad o potencia de un haz de luz monocromtica transmitido disminuye exponencialmente al aumentar aritmticamente la concentracin de la especie absorbente
Pt = Po e-kc

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer

Pt = Po e
k =

-kc

Pt = Po 10-0.4343kc
k/2.3206 = k * 0.4343

Pt = Po 10-kc

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer

Pt = Po 10

-kc

Pt log = k'' c P0
como Pt A = log P0

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer

Pt log = k'' c P0

Ley de Lambert Bouguer - Beer

Pt = Po 10 Pt = Po 10
-kc

-kb

Pt = Po 10-kkbc

Ley de Lambert Bouguer - Beer

definiendo una constante a a = k * k P t y como A = log

P0

tenemos

Ley de Lambert Bouguer - Beer LEY DE BEER

A = abc
A = Absorbancia
b = trayecto ptico, cm a = absortividad, L g-1 cm-1 c = concentracin, g/L

Ley de Lambert Bouguer Beer LEY DE BEER

A = bc
A
= Absorbancia b = trayecto ptico = absortividad molar

c = concentracin molar

Leyes de la Absorcin: Ley de t-Beer

A = bc
= absortividad Molar = M-1 cm-1
c = moles/L

b = cm

la absorcin de varias especies

permite comparar cuantitativamente

Leyes de la Absorcin: Ley de Lambert-Beer

La absortividad Molar

depende de:

La sustancia absorbente Longitud de onda Temperatura de medicin Solvente

A mayor mayor nivel de absorcin observado por lo que ms sensible el mtodo espectromtrico

Ley de Beer
A = abc
o

A = bc

Esta ecuacin demuestra la relacin lineal entre la A y la concentracin c

Ley de Beer
Por lo que mantenindose constante el camino ptico, es posible determinar la concentracin de una especie en solucin a travs de una medida de absorbancia

Ley de Beer
Cuando un haz de radiacin monocromtica proveniente de una onda plana, pasa a travs de un medio capaz de absorber radiacin, contenido en una celda de paso ptico constante, la potencia radiante disminuye logartmicamente a medida que aumenta la concentracin aritmticamente

Alcances de la Ley de Beer

Mayoritariamente se aplica en las regiones UV, VIS, IR cercano, R. X. Aplicable a especies qumicas: iones, molculas y tomos. Aplicable a soluciones diluidas, y matrices sin gran complejidad. Aplicable a niveles de deteccin de analitos del orden ppm o menores.

Alcances y Aplicaciones de la Ley de Beer

Absorcin radiacin UV-VIS por compuestos orgnicos Absorcin radiacin UV-VIS por compuestos Inorgnicos

Aplicaciones de la Ley de Beer

Determinacin de un constituyente absorbente presente en una muestra Determinacin de dos o ms especies absorbentes presentes en una muestra. Valoraciones fotomtricas en cuyo sistema participa una o ms especies absorbentes. Cintica de reacciones qumicas

Aplicaciones de la Ley de Beer

Determinacin de un constituyente absorbente Determinacin de dos o ms especies absorbentes Valoraciones fotomtricas en cuyo sistema participa una o ms especies absorbentes. Cintica de reacciones qumicas

Aplicaciones de la Ley de Beer

Determinacin de un constituyente absorbente presente en una muestra:
Medicin directa de la muestra y un patrn con lectura prxima a la muestra: Mediante Curvas de Calibracin

Aplicaciones de la Ley de Beer

Medicin directa de la muestra y un patrn con lectura prxima a la muestra:

AX C X = CR AR

CURVAS DE CALIBRACIN: el concepto

Indirecto o de Calibracin externa: externa las muestras contienen un cantidad desconocida del analito y los patrones tienen una cantidad perfectamente conocida de analito. Los patrones contienen al analito pero ste es EXTERNO al analito de la muestra Adiciones Patrn o Calibracin Interna: Interna el analito en s mismo es usado para la calibracin interna. El analito de la muestra es empleado en el protocolo de calibracin. Patrn Interno : previo a la determinacin se aade una cantidad conocida de una sustancia similar al analito (patrn interno)

Construccin de la Curva de Calibracin

Restar el blanco de las seales o asuma un intercepto distinto de cero en la curva
Sustraer el blanco de las seales es la prctica ms comn en los laboratorios

asegurase que las seales de las muestras queden en el intervalo de las seales de los estndares La curva de calibracin calculada con su pendiente e intercepto permite obtener la concentracin de las muestras desconocidas Debe estar seguro que la relacin entre la seal y la concentracin es lineal antes de aplicar los mnimos cuadrados para encontrar la recta

Si matemticamente la relacin no es conocida, grafique la curva y elija la mejor opcin para interpolar los valores de las muestras, el grfico es una opcin vlida.

Curva de Calibracin externa Obtencin de la recta:

Representacin grfica: A vs cc
Completamente lineal

Grfica de los puntos

3.5 3 Signal response 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 2 4 6 8 10 conc, mass, etc 12 14 16 y = 0.1976x

Calibration curve (n=4 measurments/ std)

Grfica de los promedios con rango de error 1

3.500 3.000 Signal response 2.500 2.000 1.500 1.000 0.500 0.000 0 2 4 6 8 10 conc, mass, etc 12 14 16 y = 0.1976x

Calibration curve
(n=4 measurments/ std)

Grfica de promedios con error indicando un intervalo de confianza de 95 %

3.500 3.000 Signal response 2.500 2.000 1.500 1.000 0.500 0.000 0 2 4 6 8 10 conc, mass, etc 12 14 16 y = 0.1976x

Calibration curve
(n=4 measurments/ std)

Curva de Calibracin externa Recta:

Completamente lineal
la lectura de la muestra se interpola en la recta obtenindose la concentracin de la solucin de muestra

Curva de Calibracin externa

Recta:
Rango lineal y regin no lineal
lectura muestra rango lineal: interpolacin en la recta lectura muestra en rango no lineal: interpolacin en regin no lineal, pero requiere mayor nmero de patrones en esa zona

Curva de Calibracin externa

Recta:
Puntos distribuidos no linealmente pero con una tendencia lineal manifiesta
Elevar nmero de datos establecer la mejor recta que pasa por los puntos ecuacin de los mnimos cuadrados residuos cuyo error corresponde a errores aleatorios de la medida y no a la concentracin

Curva de Calibracin externa

La efectividad y confiabilidad de sus resultados depende de la exactitud en las concentraciones de los patrones y la mnima diferencia entre la matriz de los patrones y de la muestra.

EJEMPLO A partir de una solucin patrn de 1000 ppm de Ca prepare la siguiente C. de C.

100 mL de solucin patrn de 100 ppm de Ca 100 mL de solucin patrn de 80 ppm de Ca 100 mL de solucin patrn de 60 ppm de Ca 100 mL de solucin patrn de 40 ppm de Ca 100 mL de solucin patrn de 20 ppm de Ca 100 mL de solucin patrn de 10 ppm de Ca 100 mL de solucin patrn de 5 ppm de Ca

Una muestra de disolucin de KMnO4, 1 * 104 M presenta un 36,6 %T cuando se mide a 525 nm en cubetas de 1.0 cm:
qu Absorbancia presenta la disolucin? a qu valor cambia el % T si la disolucin se midiera en cubetas de 2 cm? cul es la absortividad molar del compuesto a 525 nm? qu concentracin presenta una disolucin desconocida de analito si al medirse en las mismas condiciones que la muestra dio una lectura de 48,3 % T?

Igualdad de matrices
Opciones Prcticas
Separar el analito de la matriz de la muestra permite el uso de las curvas de calibracin externas Uso de las Curvas de calibracin de Adicin Estndar

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: adiciones estndar

El empleo ms habitual del Mtodo de las Adiciones Patrn es para eliminar la existencia de errores sistemticos generados por el efecto de matriz por parte de la muestra.

En este sentido los efectos de matriz son igualados en los patrones al igual que existen en la muestra.

Curva de Calibracin de Adicin Estndar

Formas de aplicacin de la Adicin Estndar:

Adicionar diferentes volmenes de disolucin patrn a varias alcuotas de muestra del mismo tamao. Despus cada disolucin se lleva a un volumen fijo, antes de efectuar la medida. Adicionar incrementos sucesivos de volmenes del patrn sobre un volumen fijo de muestra exactamente medido, requiere el control del volumen total en cada incremento.

Curva de Calibracin de Adicin Estndar

Preparacin de la serie de disoluciones: Preparar una serie de matraces aforados de volumen VT y aadir
alcuotas idnticas, VX, de la disolucin problema con concentracin cX volmenes variables de una disolucin patrn de analito que tiene una concentracin cS. reactivos apropiados y diluir hasta el volumen determinado VT, y

medir la Seal S

Curva de Adicin Estndar

Uso: minimizar interferencias
Preparacin de los patrones
En cada matraz vierta el mismo volumen de muestra Agregue cantidades o volumenes creciente de patrn o estndar Diluya a volumen conocida e igual todas las solucioneste

ejemplo

Solucin no. 1 Muestra vol. 5 Std vol. 0 Total vol. 10

2 5 1 10

3 5 3 10

4 5 4 10

solvent e estnd ar muestr a Std Conc=10 ppm

Adicin Estndar
Para calcular la concentracin de la muestra

x = 2.10 2 x = 4.20 ppm

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: adiciones estndar

Pendiente Calibracin Externa= Pendiente Adiciones Patrn

No hay efectos de matriz

Pendiente Calibracin Externa < Pendiente Adiciones Patrn

S hay efectos de matriz: calibrado interno revela exaltacin de la sensibilidad

Pendiente Calibracin Externa> Pendiente Adiciones Patrn

S hay efectos de matriz: calibrado interno revela inhibicin de la sensibilidad

PROTOCOLOS DE CALIBRACIN: adiciones estndar Dos diseos incorrectos en Calibracin Interna

Intervalo de concentraciones demasiado grande

Intervalo de concentraciones demasiado pequeo

Protocolos de Calibracin

Mtodo de las adiciones estndar Cada muestra requiere su propia calibracin. Se necesitan grandes cantidades de muestra. La automatizacin es difcil.

En trminos estadsticos es menos preciso porque la determinacin se realiza por extrapolacin.

Curva de Calibracin por Adicin Estndar

La concentracin de la muestra viene dado por:

bcs Cx = mVX

Curva de Calibracin de Patrn Interno

Se basa en la medida de la respuesta del analito y de otra sustancia empleada como patrn interno. Para esto se preparan una serie de patrones con cantidades variables y exactamente conocidas de analito y de patrn interno y se mide la respuesta del analito y del patrn interno.

Curva de Calibracin de Patrn Interno

Para construir la curva de calibracin se representa el cuociente de las respuestas entre el analito y el patrn interno, Ra/Rpi, respecto al cuociente de las concentraciones, Ca/Cpi, para cada uno de los patrones.

Curva de Calibracin de Patrn

Interno
A continuacin se le agrega una cantidad conocida de patrn interno a la muestra y se miden sus seales, se calcula la relacin de las respuestas y se determina la relacin de concentracin por interpolacin en la recta de calibracin.

Principio de aditividad de la Ley de Beer

Sistemas multicomponente : Si una solucin contiene dos o ms sustancias absorbentes, que no interactan entre s, la absorbancia total de la solucin corresponde a la suma de las absorbancias de las especies absorbentes

Ley de Beer:
AT = A1 + A2 + A3
AT = a1bc1 + a2bc2 + a3bc3

EJEMPLO
Para obtener el espectro de un compuesto absorbente, se prepararon tres soluciones de distintas concentraciones y se midieron sus A entre los 300 nm y 820 nm. Las medidas se resumen en el siguiente grfico; a) elegir tres longitudes de onda de trabajo, b) comprobar si se cumple la Ley de Beer a las longitudes de onda seleccionadas, c) seleccionar el rango de concentraciones para las curvas de calibracin, y d) elegir una longitud de onda y un rango de concentracin para la curva de calibracin que permita medir muestras cuyos contenidos del compuesto absorbente se encuentra entre 10 y 70 ppm.
2,500 50 ppm 25 ppm 10 ppm 2,000

1,500

1,000

0,500

0,000 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850

-0,500

Principio de aditividad de la Ley de Beer

AT = A1 + A2 AT = a1bc1 + a2bc2 Si se miden las A a las de mxima absorcin para cada especie y calculando previamente las absortividades a esas y manteniendo b constante, se pueden obtener las concentraciones de la mezcla por medio de un sistema de ecuaciones:

Principio de aditividad de la Ley de Beer

Para una mezcla de dos componentes absorbentes: c1 + c2 AT = a1bc1 + a2bc2 a11bc1 + a21bc2 = A T a12bc1 + a22bc2 = A T 1 para c1 2 para c2

Cuando los espectros estn bien resueltos

Los valores de se aplican a cada especie para cada longitud de onda, y se miden por separado Es posible determinar X e Y despejando las incgnitas en la ecuacin: A y b x b A A y b x b A X = ----------------------x b y b x b y b Y = --------------------x b y b x b y b

Cada smbolo a b es un determinante = ad bc c d

Ejemplo
Si las de los compuestos X e Y determinadas con compuestos puros son
272 nm 327 nm

M-1 cm-1

x 16440 3990 y 3870

6420

Una mezcla de los compuestos X e Y en una celda de 1,00 cm tiene una absorbancia de 0.957 a 272 nm y de 0.559 a 327 nm. Hallar las concentraciones de X e Y en la mezcla.

Principio de aditividad de la Ley de Beer

Una mezcla de los compuestos X e Y en una celda de 1,00 cm tiene una absorbancia de 0.957 a 272 nm y de 0.559 a 327 nm. Hallar las concentraciones de X e Y en la mezcla.

Resultados
X = 4.43 x 10-5 M Y = 5.95 x 10-5 M

Principio de aditividad de la Ley de Beer

Mezcla de tres componentes absorbentes: c1 + c 2 + c 3 AT = 1bc1 + 2bc2 + 3bc3 b cte A1 = 11c1 + 21c2 + 31c3 A2 = 12c1 + 22c2 + 32c3 A3 = 13c1 + 23c2 + 33c2 para 1 para 2 para 3

Principio de aditividad de la Ley de Beer

Mezcla de tres componentes absorbentes: Resolucin: matriz [3*3]
-1

c1 c2 c3
=

A1 A2 A3

11 12 13

21 22 23

3 1 32 33

Aplicaciones de la Ley de Beer: aditividad Espectrofotometria de derivadas Una de las dificultades mayores es la seleccin de las longitudes de onda para las mediciones; esto puede minimizar mediante:
Uso de la espectrofotometra de derivadas Uso de longitud de onda dual, mediante modulacin de la longitud de onda, fuente de corriente alterna.

Principio de aditividad de la Ley de Beer: uso de espectrofotometra de derivadas Espectro normal:

A
:

Espectro derivado:
Se grafica la primera derivada en funcin de la longitud de onda

Titulacin Fotomtrica
A + B C + D Especies Absorbentes:
Analito Reactivo o Titulante Producto

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el analito solamente

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el titulante solamente

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el producto solamente

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el analito y el titulante

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el producto y el titulante, pero el primero el doble que el segundo
A

Peq .

mL Titulante

Limitaciones y Desviaciones de la Ley de Beer

La Ley afirma que la A es proporcional a la concentracin de la especie absorbente. La Ley de Beer se cumple para una radiacin monocromtica que atraviesa una disolucin diluida, cuando la especie absorbente no participa en un equilibrio que depende de su concentracin.

Limitaciones :

Slo para soluciones diluidas (0.01 M) de la mayora de las sustancias Para soluciones de bajo contenido inico Para soluciones con bajo contenido de grandes especies moleculares de gran tamao que puedan afectar electrostticamente a la especie absorbente. Para soluciones cuyas concentraciones no modifiquen grandemente el ndice de refraccin de las soluciones

Limitaciones y Desviaciones de la Ley de Beer

Desviaciones :
Qumicas:
Por asociaciones, disiociaciones, y/o reacciones entre los componentes de la muestra con el analito, entre el analito y el solvente. Por cambios en el equilibrio qumico de la especie absorbente, por efecto de cambios de pH, temperatura, solubilidad, normalmente por causa de las diluciones.

Limitaciones y Desviaciones de la Ley de Beer

Desviaciones :
Instrumentales:
Por el no cumplimiento de hacer incidir sobre la muestra un haz verdaderamente monocromtico como lo contempla la Ley. Por la presencia de radiaciones parsitas, radiacin que contamina la radiacin separada por el sistema selector de longitud de onda. Esta radiacin se produce por efectos de dispersin de los diferentes componentes pticos del sistema monocromador.

Limitaciones y Desviaciones de la Ley de Beer Desviaciones :

Instrumentales:
Efecto del ancho de banda. Efecto de la utilizacin de longitudes de onda que correspondan a los extremos tiles de los espectrofotmetros.