SEAL

La aplicacin de un instrumento sobre el anlisis de una muestra, tiene como propsito producir una seal analtica (SA), la cual es el resultado de la interaccin entre la propiedad fsica o qumica de la muestra y la sonda o sensor del instrumento. La magnitud de la seal analtica, usualmente resulta ser directamente proporcional a la concentracin del analito presente en la muestra, SA CA Cada instrumento analtico entrega una seal an cuando en la muestra no esta presente el analito, esta seal producida, usualmente se conoce como seal blanco (Sbl), linea base o baseline. Por ello, la seal producida por el instrumento est echa de dos componentes: la seal analtica y la seal blanco: SP = SA + Sbl

RUIDO
Es el registro de interferencias, generadas al azar y dependientes del tiempo. Algunas veces son tan grandes que pueden ocultar la seal del analito El ruido es medido usando las mismas unidades con las que se mide la seal. El ruido, usualmente es de naturaleza elctrica y es originada por cambios de voltaje, corriente, potencia, y frecuencia

RELACION SEAL - RUIDO

Si bien la determinacin de la magnitud del nivel de la seal analtica, requiere de establecer la diferencia entre la seal de la muestra y la seal del blanco; tambin es necesario considerar el efecto de la presencia del ruido en la seal analtica. Para evaluar la consecuencias de este efecto se ha considerado por conveniente incorporar el factor que pueda establecer el nivel de cuantificacin de la seal respecto del ruido Este factor se conoce como cociente seal/ruido Matemticamente se define como: S/N = (promedio de la seal)/(desviacin estndar)

CRITERIOS Y PARAMETROS CARACTERISTICOS QUE DESCRIBEN LA CALIDAD Y RESOLUCION DEL METODO ANALITICO APLICADO Describen la calidad y rendimiento del mtodo analtico aplicado, permitiendo la comparacin de las mediciones de modo que el usuario pueda decidir la aplicabilidad del mismo en una situacin dada.

Estos son: Exactitud, Precisin, Sensibilidad, Lmite de deteccin, Lmite de cuantificacin, Lmite de linealidad, Rango dinmico, Selectividad.

EXACTITUD
Es el grado de concordancia entre la seal de la muestra y la seal del estndar (Entre el resultado experimental y el valor verdadero) La dificultad en medir la exactitud, radica en que muchas veces no se conoce el valor verdadero de la muestra, para solucionar este impase se recomienda usar: Material de referencia, material de referencia certificado o material estndar de referencia. En todas estas clases de material, una o ms propiedades del analito deben estar bien caracterizadas, para ser usados como estndares de calibracin.

NIVEL DE EXACTITUD DEL METODO

El nivel de exactitud del mtodo es medido como error absoluto (e) o como error relativo expresado en porcentaje (er): e = resultado obtenido resultado esperado er = [(resultado obtenido resultado esperado) / resultado esperado] x 100

Si el error relativo se sita entre el 0 y 1%, entonces el mtodo es sumamente exacto. Si el error relativo se sita entre 1% y 5% , entonces el mtodo es moderadamente exacto. Si el error relativo se superior al 5%, entonces el mtodo es de pobre exactitud. Origen del error sistemtico: Instrumental, Personal, Mtodo

PRECISION
Define el grado de dispersin de los datos (seal) en torno de un valor central (seal promedio), o la variabilidad de los mismos. La proximidad de las seales medidas expresa mayor precisin. La precisin de un mtodo puede ser evaluado bajo condiciones de experimentacin diferentes, bajo los trminos de repetibilidad y reproducibilidad. Repetibilidad: mide el grado de concordancia entre mediciones obtenidas por el mismo analista, usando el mismo instrumento, durante el mismo da. (Cun bueno es el analista) Reproducibilidad: mide el grado de concordancia entre mediciones obtenidas por diferentes analistas, usando varios instrumentos sobre un periodo largo de tiempo. (Cun relevante es el mtodo) Los parmetros de calidad que permiten evaluar la presicin del mtodo son: Desviacin estndar absoluta, Desviacin estndar relativa, Coeficiente de variacin y Varianza

Evaluacin de la Precisin de la informacin experimental Si N es el nmero de replicas de mediciones (x1, x2, x3,, XN) sobre una muestra, donde x puede ser la seal, S; o la concentracin calculada, C; entonces:
-El valor promedio (<x>) se define como:

<x> = (xi)/N
-La desviacin estndar estimada (s), o medida de la

precisin, se define como:

s = [((xi - <x>)2)/f]1/2

Donde: f (nmero de grados de libertad) = N - 1

-Desviacin estndar Relativa (DSR) = s / <x> a menudo

expresado como porcentaje y conocido por coeficiente de variacin) - Varianza = s2

SEAL Y CONCENTRACION
Para muchos mtodos instrumentales (con excepcin del potenciomtrico), la seal es funcin lineal respecto de la concentracin del analito sobre un rango de concentracion:

SP = mCA + Sbl
Donde: SP = seal producida por el instrumento CA = Concentracin del analito m = Sensibilidad del mtodo Sbl = Seal blanco

SENSIBILIDAD, (m)
Seala cunto cambia la seal cuando se produce un cambio en la concentracin del analito. m = S/CA Expresa la habilidad del mtodo para detectar los cambios en la seal debido a los cambios de concentracin en el analito Se manifiesta a travs de los factores: La pendiente de la curva de respuesta. Precisin de las mediciones.

SENSIBILIDAD ANALITICA,
= m / Depende de la concentracin del analito, desde que la desviacin estndar puede variar con la concentracin Incorpora precisin desde que m= No es afectada por la amplificacin de la seal. Si aumenta la ganancia de la amplificacin, tambin aumenta m y en cantidad similar.

SENSIBILIDAD EN LA CALIBRACION
Es la pendiente de la curva de calibracin (muchas de las curvas de calibracin son de tendencia lineal) SP = mCA + Sbl Donde: SP = seal producida por el instrumento CA = Concentracin del analito m = Sensibilidad de la curva de calibracin o del mtodo Sbl = Seal blanco La sensibilidad no es el mejor parmetro o indicador que mida la precisin

LIMITE DE DETECCION
Es la seal con la cual se puede detectar con confianza la concentracin ms pequea del analito presente en la muestra. La seal analtica debe ser mas grande que la seal del blanco, Cunto ms grande? Depende del cociente seal/ruido

S(LOD) = S(promedio)blanco + k blanco

Si k = 3, entonces el nivel de confianza es de 95%

S(LOD) = m CA(LOD) + S(promedio)blanco CA(LOD) = 3 blanco / m

LIMITE DE CUANTIFICACION
Si bien el lmite de deteccin indica la presencia del analito en la muestra, el lmite de cuantificacin es la seal que permite cuantificar el mnimo contenido del analito en la muestra. S(LOQ) = S(promedio)blanco + 10 blanco S(LOD) = m CA(LOQ) + S(promedio)blanco CA(LOQ) = 10 blanco / m

LIMITE DE LINEALIDAD
Es la seal que permite identificar el lmite superior de concentracin para el cual, la tcnica puede ser aplicada exitosamente; arriba de l, la respuesta es diferente.

RANGO DINAMICO
Est determinado entre el lmite de cuantificacin (LOQ) y el lmite de linealidad (LOL) Es el rango dentro del cual el mtodo es til. La aplicacin apropiada debe responder a un rango dinmico entre 2 a 6 rdenes de magnitud

SELECTIVIDAD
En cada ensayo, se busca una seal que sea generada desde un analito especfico En cada ensayo, se obtiene una seal que puede estar hecha de la contribucin de otras sustancias que estn presentes en la muestra. Por ello, es necesario minimizar la contribucin desde las otras sustancias y estar seguros de que ellas no interfieren en la seal del analito especfico, esto se puede lograr determinando el coeficiente de selectividad SP,T = mACA +mBCB + Sbl Coeficiente de selectibildad KB,A = mB/mA Donde: CA, es la concentracin del analito A, y CA es la concentracin del analito B

Definiciones Elementales en Estadstica

Error.- Diferencia real entre la concentracin medida y la
concentracin real.
-Error al azar.- (random) Es impredecible y no puede ser

eliminado, por tanto requiere de un tratamiento estadstico. mediante procesos de calibracin.

-Error sistemtico.- Es predecible y pude ser eliminado

El error al azar afecta la precisin, y el error sistemtico afecta la exactitud.

Evaluacin de la Precisin de la informacin experimental Si N es el nmero de replicas de mediciones (x1, x2, x3,, XN) sobre una muestra, donde x puede ser la seal, S; o la concentracin calculada, C; entonces:
-El valor promedio (<x>) se define como:

Definiciones Elementales en Estadstica

<x> = (xi)/N
-La desviacin estndar estimada (s), o medida de la

precisin, se define como:

s = [((xi - <x>)2)/f]1/2

Donde: f (nmero de grados de libertad) = N - 1

-Desviacin estndar Relativa (DSR) = s / <x> a menudo

expresado como porcentaje y conocido por coeficiente de variacin) - Varianza = s2

Definiciones Elementales
Curva Calibracin.- Define la relacin de dependencia
entre la seal, como una variable dependiente, y la concentracin, como una variable independiente. Usualmente la dependencia resulta ser no lineal para altas y bajas concentraciones, mientras que para concentraciones intermedias, resulta ser lineal.

Rango Dinmico.- Resulta ser la parte lineal del ploteo o

de la curva de calibracin.

Regresin lineal.- A menudo este mtodo es usado para

hallar la mejor lnea recta que represente la tendencia lineal de los puntos experimentales. La pendiente de la parte lineal define la sensibilidad m del mtodo instrumental.

Mtodos de Medicin
(Mtodo Curva de Calibracin)

La curva de calibracin resulta de construir un ploteo, usando la seal S como una funcin de la concentracin C, Este ploteo se obtiene a partir de mediciones de una serie de estndares, llevadas acabo dentro de ciertas condiciones experimentales.
Este es el mejor mtodo cuando los efectos de la matriz resultan ser pequeos e independientes de la concentracin del analito.

Definiciones Elementales
Estndar.- Un estndar es una muestra con una
Blanco.- Un blanco es un tipo de estndar.
Los trminos estndar y blanco, a menudo se refieren a las seales generadas por este tipo de muestras. concentracin conocida de analito y de composicin similar a una muestra desconocida o problema.

Mtodo Estndar.- Tiene como propsito validar la

dependencia funcional entre la seal generada por el anlalito y la concentracin del mismo, ello lo hace, mediante la construccin de una curva de calibracin (que resulta de plotear las seales vs las concentraciones de un grupo de estndares), y que permite definir la sensitividad del mtodo instrumental utilizado.

Ejemplos numricos por desarrollar

1.- Un espectrmetro de AA con horno de grafito, fue usado para determinar la concentracin de cobre en agua de beber. Un grupo de muestras blanco rindieron una desviacin estndar de 0.015, mientras que el grupo de estndares produjo la siguiente informacin: [Cu] (ppm) Calcular: El rango dinmico del mtodo La sensitividad del mtodo El LOD y LOQ Si una muestra de agua rinde una absorbancia de 0.366. Calcular la concentracin de Cu en la muestra de agua 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Absorbancia (A) 0.151 0.282 0.463 0.564 0.654

Ejemplos numricos por desarrollar

2.- Un laboratorio analtico comercial ha recibido un estndar de muestra vegetal desde el Instituto Nacional de Estndares y Tecnologa (INET) y en l ha ejecutado un anlisis de un pesticida, hallando una concentracin de 8.4 1.2 ppb. La informacin reportada por INET en la hoja de datos seala que el estndar tiene una concentracin de pesticida de 11 1 ppb. Seale a que tipo de error se debe el 1.2 ppb, y la diferencia entre la concentracin medida de 8.4 ppb y la concentracin real de 11 ppb. Cul tipo de error es corregible?

Ejemplo numrico.- Consideremos la siguiente informacin

experimental obtenida desde un examen espectroscpico practicado a un blanco, a 5 muestras estndares, y a una muestra problema.

Definiciones Elementales

Definir la curva de calibracin, determinar el rango dinmico lineal y la sensitividad

Muestra Blanco A (Absorbancia) 0.031 Concentracin (ppm) 0.00

Estndar 1
Estndar 2 Estndar 3 Estndar 4 Estndar 5 Muestra

0.173
0.422 0.702 0.901 1.113 0.501

2.00
6.00 10.00 14.00 18.00 ?

Mtodos de Medicin
Un problema usual en la medicin de la concentracin de un analito en la muestra, es el efecto de la matriz. La matriz de la muestra, algunas veces interfiere con la medicin. Por ejemplo, una muestra slida puede ser no uniforme, por tanto la luz dispersada por la muestra y la absorbancia medida es ms grande que la absorbancia real. Segn ello, los elementos, iones, o compuestos que especficamente interfieren con la medicin de un particular analito son llamadas interferencias. Las tcnicas para reducir los efectos de la matriz, incluyen:

Mtodos de Medicin
(tcnicas para eliminar interferencias)
1.- Sustitucin de la matriz.- Disolviendo la muestra en un solvente lquido o gas, triturando la muestra con BrK.

2.- Separacin.- Usando cromatografa, extraccin por solventes, etc. Para aislar el analito desde la matriz compleja.
3.- Preconcentracin.- Recogiendo el analito desde la muestra en un volumen ms pequeo para aumentar su concentracin. 4.- Derivatizacin.- Modificar qumicamente el analito para mejorar su volatilidad, la absorcin de luz, formacin de un complejo, etc., de modo que el instrumento pueda ms fcil medir la concentracin. 5.- Enmascaramiento.- Modificando interferencias, as que ellas no sean ms detectadas por el instrumento.

Mtodos de Medicin
(Mtodo Absoluto)
Un mtodo absoluto no requiere calibracin para calcular la concentracin desde la respuesta del instrumento. La sensitividad puede ser obtenida desde ecuaciones tericas. Ejm. Coulometra o titulacin coulomtrica.

Todos los otros mtodos requieren de calibracin para determinar la sensitividad.

Existe tres procedimientos para obtener o extraer la concentracin desde la respuesta de un instrumento. Estos son: Curva de calibracin, Adicin de un estndar, y Uso de un estndar interno