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Qu es una enzima?
Es un tipo de protena que acta como catalizador de reacciones qumicas. Incrementa la velocidad de reaccin sin cambiar el punto de equilibrio. Como catalizador:
Es especfico para cada reaccin. No necesariamente para un solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son. Tiene gran poder cataltico, transformando hasta 103 a 104 molculas por segundo. Est sujeto a diversos mecanismos de regulacin de modo tal que no genere ms producto que el necesario.
Actividad enzimtica
Es la forma de medida de una enzima. La ecuacin general de las reacciones enzimticas es:
E S Cof1 ES E P Cof 2
Donde la enzima se une al sustrato para generar un producto. Algunas veces con el auxilio de un cofactor que se modifica durante la reaccin. La actividad enzimtica se mide por la reaccin cataltica bajo la forma de desaparicin del sustrato por unidad de tiempo. Tambin por formacin de producto o modificacin del cofactor. Unidades: katal = moles de sustrato/segundo. Unid. Internacionales: umol/minuto. 1 U= 16,7 nkat.
Clasificacin de enzimas
Clase de enzima Tipo de reaccin catalizada
Oxidoreductasas Transferasas Hidrolasas Liasas Isomerasas Ligasas Reacciones que transfieren electrones de un sustrato a otro.xido reduccin Transfieren un grupo funcional de una molcula a otra. Grupos como metilos, acilos, fosfatos etc Rompen enlaces entre carbonos u otras molculas con la adicin de una molcula de agua. Rompen enlaces C-C, C-S, C-N sin el ingreso de una molcula de agua. Transforman un ismero en otro transfiriendo un grupo funcional de una posicin a otra. Forman enlaces C-C, C-N, C-O y C-S uniendo dos molculas con gasto de energa.
enzima
sustrato
enzima
productos
sustrato
producto
Actividad cataltica
Las enzimas aceleran la velocidad de reaccin por las siguientes razones: La unin de sustrato y enzima incrementa la concentracin efectiva de sustrato en las inmediaciones del sitio activo. Hay tambin un cambio conformacional que orienta al sustrato. La unin enzima sustrato tiene un nivel ms alto de energa y las modificaciones de longitud y ngulo del sustrato asemejan a la forma del estado transitorio. Algunos de los residuos del sitio activo, participan de la reaccin donando y aceptando protones. Algunos residuos catalticos tienen grupos que ayudan a romper enlaces covalentes.
Localizacin enzimtica
Na/K ATPasa Retculo endoplasma Glucosa 6 fosfatasa
membrana
Las enzimas ejercen su funcin predominantemente en el interior celular. Mas an lo hacen en determinado organelo de la clula. Las enzimas que se encuentran en el plasma o lquidos diversos corresponden a aquellas que se estn eliminando y muy pocas como la LCAT (Lecitina colesterol acil transferasa), LLP (Lipasa lipoproteica), ejercen su funcin a nivel plasmtico.
Mitocondria
Temperatura
No existe actividad enzimtica a -273C o cero absoluto. A partir de esa temperatura los incrementos provocan mayor actividad enzimtica. La que se expresa como coeficiente de temperatura o Q10. Esto es, el incremento de actividad por cada 10C de aumento de temperatura. En trminos generales Q10 = 2, es decir que por cada 10C de temperatura la velocidad se dobla. Existe una temperatura ptima tras la cual los aumentos provocan desnaturalizacin de la protena enzimtica y prdida de la actividad.
actividad
0
temperatura
70
pH
Cada enzima tiene un pH ptimo de trabajo, el cul es variable. Las enzimas intracelulares trabajan entre 5 y 9 , las enzimas digestivas pueden trabajar en pH diferentes. Los extremos de pH afectan la ionizacin de los centros activos (-COO- NH3+ SH).
0 pH
14
pH cido (inac)
pH ptimo (activo)
pH alcalino (inac)
SP
K 1
K1
K1 ( P) Keq K 1 (S )
K1
Enz S Enz P
K 1
Keq
K1 K 1
( P) (S )
Vmax
Vmax/2
Km.
Vmax[ S ] Km [ S ]
Bajo estas condiciones Vmax se observa cuando todos los sitios activos estn llenos de sustrato. Toda la enzima est bajo la forma de [ES] y la Km se define como concentracin de sustrato a Vmax/2 Vmax: es un ndice de la eficiencia de una enzima. Es la velocidad cuando todos los sitios activos estn saturados, y es proporcional a la concentracin de la enzima. Sus unidades son unidades de velocidad. Km: es una medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato. Una baja Km indica alta afinidad entre enzima y sustrato. Las unidades de Km son unidades de concentracin.
La concentracin de sustrato es tan grande con respecto a la de enzima, que la formacin de ES no altera significativamente la concentracin de sustrato. Al inicio de la reaccin la concentracin del producto es tan insignificante que la velocidad descrita como k4 puede ser ignorada. La velocidad de transformacin de ES en E+P(k3) es el factor limitante de la reaccin. La formacin de ES es rpida y reversible y es igual a la velocidad de desaparicin de ES.
1/v
1 km 1 1 . v Vmax [ S ] Vmax
Cuando 1/v se grafica frente a 1/s se obtiene una recta, donde la pendiente es Km/Vmax. -1/Km La interseccin en el eje de y es igual a 1/Vmax y la del eje de x es igual a 1/Km.
1/Vmax
1/[S]
Inhibidores competitivos
Estructuras semejantes al sustrato que compiten con l por el mismo centro activo. Sus efectos pueden revertirse si se incrementa la concentracin del sustrato hasta ocupar todos los centros activos. La Vmax no cambia, pero si el Km porque se necesita ms sustrato.
1/V
inhibidor
1/Vmax -1/Km
[S]
1/[S]
Inhibidores no competitivos
Estructuras diferentes al sustrato por lo que se unen a un sitio independiente de la enzima. Ambos, sustrato e inhibidor pueden unirse a la enzima al mismo tiempo. Su efecto no puede revertirse aumentando la concentracin del sustrato. No tiene efecto sobre la Km pero s sobre la Vmax.
1/V V inhibidor
1/Vmax
[S]
-1/Km
1/[S]
Inhibidores irreversibles
Reaccionan covalentemente con la cadena lateral de un aminocido de la enzima, para formar un complejo estable permanentemente inactivado. Se les llama tambin substratos suicidas. Su efecto es igual al de un inhibidor no competitivo.
LDH
LDH
10
Isoenzimas
Enzimas que realizan la misma funcin pero difieren en su estructura qumica y propiedades cinticas. Las formas isoenzimticas distintas pueden pertenecer a distintos tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen. Generalmente son estructuras oligomricas con varios tipos de cadenas proteicas -dmeros o tetrmeros- .
100% % 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
Isoenzimas LDH
LDH1 LDH2 LDH3 LDH4 LDH5
Eritrocitos
Pulmones
Hgado
Rin
Miocardio
Msculo
Bazo
Dehidrogenasa lctica
Existen cinco isoenzimas de la deshidrogenasa lctica (LDH). Cada una es un oligmero con cuatro protmeros de los tipos H y M y tiene un PM de 34 000. Los protmeros se combinan de manera distinta y se originan en distintos tejidos con preferencia. El suero tiene un contenido representativo de todos los tejidos.
Isoenzima SubunidadesTejido predominante LDH1 HHHH corazn LDH2 HHHM corazn LDH3 HHMM rin, pulmn LDH4 HMMM hgado LDH5 MMMM hgado
normal
infarto
Creatino fosfokinasa
Isoenzima CK1 Ck2 CK3 Subunidades BB MB MM Tejido predominante Cerebro Msculo cardiaco Msculo esqueltico
(+)
CK1 CK2 CK3
Existen tres isoenzimas de la creatino fosfokinasa. Cada una es un dmero formado por la combinacin de protmeros M y B. Cada dmero representa a un tejido en particular.
(-)