Determinacin de malatin residual en alimentos de origen vegetal

Objetivo:
Determinar la concentracin de malatin residual en la superficie de frutas y vegetales con un mtodo colorimtrico, para que el alumno relacione la cantidad encontrada con el riesgo toxicolgico mediante el LOAEL para este insecticida y el consumo de dichos alimentos a largo plazo.

Cuestionario
1.- Seala la diferencia entre plaguicida e insecticida.
Se define como plaguicida a toda sustancia qumica inorgnica u orgnica que se emplea para combatir animales o plantas perjudiciales para el hombre, animales domsticos o plantas tiles. Mientras que los insecticidas tienen mayor especificidad para eliminar insectos. 2.- Qu tipo de insecticida es el malatin y qu ventajas presenta su uso con respecto a los insecticidas organoclorados? El malatin es un tipo de insecticida organofosforado de mayor efectividad y menor persistencia frente a los organoclorados. Presenta una permanencia dbil en el medio y son degradados rpidamente por el organismo. NO bioacumulable.

3.- Cules son las enzimas utilizadas en mamferos e insectos para la biotransformacin del malation? Qu productos genera cada una? Las enzimas tanto en los mamferos como en los propios insectos son: carboxiesterasas, oxidasas y fosfatasas. El malatin es detoxificado en mamferos por hidrlisis a cargo de carboxilesterasas hasta el monocido de malatin que no es txico, pero que es muy efectivo en insectos. Los mamferos lo hidrolizan, con lo cual no es fcil que niveles txicos de organofosforados lleguen al sistema nervioso. La toxicidad selectiva del malatin para aves e insectos, radica en que las esterasas no son tan abundantes en estas especies. No obstante, en ciertas cepas de insectos que son resistentes al malatin, el mecanismo se asocia con un alto nivel de arilesterasa, con la que pueden desintoxicarse por hidrlisis del insectida. 4.- Cul es el mecanismo de accin del malatin?

Los organofosforados entran al organismo por va cutnea, respiratoria y digestiva. Los compuestos organofosforados actan por inhibicin de la acetilcolinesterasa, que lleva acabo la hidrolisis de acetilcolina en colina y cido actico. Los compuestos organofosforados impiden esta hidrolisis por lo que la acetilcolina se acumula causando efectos en el sistema nerviosos central. 6.- Indica el valor del lmite mximo residual (LMR) de malatin para frutas ctricas y vegetales de acuerdo a la legislacin vigente.

LMR frutas citricas: 7mg/Kg y vegetales: 1mg/Kg

Reaccin
O H2C H3CO H3CO OH P O H3CO H3CO S P O CH C C O O O C2H5 C2H5 H3CO H3CO H2C S P O CH O C C O O OH C2H5

O H2C H3CO H3CO SH P S H3CO H3CO S P S CH C C O O O C2H5 C2H5 H3CO H3CO H2C S P S CH

O C C O OH O C2H5

O H3CO H3CO OH P S H3CO H3CO P H2C S S CH C C O OH OH

Procedimiento
Pesar 250 g de muestra

Colocar muestra en un frasco de vidrio

Aadir 60 mL de diclorometa no

Tapar y agitar vigorosame nte por 5 minutos.

Filtrar el extracto

Medir el volumen del filtrado

Tomar dos alcuotas de 10.0 mL con pipeta volumtrica Transferir cada fase orgnica en el mismo embudo de separacin del cual proviene.

Colocar cada alcuota en un embudo de separacin.

Adicionar 5.0 mL de etanol y 0.2 mL de disulfuro de carbono 0.5% (disolucin II).

Agitar suavement e los embudos.

Adicionar 15 mL de disolucin cida de sulfato de sodio (disolucin IV).

Agitar suavement e por 1 minuto.

Recolectar la fase orgnica en un vaso de precipitado .

Aadir 5 mL de etanol, agitar y aadir 0.2 mL de NaOH 6 N (disolucin V). Aadir 0.2 mL de la disolucin de cloruro frrico (disolucin VII), agitar y desechar la fase orgnica.

Agitando nuevament e por 5 minutos, dejar reposar 1 minuto. Al blanco de muestra, aadir 5 mL de dicloromet ano y 0.3 mL de agua destilada.

Adicionar 15 mL de la disolucin de sulfato de sodio (disolucin III). A la otra fase acuosa aadir 5 mL de diclorometa no y 0.3 mL de disolucin de sulfato cprico (disolucin VIII).

Agitar y descartar la fase orgnica.

Agitar suavement e los embudos por 1 minuto y colectar las fases orgnicas;

A la fase acuosa aadir 5 mL de diclorometa no y una gota de indicador de fenolftalen a al 1%. Ajustar a cero el espectrofot metro con diclorometa no.

Ajustar el pH a 5 agregando gota a gota HCl 6 N (disolucin VI). Leer el porcentaje de transmitanc ia de las muestras a 420 nm.

Agitar el embudo y comprobar con el vire del indicador.

Resultados
Absorbancia (=420nm)

Curva patrn malatin

0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04 0.045 y = 6.5452x + 0.024 R = 0.9583

Punto de la curva BLANCO 1 2 3

% Transmitancia 100 81.85 65.95 53.7

Concentracin mg/mL

Tubo

Volumen de disolucin patrn (mL) 0 1.0 2.5 5.0

Concentracin de malatin

Transmitancia en (%) ( =420 nm) 100 81.85 65.95 53.7

Absorbancia (=420nm)(-log T) 0.00 0.090 0.181 0.270

0 1 2 3

0.00 0.008 0.02 0.04

Clculos
Para la absorbancia empleamos:
Absorbancia = 2 - log (% transmitancia), sta se da porque las unidades de absorbancia son de 0 a 2. La absorbancia se relaciona con la transmitancia de la siguiente forma: Absorbancia = log (1/T) Absorbancia = - log (% transmitancia/100) Absorbancia = 2 - log (% transmitancia)

Ejemplo de clculo para calcular la absorbancia:

Abs = 2 - log (81.15) = 0.0907

Para calcular la concentracin de malatin (mg/mL):

50 0.1 1 8 2 1000 100 1 100 2 100 1 . Ejemplo para calcular concentracin: = 0.04 2.5 5.0 = .

Equipo /muestra

Peso muestra (g)

Volumen extracto (mL)

% Transmitancia

Absorbancia

Equipo 1
Chile poblano Equipo 2 Naranja 350.0 25 106.1 50

Blanco
Muestra Blanco Muestra

97.37
92.73 90.53 89.75

0.0116 0.0328 0.0432 0.0470 0.0220 0.0446 0.0164 0.1355 0.0432 0.0272 0.0248 0.0465 0.0259 0.0226 0.0093 0.0500 0.0258 0.0167 0.0602 0.0805

Equipo 3
Toronja Equipo 4 Mango Equipo 5 Tomate Equipo 6 Limn Equipo 7 Ejotes Equipo 8 Chilacas Equipo 9 Elote Equipo 10 Cilantro 86.6 39 362.6 32 286.8 46 250 29 305 23 209 94 296.5 28 315.7 22

Blanco
Muestra Blanco Muestra Blanco Muestra Blanco Muestra Blanco Muestra Blanco Muestra Blanco Muestra Blanco Muestra

95.06
90.23 96.29 73.19 90.53 93.92 94.45 89.84 94.20 94.94 97.88 89.12 94.23 96.23 87.06 83.09

Con la ecuacin obtenida de la curva patrn

X= (y-0.024 / 6.5452)
Para calcular el valor de Y, al valor de absorbancia de la muestra se resta el valor del blanco de muestra, el resultado de Y ser mg de malatin/mL.
Con ste valor se realiza un anlisis para conocer los mg de malatin /Kg tomando en cuenta las diluciones realizadas.
0.041 0.0239 = 6.5451

0.0025 mg de malatin / mL

0.0025 5.0 46 1000 10 286.8 1 = .

Muestra

Peso muestra (g)

Volumen extracto (mL) 50 25 22 28

Absmuestra Absblanco

Concentracin de malatin (mg malatin/mL) ---0.01454

PPM (mg malatin/kg) 0 0 0 1.166

Chile poblano Naranja Toronja Mango

106.1 350.0 315.7 296.5

0.0212 0.0038 0.0226 0.1191

Tomate

209

94

- 0.0160

..

Limn Ejotes Chilacas Elote Cilantro

305 250 286.8 362.6 86.6

23 29 46 32 39

0.0217 -0.0034 0.0407 -0.0091 0.0203

.. .. 0.0025 ---

0 0 0.200 0 0

1.4 c o n c e n t r a c i n ( p -0.2 p m -0.4 -0.6 ) 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 1 2

Malatin en alimentos

10

alimentos

Problema
Determinar el contenido de malatin residual en la muestra vegetal. Calcular la cantidad necesaria de vegetal que deber consumir un adulto (60kg peso corporal) para presentar efectos adversos. Para ello hay que considerara que el LOAEL en ratas macho para malatin es de 100mg/kg corporal por da.

100

1000

0.1

60 (0.1 ) = 6 1 6 mg de malatin en humanos de 60 kg para presentar efectos adversos a la salud. Como en 1kg de chilaca de nuestra muestra encontraremos 0.2004 mg de malatin, por lo tanto se debe consumir 20.04 kg de chilaca de nuestra muestra analizada para que un humano de 60 kg pueda presentar daos adversos

Anlisis y conclusiones
De forma experimental obtuvimos resultados de Transmitancia, los cuales nos sirven para poder obtener la Absorbancia:
Absorbancia= 2-log(% transmitancia). Para nuestra muestra, la cantidad de malatin es 0.2004 ppm lo cual nos indica que est dentro de la norma establecida, pues la cantidad mxima de residuos de malatin permitida por la FDA y la EPA en cosechas de alimentos es 8 ppm.

Analizando los valores grupales se pueden observar valores negativos de concentracin (mg malatin/mL), la resta resulta negativa porque los valores de absorbancia medidos son menores a los de la ordenada al origen obtenida en la curva patrn. Por lo tanto, los resultados para reportar PPM tambin resultan negativos, esto se puede deber a un procedimiento mal realizado , o bien porque el alimento analizado no contiene residuos de malatin pues no fue utilizado durante su cosecha.

Bibliografa
Valle Vega, P. TOXICOLOGIA DE ALIMENTOS. Departamentos de alimentos y biotecnologa. Facultad de qumica. Universidad nacional Autnoma de Mxico. Paginas 18-28
http://www.redsalud.gov.cl/archivos/alimentosynutricion/i nocuidad/resol20581residuosplaguicidas.pdf. consulta realizada el 26 de febrero de 2013 a las 10:00 horas. AOAC. 2005. Official Methods of Analysis. Guidelines for Collaborative study. Procedures to Validate Characteristics of a Method of Analysis. Appendix D. United States, p: 112