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FACULTAD DE MEDICINA METODOS DE ESTUDIO DE LA CELULA Y TEJIDOS

RESEA HISTORICA Antonio Van LEEUWENHOEK

NIVELES DE ESTUDIO CELULAR


Estructural Ultraestructural Fisiologa Celular Bioquimica Citoquimica Biologa Molecular

EQUIPOS DE MAGNIFICACION
Limite de la vision humana 0.1 mm. Tipos de microscopios a. pticos b. Electrnicos c. Microscopios de rayos X d. Microscopios de barrido con sonda - Microscopia de efecto tunel
- Microscopio de fuerza atmica

Dimensiones en Microscopa
SISTEMA MTRICO DECIMAL Submltiplos del metro ABREVIACIN UNIDADES TRADICIONALES

Metro Decmetro Centmetro Milmetro 0.1 mm. 0.01 mm. 0.001 mm. 0.1 micra 0.01 micra 0.001 micra 0.1 nanometro

micra

nm A

Milimicra o nanometro Angstron

Microscopio de Campo Claro


Microscopios pticos simples:
Lupas,

estereoscopicos, de diseccion Forman imgenes derechas Poco aumento 50X

MICROSCOPIOS OPTICOS COMPUESTOS


Parte mecanica, estativo o montura:

Parte optica

Pie Columna (Pilar, charnela y brazo) Tubo: Revolver Tornillos macrometrico y micrometrico Platina: Pinzas sujetadoras y mandos coaxiales Subplatina: Tornillos del condensador, anillo portafiltro, diafragma iris, soporte de luz o espejo

Oculares: Tipos Objetivos: Tipos (magnificacion, A.N., longitud del tubo, espesor de la laminilla) Sistema de iluminacion: Fuente de luz, condensador y diafragma

Microscopio ptico Compuesto

Nociones de Microscopia
Factores que determinan la mayor capacidad del microscopio
Calidad de los lentes (correccin de

aberraciones cromticas, de esfericidad y curvatura de campo) Longitud de onda determina el poder de resolucin Resolucin (0.2 m)

Resolucion
Lmite de resolucin (r) = 0.61 x (lambda) AN En donde:
0.61 es una constante que expresa la diferencia de contraste mnimo que puede detectar el ojo humano. Lambda, es la longitud de onda de luz utilizada. AN es la apertura numrica del objetivo.

Apertura Numrica

Aberraciones de los Lentes

Curvatura de campo

Aberracin cromtica

Aberracin de esfericidad

MICROSCOPIOS ESPECIALES

Caracter sticas
Usos

Contraste de Fase
Observacin de clulas y tejidos vivos

De Interferencia
Determinar el peso seco de sustancias, observacin de clulas y tejidos vivos

De Polarizacin
Observacin de minerales, de componentes celulares o titulares con ordenamiento molecular

De Campo oscuro
Observacin de grmenes

Luz ultravioleta
Identificacin de cidos nucledos de clulas

Fluorescencia
Identificacin de cidos nucledos , cromosomas y complemento par inmunofluorecencia

Fuente

Luz (fotones)

Luz (fotones)

Luz que vibra en una sola direccin


De vidrio

Luz (fotones)

LUV de 200 400 nm

LUV de 400 nm

Lentes

De vidrio: Condensador y objetivos con placas cambiadora de fases Los retardos de fases en sustancias con densidad y espesor variables, no son percibidos por el ojo humano, peo cuando se convierten en diferencia de intensidad luminosa por las placa cambiadora de fase adelantando o retardando un cuarto d fase en condensador y objetivo, se exagera esa diferencia y se observa estructuras

De vidrio

De vidrio

De cuarzo o fluorita

De cuarzo o fluorita

Fundamentos

Se logra la separacin de la luz en dos haces antes de llegar al preparado. Un rayo pasa por el preparado y el otro fuera de el y sirve para comparar

Se basa en la existencia de sustancias birrefringentes con alto grado de orientacin molecular (anistropas) que dividen el rayo incidente en un rayo ordinario (eliminado por el nicol de calcita y un rayo extraordinario que ingres al eje ptico)

Condensador especial, dirige rayos de luz en forma oblicua al portaobjetos sin que ningn rayo directo ingrese al objetivo Se aprecia un fondo oscuro con puntos brillantes cuando hay muestra que refleje la luz

Es invisible a nuestra vista Su longitud de onda oscila entre 400 nm a 200 nm Se produce conjuntamente con luz visible en el arco voltaico y en las lmparas de vapor de mercurio Tienen efectos perjudiciales sobre las clulas vivas y puede provocar lesiones oculares No atraviesa las lentes de vidrio, con excepcin de las ondas cuya longitud se aproxima a los 400 nm Se propaga a travs de lentes de cuarzo fundido o de fluorita Impresiona las placas fotogrficas Se hace visible en las pantallas fluorescentes Es absorbida por determinadas sustancias

Aprovecha propiedad de ciertas sustancias que al ser excitadas por radiaciones emiten luz visible. Fluorescencia primaria, natural o autofluorecencia (clorofila que da fluorescencia roja, la riboflavina que produce fluorescencia amarilla; el bacilo de la tuberculosis) Fluorescencia secundaria inducida, (anaranjado de acridina, la quinadrina, etc)

Observacin

Visual, micrografas

Visual, micrografas

Visual, micrografas Nicol polarizador (debajo del condensador) Nicol analizador (encima del objetivo)

Visual, micrografas Condensador con filtro opaco que bloquea el paso de luz al objetivo

Impresionan placas fotogrficas Filtros seleccionados determinan longitud de onda Propiedades de visualizar en pantallas fluorescentes sustancias que absorben la ultravioleta

Visual, micrografas Y placas fotogrficas Filtro e radiacin ultravioleta

Peculiaridad

La separacin de los rayos (directo y refractado) es en todo el preparado

Similar al Microscopio de contraste de fase. Se logra colores de interferencia

Microfotografa con contraste de fasecon 400 X. Etapa de 4 blastmeras de un cigoto de Emerita anloga (muy muy)

Microfotografa tomada con microscopio de contraste de fase. A la izquierda se aprecia un vulo, a la derecha un cigoto, con 2 y con 4 blastmeras, de Emerita anloga.

Microfotografas de clulas epiteliales de la cavidad oral vistas con microscopio de: (a) Campo claro. (b) Contraste de fase. (c) De interferencia

Microfotografa de la corona de un diente visto con microscopio de luz polarizada: E = Esmalte. D = Dentina 1 = Laminilla del esmalte. 2 = Lmite amelodentinal. 3 = Canalculos dentinales

Microscopa de campo oscuro. a) Con condensador paraboloide. B) Con condensador cardioide (en forma de un corazn).

Microfotografa de clulas tomadas con microscopio de fluorescencia. Los colorantes fluorescentes utilizados permiten ver los ncleos de color azul y en el citoplasma se aprecian fibras del citoesqueleto con fluorescencia verde

MICROSCOPIO ELECTRONICO

RAYOS CATODICOS
CARACTERISTICAS Y PROPIEDADES Son haces de electrones que se propagan en el vaco siguiendo un trayecto ondulatorio. Se puede disminuir a voluntad la longitud de estas ondas, hasta conseguir ondas miles de veces ms pequeas que las de luz (esto se consigue aumentando la diferencia de potencial entre el ctodo y el nodo). Estos electrones atraviesan lminas finsimas de materia. Son deflexionados por campos electromagnticos Producen efectos trmicos y mecnicos Son invisibles. Producen fluorescencia al incidir sobre planos de material fluorescente. Impresiona las placas fotogrficas.

DIFERENCIAS ENTRE: MICROSCOPIO OPTICO Y ELECTRONICO

Microscopio Optico
De interferencia de rayos luminosos Simple con aire

Caracteristicas
Imagen dada por el M Tubo

Microscopio Electronico
Rayos catodicos, deflexionados por campos elecromagneticos Al vacio con gran diferencia de potencial

Luz (fotones)
Ocular, objetivos y condensador

Fuente
Lentes

Filamento de Tungsteno (electrones)

Bobinas: Campos electromagneticos o condensador, objetivo y proyectos

Celulas vivas o muertas


Coloreada o no 0.1 m 5 500 A

Estudian
Observacion de imgen Poder de resolucion Longitud de onda

Celulas muertas

Diferentes tonos de gris, sombreados electronicamente 1 nm o 10 A 0.05 A (puede disminuir a voluntad por difenerencia de potencial entre nodo y ctodo)

500 a 2000 de veces

Aumento

200 000 a 300 000 aumentos directos

Microscopio Optico
Formol, Carnoy, etc Parafina o celoidina Con el microtomo De acero De 4 a 10 m De vidrio Estructura Visual, micrografias y placas fotgraficas De campo claro, de contraste de fase, de Interferencia, de luz polarizada, de acmpo oscuro, de LUV, de fluorecencia Mecanica y optica

Caracteristicas
Fijacion Inclusin Cortes Cuchilla para corte Grosor de cortes Portaobjeto Nivel de observacion Observacion

Microscopio Electronico
Bicromato dde K., tetraoxido de osmio, formaldehido Acrilicos o resina epoxi Con el ultramicrotomo De diamante o vidrio 20 a 100 nm De colodion, aluminio o berilio Ultraestructura Impresionan placas fotograficas 1 000 000 de aumentos De transmision, de barrido (scanning)

Tipos

Partes

Tubo o columna y consola

FIN