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Gnero: Clostridium Especie: C.

difficile bacilos gram positivos formadores de esporas anaerobios estrictos

Primera causa de diarrea nosocomial en los pases desarrollados, con grandes dificultades para su erradicacin del medio hospitalario

Bacteria comensal del intestino humano . Los pacientes quienes han estado por largo tiempo hospitalizados tienen una mayor probabilidad de ser colonizadas por este organismo. En pequeos nmeros, no tiende a causar daos de significado clnico. Los antibiticos, causan un desequilibrio de la flora intestinal, llevando a una sobrepoblacin por el C. difficile. Ello conlleva a la colitis seudomemb.

Las colonias muestran un crecimiento ptimo en agar sangre a T corporal.

Al microscopio se observan en forma de palillos de fsforos con el abultamiento localizado en un extremo terminal.

gran resistencia a los iniciales intentos de cultivar la especie y si era sembrada, creca muy lentamente en los cultivos

La mayora de casos se producen en hospitales(en EE.UU. 1/100 pac. presenta diarrea por C.D.) La tasa de portadores sanos en la poblacin adulta es del 0 al 3%, mientras que alcanza el 15 o el 20% en los pacientes hospitalizados y tratados con antibitico. Las esporas de C. difficile se adquieren por transmisin fecal-oral. Aproximadamente un tercio de los pacientes colonizados presenta diarrea por C. Difficile.

Tto a antibiticos

Empleo de anticidos

FACTORES DE RIESGO

Edad avanzada

Mayor estancia hospitalaria

Enfermedad grave

Produce quimiotaxis; induce la produccin de citocinas con hipersecrecin de fluido. Induce la despolimerizacin de la actina con la prdida de el citoesqueleto celular. Interviene en la unin a las clulas colnicas humanas. Permite la supervivencia del microorganismo durante meses en el medio hospitalario.

A partir del 2002(Canad y EE.UU.) y se identific la cepa de campo pulsante tipo NAP-1 (North America pulsedfield type 1), ribotipo 027, endonucleasa de restriccin tipo B1, toxinotipo III. NAP1/B1/027 Lo que hace que estas cepas se propaguen con ms rapidez y sean ms virulenta es que poseen: (delecin parcial en el gen regulador negativo de la toxina)

Periodo de incubacin: menos de 1 semana Sntomas comunes: diarrea, fiebre, dolor abdominal y leucocitosis

Portadores asintomticos

Megacolon txico

MANIFESTACIONES CLINICAS

Diarrea leve a moderada

Colitis seudomembranosa 3-5%

Colitis seudomembranosa

Megacolon txico

Leucocitosis al hemograma, leucocitos fecales pos(30-60 % de los casos), 30% con sangre oculta en las heces.

leo, dilatacin de colon, engrosamiento de la pared intestinal.

locus de patogenicidad (PaLoc)

rea de 19 kb del genoma C. difficile, incluye los genes de las toxinas A y B y los genes reguladores que las rodean

producen o ambas toxinas o ninguna de las dos. cepas que no cuentan con la produccin de la toxina A.

Lneas de clulas para la deteccin de citotoxina: fibroblastos de prepucio humano lnea de clulas ms sensibles para la deteccin de toxinas a bajas titulaciones (1:160 o menos).

Sensibilidad de deteccin de la citotoxina vara del 67% al 100%.

Desventajas: Cultivos celulares no disponibles en todos los laboratorios de microbiologa y que precisa un perodo de incubacin de 48-72 h.

Pruebas de EIA disponibles que detectan la toxina A o detectan ambas toxinas A/B. Diagnstico positivo con una muestra y se descarta su presencia con, al menos, 3 muestras negativas.

Sensibilidad :63% al 94% Especificidad:75% al 100%.


Se prefiere el estudio de toxina A/B porque entre el 1% al 2% de las cepas son negativas para la toxina A.

Utilizados por ms del 90% de los laboratorios en los EEUU debido a su facilidad de uso y a los bajos costos de mano de obra, en comparacin con los estudios de citotoxina celular.

Diluir con el diluyente del kit las muestras de heces(diarreicas) 1/11

Pocillos para CP, CN y muestras. Agregar de cada uno 100ul respectivamente, aadir 2gotas(100ul) de CONJUGADO 1 e incubar a T ambiente (2025C)luego de homogenizar por 1 hora.

Concluda la 1 incubacin, lavar con la solucin de lavado, secar bien y aadir 100ul de CONJUGADO 2 a cada pozo e incubar previa homogenizacin por 30 min a T ambiente. Luego proceder a lavar cada pocillo, dejar secar un momento con la placa invertida y aadir el SUSTRATO 100ul a cada pozo y colocar en cmara oscura e incubar 15 min a T ambiente. Terminada la incubacin aadir solucin STOP 50ul a cada pozo y proceder a la lectura.

Pilar en el diagnostico de laboratorio de infeccin a C. Difficile y esencial para el estudio epidemiolgico de cepas aisladas.
Cultivo selectivo: cicloserina, cefoxitina, y fructosa (medio CCFA) Adicin de taurocolato o lisozima: mejora la recuperacin de C. diff., debido a un aumento de la germinacin de las esporas. Ambiente anaerbico de las placas de cultivo antes de su uso. Caractersticas de colonias: planas, amarillas, de aspecto vtreo esmerilado con una aureola amarilla rodeando el medio, con olor tpico y muestran fluorescencia con lmpara de Wood. Tincin de Gram: bacilos gram-positivo o gram-variable para C. difficile.

Control de calidad del laboratorio del medio selectivo para aislar a C. diff., ya que se han producido variaciones en los ndices de recuperacin con medios preparados por diferentes fabricantes.

sensibilidad 58% al 68% especificidad del 94% al 98%


Ventajas: Es rpida, relativamente econmica y especfica
Desventajas: No es tan sensible No proporciona ninguna informacin con respecto a la toxigenicidad de la cepa aislada Proporciona la cepa aislada propiamente dicha.

sensibilidad del 85% al 95% especificidad del 89% al 99%(alto VPN) lo que las convierte en tiles para una deteccin rpida, si se combinan con otro mtodo que detecte toxinas. Resultado negativo Muestra Resultado positivo Prueba de confirmacin Negativo para C.D

*Prueba de confirmacin: Estudio de citotoxina celular. EIA de toxina A/B aunque la sensibilidad limitada del EIA de toxina es problemtica.

sensibilidad (100%) Especificidad (96,7-100%) elevadas Es una tcnica muy compleja y con un alto coste, por lo que su utilizacin no est recomendada para el diagnstico de C. difficile de forma sistemtica

Interrumpir, si es posible, el antibitico precipitante


Frmacos de primera lnea para el tratamiento del C. difficile: metronidazol y la vancomicina. Tienen similar grado de eficacia(90-97%) y se recomienda su administracin oral, ya que el C. difficile est restringido a la luz del colon.

Metronidazol: Se recomiendan dosis orales (boca-sonda nasogstrica) entre 250 mg 4 veces al da o 500 mg 3 veces al da durante 10-14 das

Vancomicina: Administracin por va oral, incluida la sonda nasogstrica, en dosis de 125 mg 4 veces/da o 500 mg 3 veces/da, o por va rectal en enemas (disol. 1 g en 1 l de agua d, administrando 250 ml cada 6 h retenindolo durante 3 h)

Similar que la vancomicina, pero es menos efectiva para la erradicacin de las toxinas. Estos agentes se unen a la toxina de C. diff. y la absorben. Se utilizan como coadyuvante en el tratamiento de las recurrencias. intestinal. 0,45 y el 3% de los pacientes con diarrea por C. diff. requieren tratamiento quirrgico. Las indicaciones quirrgicas son peritonitis, riesgo inminente de perforacin, leo con megacolon o sepsis refractaria al tratamiento conservador. Basado en la restauracin de la flora

Gracias!