METODO DE CUENTA TOTAL DE MOHOS Y LEVADURAS

Montes Daz Elizabeth Morales Salgado Isaac Andres Duran Alvarado Mara Eugenia Villada Garca Liliana

10 g. de muestra + 90 ml. de Solucin salina isotnica al 0.09 %

10 -1

Los tubos contienen 9 ml. de solucin salina isotnica al 0.09 %

Para la realizacin de disoluciones se trasladara 1 ml. de dilucin a dilucin.

10 -2

10 -3

10 -4

10 -5

* A partir de este punto sembrar 0.1 ml. Dilucion en placas que contienen Agar papa dextrosa.

Preparacin de soluciones
0.1 ml
10 ml o 10 g de muestra 10-1 1ml

90 ml SSI
10-2

0.1 ml

1 ml

0.1 ml
10-3

Incubar 25 C 2-5 das Contar el numero de colonias y multiplicarlo por el inverso de la dilucin (ufc/gr muestra)

1 ml
10-4

0.1 ml

1 ml 0.1 ml
10
-5

 Solucin salina isotnica.

Efecto conservante

Agar papa dextrosa

Los hidratos de carbono y la infusin de papa favorecen el crecimiento de levaduras y hongos en tanto que por el bajo rango de pH , la flora acompaante se reduce significativamente. Las caractersticas morfolgicas tpicas de los hongos se desarrollan muy bien en este medio de cultivo. Composicin por Litro: Agar -15g Dextrosa - 20g Infusin papa - 4g

MOHOS
El termino moho se suele aplicar para designar a ciertos hongos filamentosos multicelulares. Crecen en la superficie de los alimentos. Tienen un tpico aspecto aterciopelado algodonoso, a veces pigmentado. Intervienen en la alteracin de muchos tipos de alimentos. Son tiles en la elaboracin de ciertos alimentos La parte principal de su crecimiento suele tener un aspecto blanco, aunque puede tener colores distintos, color oscuro o color humo.

Caracteres de los cultivos

Algunos mohos tienen una textura laxa y un aspecto lanoso , mientas que otros son compactos. Algunos tienen aspecto aterciopelado en su superficie libre, el aspecto de otros es seco y pulverulento, y el de otros es hmedo o gelatinoso.

 El aspecto del reverso de un moho que crece en una placa de agar puede ser muy llamativo, por ejemplo: El color negro azulado opalescente o el color negro verdoso de la cara inferior de Cladosporium.

Moho

LEVADURAS
Aquellos hongos que generalmente no son filamentosos, sino unicelulares y de forma ovoide o esferoide, y que se reproducen por gemacin o por fisin. Se encuentran en los alimentos y estas pueden ser beneficiosas o perjudiciales.
Beneficiosas: elaboracin de alimentos Perjudiciales: producen alteraciones

Se caracterizan principalmente en base a sus caracteres morfolgicos, aunque para el microbilogo de alimentos, sus propiedades fisiolgicas tienen mayor importancia

Caracteres de los cultivos

Crecimiento en forma de velo en la superficie de los medios lquidos indica que se trata de una levadura oxidativa o formadora de velo.
La produccin de un pigmento carotenoide confirma que la levadura que ha crecido pertenece al genero Rhodoturola. El aspecto de crecimiento de los microorganismos tiene importancia cuando estos producen un moteado pigmentado en la superficie de los alimentos

 La mayora de las colonias jvenes de levaduras son hmedas y algo mucosas, aunque es posible que tengan aspecto harinoso. Algunas colonias tienen un color crema o rosado. Las levaduras son oxidativas, fermentativas o bien su actividad metablica es a la vez de ambos tipos.

 En la superficie de un liquido, las levaduras oxidativas pueden ser en forma de pelcula, de velo, o espuma y por ello se denominan levadura formadoras de pelculas. El aspecto de crecimiento de los microorganismos tiene importancia cuando estos producen un moteado pigmentado en la superficie de los alimentos

Las levaduras fermentativas suelen crecer en toda la masa del liquido y producen dixido de carbono.

Observacin de caractersticas de mohos

Cortar con un bistur alrededor de cada colonia

Colocar los fragmentos de agar separados en el porta objetos

Observar el micelio areo en microscopio de diseccin

Transferir parte del micelio a otro porta objetos y observar las estructuras en un microscopio ptico. Comparar con bibliografa.

IMGENES DE ALGUNOS TIPOS DE MOHOS

Observacin de caractersticas de levaduras

.
Extensin de la muestra sobre el portaobjetos

FROTIS
Extensin de la muestra con el fin de separa los m.o.

Secado de la preparacin

Fijado o adhesin de las clulas al portaobjetos

Un solo colorante

SIMPLE

TINCION
DIFERENCIAL Mas de un colorante

Forma y tipo de agrupacin de m.o. Observan estructuras celulares como endosporas

Frotis se cubre con el colorante Deja actuar (1 5 min.) Se lava con agua y se seca

Por qu azul de metileno para la tincin?

Tie todas las clulas bacterianas rpidamente. No produce un color intenso que oscurezca los detalles celulares. til para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales puesto que la mayor parte del material celular no se tie.

Seleccionar colonias grandes, ovaladas aisladas o apiculares.

Adicionado con

Dextrosa

Sembrar en medio Wickerham con campana de Durham

Adicionado con

Rafinosa

Seleccionar colonias pequeas, ovaladas agrupadas en micelio ramificado de levaduras apiculares.

Sembrar en Caldo de extracto de malta

Medio YM agar (MALT WICKERHAM)

Composicin : Agar agar bacteriolgico 15 g Extracto de levadura 3 g Extracto de malta 3 g Peptona 5 g Glucosa 10 g Agua c.s p 1000 ml

 Extracto de levadura.
Medio nutritivo empleado para el recuento de microorganismos en aguas.

Extracto de malta
Medio para la deteccin, aislamiento y enumeracin de levaduras y mohos

Peptona
Nutre a los M.O para que se multipliquen a gran velocidad. Se utiliza para estudios de fermentacin.

OBSERVACIONES
Tubos con:

Dextrosa y Rafinosa
turbidez y produccin de CO2

Fermentacin alcohlica
Extracto de malta
Posible formacin de pelcula superficial de micelio

Desarrollo de levaduras aerobias formadoras de micelio

Realizan diluciones, se siembra e incuba

Frotis y Tincin

Se cuentan colonias y se seleccionan en:

Levaduras

Hongos
Separan del agar y se observan al microscopio: De biseccin y ptico

Siembra

Caldo de extracto de malta Medio Weckerham Formacin de pelcula superficial en el medio rafinosa Desarrollo de levaduras aerobias, formadoras de micelio Fermentacin alcohlica

dextrosa

Turbidez Produccin de CO2