Universidad Nacional Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Escuela de Qumica

ADN
cido desoxirribonucleco Alejandra Cceres Z.

DEFINICIN
Es la molcula que contiene la informacin gentica, los cuales residen en el ncleo celular y algunas organelas. La molcula de ADN porta la informacin necesaria para el desarrollo de las caractersticas biolgicas de un individuo y contiene los mensajes e instrucciones para que las clulas realicen sus funciones. Dependiendo de la composicin del ADN (refirindose a composicin como la secuencia particular de bases), puede desnaturalizarse o romperse los puentes de hidrgenos entre bases pasando a ADN de simple cadena o ADNsc abreviadamente.

El ADN se compone de tres componentes: Un azcar con cinco carbonos llamada desoxirribosa Uno o ms grupos fosfatos Una Base (Pirimidina o Purina)

Azcar: Desoxirribosa

Grupo Fosfato

Base: Purinas o Pirimidinas

Purinas Tiene un sistema de anillos fundidos de pirimidina y de amidazol, son no saturados con dobles enlaces conjugados, esta propiedad hace que sean anillos planos y posean la capacidad de absorber la luz ultravioleta.

 Pirimidina
Tiene un solo anillo de cuatro carbonos y dos de nitrgeno, al igual que las purinas son no saturados, con dobles enlaces conjugados

 Nulesidos Estn formados por ribosa y desoxirribosa y una base. Nucletidos Son derivados fosforilados de los nucletidos.
Tabla 1. Nomenclatura de bases, nuclesidos y nucletidos Base Adenina (A) Guanina (G) Citosina ( C ) Uracilo (U) Base Adenina (A) Guanina (G) Citosina ( C ) Timina (T) Ribonuclesido Adenosina Guanosina Citidina Uridina Desoxirribonuclesido Desoxiadenosina Desoxiguanosina Desoxicitidina Timidina Ribonucletido (5'- monofosfato) Adenosina 5'-monofosfato (AMP) Guanosina 5' - monofosfato (GMP) Citidina 5' - monofosfato (CMP) Uridina 5' - monofosfato (UMP) Desoxirribonucletido (5'- monofosfato) Desoxiadenosina 5'-monofosfato (dAMP) Desoxiguanosina 5' - monofosfato (dGMP) Desoxicitidina 5' - monofosfato (dCMP) Desoxitimidina 5' - monofosfato (dTMP)

Nuclesido

Nucletido

 El ADN es bicatenario, es decir, est constituido por 2 cadenas polinucleotdicas unidas entre s en toda su longitud. Esta doble cadena puede disponerse en forma lineal (ADN del ncleo de las clulas eucariticas) o en forma circular (ADN de las clulas procariticas, as como de las mitocondrias y cloroplastos eucariticos). En los cromosomas estas molculas se arreglan en estructuras ms compactas en las que la doble hlice se enrolla sobre s misma. En el caso de las bacterias, la molcula de ADN de ms de un milmetro de longitud se arregla dentro de la bacteria que slo tiene una longitud de una micra (o sea es una longitud mil veces menor). En las clulas eucariotas el ADN se encuentra principalmente localizado en el ncleo, en forma de cromosomas que son complejas asociaciones de ADN y protenas.

 Cada una de las bases de una hebra, forma puentes de hidrgeno con una base de la hebra opuesta. La guanina se aparea con la citosina y la adenina con la timina, maximizando los puentes de hidrgeno entre sitios potenciales. Los pares de bases G/C tienen tres puentes de hidrgeno y los pares de bases A/T tienen dos.

Obtencin de ADN
La extraccin de ADN se da en varias etapas. Primero se tienen que romper la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. Luego debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

La primera semana se realiz el aislamiento del ADN

 La segunda semana se hizo la separacin de nucleoprotenas y la purificacin del ADN, demostrndolo con pruebas cualitativas colorimtricas con los ensayos de difenilamina y Biuret.
Cuadro 1. Resultado de las pruebas cualitativas con el ensayo de Difenilamina.
Muestra analizada Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Coloracin luego de 30 min de agregar el reactivo Azul claro Morado Violeta Resultado de la prueba Positivo Positivo Positivo

 Cuadro 2. Resultado de las pruebas cualitativas con el ensayo de Biuret.

Muestra analizada Coloracin luego de agregar el reactivo Gris violceo Gris violceo Azul Resultado de la prueba

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Positivo Positivo Negativo

Discusin de resultados
Para eliminar posibles contaminantes y clulas carentes de ADN, se eliminaron todos los tegumentos, tejido graso y conectivo de la muestra de hgado de res. Al morterizar se rompi las membranas de varias clulas liberando el contenido. La funcin del Tris-EDTA-sacarosa, es formar un complejo similar a la forma de un detergente, que hace que el EDTA atrape los cationes Mg y Ca provenientes de las protenas y las mantenga en solucin para degradar el ADN, adems de romper por medio de un cambio osmtico la membrana plamtica, dejando cada vez ms expuesto el ncleo donde se encuentra el ADN. El tris mantiene el pH fisiolgico adecuado y la sacarosa mantiene un gradiente de concentracin para que la menbrana no pierda la estructura.

 El rompimiento de membranas es continuado por el Tris-EDTA sin sacarosa y por el licuado. Al agregarle el NaCl se obtuvo que el Na neutralizar la carga, ya que cada hlice de ADN tiene una enorme densidad de carga, por lo que las dos cadenas tienden a empujarse favoreciendo la separacin, al estar los cationes en solucin se forma una nube las cargas de positivas del ADN, los cuales son atrados por las cargas negativas del ADN. La nube disminuye la densidad de carga y disminuye la repulsin entre los fragmentos de ADN, haciendo que se precipite en la solucin de alcohol. Luego de agregar los reactivos se toma la primer muestra y se le hace la prueba de difenilamina y se corrobora la presencia de la desoxirribosa por la coloracin azul que forma el complejo de la difenilamina con la desoxirribosa. Tambin se le hace la prueba de Biuret la cual da positiva evidenciando la presencia de ADN contaminado con protena. (Cuadro 1 y 2)

 El etanol se agreg con el fin de desenrollar y recolectar con la varilla de vidrio el ADN en disolucin. (Fig 7)
El ADN recolectado fue redisuelto en NaCl y se dej en una mezcla de cloroformo-alcohol isoamlico con el fin de extraer las grasas presentes, lo cual form 3 fases luego de la centrifugacin, la fase superior contena el ADN disuelto, la del medio las grasas y la inferior el cloroformo restante. En este ltimo paso de purificacin se logr la obtencin de un ADN relativamente puro, as lo demuestran los resultados obtenidos para el tubo 3, donde ya la prueba especfica para protenas, no da coloracin violcea, por lo que se puede afirmar que esa solucin estaba limpia de protenas. Concluyendo la ltima porcin de ADN recolectada en la varilla de vidrio, presentaba una coloracin blancuzca, por lo que se demuestra su grado de purificacin.