INTRODUO

cidos nuclicos so as molculas com a funo de armazenamento e expresso da informao gentica.

DNA ou cido desoxirribonuclicos

RNA ou cido ribonuclico

NUCLEOTDEOS E NUCLEOSDEOS

Nucleotdeos: um composto qumico e possui trs partes: um grupo fosfato, uma pentose (molcula de acar com cinco carbonos) e uma base orgnica. Quando retirado o grupo fosfato de um nucleotdeo obtm-se um nucleosdeo (pentose mais base orgnica)

NUCLEOTDEOS E NUCLEOSDEOS
Nucleotdeos: Base nitrogenada + Pentose + Fosfato Nucleosdeo = Base nitrogenada + Pentose

Bases Nitrogenadas

Pirimidina: Timina, Uracila e Citosina Purina: Adenina e Guanina

NUCLEOTDEOS E NUCLEOSDIOS
Base
Adenina Guanina Citosina Timina Uracil

Nucleosdeo
Adenosina Deoxiadenosina Guanosina Deoxiguanosina Citidina Deoxicitidina Timidina Uridina

Nucleotdeo
Adenilato Deoxiadenilato Guanilato Deoxiguanilato Citidilato Deoxicitidilato Timidilato Uridilato RNA DNA RNA DNA RNA DNA DNA RNA

NUCLEOSDEOS

Nuclosdeos que podem ser obtidos do DNA

NUCLEOSDEOS

Nuclosdeos que podem ser obtidos do RNA

Sntese de Nucleotdeos em laboratrio

SNTESE DE NUCLEOTDEOS E NUCLEOSDEOS EM LABORATRIO

TCNICA 1:

SNTESE DE NUCLEOTDEOS E NUCLEOSDEOS EM LABORATRIO

TCNICA 2:

SNTESE DE NUCLEOTDEOS E NUCLEOSDEOS EM LABORATRIO

TCNICA 3:

Para converter nucleosdeos em nucleotdeos usam-se diversos agentes de fosforilao

APLICAES MEDICINAIS

ESTRUTURA E FUNES DOS CIDOS NUCLICOS

CIDO DESOXIRRIBONUCLICO DNA ou ADN

HISTRICO
1953 JAMES WATSON e FRANCIS CRICK

Descrio da estrutura fsica do DNA baseando-se nos estudos de difrao de raio X de Rosalind Franklin e Maurice Wilkins e em estudos qumicos da molcula

Modelo da dupla fita proposto foi fundamental para a compreenso do mecanismo de transmisso e execuo da informao gentica

POR QUE ESTUDAR O DNA?

Contm toda a informao gentica de um organismo

Esta informao est arranjada em unidades hoje conhecidas como genes

Armazenamento e transmisso de genes

A DESCOBERTA DO DNA

Em 1953, Watson e Crick descobrem a estrutura de dupla hlice do DNA.

Notamos que o pareamento especifico que postulamos sugere um possvel mecanismo de cpia para o material gentico

ESTRUTURA PRIMRIA
um polmero no ramificado Formado por monmeros chamados de nucleotdeos

QUATRO TIPOS DE NUCLEOTDEOS NO DNA

Como a ligao entre uma desoxirribose e outra desoxirribose s pode ser feita quando um grupo fosfato liga-se no Carbono 5do primeiro acar e no Carbono 3do segundo acar dizemos que a molcula de DNA cresce em direo 5 3

OBSERVAES DE E. CHARGAFF

Existe variao de porcentagens de nucleotdeos de uma espcie para outra, mas era constante dentro da mesma espcie.

Em qualquer DNA, de qualquer espcie, a porcentagem da base timina era sempre igual a da base adenina, e a porcentagem da base citosina eram igual a da base guanina.

O MODELO DE DUPLA HLICE

LIGAES DE HIDROGNIO

ANTIPARALELISMO

As fitas do DNA esto dispostas em direes opostas.

A DUPLA HLICE

Fatores que estabilizam a dupla hlice: Interaes hidrofbicas Foras de van der Walls Ligaes de hidrognio Interaes inicas

Entre as bases nitrogenadas

Entre os grupos fosfato do DNA e os ctions (Mg2+) presentes na soluo fisiolgica

A DUPLICAO

FORMAS DE DNA

PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DO DNA

TEMPERATURA MDIA DE FUSO

RNA
A sntese do RNA - Transcrio:

A sntese de RNAm se inicia com a separao das duas fitas de DNA

Apenas uma das fitas servir de molde para a produo do RNAm

RNA
A sntese do RNAm - Transcrio:

O processo de transcrio auxiliado pela RNA polimerase e forma-se uma fita nica;
O RNA possui a ribose ao invs da desoxirribose e a uracila ao invs da timina.

RNA
RNA e sntese de protenas: Os tipos de RNA que podem ser formados so:

RNA
RNA e sntese de protenas: Logo depois da publicao da hiptese de Watson-Crick, foi formulado "o dogma central da gentica molecular":

A sntese de protena , obviamente, muito importante para a funo da clula, pois as protenas (as enzimas) catalisam suas reaes. O gene o segmento da molcula de DNA que contm a informao necessria para direcionar a sntese de protenas.

O CDIGO GENTICO

O cdigo deve ser na forma de trs bases (cdon), resultando em 64 seqncia diferentes; Como so 20 aminocidos existentes h mais cdons do que aminocidos ! Por isso o cdigo gentico degenerado pois um mesmo aminocido pode ser especificado por mais de um cdon. Chamamos tambm o cdigo gentico de universal pois funciona da mesma maneira em todos os organismos da Terra.

O CDIGO GENTICO

RNA
RNA e sntese de protenas:

O funcionamento de uma clula depende de uma srie de reaes qumicas

Reaes qumicas dependem de enzimas

Enzimas so protenas

As protenas tm sua sntese orientadas por molculas de RNA

Molculas de RNA so produzidas sob orientao do DNA

ENTO, O FUNCIONAMENTO CELULAR DEPENDE DO DNA !

DETERMINAO DA SEQUENCIA DE BASES DO DNA

DETERMINAO DA SEQUENCIA DE BASES DO DNA

Inicialmente devemos fragmentar a molcula de DNA por ser muito grande; O processo realizado mediante enzimas denominadas endonucleases de restrio. Estas enzimas clivam a fita dupla do DNA em sequncias de bases especficas. Por exemplo, a EcoRl, rompe a seqncia GAATTC entre G e A.

DETERMINAO DA SEQUENCIA DE BASES DO DNA

H tambm um mtodo qumico de determinao de sequncia de bases. Nesse mtodo o fragmento de restrio da fita dupla a ser seqenciado inicialmente marcado com uma enzima em na extremidade 5 por um grupo fosfato contendo fsforo radioativo. Depois disso, as fitas so separadas e isoladas. Em seguida os fragmentos de fita simples, marcados, so tratados com reagentes que atacam bases especficas, modificando-as de modo a permitir a clivagem da cadeia prximo quelas bases.

DETERMINAO DA SEQUENCIA DE BASES DO DNA

Esses fragmentos podem ento ser separados por uma tcnica chamada eletroforese em gel.

DETERMINAO DA SEQUENCIA DE BASES DO DNA

O DNA introduzido em pequenos poos de gel (agarose, poliacrilamida), e ento uma corrente eltrica aplicada atravs do gel. Como o DNA negativamente carregado, ele atrado pelo eletrodo positivo. Entretanto, para chegar ao eletrodo positivo, o DNA deve migrar atravs do gel. Aps a eletroforese, os fragmentos de DNA normalmente so corados com brometo de etdeo, que possui afinidade pelo DNA e fluorece vivamente em contato com a luz ultravioleta. Dessa forma pode-se localizar as bandas que correspondem ao DNA.

DETERMINAO DA SEQUENCIA DE BASES DO DNA

DETERMINAO DA SEQUENCIA DE BASES DO DNA

A PCR REAO EM CADEIA DA POLIMERASE

Ocorrendo a fragmentao das molculas de DNA, com o uso das enzimas de restrio, e o seu reconhecimento pela tcnica de eletroforese em gel, o prximo passo multiplicar (clonar) o fragmento obtido e submet-los tecnologia do DNA recombinante. A tcnica de multiplicao da fita de DNA chamada de PCR (reao em cadeia da polimerase).
A amostra de DNA, a enzima que faz a replicao (DNA polimerase), os nucleotdeos de DNA e os primers complementares a sequncia de DNA so colocados em um tubo de ensaio. Coloca-se o tubo de ensaio em uma mquina de PCR. Aquece-se o tubo a 94C para desnaturar (separar a dupla fita) o DNA. Cada fita simples do DNA que foi desnaturado serve de molde para a sntese de novas cadeias complementares. Para isso resfria-se a 54C onde os primers se anelam ao incio das duas fitas simples, servindo de iniciadores para a enzima polimerase. Aquece-se novamente o tubo a 72C (temperatura ideal de funcionamento da DNA polimerase) para a duplicao da fita. A DNA polimerase inicia, aps o final do primer, a colocar os nucleotdeos livres na fita de DNA ligando-os por complementaridade, formando assim uma nova fita dupla.

A PCR REAO EM CADEIA DA POLIMERASE

Vdeo

A PCR REAO EM CADEIA DA POLIMERASE

A tcnica PCR de grande utilidade, pois permite a rpida amplificao de um gene especfico ou de um exon de um determinado gene e rpida genotipagem de marcadores polimrficos, entre outros.

ESTUDO GENTICO FETAL - Este estudo realizado atravs da extrao do DNA de material de aborto, permitindo identificar aneuploidias dos cromossomos 21, 18, 16, 13, X e Y que consistem em causa de parte dos abortamentos espontneos. HIV PCR QUALITATIVO - A PCR qualitativa do HIV-1 til para detectar o HIV-1 antes da soroconverso; esclarecer um Western Blot indeterminado e avaliar a presena desta infeco em crianas nascidas de mes sabidamente infectadas pelo HIV-1.

O SEQUENCIAMENTO DO GENOMA HUMANO

Iniciado formalmente em 1990 e projetado para durar 15 anos, o Projeto Genoma tinha como principais objetivos: determinar a ordem, ou seqncia, de todas as bases do nosso DNA; identificar e mapear os genes de todos os 23 pares de cromossomos humanos; armazenar essa informao em bancos de dados, desenvolver ferramentas eficientes para analisar esses dados e desenvolver meios de usar esta informao para estudo da biologia e da medicina.

O trmino do seqenciamento do genoma humano levou identificao de cerca de 25.000 genes. Em razo da complexidade do ser humano, o nmero de genes esperado era muito maior do que o encontrado. Isso evidenciou que a grande complexidade do organismo humano produto da interao de outros fatores, alm do nmero de genes.

O SEQUENCIAMENTO DO GENOMA HUMANO

Doenas genticas hoje estudadas atravs do Projeto Genoma:
Ataxias progressivas Atrofias espinhais progressivas Autismo Craniossinostose Distrofias musculares congnita Distrofias musculares progressivas: (Distrofia miotnica de Steinert, Distrofias musculares do tipo cinturas (DMC), Distrofia muscular do tipo fcio-escpulo-umeral, Distrofias Musculares tipo Duchenne e tipo Becker) Esclerose lateral amiotrfica Esclerose tuberosa Fissuras palatais e labiopalatais Leucodistrofias Miopatias congnitas estruturais Neuropatias perifricas Paraplegia espstica Retardo mental inespecfico e sindrmico Sndrome de Angelman Sndrome de Knobloch Sndrome de Prader-Willi Sndrome de Treacher Collins Sndrome do X frgil Surdez Hereditria Xeroderma Pigmentoso

SNTESE EM LABORATPRIO DE OLIGONUCLEOTDEOS

O Oligonucleotdeo um fragmento curto de uma cadeia simples de cido nuclico (DNA ou RNA), tipicamente com 20 ou menos bases. Gentica invertida: alterao aleatria dos genes ou anulao de alguns genes por mutao induzida. O oligonucleotdeo que sintetizados, chama-se nucleotdeos anti-sensores, ele se liga no que se denomina a sequncia sensora do DNA. Nesta ligao podem alterar a atividade do gene e at anul-la.

Os mtodos usados nas snteses dos oligonucleodeos so os usados na sntese de protena, e entre elas as tcnicas em fase slida automatizada.

Sntese de laboratrio de oligonucleotdeos

 Referncias bibliogrficas
Livro texto: Qumica Orgnica 2- Ed 6,7 e, 8- T. W. Graham Solomons; Site:WWW.enq.ufsc.br/labs/probio.../acidos.htm; acessado em 27 de novembro de 2010 s 12hs; Site: WWW.genoma.ib.usp.br; acessado em 30 de novembro de 2010 s 15hrs;