Microbiologia

Aula prtica 7 2012/2013

MJC 12-11-2012

Sumrio P5:

Isolamento, cultivo e identificao Streptococcus spp e Staphylococcus

Identificao das espcie de Streptococcus e Staphylococcus presentes utilizando:

Teste da catalase O teste miniaturizado de identificao STREPTO SYSTEM 9R e Staf System 18R. Inoculao da placa (galeria de

testes bioqumicos)

Caracterizao da susceptibilidade a antibiticos da estirpe identificada por antibiograma.

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Caracterizao Fisiolgica e Bioqumica de Microrganismos

A informao sobre a forma e dimenso da clula bacteriana (e das suas colnias) insuficiente para a sua caracterizao/identificao. comum que estirpes semelhantes quanto morfologia e tipo de crescimento sejam muito diferentes quanto sua actividade metablica.

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Testes bioqumicos:
o Actividade de enzimas e hidrlise enzimtica de compostos o Utilizao de fontes de carbono o Utilizao fermentativa de hidratos de carbono o Sistema de transporte de electres o Produo de metabolitos celulares

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Testes bioqumicos miniaturizados

o Consistem numa bateria de reaces bioqumicas e enzimticas que produzem alteraes de cor

o STREPTO SYSTEM 9R
um sistema de identificao estandardizado para bactrias de Streptococcus. conjunto de 9 microtubos (poos) com substratos desidratados baseia-se na utilizao de meios especficos que permitem monitorizar reaces bioqumicas e enzimticas pela alterao da cor. aps incubao, os resultados so traduzidos por um cdigo numrico obtido pelo perfil de cor apresentado nos diferentes testes.
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Testes bioqumicos miniaturizados

o Os testes bioqumicos miniaturizados so normalmente desenvolvidos para um grupo restrito de espcies ou estirpes.

o Assim muitas vezes necessrio saber que estamos a usar um organismo pertencente a um determinado gnero.
o Neste caso vamos confirmar se estamos a usar Streptococci ou Staphylococci.

o Como fazemos?
o Usamos a colorao de Gram para ver morfologia, arranjo e reaco de Gram. o Usamos o teste da catalase como auxiliar

o A maioria dos Staphylococci so Catalase + enquanto que a maioria dos Streptococci so Catalase 12/11/2012 Microbiologia 2010/2011 6

Antibiograma
o Uma das formas de caracterizao bioqumica de uma estirpe a identificao da sua susceptibilidade a determinados antibiticos. o Este item de caracterizao assume um papel fundamental na caracterizao de isolados clnicos uma vez que este resultado pode ser utilizado na definio da teraputica a aplicar.

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Antibiograma

Num antibiograma o antibitico impregando nos discos de papel difunde-se no agar criando (ou no zonas de inibio do crescimento bacteriano. a dimenso das zonas de inibio que define a sensibilidade ou resistncia do microrganismo.

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Antibiograma & Concentrao mnima inibitria (MIC)

A verso anterior a mais tradicional mas possvel determinar sensibilidade a antibiticos por variantes do antibiograma: estrip, MICs.
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Trabalho a realizar (Seleco das colnias a usar):

o Colorao de Gram (Protocolo da aula anterior) o Teste da catalase (permite a distino entre Staphylococci e Streptococci).
Preparar uma lmina de vidro com uma gota de perxido de hidrognio a 3%(v/v) e misturar uma amostra da cultura a identificar (com ansa). catalase-positivo (aparecem bolhas; estafilococos)

catalase-negativo (no h aparecimento de bolhas; estreptococos).

As bolhas so formadas pelo oxignio molecular libertado na reaco da catalase.

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Inoculao das galerias STREP

oPreparar uma suspenso de clulas (SC)
Usar as culturas lquidas com streptococci preparadas na 6f.

oInocular do sistema STREPTO SYSTEM 9R com:

0,2ml SC nos poos 1-9 0,1ml SC no poo 3-IPP Colocar um disco no poo 1-PYR

oIncubar 18-24h a 37C

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Inoculao das galerias STAF

oPreparar uma suspenso de clulas (SC)
Seleccionar uma colnia da placa de agar inoculada na 6f e suspender em 5ml de soro fisiolgico estril.

oInocular do sistema STAF 18R com:

0,2ml SC em todos os poos Cobrir os poos 1-ADC e 2-UR com 2 gotas de leo mineral Pr um disco de xilose no poo 10-XYL e um disco de ribose no poo 15-RIB.

oIncubar 18-24h a 37C

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Trabalho a realizar (Antibiograma):

oRecolher uma colnia do microrganismo usado para a identificao nas galerias com uma zaragatoa e coloc-la em 0,5 ml de soluo salina estril. oAgitar brevemente no vortex. oUsar a zaragatoa para espalhar o inculo numa placa com meio Mueller-Hinton, da maneira mais uniforme possvel. (rodar a placa duas vezes) oCom uma pina estril colocar os discos impregnados com os vrios antibiticos (Amoxiciclina, Metronidazole e Tetraciclina) na placa. Identificar e inocular 18-24 h na estufa a 37C.
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Recursos
http://www.tgw1916.net/video_pages/Antibiogram_video.html

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