INSTRUMENTOS DE ANALISIS APLICADOS A LA EVALUACION DE CALIDAD DE ALIMENTOS

Berrio Ramos Osnaider Colon Mora Danilo Gonzales Herrera Horemy

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION ATOMICA

Espectro Electromagntico

Principio bsico

El tomo consiste de un ncleo y de un nmero determinado de electrones que llenan ciertos niveles cunticos. La configuracin electrnica ms estable de un tomo corresponde a la de menor contenido energtico conocido como estado fundamental. Si un tomo que se encuentra en un estado fundamental absorbe una determinada energa, ste experimenta una transicin hacia un estado particular de mayor energa. Como este estado es inestable, el tomo regresa a su configuracin inicial, emitiendo una radiacin de una determinada frecuencia.

Principio bsico

La frecuencia de la energa radiante emitida corresponde a la diferencia de energa entre el estado excitado (E1) y el estado fundamental (Eo) como se encuentra descrito en la ecuacin de Planck: h=constante de Planck =frecuencia c=velocidad de luz =longitud de onda

Diagramas de niveles de energa

COMPONENTES DE UN EQUIPO TIPICO DE AA

1) SISTEMA DE INTRODUCCION DE LA MUESTRA Y ATOMIZACION

Se utilizan atomizadores con y sin llama para producir tomos libres del metal en el haz de la radiacin. Estn compuesto de un nebulizador y un quemador. Generalmente, la eleccin depender de la temperatura requerida para la disociacin de los compuestos y de las caractersticas qumicas del elemento a determinar. El Horno de grafito el vapor atmico se genera en un tubo de grafito calentado elctricamente, en cuyo interior se ubica la muestra

CARACTERSTICAS DE DIFERENTES FUENTES DE FLAMAS

mezcla Aire Gas natural Aire - Propano Aire Hidrogeno Aire 50% oxy-acetileno Oxigeno nitrogeno- acetileno Oxido nitroso - Acetileno Dioxido de nitrogeno - hidrogeno Oxigeno - Cianogeno Mxima velocidad de flama (cm/s) 55 82 320 160 640 180 150 140 Mxima Temp. (C) 1840 1925 2050 2300 2815 2955 2660 4640

Generalmente, la eleccin depender de la temperatura requerida para la disociacin de los compuestos y de las caractersticas qumicas del elemento a determinar.

La precisin, exactitud y lmites de deteccin de los mtodos atmicos dependen de forma crtica de las etapas de atomizacin y del mtodo de introduccin de muestra.

2)LMPARA DE CTODO

Consiste en un nodo de tungsteno y un ctodo cilndrico, sellado en un tubo de gas lleno de nen o argn a una presin de 1 a 5 torr. La configuracin cilndrica del ctodo tiende a concentrar la radiacin en una regin limitada del tubo. Este diseo aumenta tambin la probabilidad de que vuelva a depositarse en el ctodo, en vez de en las paredes de vidrio.

3) MONOCROMADOR

4)TUBOS FOTO MULTIPLICADORES

5)DETECTOR DE MICRO CANAL

ELEMENTOS DETECTABLES POR ABSORCIN ATMICA

PARA TENER EN CUENTA

Se utilizan dos trminos para caracterizar a los mtodos de absorcin atmica. La sensibilidad: se define como la concentracin de un elemento en g/mL (o ppm) que produce una seal de transmitancia de 0.99 o la correspondiente absorbancia de 0.0044. lmite de deteccin: se define como la concentracin de elementos que produce una seal analtica igual al doble de la desviacin estndar de la seal de fondo.

Se observan lmites de deteccin que van de aproximadamente 3 x 104 ppm a 20 ppm para los diferentes elementos metlicos, cuando se utiliza la absorcin atmica con atomizacin en llama. La atomizacin sin llama aumenta a menudo este lmite por un factor de 10 a 1 000.

VALIDACIN DE LA METODOLOGA DE CUANTIFICACIN DEL MAGNESIO POR ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA DE LLAMA EN LA CANASTA BSICA DE COSTA RICA

 Objetivo:

Validar la metodologa analtica para la determinacin de magnesio en alimentos por espectroscopia de absorcin atmica de llama. Materiales y Mtodos: Los alimentos que se consumen cocidos, se cocieron a la manera usual de consumo del costarricense y se les determin la humedad. La digestin de las muestras se realiz en horno de microondas y se cuantific el contenido de magnesio por espectroscopa de absorcin atmica de llama. La validacin de la metodologa se realiz con disoluciones patrn de magnesio trazables a la NIST y con materiales de referencia certificados trazables.

 Resultados:

El mbito de linealidad ptimo que se obtuvo fue de (0,021-0,65) mg/L con un coeficiente de correlacin de 0,992. Los lmites de deteccin y cuantificacin reportados fueron de 0,021 mg/L y 0,037 mg/L, respectivamente. La sensibilidad de calibracin fue de 0,688 ALmg-1 y la sensibilidad analtica fue de 215 Lmg-1. La precisin se evalu en condiciones de repetibilidad, se obtuvo un valor para RDSr igual a 1,1 %. La veracidad se determin utilizando tres patrones certificados de la NIST, SRM 1846 Infant Formula con un valor reportado para magnesio de (53829) mg/kg, SRM 1846 Bovine Muscle Powder con un valor reportado para magnesio de (96095) mg/kg, y SRM 8415 Whole Egg Powder con un valor reportado para magnesio de (30527) mg/kg en masa, en los tres casos se obtuvieron sesgos de -0,0014 mg/L en promedio.

 Discusin:

Se analizaron 46 alimentos seleccionados de la canasta bsica alimentaria del costarricense, frescos o cocinados a la manera habitual de consumo, sin adicionarles aditivos. Los alimentos con contenido de magnesio cuantificable fueron: leguminosas (garbanzos, lentejas, frijol negro y rojo), granos y cereales (arroz blanco y precosido), productos lcteos (leche entera en polvo, queso mozzarella, queso fresco), verduras y hortalizas (camote, ajos, pltano maduro), granos (frijoles, lentejas, garbanzos), carnes (tilapia, pechuga de pollo, lomo e hgado de re), frutas (banano criollo y de exportacin), productos industrializados (pan a base de harina de trigo y tortillas de maz).

ESPECTROMETRIA DE MASAS

 El

espectrmetro de masas es un instrumento que permite analizar con gran precisin la composicin de diferentes elementos qumicos e istopos atmicos, separando los ncleos atmicos en funcin de su relacin masacarga (m/z)
espectros de masas se obtienen de la conversin de los componente de una muestra en iones gaseosos que se mueven rpidamente y se separan segn la relacin masa/carga

Los

RELACIN MASA/CARGA
Se

obtiene dividiendo la masa atmica de un ion entre el numero de cargas que tiene el ion Ejemplo:

m/z=16.095/1=16.095 m/z = 17.035/2= 8.518

muestra

detector

Sistema al vacio

Procesador de seal

Dispositivo de lectura

Ionizacin de la muestra generalmente en forma de catin

Separacin de los iones de acuerdo a su relacin masa carga

detector

Deteccin y cuantificacin de iones

ENTRADAS PARA LAS DIFERENTES MUESTRAS

Sistema discreto de entrada( clsico simple)

Entrada por sonda directa

Sistema de entrada cromatogrficos

SISTEMA DISCRETO DE ENTRADA CLSICO SIMPLE

El sistema clsico (y el ms simple) es el discreto, en el cual la muestra se volatiliza externamente y se introduce en la regin de ionizacin que esta a baja presin.

FUENTE DE IONIZACION
La

fuente de iones es la encargada de la fragmentacin de las molculas de la muestra, lo cual es muy relevante en el proceso, ya que de ello depende la informacin que se observa en los espectros

IONIZACION POR IMPACTO ELECTRONICO

Haz de electrones

Placas aceleradoras de iones

nodo

Ctodo incandescente
Placa de repulsin Placa de enfoque

IONIZACION POR IMPACTO ELECTRONICO

IONIZACION POR IMPACTO ELECTRONICO

IONIZACION POR IMPACTO ELECTRONICO

ENFOQUE:
Cuando los iones salen de la cmara de ionizacin y son acelerados hacia el analizador llevan una energa cintica similar pero una direccin divergente, lo que hace necesario orientarlos de una manera adecuada para ingresar el analizador. esto se consigue con la placa de enfoque la cual genera un campo electrosttico que atrae a los iones convergiendo de manera adecuada su direccin de entrada al anlisis de masas .

ANALIZADOR DE MASAS
en analizador de masas se hace la separacin de iones segn la relacin masa/carga existen varios tipos de analizadores segn se realice este proceso , en ellos encontramos del sector magntico (de enfoque simple , de doble enfoque) trampa de iones cuadrupolo de tiempo de vuelo

ANALIZADOR DEL SECTOR MAGNETICO

bajo el fundamento de la ley de lorentz , los iones pasan por un

campo magntico uniforme generado por un electroimn, describen

una deflexin en su trayectoria en funcin de su relacin masa carga ,

como por lo general los iones tienen como carga (z=1). la separacin se hace en funcin de su masa , los cuales describirn diferentes radios

ANALIZADORES DE MASA DEL SECTOR MAGNETICO

ANALIZADORES DEL SECTOR MAGNETICO

Si b y u se hacen constantes, m/z es directamente proporcional a rm : este mtodo permite detectar los iones empleando distintos colectores individuales para cada m/z m (z=1) o placas fotosensibles donde los impactos de los iones producirn manchas de distinta intensidad.

ANALIZADODRES DEL SECTOR MAGNETICO

LA COPA FARADAY
La

copa de faraday es barata y simple mecnica y elctricamente; su principal desventaja es que se necesita un amplificador de alta impedancia, el cual limita la velocidad a la cual debe ser barrido el espectro. El detector de copa faraday es tambin menos sensible que los multiplicadores de electrones ya que no proporciona amplificacin interna.

MULTIPLICADOR DE ELECTRONES

MULTIPLICADOR DE ELECTRONES

OBTENCIN Y ANLISIS DE UN ESPECTROGRAMA DE MASAS.

Como consecuencia del bombardeo electrnico en la cmara de ionizacin, las molculas se rompen en una serie de fragmentos, siempre que una misma molcula se rompa en las mismas condiciones nos dar el mismo tipo y nmero de fragmentos y constituyen la fragmentacin patrn. Gracias a esto se pueden determinar que es la muestra por comparacin y por otra parte, la intensidad relativa de los distintos picos, permite deducir la proporcin en que cada componente se encuentra en la muestra.

EMPLEO DE LA ESPECTROMETRA DE MASAS COMO HERRAMIENTA PARA LA DETERMINACIN DE TXICOS EN ALIMENTOS: HACIA LA SEGURIDAD ALIMENTARIA

En los alimentos se pueden encontrar un gran nmero de sustancias txicas, tales como plaguicidas, antibiticos y toxinas, presentando distintos orgenes (naturales o sintticos) y niveles de toxicidad para la salud humana. Este tipo de compuestos se encuentran generalmente a muy bajas concentraciones en matrices muy complejas, por lo que es necesario la utilizacin de metodologas lo ms fiables posibles. En este sentido, el empleo de las tcnicas cromatografas (de gases y de lquidos) acopladas a detectores de espectrometra de masas ha permitido la deteccin adecuada de este tipo de sustancias en los alimentos a concentraciones extremadamente bajas. Por ello, y en funcin de las caractersticas del contaminante, se debe elegir la tcnica cromatografa que posibilite una mejor separacin del contaminante de los interferentes presentes en la matriz, as como de los contaminantes entre s. Esta metodologa proporciona datos de gran valor que mejoran nuestro conocimiento de la Salud Pblica a travs de la Seguridad Alimentaria.

En funcin de la naturaleza del txico a determinar se aplica la combinacin de tcnicas ms adecuada. De esta manera, para el anlisis de compuestos de baja-media polaridad, la tcnica ms apropiada es la cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas (GC-MS). De hecho, en la dcada anterior, la GC-MS ha sido la tcnica ms ampliamente usada para la deteccin de la mayora de los contaminantes orgnicos, puesto que se trata de una tcnica reproducible entre distintos laboratorios47. Finalmente se puede indicar el reciente problema aparecido en el sector hortcola espaol con la presencia de isofenfos metil (plaguicida no registrado) en pimientos. El empleo de la espectrometra de masas ha permitido una rpida y correcta identificacin de dicho producto en vegetales, como se puede observar en la figura 3, donde se muestra el pico cromatogrfico del isofenfos metil (separado mediante un cromatgrafo de gases) junto a los iones caractersticos de dicho compuesto al ser fragmentado y que ha permitido su rpida deteccin en pimientos contaminados por dicho plaguicida.

Refractometria

Refractometra

Fundamentos y aplicacin en industria

Refractometria Refractometria
Tcnica analtica que consiste en la medida del ndice de de un lquido con objeto de investigar su composicin si se trata de una disolucin o de su pureza si es un compuesto nico.

Refractmetros
Angulo Limite
En estos aparatos se observa el campo del ocular dividido en una zona obscura y otra clara (Rayo Limite).

Inmersin
En prisma simple va montado en un telescopio que contiene el compensador y el ocular.

Desplazamiento de Imagen En estos aparatos se mide el desplazamiento del rayo refractado en relacin al rayo incidente

Angulo Critico
Miden el ndice de refraccin de lquidos en la interface con aire o corrientemente, un prisma de vidrio.

En la industria Alimenticia. En general la instalacin de refractmetros en lnea proporciona anlisis rpidos y precisos en multitud de procesos industriales.

Aplicaciones

Refractometra
Se basa en:

Refractometria

Reflexin= la luz rebota, mismo plano

Refraccin= De un plano a otro, cambio de velocidad de propagacin de onda
Utilidad Confirmar identidad de compuestos Medir pureza (compuesto nico) Medir concentraciones (solucin)

Cada medio posee un ndice de refraccin (IR), es igual a vel. Luz En el vaco sobre vel. Luz en el medio Este depende de: Temperatura Presin, etc..

Refractometria
Cuando el segundo medio es ms denso que el primero, el el rayo se aproxima a la perpendicular trazada sobre la superficie divisoria en el punto de incidencia. La causa fundamental de este cambio en la direccin se debe al cambio en la velocidad de la luz que se hace ms lenta cuanto ms denso sea el medio por el que pasa el haz.

El ndice de refraccin, n, es la razn entre las velocidades de la luz en ambos medios. La Ley de Snell representa a este ndice como la razn de los senos de los ngulos de; incidencia y refraccin

Refractometria

Angulo Crtico

El ngulo crtico es el ngulo formado por la perpendicular a la cual el haz cambia desde luz transmitida en el lquido a luz totalmente reflejada en la superficie del lquido. El ngulo crtico no depende slo de la composicin de la disolucin sino del material del prisma. El ndice de refraccin se puede calcular as: ic = arcsen(ng/nl) ic : ngulo crtico en radianes en el vidrio. ng ndice de refraccin del vidrio. nl el ndice de refraccin del lquido.

Refractometria

Refractmetros de ngulo Lmite

En estos aparatos se observa el campo del ocular dividido en una zona obscura y otra clara y esta separacin entre ambas se llama Rayo Limite.

Ningn rayo puede formar un ngulo superior al crtico. La medida de este ngulo permite medir el ndice de refraccin de la muestra.

Refractometria

Refractmetro de Inmersin

En un prisma simple va montado en un telescopio que contiene el compensador y el ocular. La superficie inferior del prisma se sumerge en un pequeo vaso que contiene a la muestra, con un espejo debajo para reflejar la luz hacia arriba a travs del lquido.

Refractometria Refractmetros de

Desplazamiento de Imagen
En estos aparatos se mide el desplazamiento del rayo refractado en relacin al rayo incidente. Se construye un prisma con la muestra y el ndice se calcula en base al desplazamiento angular de la luz al pasar por la muestra. Si la muestra es lquida se coloca en un recipiente en forma de prisma.

Refractometria

Refractmetros Diferenciales

Se emplean primariamente para el anlisis de mezclas lquidas. Se aplican a cualquier mezcla cuyo ndice de refraccin es una funcin simple de la composicin.

Refractometria

Estos instrumentos emplean una sola clula a travs de la cual la luz es transmitida.

El rayo es difractado un ngulo cuyo valor depende de la diferencia del ndice de refraccin entre la muestra y una muestra estndar que constituye una parte de la clula. El ngulo de refraccin se mide con un dispositivo fotoelctrico.

Refractometria

Refractmetros de

ngulo crtico en lnea.

Miden el ndice de refraccin de lquidos en la interface con aire o, ms corrientemente, un prisma de vidrio.

Refractometria Aplicaciones de la

Refractometra.

Existe una amplia aplicacin para alimentos lquidos viscosos con cierto contenido en slidos.

En general la instalacin de refractmetros en lnea proporciona anlisis rpidos y precisos en multitud de procesos industriales.

Refractometria

Refractmetro de Abb

Requiere de 10-15 ml de muestra. En prisma simple va montado en un telescopio que contiene el compensador y el ocular. La superficie inferior del prisma se sumerge en un pequeo vaso que contiene a la muestra, con un espejo debajo para reflejar la luz hacia arriba a travs del lquido.

Refractometria

Anlisis

HPLC

Cromatografa HPLC
Fundamentos y aplicaciones

HPLC

Cromatografa HPLC
Cromatografa = escribir en colores

Elementos que participan en una cromatografa: 1. Fase estacionaria 2. Fase mvil 3. Muestra

Cmo interaccionan?

En general, una cromatografa se realiza permitiendo que la mezcla de molculas que se desea separar (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio (la fase mvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a travs de sta para "lavar" (eluir) a las molculas en la muestra.

HPLC
Una muestra en estado lquido es arrastrada por una corriente lquida llamada eluyente. Como fase estacionaria acta un slido finamente dividido (dimetro de partcula 3, 5, 10 m), o una pelcula lquida a l adherida.

Las muestras no necesitan ser vaporizadas para su anlisis. Cualquier sustancia puede ser potencialmente analizada por esta tcnica.

Dependiendo de la retencin de los componentes de la muestra por la fase estacionaria y de su solubilidad en el eluyente se provocar su migracin diferencial.
Utiliza bombas que permiten presiones de hasta 6000 psi (414 atm) hacen pasar la fase mvil por el interior de columnas de acero (2-5 mm x 3-25 cm) que contienen la fase estacionaria con flujos de 0,1 10 ml/min.

HPLC

Preparacin de la muestra
MOTIVO
REDUCIR LA CANTIDAD DE MUESTRA QUE SE INYECTA A LA COLUMNA PROTEGER LA COLUMNA MEJORAR LA SEPARACIN CROMATOGRFI CA DE LOS PICOS PROPORCIONAR RECUPERACIONES CUANTITATIVAS Y REPRODUCIBLES

Mtodos:

ELIMINAR LAS INTERFERENCIAS

CONCENTRAR LOS COMPONENTES DE INTERES; MEJORAR LA SENSIBILIDAD PREPARAR LA MUESTRA EN EL DISOLVENTE MS ADECUADO PARA EL ANLISIS FINAL ELIMINAR PARTCULAS EN SUSPENSIN

FILTRACIN EXTRACCIN LQUIDO-LQUIDO CROMATOGRAFA DE CAPA FINA PRECIPITACIN SELECTIVA CROMATOGRAFA DE PERMEACIN SOBRE GELES EXTRACCIN EN FASE SLIDA CENTRIFUGACIN PRECOLUMNAS UTILIZACIN DE MEMBRANAS

La mayora de las muestras de alimentos que se analizan por mtodos instrumentales de separacin son demasiado complejas, estn demasiado diluidas o son incompatibles con el sistema cromatogrfico, lo que impide su introduccin directa

HPLC
HPLC
Por su polaridad se clasifica en:

Caractersticas
Selectividad Sensibilidad Rapidez Reproducibilidad

Parmetros
Naturaleza de la fase estacionaria

Fase Directa: fase estacionaria polar fase mvil de baja polaridad

Fase Reversa: fase estacionaria de polaridad baja fase mvil de polaridad alta

Tamao de partcula Eluyente (composicin y flujo) Detector

Principales mecanismos de interaccin en cromatografa lquida:

Adsorcin superficial Particin Intercambio inico Exclusin molecular

HPLC

Componentes HPLC
Fase mvil
Alta pureza (calidad HPLC). Inactividad frente a la fase estacionaria. Baja viscosidad. Compatibles con la muestra. Facilitar la recuperacin de la muestra. Compatibilidad con el sistema de deteccin. Disolventes previamente desgasificados

Bombas

Presin estable hasta 5000 psi (400 atm) 1 atm = 14,696 psi Flujo libre de pulsaciones Amplio rango de flujos (0,1 a 10 mL/min) Control, exactitud y reproducibilidad del flujo Componentes qumicamente inertes y resistentes a la corrosin

Precolumnas

Inyectores

Se emplean vlvulas inyectoras de volumen (loop) constante Pueden ser manuales o automticas Para variar el volumen de inyeccin se debe cambiar el loop correspondiente Se debe evitar la entrada de burbujas en el sistema de inyeccin

Se trata de una pequea columna (0,5 3 cm) colocada entre el inyector y la columna Ayuda a prevenir la entrada de suciedad, procedente de la muestra o del eluyente, en la columna analtica Va a permitir alargar la duracin de las columnas Debe ser del mismo relleno que el de la columna analtica

HPLC

Componentes HPLC
COLUMNAS
Rellenos de columnas
Fase Normal Slica Almina Amino (-NH2) Ciano (-CN) Diol (glicidoxi-etilmetoxisilano) Fase Reversa C-2 o RP-2 (-SiCH2CH3) C-8 o RP-8 (-Si-(CH2)7-CH3) C-18 o RP-18 (Si-(CH2)17-CH3)

Long. columna vs. Resolucin de picos

Ventajas de la High Speed HPLC con columnas cortas Tiempo de anlisis reducido Menor consumo de disolventes Menor dispersin de los solutos a analizar Ahorro de costes Mayor sensibilidad

HPLC

Cromatograma

HPLC

HPLC

Exclusin molecular
Exclusin molecular Como fase estacionaria se emplea un material poroso inerte (gel) que permite la discriminacin entre los solutos segn su tamao. Los analitos de mayor tamao no pueden penetrar en los poros de la fase estacionaria y son excluidos, viajando con la fase mvil en el frente de la misma. Se muestra especialmente til para determinar el rango molecular de polmeros, protenas, etc.

La separacin se basa en el tamao molecular. Como fase estacionaria se emplean sustancias de tamao de poro determinado. Tambin se denomina cromatografa de permeabilidad por gel (GPC).

HPLC

Intercambio inico
Tanto fase estacionaria como fase mvil son de naturaleza inica. La iones de la fase estacionaria son de carga opuesta a los del eluyente.

Se emplea para el anlisis de todo tipo de iones (inorgnicos y orgnicos). Las molculas intercambiadoras se ligan a soportes especficos. El material intercambiador de la fase estacionaria es de dimetro de partcula pequeo (1-10 m)

HPLC

Particin
La separacin se basa en el reparto o distribucin de los solutos entre una fase mvil lquida y otra estacionaria inmiscible, soportada sobre un slido inerte. La discriminacin se produce por diferencias de solubilidad.
Las especies ms retenidas sern las que presenten mayor afinidad (solubilidad) por la fase estacionaria que por la fase mvil (eluyente). La separacin de los solutos se basa en las diferencias en esta solubilidad relativa. Son ms comunes los mtodos cromatogrficos en fase reversa dada la naturaleza hidroflica de las muestras de mayor inters (clnico, contaminacin, alimentos).

Segn empleemos fase directa o fase reversa se nos va a alterar el orden de elucin de bandas y el tiempo de anlisis.

HPLC
Soportes en directa y reversa

HPLC

Adsorcin
La fase estacionaria es slida. La separacin se logra por las diferencias en solubilidad (en fase mvil) y de retencin por adsorcin (en fase estacionaria) de la mezcla de solutos.
Slica (90%) y almina (10%) son las fases estacionarias ms comunes. Tanto las molculas de solutos como de disolvente son atradas hacia los lugares activos polares de la fase estacionaria. Unos solutos sern ms atrados que otros por la fase estacionaria y as se lograr su migracin diferencial. Se usan mezclas de disolventes para conseguir el poder de elucin y la selectividad adecuadas. Normalmente un disolvente apolar (n-hexano) unido a otro ms activo (acetona, cloruro de metilo, etc.).

HPLC

Detectores
El tipo de muestra o tipo de analisis condiciona el detector a escoger
Los detectores ms utillizados en HPLC son: Detector UV. Hay bsicamente tres tipos: Detector de Longitud de Onda Fija Detector de Longitud de Onda Variable Detector de Arreglo de Diodos

Detectores Electroqumicos. Pueden ser clasificados en tres tipos: Detector Amperomtrico Detector Conductimtrico Detector Potenciomtrico

Detector de Indice de Refraccin. Existen muchos diseos de estos detectores, pero solamente existen ahora dos tipos: Tipo Deflexin Tipo Fresnel Detector de Fluorescencia. Este detector solamente puede detectar compuestos que tengan fluorescencia nativa o inducida por derivatizacin . Detector de Fluorescencia Inducida por Laser. Segn la Fuente de Excitancin Segn el sistema ptico

Detectores basados en una propiedad de la fase mvil. Ejemplo: Detector de Indice de Refraccin Detectores basados en una propiedad de la sustancia a separar. Ejemplo: Detector de Fluorescencia, Detector Ultravioleta

HPLC

Investigacin U. de Alcal
Determinacin del pptido bioactivo Soymetide en productos comerciales de soja por HPLC Capilar
Se ha desarrollado un mtodo por HPLC Capilar para la determinacin de soymetide, pptido con actividad inmunoestimuladora procedente de la hidrlisis enzimtica con tripsina de la soja.

HPLC
Se han establecido por primera vez las cantidades de soymetide presentes en los cultivos de soja, as como en sus productos comerciales (bebidas de soja y formulas infantiles). Los resultados han permitido establecer que en dichos productos el soymetide se encuentra en cantidades suficientes para llevar a cabo su actividad bioactiva tras su ingesta. Se ha evaluado el efecto del procesado del alimento en la cantidad de soymetide, revelando una menor relacin soymetide/protena en los productos procesados

ESPECTROSCOPA INFRARROJA

ESPECTROSCOPA INFRARROJA
Sin embargo, el espectro Casi todos los infrarrojo es mucho ms compuestos complejo comparado con el qumicos ultravioleta o el visible. La orgnicos radiacin infrarroja es de presentan baja energa y su absorcin marcada por una molcula causa absorcin toda clase de cambios selectiva en la sutiles en su energa regin infrarroja. rotacional o vibracional. Este mtodo se utiliza, por ejemplo, para medir la concentracin de carbono orgnico total cuando hay solo pequeas cantidades de carbono en el agua.

MODOS NORMALES DE VIBRACION

Es el numero de modos normales de vibracin el que define el espectro vibracional de cada molcula
Los tomos que constituyen una molcula estn unidos por fuerzas de origen electrosttico, que semejan uniones elsticas y en consecuencia, sus movimientos son peridicos o casi peridicos. Estos movimientos son en realidad una superposicin de los llamados modos normales de vibracin, en lo que todos los tomos se encuentran vibrando con la misma fase y frecuencia normal. estos espectros tambin dependen de las masas de los tomos involucrados, su arreglo geomtrico dentro de la molcula, y la elasticidad de los enlaces qumicos

EL ANCHO DE LOS PICOS

Los picos que aparecen en el espectrograma jams son infinitamente delgados, aun si pudiramos disponer de un espectrmetro con una resolucin perfecta. Existen tres factores que contribuyen al ensanchamiento de los picos:

Ensanchamiento Ensanchamiento Ensanchamiento natural. Doppler. por presin.

Existen don tipos de espectrmetros infrarrojos, los dispersivos y los de transformada de Fourier.
Un espectro por transformada de Fourier consta de tres elementos bsicos: una fuente luminosa, un interfermetro y un detector.

PREPARACIN DE LA MUESTRA
Las muestras gaseosas requieren poca preparacin ms all de su purificacin, pero se usa una celda de muestra con una larga longitud de celda (usualmente 5-10 cm) pues los gases muestran absorbancias relativamente dbiles. Las muestras lquidas se pueden disponer entre dos placas de una sal de alta pureza. Las placas son transparentes a la luz infrarroja y no introducirn lneas en el espectro. Algunas placas de sal son altamente solubles en agua, y as la muestra, agentes de lavado y similares deben estar completamente anhidros (sin agua). Las muestras slidas se pueden preparar principalmente de dos maneras. La primera es moler la muestra con un agente aglomerante para formar una suspensin (usualmente nujol) en un mortero de mrmol o gata. Una fina pelcula de suspensin se aplica sobre una placa de sal y se realiza la medicin.

FUNCIONAMIENTO
Un haz colimado, proveniente de una fuente que emite en toda la regin IR incide sobre el divisor de haz. El haz incidente se divide en dos haces perpendiculares de igual energa, uno incide sobre el espejo mvil y otro sobre el fijo. Los haces son reflejados por ambos espejos y se recombinan al llegar al divisor de haz.

Y finalmente detector

llega

al

El haz resultante pasa a traves de la muestra, en donde sucede una absorcion selectiva de longitudes de onda.

Esto da lugar a una interferencia, la cual puede ser constructiva o destructiva dependiendo de la posicin relativa del espejo mvil con respecto al espejo fijo.

VENTAJAS DEL ESPECTROMETRO DE TRANSFORMADA DE FOURIER

1 2
Menor duracin para la obtencin de un espectrograma comparado con los dispersivos, espectrogramas de resolucin aceptables en tiempos de orden de segundos, mientras que los dispersivos requieren de 10 a 15 minutos.

No se necesitan rendijas que limitan la cantidad de energa que llega al detector. En los espectrmetros dispersivos estn son necesarias para dar mayor resolucin.

3
4

La muestra no se encuentra inmediatamente despus de la fuente, por lo cual se calienta mucho menos que en los espectrmetros de dispersin.

En el espectrograma no aparecen las contribuciones por emisin de la muestra. Tampoco se detecta luz parasita, de tal forma que no es necesario trabajar en condiciones de iluminacin especiales.

ESPECRTROSCOPIA INFRARROJA Y SU USO EN EL ANALISIS DE ALIMENTOS

la tcnica de espectroscopia de infrarrojo o IR goza actualmente de la preferencia de centros de investigacin y laboratorios dedicados a la identificacin de alimentos adulterados.

debido principalmente a que es una herramienta analtica con alta precisin en sus resultados, la muestra por analizar requiere a menudo de una mnima preparacin, es un anlisis muy rpido (entre 20 y 90 s), es un mtodo no destructivo y, adems, es una tcnica amigable con el medio ambiente, ya que no utiliza solventes contaminantes en su medicin.

UN MTODO RPIDO PARA LA DETERMINACIN DE LA ESTABILIDAD OXIDATIVA DE GRASAS Y ACEITES MEDIANTE ESPECTROSCOPA INFRARROJA CON TRANSFORMADA DE FOURIER. COMPARACIN CON MTODOS CLSICOS. M. D. Guilln, N. Cabo Universidad del Pas Vasco Tecnologa de alimentos. Facultad de Farmacia. Paseo de la Universidad, 7. 01006-Vitoria. Telfono: 945013081. Correo electrnico: knpgulod@vc.ehu.es Introduccin La degradacin oxidativa de los lpidos constituye una de las principales y ms frecuentes causas de deterioro de los alimentos debido a que la mayora de ellos estn constituidos por lpidos en diferentes proporciones. Unido al deterioro de las condiciones organolpticas, la oxidacin lipdica puede provocar la reduccin del valor nutricional y la generacin de compuestos nocivos para la salud. Los perxidos lipdicos, los radicales libres, el malonaldehdo y algunos productos de la oxidacin del colesterol son ejemplos especficos de compuestos considerados perjudiciales para la salud y que se generan en la oxidacin. En este sentido algunos autores han relacionado el consumo de productos generados en la oxidacin lipdica con el desarrollo de enfermedades cardiovasculares. Para el control del estado oxidativo de los alimentos y materias primas empleadas en su elaboracin, tradicionalmente, se emplean mtodos clsicos como el ndice de Perxidos o el Valor de Anisidina, basados en la determinacin de compuestos generados en diferentes etapas de la oxidacin. La utilizacin de dichos mtodos presenta los inconvenientes propios de mtodos empricos. En esta comunicacin se informa de un mtodo alternativo para la determinacin rpida y sencilla del grado de oxidacin y estabilidad oxidativa de aceites y grasas mediante espectroscopa infrarroja con transformada de Fourier.

Experimental Se llev a cabo el seguimiento de la oxidacin inducida en estufa a 70C y aireacin de diferentes aceites vegetales comestibles mediante la adquisicin peridica de los espectros infrarrojos en un espectrofotmetro infrarrojo con transformada de Fourier Bruker Vector 33 siguiendo la metodologa descrita previamente [2, 3]. Paralelamente se determin por duplicado el Indice de Perxidos y el Valor de Anisidina de las muestras siguiendo mtodos estandarizados. Resultados y Conclusiones Se comprob que los datos del Indice de Perxidos y del Valor de Anisidina de los distintos aceites a lo largo de su proceso de oxidacin estn estrechamente correlacionados con los valores de las frecuencias de determinadas bandas del espectro infrarrojo; es decir, los valores de las frecuencias de ciertas bandas del espectro infrarrojo proporcionan una informacin comparable a la obtenida por los mtodos clsicos, pero con importantes ventajas frente a aquellos, como son la sencillez de la tcnica, ahorro en reactivos y reduccin considerable del tiempo de anlisis. Referencias [1] P. B. Addis (1986). Food Chem. Toxic., 24:1021-1030. [2] M. D. Guilln, N. Cabo (1999). J. Agric. Food Chem., 47:709-719. [3] M. D. Guilln, N. Cabo (2000). J. Sci. Food Agric., 80:1-9.

Agradecimientos Se agradece a la Direccin General de Investigacin del Ministerio de Ciencia y Tecnologa (Proyecto AGL 2000-1696) y a la Universidad del Pas Vasco (Proyecto UPV 101.123-EB087/99) la financiacin concedida.

ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA
Desde el ao 1964 aproximadamente, se han llevado a cabo trabajos de investigacin encaminados al desarrollo de un mtodo analtico basado en la fluorescencia atmica Se ha demostrado que esta tcnica es adecuada y til para la determinacin cuantitativa de un sin numero de elementos. Sin embargo no ha tenido hasta la fecha una gran aplicacin debido a la gran eficacia de los mtodos de emisin y absorcin atmica El uso limitado de esta tcnica no se atribuye a las desventajas que posee sino mas bien a que no ha mostrado ventajas sobre los mtodos de emisin y absorcin establecidos. Por otro lado los instrumentos de fluorescencia dispersivos resultan ser mas complejos y potencialmente mas caros.

INSTRUMENTACION

Los componentes de los instrumentos para medidas de fluorescencia atmica presentan generalmente una disposicin similar a la indicada a continuacin:

el receptculo de la muestra es normalmente una llama, pero tambin puede ser un horno electro trmico o una descarga luminiscente entre otros.

FUENTES
Seria deseable una Quiz la fuente mas fuente continua para utilizada en En los trabajos iniciales las medida de con esta tcnica se fluorescencia atmica fluorescencia atmica. ha sido la lmpara de utilizaban las lmparas Lamentablemente, sin de ctodo hueco descarga son embargo, la potencia electrodos que como fuente, de salida de la mayora aplicando a la lmpara generalmente produce de las fuentes continuas impulsos cortos de una intensidades superiores en una regin tan corriente mayor a la a las ctodo hueco. estrecha (como la de que esta tolera en Estas ha sido una lnea de absorcin funcin continua para empleadas en distintas atmica) es tan as aumentar las formas pero el no estar pequea que limita la intensidad de salida sin disponible para muchos sensibilidad del mtodo destruir la lmpara. elementos ha sido un de una manera gran problema importante. La fuente ideal para las medidas de fluorescencia atmica son los lseres, por su elevadas intensidades y sus anchuras de banda estrechas. Sin embargo, su elevado coste ha impedido su aplicacin en mtodos de fluorescencia atmica de rutina

INSTRUMENTOS DISPERSIVOS
Un sistema dispersivo para medidas de fluorescencia atmica esta constituido por una fuente modulada, un atomizador (con llama o sin llama), un monocromador o sistema de procesamiento de la seal y de lectura. A excepcin de la fuente la mayora de estos componentes son similares a los mencionados anteriormente

INSTRUMENTOS NO DISPERSIVOS
En teora, cuando se utiliza como fuente de excitacin una lmpara sin electrodos o una de ctodo hueco, no seria necesario un monocromador o un filtro, ya que la radiacin emitida, en principio, es la de un nico elemento y por tanto ello solo excitara a los tomos de ese elemento. Un sistema no dispersivo podra estar constituido solamente por una fuete, un atomizador y un detector.

VENTAJAS DEL SISTEMA NO DISPERSIVO

La simplicidad y bajo coste de la instrumentacin

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La fcil adaptacin para el anlisis multielemental

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El alto rendimiento energetico, y por ello una mayor sensibilidad. La recogida simultanea de la energa de mltiples lneas, lo que tambin aumenta la sensibilidad.

GENERALIDADES
INTERFERENCIAS: las interferencias que se producen en esta tcnica son del mismo tipo y aproximadamente de igual magnitud que las observadas en espectroscopia de absorcin atmica. APLICACIONES: los mtodos de fluorescencia atmica se han aplicado al anlisis de metales en materiales como agua de mar, sustancias biolgicas, grafito u muestras agrcolas.