Universidade Federal do Par Instituto de Cincias Biolgicas Faculdade de Biotecnologia Docente: Profa. Dra.

Luciana Monteiros

Alunos: Giselle Brasil Samuel Amaral

Artigo a ser apresentado:

 Tcnica

Espectroscopia

amplamente

usada desde 1960 Analise de estrutura secundria Amostra em soluo aquosa (Influncia do meio) Mtodo Simples e rpido Altamente sensvel a conformaes
Augustin Fresnel

Luz plano polarizada

Composto opticamente Ativo

Componentes da luz plano polarizada

Estudo da estabilidade de enzimas Dinmica de Protenas Mudanas na Conformao de Protenas Estima Estrutura Secundria de Protenas Interao Protena e RNA Interao Protena e Protena

Espectro do Dicrosmo Circular. Prximo a regio do Ultravioleta (320-260nm) reflete o ambiente das cadeias laterais contendo o anel aromtico. As alfa hlices so identificadas por terem bandas negativas de 222 208nm e bandas positivas de 193nm As Folhas beta possuem bandas positivas a 195nm e bandas negativas prximo de 218nm

Cubeta de quartzo

Jascow 32 Espectropolarimetro

Ultravioleta Distantes. Abaixo de 250nm Transies Eletrnicas: n (Oxignio > Amida) (190nm-200nm)

Ultravioleta Prximo Utilizada para caracterizar mudanas na estrutura terciria das protenas. Grupos cromforos mais importantes: cadeias laterais. Comprimento de onda menor que 190nm Exceo: aromticos.

Utilizada para identificar ou analisar a composio de uma amostra. Se baseia no nvel de vibrao das ligaes covalentes entre os tomos. Radiao Infravermelho Variao no momento bipolar

Espectrofotmetros de Infravermelho Espectroscopia por transformada de Fourier de absoro no infravermelho

Raramente proporciona informaes absoluta Enorme quantidade de grupos Cromforos Grupos Vizinhos Compostos Padro

Otimizao dos parmetros Preciso da tcnica de dicrosmo circular Comparao com outras tcnicas ( Raio-X e FTIR)

Myoglobina

Hemoglobina

Lisozima

Ribonuclease A

Hsp90

Piruvato Cinase

CRP

Tum 1

Calmodulina

High Performance Phenyl-Sepharose Column

ons cloretos so utilizados para estabilidade na estrutura conformacional; Promover intervalos apropriados de pH;
Absoro distante do alcance UV, onde a estrutura das protenas apresentam caractersticas diferentes de luz polarizada circulante;

Espectro de CD de 9 protenas registradas na regio entre 190 a 250 nm;

-protenas: hemoglobina e mioglobina;

/-protenas: Piruvato quinase,

Calmodulina,

Lisozima,

cAMP,

Ribonuclease A, Hsp90, Tum 1;

Altas qualidades dos aparelhos; A tcnica de anlise da segunda derivada para diminuio dos efeitos da linha de base e aumento das pequenas diferenas espectrais; importante a qualidade dos espectros a ser aplicados a segunda derivada; Anlise da segunda derivada: algortimo de Savitzky-Golay que calcula uma mdia mvel, onde os dados so estimados por uma funo polinominal de segundo grau;

Os desvios mdios de CD foram mais de 50%

o que no pode ser aceito em investigaes;

O grande desvio de CD indicou que a

estimativa de estruturas secundrias de

protenas insuficiente para estabelecer

dados confiveis;

O que poderia causar problemas significativos associados a CD como mtodo para estimativa da protena secundria estrutura

1.

2.
3.

Posies, magnitudes das bandas proteicas e a sobreposio do espectro; Estrutura paralela e antiparalela de -folhas tendem a ser mais variveis; Regies proticas curvilneas tm carater espectral menos claro;

4.

5.

As inconsistncias de referncia de dados pode levar a imprecises na definio da estrutura secundria; Parmetros como: cadeias laterais, cromforos e estrutura secundria distorcida pode levar a erros;
Anlises a partir de CD limitada a estimativa de componentes em protenas.

Verificou-se um grande desvio entre os resultados de CD e cristalografia de raios-X, embora os parmetros de CD estivessem otimizados; Embora seja um mtodo rpido e simples, o CD fornece dados imprecisos; A tcnica de FTIR pode fornecer resultados mais confiveis e pode ser usada como mtodo alternativo para estudo de componentes de estrutura secundria;

Espectroscopia de infravermelho. 2013. Disponvel em <Espectroscopia de infravermelho> Espectroscopia de Absoro no Infravermelho (IRS). Unesp. 2012.Disponvel em <http://www2.sorocaba.unesp.br/gpm/ftir.htm> Kalen Lin et al. Overestimated accuracy of circular dichroism in determiningprotein secondary structure,2013.7 pginas. Mayorga, Obdulio Lpez. Qumica Fsica de Macromolculas. 2010. Norma J. Greenfield, Circular Dichroism. 2004.

Obrigado!