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Objetivo
Establecer los lineamientos para la toma, transporte y procesamiento de muestras biolgicas que permitan asegurar sus condiciones de calidad para los anlisis correspondientes.
Etapa pre-analtica
Los antecedentes del paciente y los factores epidemiolgicos son tiles para orientar el diagnstico etiolgico.
Etapa analtica
La validez de los resultados del diagnstico microbiolgico depende entre otros factores, de que se sigan correctamente las normas de obtencin, transporte y procesamiento de la muestra.
Toda la informacin diagnstica que el laboratorio de microbiologa puede proporcionar, depende de la calidad de la muestra recibida.
Una toma mal realizada, o transportada determinar un fallo en la recuperacin de los agentes patgenos, que puede inducir a errores diagnsticos y tratamiento.
Lo ms importante es diferenciar entre flora normal y patgena. El aislamiento de un patgeno o posible patgeno no indica necesariamente que est implicado en el desarrollo de la enfermedad. Ej.: S.pneumoniae.
Medios de transporte
Los medios para el transporte de muestras ms utilizados y que permiten la viabilidad de la mayora de los patgenos son: el medio de Stuart, Cary-Blair y el de Amies. Estos medios semislidos tienen un ph regulado y son esencialmente una mezcla de sustancias tamponadas que carecen de factores de crecimiento.
1. Microorganismo aislado.
Procedimiento
1. Cepa : cultivo fresco y puro. 2. Inculo: pasar 1 o 2 colonias a un tubo de caldo Mueller Hinton. El crecimiento bacteriano se ajustar a la turbidez del patrn 0.5 del estndar de McFarland. 3. Introducir un hisopo e inocular en forma masiva una placa con agar Mueller Hinton.
Procedimiento
4. Colocar hasta un mximo de 6 discos de antibiticos en forma equidistante. 5. Incubar a 35 oC por 18 h. 6. Medir el halo de inhibicin con una regla. Comparar con tablas de interpretacin internacional. S, I o R. 7. Reportar.
Mueller Hinton
MH + 5% sangre cordero
Control de calidad
Implementar en su rutina diaria de laboratorio el proceso de control de calidad. Usar y conservar correctamente cepas ATCC a mediano y corto plazo.
Sistema Vitek :
Realizar control de calidad a toda nueva tarjeta de identificacin o de sensibilidad, una vez que se ha recibido. No se requiere otro control de calidad si todos los resultados estn dentro de los lmites. Los informes de control de calidad y reporte de desviaciones, son mantenidos en el Libro de control de calidad del Vitek.
Incubadora
a) Controlar diariamente la temperatura de las incubadoras, antes de sacar las placas y anotar en una hoja control el resultado. b) Observar el termorregulador por cualquiera alteracin en su posicin preestablecida. c) Todas las incubadoras deben ser limpiadas mensualmente y llevar un rcord de mantenimiento preventivo.
Refrigerador
a) Control diario de la temperatura en hoja de formato mensual. b) Mantenga la temperatura entre 4 8 C. c) Lleve un registro de problemas de funcionamiento, causa y solucin.
Microscopios :
1. Limpieza del aceite de objetivos, condensador, etc. 2. Apagar la fuente de luz. 3. Colocar cobertor contra el polvo. 4. Limpieza de Ocular, condensador y diafragma. 5. Limpieza y ajuste del sistema lumnico.
Tincin de Hansel
Fijar la lmina con metanol absoluto por 3 min. Cubrir la lmina con eosina durante 1 min. Lavar con agua destilada. Teir con azul de metileno por 1 min. Lavar y decolorar ligeramente con metanol (dos a tres gotas). Dejar secar y examinar el extendido con objetivos de 10X y 40X.
Tincin de Hansel
Realizar un recuento diferencial con objetivo de 40X, se cuentan 50 clulas por campo, si se observan 10 eosinfilos se considera la prueba positiva.
Cultivo farngeo
Se utiliza para el diagnstico de faringitis estreptocccica. Excepcionalmente se puede requerir bsqueda de otros patgenos (por ejemplo: Neisseria gonorrhoeae).
Cultivo farngeo
Se investigar rutinariamente la presencia de Streptococcus betahemoltico del grupo A (S. pyogenes) y otros grupos beta hemolticos como C y G.
Cultivo farngeo
Utilizar hisopos de dacrn o de alginato de calcio para recolectar las muestras para el cultivo. El estreptococo sobrevive en hisopos secos por cerca de 2 horas y en medio de transporte (Stuart, Amies) a 4C por 24 a 48h.
Procedimiento
1. Inspeccin de la faringe. 2. Indicar al paciente que abra la boca y que pronuncie un largo ah. 3. Introducir el hisopo y frotar enrgicamente ambas amgdalas/criptas y la pared posterior de la faringe con movimientos de barrido y sembrar AS.
Cultivo farngeo
Con frecuencia, el dolor de garganta se debe a un virus, pero el cultivo permite determinar si se debe a una bacteria.
Angina de Vincent
Angina de Vincent
Haemophilus
Neisseria
Bsqueda de Arcanobacterium haemolyticum: Se recomienda el uso de AS humana o de caballo para el aislamiento primario. Se puede utilizar el AS de carnero convencional con incubacin hasta por 72h para lograr evidenciar la beta-hemlisis.
A. haemolyticum
Borrelia/campo oscuro
Cuando la clnica oriente hacia una faringitis por N. gonorrhoeae, debe seleccionarse el medio Thayer-Martin o el GC. Otras especies de Neisseria tambin pueden estar presentes en cultivos de garganta y deben diferenciarse bioqumicamente.
Prueba de la bacitracina
Esta tcnica tiene un 5% de falsos negativos y entre 10 y 20% de falsos positivos ya que otros Streptococcus (grupos C y G) tambin pueden dar sensibles.
Prueba de PYR
Se fundamenta en la actividad de la enzima pirrolidonil aminopeptidasa producida por S. pyogenes, sobre un sustrato el L-pirrolidonil-beta-naftilamida (PYR), con formacin de beta-naftilamida libre, que se combina con el reativo cinamaldehdo formando un producto final de color rojo.
Los laboratorios que utilizan las pruebas bacitracina o PYR deben informar: Hubo desarrollo presuntivo de Streptococcus pyogenes.
La identificacin definitiva se lleva a cabo mediante la deteccin del antgeno especfico de grupo, tambin llamado carbohidrato de Lancefield; sta se realiza a travs de mtodos de aglutinacin con partculas de ltex o coaglutinacin, directamente sobre la colonia aislada. Solo los estreptococos beta-hemolticos, A , B , C , F , G y los alfa o no hemolticos del grupo D pueden clasificarse con esta prueba.
Desventajas: Solo detectan Streptococcus grupo A. Bajo valor predictivo positivo. El elevado costo.
2. Pruebas de tolerancia:
Se refiere a la capacidad que pueda tener la bacteria para crecer a distintos tipos de temperaturas, atmsfera, pH, sales presentes en el medio, antibiticos, entre otras.
Mtodos rpidos
Sistema API: Posee un gran nmero de pruebas bioqumicas, las cuales se presentan como sustratos liofilizados en una galera de pozos y se requiere slo de un inculo estandarizado a partir de cultivos puros y frescos, y un tiempo de incubacin posterior que depende de la galera de pruebas que se haya escogido.
Mtodos rpidos
El sistema VITEK consta de un mdulo de vaco-sellador, un incubador-lector, una computadora, el monitor y la impresora. Permite identificar bacterias hasta en 3 horas.
Inmunodiagnstico.
Tambin conocido como serologa diagnstica. Se utilizan pruebas que permiten la interaccin antgeno anticuerpo para diagnosticar enfermedades infecciosas, as como para identificar microorganismos.
El uso de la biologa molecular para el diagnstico y seguimiento de las enfermedades infecciosas se basa en las caractersticas de los cidos nucleicos como cdigos nicos de identificacin de todo ser viviente.
Etapa post-analtica
El informe al mdico tratante debe incluir la identificacin del paciente, tipo de muestra recolectada, estudio microbiolgico realizado, fecha de recepcin de la muestra, emisin de los resultados y cualquier otro dato necesario.
Toma de muestra
La recoleccin se realizar en un envase desechable que debe ser de boca ancha con tapa de rosca, con capacidad para 30 50 mL, transparente porque permite ver la cantidad y la calidad de la muestra.
Baciloscopa
Baciloscopa
(-): No se encuentran BAAR en 100 campos observados. (+): Menos de 1 BAAR por campo en 100 campos observados. (++): 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos observados (+++): Ms de 10 BAAR por campo en 20 campos observados.
En caso de encontrar slo uno a cuatro bacilos en cien campos observados debe ampliarse la lectura a otros 100 campos utilizando una nueva lnea.
Procedimiento
En el caso de conjuntivitis, la muestra se obtendr del ngulo interno del ojo. Obtener raspado conjuntival del borde interno del prpado superior e inferior para la investigacin de C. trachomatis
Examen en fresco
5 o ms leucocitos por campo, es signo de piuria e infeccin. Cilindros leucocitarios + un germen con recuento significativo, sugiere pielonefritis. En infecciones vesicales agudas, adems de piuria, puede comprobarse hematuria.
Frotis
Una o ms bacterias por campo de inmersin se presenta en muestras con cuentas mayores de 100.000 colonias/mL de orina, y al menos un leucocito cuando existe piuria.
Disentera: historia de moco o sangre en las heces con tenesmo o dolor al defecar y temperatura axilar de 38.5 C.
Gastroenteritis: diarrea lquida de color amarillo verdosa o no, acompaada con vmito y fiebre en algunas ocasiones. Fiebre entrica: fiebre, cefalea, dolor abdominal, bradicardia relativa, esplenomegalia y leucopenia. Ej: Fiebre tifoidea.
Interpretacin
La presencia de 5 o ms leucocitos por campo microscpico sugiere la presencia de un agente enteroinvasor. La ausencia de clulas inflamatorias sugiere la presencia de un agente toxignico.
Preston mod.
Shigella
XLD
Yersinia
V. cholerae
Agar sangre control esterilidad y cepa de V. cholerae O1. Reactivo oxidasa con cepas de P. aeruginosa, E.
coli.
flexneri, P. aeruginosa. Agar LIA con cepa de E. coli, P. vulgaris, S. flexneri. Agar MIO con cepa de E. coli, K. pneumoniae.
SS
Bacteremia: Presencia de bacterias en la sangre. Bacteremia primaria: Ausencia de foco primario de infeccin. Bacteremia secundaria: Existe una asociacin clnica, temporal y bacteriolgica con un sitio reconocido de infeccin en el paciente.
Septicemia: Conjunto de alteraciones fisiolgicas por presencia de los microorganismos en torrente sanguneo o en tejidos. Actualmente se considera como una respuesta sistmica a una infeccin, se manifiesta por dos o ms de los siguientes parmetros: temperatura mayor de 38 C o menor de 36C, ritmo cardaco mayor de 90 latidos por minuto, recuento leucocitario mayor de 12.000/mL o mayor del 10% de bandas.
Choque sptico: Sepsis con hipotensin, a pesar de una reanimacin adecuada con lquidos el paciente no responde, alteracin de la perfusin orgnica, que puede incluir disminucin del gasto urinario, cambios del estado mental, acidosis sistmica e hipoxemia.
Infecciones endovasculares: Consisten en infecciones localizadas en el torrente intravascular, as como sitios de acceso intravenoso perifrico, central y para hemodilisis.
En el caso de las bacteremias y septicemias es necesario el cultivo de sangre, as como en las infecciones endovasculares el cultivo de la punta de catter para el diagnstico microbiolgico de los mismos.
2.
3.
4.
Seleccionar el sitio. Preparacin del sitio. Desinfectar las tapas de las botellas para el hemocultivo con isodine. Proceder a la venopuncin en una proporcin de 1:10.
2. Cortar con tcnica estril a 4 5 cm del extremo del catter. 3. Colocar la punta en un tubo estril para ser enviada al laboratorio. 4. Una vez en el laboratorio se procede a inocular mediante rodamiento en una placa de agar sangre la punta del catter. 5. La placa de agar sangre debe ser incubada en microaerofilia a una temperatura de 36C durante un mximo de 72 horas con lecturas intermedias cada 24 horas. 6. Despus de la incubacin, realizar contaje del nmero de colonias bacterianas y si el nmero de colonias en la placa es igual o mayor de 15, la posibilidad de septicemia con este punto de origen es alta.
Meningitis asptica: Inflamacin menngea de causa diversa, sin evidencia de un microorganismo patgeno detectable en LCR.
Vaginitis: es la inflamacin de la vagina que se acompaa comnmente con secrecin vaginal o leucorrea. Vaginosis bacteriana: es la causa ms frecuente de infeccin vaginal entre las mujeres en edad frtil.
Uretritis: consiste en la inflamacin de la uretra, que ocasiona sntomas como: disuria, dispareunia, secrecin uretral mucopurulenta y eritema del meato.
Vaginosis bacteriana
E) score=8; F) score=10.
Atopobium vaginae
Biofilm
Tx metronidazol, 3 y 35 das.
Hifas y clamidoconidios
Tubo germinativo
Sntomas y signos: Prurito y/o ardor vaginal. Examen ginecolgico: Descarga abundante de flujo de aspecto de leucorrea e irritacin de la mucosa vaginal. Cultivo vaginal: Desarrollo de flora comensal (lactobacilos). Estudio de gram: Compatible con identificacin de lactobacilos abundantes. Medicin del pH vaginal: Anormalmente cido, entre 3,5 y 4,5. Estudio por microscopa: Demostracin en biopsia o extendido citolgico, de lisis en las clulas epiteliales. Caractersticas frecuentes de los lactobacilos: Se observan cambios morfolgicos.
Las bacterias anaerobias son patgenos importantes de infecciones en el hombre. Pueden estar involucradas en cualquier tipo de infeccin, de piel y tejidos blandos, osteomielitis, infecciones pleuropulmonares, intra-abdominales y del tracto genital femenino
Cultivo
Si se sospecha la participacin de flora bacteriana mixta, tanto anaerobia como facultativa, se recomienda el uso de medios de cultivo no selectivos y selectivos. Como agar base se emplea agar Schaedler, agar Brucella, agar Wilkins Chalgren, agar CDC.
Mtodo convencional: Galera de medios diferenciales que ponen en evidencia la capacidad de microorganismos para utilizar carbohidratos, licuar la gelatina, producir indol y ureasa, reducir los nitratos, hidrolizar la esculina, crecer en bilis al 20%, producir lecitinasa o lipasa, entre otras, son las ms utilizadas.
GRACIAS!!!