Bactérias Acéticas - Micro

UTILIZAO DE BACTRIAS
PRODUTORAS DE CIDO ACTICO
NA INDSTRIA ALIMENTAR
Caratersticas

[1] [2] [3]
Gram negativas Mesfilas, aerbias estritas No formadoras de esporos Clulas em forma de bastonete Catalase positiva Oxidase negativa pH timo de crescimento 5-6.5 Resistentes a elevadas concentraes de cido actico e baixo pH A temperatura tima de crescimento para a maioria de 25-30C Realizam a oxidao incompleta de lcool, levando produo de cido actico Gluconobacter tem ausncia de algumas enzimas do ciclo do cido ctrico pelo que no pode oxidar o cido actico
[1] Sengun, I., Karabiyikli, S. (2011) Importance of acetic acid bacteria in food industry. Food Control, 22: 647-656. [2] Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. [3] Okafor, N. (2007) Modern industrial microbiology and biotechnology. Science Publishers, Enfield.
Cultivo
[2]
So facilmente cultivveis em meio: Camada dupla meio AE (cido actico-etanol) que fornece s colnias que crescem na superfcie um fornecimento constante de etanol e humidade a partir de uma camada inferior semisslida. GYC (glicose, extrato de levedura, carbonato de clcio) YPM (extrato de levedura, peptona, manitol) YPE (extrato de levedura, peptona, etanol)
Identificao
[2] [3]
A identificao fenotpica difcil devido elevada frequncia de mutaes

A aplicao de mtodos moleculares que no requerem o isolamento de microrganismos com base na identificao e caracterizao de segmentos especficos de DNA pode oferecer a soluo para a identificao rpida e precisa
Eletroforese desnaturante em gel de gradiente (DGGE) utilizado para anlises de comunidades microbianas em amostras ambientais e alimentares. PCR mtodo de identificao rpido e sensvel utilizado para identificar espcies de bactrias cido acticas.
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[2] Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. [3] Okafor, N. (2007) Modern industrial microbiology and biotechnology. Science Publishers, Enfield.
Tabela 1 Espcies dos doze gneros de bactrias cido acticas
[1] Sengun, I., Karabiyikli, S. (2011) Importance of acetic acid bacteria in food industry. Food Control, 22: 647-656.
Tabela 2 Ocorrncia
[1] Sengun, I., Karabiyikli, S. (2011) Importance of acetic acid bacteria in food industry. Food Control, 22: 647-656.
Utilizao na indstria alimentar
Consideraes
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As estirpes de bactrias cido actico utilizadas na produo industrial devem: a) Tolerar concentraes elevadas de cido actico; b) Requerer pequenas quantidades de nutrientes; c) No oxidarem novamente o cido actico formado; d) Ter um alto rendimento em termos de cido actico produzido.
O processo bioqumico simples:
[3] Okafor, N. (2007) Modern industrial microbiology and biotechnology. Science Publishers, Enfield.
D-tagatose
Cacau
Vitamina C
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Vinagre
Lquido transparente, incolor ou com um tom caramelo, com um teor em cido actico, entre 40 e 150 g de cido actico por litro.
Originalmente, o vinagre era obtido no de vinhos, mas de cervejas deixadas ao ar, isto , formava-se por fermentao espontnea.
As matrias-primas utilizadas para a produo de vinagre podem ser: cidra, vinho, cerveja e outras bebidas resultantes da fermentao alcolica de cereais, frutos e batatas, e solues de acar, tais como o mel.
Os tipos mais comuns de vinagre numa regio refletem muitas vezes a bebida alcolica local (por exemplo, vinagre de arroz popular no Japo, vinagre de vinho na Frana e vinagre de malte no Reino Unido). Contm misturas de suplementos (ex: extrato de levedura seca) com o objetivo de reiniciar o bioprocesso mais rapidamente caso este seja interrompido por um distrbio.
Sengun, I., Karabiyikli, S. (2011) Importance of acetic acid bacteria in food industry. Food Control, 22: 647-656. Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124.
O vinagre foi provavelmente o resultado de uma bebida alcolica estragada, considerando que a palavra acetum significa vinho azedo.
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Vinagre: produo
Os principais organismos produtores para processos aerbios so as AAB principalmente do gnero Acetobacter.
Acetobacter spp. so melhores produtores de cido e so mais utilizadas na produo de vinagre comercial contudo, sofrem da necessidade de sobreoxidar o cido actico, o que no um problema com Gluconobacter spp.
As principais propriedades de uma estirpe na produo de vinagre so:

tolerncia a altas concentraes de cido actico baixos requisitos nutricionais incapacidade de sobre-oxidar o cido actico formado elevada taxa de produo resistncia a infees de fagos
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Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124.
Vinagre: produo
1 processo Fermentao para produzir etanol a partir de uma fonte de hidratos de carbono, por exemplo glucose (30-32C, utilizando a levedura Sacharomyces cerevisiae) 2 processo Bio-oxidao do etanol a cido actico
O rendimento total terico de cido actico produzido a partir da glucose de 0,67 g de cido actico por grama de glicose.
Pequenas quantidades de substncias volteis so formadas durante o metabolismo secundrio (acetaldedo, etano, formiato de etilo, acetato de etilo) variando nos diversos tipos de vinagre. Assim, vo proporcionar variedades de odor, sabor, cor e outras propriedades.
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Vinagre: produo
O processo geralmente parado a um nvel mnimo de etanol residual, para evitar sobre-oxidao. Se a contrao de etanol diminui para valores abaixo do nvel mnimo, o cido actico oxidado a CO2 e gua.
A arerao completa e o controlo rigoroso da concentrao de oxignio durante o bioprocessamento so importantes para maximizar a produo e manter as bactrias viveis. Uma interrupo no fornecimento de oxignio, mesmo que por um curto perodo de tempo, pode provocar a morte das bactrias e a falha do processo. A quantidade terica de ar necessria para 1 L de vinagre contendo 6% de cido actico cerca de 120 L contudo, na prtica devido taxa lenta de troca lquido-gs, a quantidade necessria muito maior.
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Vinagre: mtodos de fabricao
1. Processo Lento ou Orleans 2. Processo Rpido ou Alemo

3. Processo Submerso
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1. Processo Lento ou Orleans
Mtodo mais antigo e tradicional de elaborao do vinagre. Utilizado na produo de vinagre de alta qualidade.
Consiste em favorecer o contato do ar com uma fina camada gelatinosa, que se mantm na superfcie do vinho (me do vinagre). O vinho colocado para acetificar em barris de madeira adaptados e designados de acetificadores.
Figura ?? - Recipiente utilizado para produo de vinagre pelo processo Orleans.
PROCEDIMENTO: Os cascos so furados e um tudo de vidro introduzido para permitir a entrada e remoo do vinagre. O licor de partida colocado num barril grande, contendo aparas de madeira ou caules de uvas, de onde se inicia o processo de acidificao. Se o licor for deixado em repouso, forma-se uma pelicula de AAB na superfcie (interface entre o meio acetificador e o ar). Como o oxignio entra no licor atravs dessa pelcula as bactrias utilizam-no para converter o etanol em cido actico. O barril deixado em repouso at atingir nveis de acidez desejados (8 dias). Em seguida, o lquido retirado e transferido para barris, onde mantido at atingir o pico de acidez (3 meses). Aps atingir esse pico, retira-se 2/3 ou de vinagre do fundo do barril a cada semana e adiciona-se um volume igual de lquido a partir do topo.
Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. Okafor, N. (2007) Modern industrial microbiology and biotechnology. Science Publishers, Enfield.
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1. Processo Lento ou Orleans
Os barris so colocados em locais onde a temperatura permanece elevada no inverno, para que a acetificao ocorra de forma mais rpida. Deve-se sempre evitar o contato do vinho e do vinagre com materiais ou equipamentos que contenham ferro, cobre, alumnio ou outros metais que causam problemas de turvao e de toxicidade.
Rendimento da transformao do lcool em cido actico baixo; Muito lento; Possibilidade de proliferao de bactrias produtoras de celulose e consumidores de cido actico.
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2. Processo Rpido ou Alemo
Utilizao de diferentes materiais porosos como caules de uvas e, especialmente, aparas de madeira, para aumentar a superfcie de contato das bactrias acticas com o vinho.
PROCEDIMENTO: Figura ?? - Recipiente utilizado na produo do Inicialmente, enche-se o recipiente com apares de madeira que possui nas vinagre pelo mtodo Alemo paredes laterais orifcios para ventilao. Um falso fundo permite recolher o vinho em processo de acetificao, que passa pela camada porosa formada pelas aparas e recolocado na parte superior tantas vezes quantas necessrias, para alcanar o grau actico desejado. O processo iniciado a partir da adio de vinho com aproximadamente 10% de vinagre no pasteurizado . Aquando da passagem da mistura pelas aparas, recebe o ar que se movimenta de baixo para cima devido ao aquecimento provocado pelo calor libertado no processo de acetificao. Quando a concentrao de lcool do vinho utilizado para acetificao alcanar prximo a 0,3% v/v, retira-se aproximadamente 4/5 do volume de vinagre, que substitudo por um mesmo volume de vinho reiniciando-se o processo. A retirada de vinagre feita, em mdia, a cada 10 dias.
Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. Okafor, N. (2007) Modern industrial microbiology and biotechnology. Science Publishers, Enfield.
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2. Processo Rpido ou Alemo
VANTAGENS: mais rpido que o mtodo Orleans; baixo custo; altas concentraes de cido actico; requisitos de espaos so menos.
DESVANTAGENS: custos das aparas, que tm de ser substitudo pelo menos uma vez por ano; tempo de incio longo; perda de substncias volteis por evaporao (aproximadamente 10%).
Este mecanismo de produo de vinagre bastante utilizado devido elevada qualidade sensorial do produto final.
Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. Sengun, I., Karabiyikli, S. (2011) Importance of acetic acid bacteria in food industry. Food Control, 22: 647-656.
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Processo inicia-se igualmente com um vinho previamente acetificado com, aproximadamente, 10% de vinagre no pasteurizado. Baseia-se na presena da bactrias acticas submersas no vinho para acetificar, saturado constantemente por finas partculas de ar. Neste processo as bactrias acticas encontram-se imersas no vinho, sem nenhum suporte de material poroso, mas contato direto com o oxignio do ar proveniente de intenso arejamento. O equipamento utilizado formado por um recipiente de grande capacidade, geralmente feito de ao inoxidvel, com uma turbina de ar no fundo e tubos por onde circula a gua para refrigerao que funciona automaticamente.
Figura ?? - Recipiente utilizado para produo do vinagre pelo mtodo Submerso.
Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. Okafor, N. (2007) Modern industrial microbiology and biotechnology. Science Publishers, Enfield. Tan, S. C.(2005) Vinegar Fermentation. Thesis Submitted to the Graduate Faculty of the Louisiana State University Agricultural and Mechanical College in Partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Science in The Department of Food Science. B.S., Mechanical Engineering, University of Louisiana at Lafayette
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PROCEDIMENTO: Ao entrar no fermentador, o ar dispersado de forma homognea por todo o vinho. Quando o vinho do fermentador alcanar aproximadamente 0,2% v/v de lcool, o que acontece em intervalos de 30 a 40 horas, retiram-se aproximadamente 40-45% do volume de vinagre. Este substitudo pelo mesmo volume de vinho a acetificar. O controlo da concentrao de etanol importante, porque no caso de depleo de etanol, as estirpes Acetobacter sofrem uma mudana no seu metabolismo e comeam a sobre-oxidar o cido actico a CO2 e gua. O etanol reprime a sobre-oxidao, reduzindo o risco durante a acidificao assim, mantido um nvel residual de etanol.
Figura ?? - Representao do processo submerso.
Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. Okafor, N. (2007) Modern industrial microbiology and biotechnology. Science Publishers, Enfield. Tan, S. C.(2005) Vinegar Fermentation. Thesis Submitted to the Graduate Faculty of the Louisiana State University Agricultural and Mechanical College in Partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Science in The Department of Food Science. B.S., Mechanical Engineering, University of Louisiana at Lafayette
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VANTAGENS: mais eficiente; atravs desse processo, possvel reduzir as perdas por evaporao para 3-5%, no havendo necessidade de material de suporte e, consequentemente, os problemas advindos da sua manuteno.
DESVANTAGENS: produto menos aromtico visto que o perodo de contato curto e as esterases no tm tempo para realizar as suas funes de forma adequada resultando num baixo teor de substncias volteis; vinagre produzido apresenta-se turvo, com qualidade inferior ao obtido pelo mtodo lento, devido ao revolvimento acentuado e persistente provocado pela quantidade de ar introduzido sob presso na acetificao.
Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. Sengun, I., Karabiyikli, S. (2011) Importance of acetic acid bacteria in food industry. Food Control, 22: 647-656.
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Produtividade mdia (g/L.h)
5,0 1,0 0,03
Processo
Submerso Rpido Lento
rea Ocupada (m2)

30,0 30,0 30,0
Vinagre produzido (L/dia)

30000 1000 50
Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. Tan, S. C.(2005) Vinegar Fermentation. Thesis Submitted to the Graduate Faculty of the Louisiana State University Agricultural and Mechanical College in Partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Science in The Department of Food Science. B.S., Mechanical Engineering, University of Louisiana at Lafayette
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Vinagre: processamento final do vinagre

Processo lento
Apenas uma filtrao necessria; A seguir ajusta-se o pH com gua potvel; Pasteuriza-se a 65C por 5 minutos; Embala-se a quente.
Processo rpido
Fornece o produto quase lmpido j que parte das substncias que poderiam turvar o vinagre retida no material suporte do gerador; A filtrao feita em filtro-prensa, seguindo-se a pasteurizao e acondicionamento.
Processo lento
Fornece vinagre bastante turvo por conter em suspenso as bactrias acticas e as substncias slidas originadas da matrias-primas; Necessita de tratamento com clarificador, que misturado com o vinagre bruto e deixado em repousa para sedimentao; Aps alguns dias o sobrenadante filtrado em filtro-prensa; De seguida faz-se uma diluio, pasteurizao e embala-se.
Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. Tan, S. C.(2005) Vinegar Fermentation. Thesis Submitted to the Graduate Faculty of the Louisiana State University Agricultural and Mechanical College in Partial fulfillment of the 24 requirements for the degree of Master of Science in The Department of Food Science. B.S., Mechanical Engineering, University of Louisiana at Lafayette

Muitos outros processos surgiram aps a observao de que o oxignio era o fator limitante do processo de acetificao: Processo por Gerador de Mergulho; Processo Mackin; Processo Bourgenois;
Processo Fardon;
Gerador por Sifonagem; Tambor Rotatrio; Acetificador por Injeo de Ar em Jatos; Fermentador em Torre.
Tan, S. C.(2005) Vinegar Fermentation. Thesis Submitted to the Graduate Faculty of the Louisiana State University Agricultural and Mechanical College in Partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Science in The Department of Food Science. B.S., Mechanical Engineering, University of Louisiana at Lafayette
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Vinagre: composio
A composio caracterstica de um vinagre depende basicamente da matria-prima que o originou.
cido actico
O cido actico o principal componente do vinagre, independentemente do substrato alcolico que o originou. A sua concentrao expressa em graus acticos (gramas de cido actico por 100 ml de vinagre).
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Vinagre: composio
cido actico lcool etlico (etanol) residual

No processo de produo de vinagre o objetivo principal alcanar o maior rendimento possvel na transformao de etanol em cido actico. Contudo, este substrato no deve esgotar visto que, as bactrias acticas, na ausncia de lcool etlico, so capazes de promover a degradao do cido actico produzido.
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Vinagre: composio
cido actico lcool etlico (etanol) residual Extrato seco

Em geral, o teor de extrato seco do vinagre composto por substncias no volteis presentes no produto (glicerina, substncias pcticas, substncias nitrogenadas). A determinao do extrato seco utilizada com o objetivo de evitar fraudes, j que teores muito baixos ou muito altos de extrato seco podem indicar adulteraes do produto.
(Produtos diludos com gua ou com solues de cido actico apresentam teores baixos de extrato seco, assim como teores muito altos de extrato seco podem indicar uma adio de substncias no volteis que aumentam o resduo seco.)
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Vinagre: composio
cido actico
lcool etlico (etanol) residual Extrato seco
Cinzas
A determinao do teor de cinzas permite determinar os minerais presente no produto. Um vinagre diludo e reconstitudo parcialmente com cido actico apresenta baixos valores de teor de cinzas, assim como valores muito altos podem indicar a adio de substncias no volteis.
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Tipos de vinagre
VINAGRE DE VINHO
Obtido a partir da converso actica do vinho. Os vinhos utilizados para acetificao so aqueles com baixo teor de etanol (79% v/v), ou aqueles em que a acidez voltil demasiado elevada. Caso se utilize vinhos com elevado teor de lcool estes precisam se ser diludos com gua visto que uma elevada concentrao de lcool ir inibir o desenvolvimento de AAB. O vinho deve ser isento de dixido de enxofre. A acidez do vinagre pode variar consoante o grau de lcool no vinho. Para evitar instabilidade devido s enzimas e microrganismos, o vinagre de vinho pasteurizado antes ou depois do engarrafamento.
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Tipos de vinagre
VINAGRE DE CIDRA
Produzido a partir de cidra que foi submetida bioconverso actica e amplamente usado como vinagre de mesa. de cor amarelada e pode ser escurecido com caramelo.
A sua acidez no muito elevada e o seu sabor adstringente recorda o fruto de origem.
VINAGRE DE FRUTAS
Sumos fermentados a partir de uma variedade de outras frutas (pssegos, bagas) so tambm utilizados para a produo de vinagre. Como estes lquidos alcolicos no so destilados, estes mantm os sabores e aromas das matrias-primas.
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Tipos de vinagre
VINAGRE DE MEL
VINAGRE DE LCOOL
Produzido a partir do etanol diludo purificado. Vinagre muito cido mas no aromtico. Contm uma pequena quantidade de aminocidos (produtos de autlise das AAB). Este vinagre o mais difundido no mundo.
VINAGRE DE ARROZ
Vinagre japons obtido a partir da fermentao do arroz.
Vinagre com uma acidez relativamente baixa e alto teor de cido aminado.
de cor clara e sabor limpo, delicado. Muito apreciado na culinria oriental porque no altera significativamente o sabor do alimento. Os vinagres chineses so ricos em aminocidos, cido actico, cido piroglutmico e cido lctico.
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Tipos de vinagre
VINAGRE DE MALTE
Produzido a partir de cevada maltada com ou sem a adio de outros cereais. A fabricao deste tipo de vinagre envolve triturao, fermentao e acetificao. Durante a triturao, o malte de cevada, por vezes misturado com outros cereais tais como o milho e o arroz, modo e misturado com gua quente (amido convertido por -amilase em maltose, dextrose e dextrina). O licor doce drenado atravs de um fundo falso perfurado do casco e recolhido em recipientes, onde fermentado pela adio de leveduras que convertem os acares fermentveis em etanol e dixido de carbono. Quando a fermentao est completa, o licor alcolico separado das leveduras e acetificado por inoculao com culturas de Acetobacter. Na presena de oxignio atmosfrico, o lcool resultante oxidado em cido actico. Vinagre de malte contem 4% w/ v de cido actico.
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Tipos de vinagre
VINAGRE BALSMICO
A matria-prima mosto de uvas, de preferncia Trebbiano. Quando a fermentao alcolica comea (24h aps a prensagem), o mosto fervido suavemente at ser reduzido a cerca de metade ou um tero do seu volume inicial. O resultado um licor com um elevado teor de acar (cerca de 30%),no qual comea, muito lentamente, a fermentao alcolica e actica em barris especiais com diminuio de volumes de 60-20L dispostos sucessivamente, tambm conhecido como bateria de barris (entre 5-12 barris de madeiras diferentes). Cada madeira ir influenciar o vinagre balsmico de uma forma nica (castanheiro rico em tanino e d boa cor; cerejeira doce; madeira de carvalho devido sua densidade ajuda a concentrar o vinagre).
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Tipos de vinagre
VINAGRE BALSMICO
De acordo com o mtodo tradicional, parte do contedo do tambor mais pequeno retirado anualmente para consumo e substituda com igual volume do barril mais prximo da bateria. Este e por sua vez alimentada pelo barril vizinho e assim sucessivamente. Finalmente, o maior barril est coberto com mosto fervido da estao. O processo da produo de vinagre balsmico leva em mdia 20 anos. O rendimento muito baixo (1 litro de vinagre por 100 kg de mosto fresco) no entanto, o produto final de qualidade excecionalmente alta, de cor castanha escura, doce e azedo ao gosto e com um cheiro aromtico caracterstico agradvel. A tolerncia de acar uma caracterstica importante de AAB para a produo de vinagre balsmico tradicional porque feito a partir de mosto concentrado com uma alta concentrao de acar. No vinagre balsmico tradicional a acidez varia entre 6% e 18% w/v de cido actico.
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Vinagre
A produo de um bom vinagre depende de uma srie de fatores como:
linhagem e a seleo do microrganismo; matria-prima;
concentrao do lcool;
temperatura de fermentao; quantidade de O2;
temperatura de fermentao (20 a 30C);

pH timo na faixa de 5 e 6; maturao e conservao;
clarificao, filtrao e pasteurizao;

materiais de construo de tubulaes, recipientes e depsitos.
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Perspetivas Futuras
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Bibliografia
[1] Sengun, I., Karabiyikli, S. (2011) Importance of acetic acid bacteria in food industry. Food Control, 22: 647-656. [2] Raspor, P., Goranovic, D. (2008) Biotechnological Applications of Acetic Acid Bacteria. Critical Reviews in Biotechnology, 28:101124. [3] Okafor, N. (2007) Modern industrial microbiology and biotechnology. Science Publishers, Enfield.
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UTILIZAO DE BACTRIAS

PRODUTORAS DE CIDO ACTICO

[1] [2] [3]

A identificao fenotpica difcil devido elevada frequncia de mutaes

Tabela 1 Espcies dos doze gneros de bactrias cido acticas

Utilizao na indstria alimentar

O processo bioqumico simples:

As principais propriedades de uma estirpe na produo de vinagre so:

Vinagre: mtodos de fabricao

1. Processo Lento ou Orleans 2. Processo Rpido ou Alemo

Vinagre: mtodos de fabricao

Vinagre: mtodos de fabricao

Vinagre: mtodos de fabricao

Vinagre: mtodos de fabricao

Vinagre: mtodos de fabricao

Figura ?? - Recipiente utilizado para produo do vinagre pelo mtodo Submerso.

Vinagre: mtodos de fabricao

Figura ?? - Representao do processo submerso.

Vinagre: mtodos de fabricao

Vinagre: mtodos de fabricao

rea Ocupada (m2)

Vinagre produzido (L/dia)

Vinagre: processamento final do vinagre

Vinagre: mtodos de fabricao

cido actico lcool etlico (etanol) residual

cido actico lcool etlico (etanol) residual Extrato seco

Vinagre japons obtido a partir da fermentao do arroz.

linhagem e a seleo do microrganismo; matria-prima;

temperatura de fermentao (20 a 30C);

clarificao, filtrao e pasteurizao;

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