Gentica Humana

REPLICAO DO DNA
Prof. Msc. Ronaldo Celerino Centro Acadmico de Vitria Universidade Federal de Pernambuco

Implicaes do Dupla Hlice na Replicao do DNA

Complementaridade das fitas replicao cada filamento pode servir como molde para sntese de um nova cadeia; Especificidade do emparelhamento de bases apenas uma sequncia pode ser especificada por cada molde;
Replicao semiconservativa cada fita original de nucleotdeo permanece intacta (conservada);

Modelos de Replicao
Replicao Conservativa
Molcula de DNA inteira serve como molde para uma molcula totalmente nova; Molcula original completamente conservada durante a replicao;

Modelos de Replicao
Replicao Dispersiva Quebra em fragmentos modelos sntese de novos fragmentos de DNA; Remontagem de duas molculas de DNA completas; DNA resultante intercalamento de DNA velho e novo; Nenhuma molcula original conservada;

Modelos de Replicao

Replicao Semiconservativa Duas fitas de nucleotdeos se afastam e cada uma serve como molde para uma nova molcula de DNA

Modelos de Replicao

Experimentos de Meselson e Stahl

Qual dos trs modelos? Istopos 14N e 15N; Cultura de E. coli meio contendo
15N;

Muitas geraes - 15N incorporado nas purinas e pirimidinas; Amostra cultivo em meio contendo
14N

Distino centrifugao em alta velocidade formao de gradiente de densidade;

Experimentos de Meselson e Stahl

Replicao em Tetha

Replicao bidirecional

Replicao do Ciclo Rolante

Replicao Linear
Clulas eucariticas replicao; - muitas molculas de DNA muitas origens de

Velocidade - 500 a 5000 nucleotdeos por minuto para cada forquilha; Diversas bolhas de replicao fuso formao de suas molculas de DNA idnticas;

Replicao: Procariotos x Eucariotos

Requerimentos da Replicao

Um molde de DNA de fita simples;

Substratos para montagem da nova cadeia de nucleotdeo; Enzimas e protenas que lem o molde e reuni os substratos na molcula de DNA;

Sntese de uma Nova Fita de DNA

Direo da Replicao
DNA polimerase adiciona nucleotdeos apenas ao terminal 3 da cadeia crescente; Nova cadeia de DNA sempre cresce na mesma direo (5 3); Uma fita fica exposta na direo 5 3 e a outra na 3 5;

Direo da Replicao
Fita exposta na direo 3 5 nova fita sintetizada continuamente na direo 5 3 fita leading; Fita exposta na direo 5 3 sntese de pequenos fragmentos (fragmentos de Okazaki) replicao descontnua fita lagging; Fragmentos de Okazaki 100 a 200 nucleotdeos Replicao bidirecional duas forquilhas;

Direo da Replicao

Requerimentos da Replicao

Etapas da Replicao

Iniciao Deselicoidizao Extenso Trmino

Replicao do DNA Bacteriano

Iniciao Cromossomo circular nica origem de replicao (oriC); Ligao de protenas iniciadoras pequeno corte abertura ligao da helicase;

Replicao do DNA Bacteriano

Deselicoidizao: DNA helicase quebra as pontes de hidrognio;

Helicase liga-se a fita lagging em cada forquilha e se move na direo 53;

Protenas de ligao a fita simples (SSB) estabilidade da fita simples de DNA; DNA girase (topoisomerase) reduz a toro da cadeia reduzindo a super-helicoidizao

Replicao do DNA Bacteriano

Replicao do DNA Bacteriano

Primers (iniciadores):

Enzima Primase sntese de trechos de nucleotdeos de RNA (10 12 nucleotdeos) contendo 3-OH ligao da DNA polimerase;
Primers de RNA devem ser removidas e substitudos por DNA; Primase forma um complexo com a helicase;

Replicao do DNA Bacteriano

Extenso
Abertura adio de primer extenso da cadeia polinucleotdica pela DNA polimerase; Diversas DNA polimerases;

Caractersticas das Enzimas DNA Polimerase

Sintetiza qualquer sequncia especificada pela cadeia molde; Sntese na direo 53 adio de nucleotdeos no grupo 3OH; Utiliza dNTPs para sintetizar novos DNA; Requer primer para iniciar a sntese;

Catalisa a formao de uma ligao fosfodister entre o grupo fosfato e o 3-OH;

Fitas sintetizadas complementares e antiparaleas; Esto associadas com outras protenas;

DNA Ligase
DNA ligase reparao dos cortes na cadeia ; DNA ligase catalisa a formao da ligao fosfodister sem adicionar outros nucleotdeos na cadeia;

Enzimas Atuantes na Replicao

COMPONENTE
Protena Iniciadora DNA helicase PLU DNA girase

FUNO
Ligam-se a origem e separam os filamentos do DNA para iniciar a replicao Desenrola o DNA na forquilha de replicao Ligam-se ao DNA unifilamentar e impede a formao de estruturas secundrias Move-se frente da forquilha de replicao, liberando a toro que se acumula devido a deselicoidizao na forquilha de replicao Sintetiza um primer curto de RNA par dar um grupo 3-OH para ligao de nucleotdeos de DNA Alonga um novo filamento de nucleotdeos a partir do grupo 3-OH dado pelo primer Remove os primers de RNA e substitui por DNA Une os fragmentos de Okazaki fechando os cortes no aucarfosfato do DNA recm sintetizado

DNA primase DNA polimerase III DNA polimerase I DNA ligase

Forquilha de Replicao
Duas unidades de DNA polimerase III - presentes, uma para cada fita;

O molde da cadeia lagging forma um loop DNA polimerase III move-se ao longo da fita no sentido 53

Forquilha de Replicao

Requesitos: Helicase para abertura do DNA; Protenas de ligao a fita simples manuteno da separao; Girase remoo das tores a frente; Primase sntese de primers com 3-OH; DNA polimerase Sntese das fitas leading e lagging;

Terminao

Algumas molculas encontro de duas forquilhas de replicao;

Sequncias especficas bloqueiam replicao;

Protena de terminao (Tus em E. coli) liga-se a sequncia bloqueia a helicase;

Fidelidade da Replicao do DNA

Taxa de erro celular 1 por bilho de nucleotdeo; Erros pela DNA polimerase 1 por 100 mil nucleotdeos proofreading (reviso) atividade exonuclease 3-5 - correo do erro; Reparo de mau pareamento (mismatch repar) deformidades na estrutura secundria do DNA reconhecimento enzimtico exciso do par de nucleotdeos; Correo de erros depois da replicao Habilidade de distino da fita velha da nova - metilao (CH3) ;

Fidelidade da Replicao do DNA

Replicao em Eucariotos
Mltiplas origens cromossomos;

de

replicao

em

seus

Mais tipos de DNA polimerase, com diferente funes; Montagem dos nucleossomos imediatamente aps replicao:
nucleossomos so quebrados no decorrer da replicao e depois remontados a partir de uma mistura aleatria de histonas novas e antigas

Origens em Eucariticos
DNA eucaritico contm muitas origens de replicao;

Em cada origem um complexo de multiproteinas de reconhecimento de origem se liga e inicia o desenrolamento do DNA;

DNA Polimerase dos Eucariotos

Existem ao menos 13 diferentes DNA polimerases em clulas eucariticas.

Replicao das Pontas Cromossmicas

Telmeros - Fita lagging retirada de primers gap ausncia de 3-OH encurtamento;

Presena de muitas sequncias repetidas;

cpias

de

pequenas

Telomerase enzima que adiciona repeties e permite a extenso;

Replicao das Pontas Cromossmicas

Replicao das Pontas Cromossmicas

Regras Bsica da Replicao

Sempre semiconservativa; Incio sequncia chamada origem; Sntese de DNA iniciada por pequenos segmentos de RNA primers;

Extenso no sentido 53
O novo DNA sintetizado de dNTPs; na polimerizao do DNA, dois fosfatos so clivados dos dNTPs e o nucleotdeo resultante adicionado ao grupo 3-OH da cadeia crescente; Continua na fita leading e descontinua na fita lagging; Novos nucleotdeos so complementares e antiparalelos ao seu molde; Ocorre em taxas muito elevadas e com muita preciso;

Obrigado!!!
ronaldocelerino@yahoo.com.br Material didtico: http://ronaldocelerinogenetica.blogspot.com