Reemplazar el uso de petrleo Reducir la generacin de CO2

Tecnologa simple y eficiente Extraer y fermentar los azucares presentes en lignocelulosa.

El futuro de la industria del bioetanol depender de mltiples biotecnologas entre otras: Alto rendimiento de maz (OGM). Almidn: recuperacin y estructura.

Diseo y produccin de enzimas amilolticas.

Microorganismos modificados para una fermentacin eficiente. Recuperacin de etanol a travs de bioprocesos de alta eficiencia.

Fuentes alternas de azcares fermentables: celulosa y hemicelulosas.

Desarrollo de nuevos biocatalizadores etanolognicos

HEXOSAS Embden-Meyerhof-Parnas + Entner-Doudoroff PENTOSAS Va de las Pentosas

PDH (0.4 mM)

TCA
LDH (7 mM)

PIRUVATO Zymomonas mobilis

PFL (2 mM)

Lactato Acetyl-CoA

Piruvato Decarboxilasa (0.4mM) (PDC) Acetaldehdo +CO2 Alcohol Deshidrogenasa II (ADHII)

Formato

Acetato

Etanol

CO2

H2

Etanol

Principal componente estructural de los vegetales

Caractersticas del sustrato

La celulosa es un polisacrido formado por unidades de glucosa unidas mediante enlaces -1,4 glucosdicos.

La configuracin le permite a la celulosa formar cadenas largas, lineales y paralelas, unidas entre s formando una estructura cristalina y organizada.

 La mayor parte de la fase amorfa de celulosa corresponde a las cadenas que se encuentran en la superficie de la estructura mientras que los componentes cristalinos ocupan el ncleo

CELULASAS

Complejo enzimtico que hidroliza los enlaces b- glucosdicos en la celulosa. Formado por: o endo--1,4-glucanasa (EC 3.2.1.4) (Cx) o exo--1,4-glucanasa (celobiohidrolasa EC 3.2.1.19) (C1) o -glucosidasa (celobiasa EC 3.4.1.21) (Cb)

MECANISMO ENZIMTICO

1. La endo -1,4-glucanasa acta al azar sobre los enlaces -1,4 glucosdicos de la celulosa de las zonas amorfas y la conviente en oligosacridos.

endo -1,4glucanasa

MECANISMO ENZIMTICO

2. La exo -1,4-glucanasa, o celobiohidrolasa, es una enzima que corta la cadena 1,4 -Dglucano a partir del extremo no reductor de la molcula de celulosa y de las celodextrinas, lo que provoca la remocin de unidades de celobiosa (2 molculas de glucosa)

CBH de T. reesei

MECANISMO ENZIMTICO

3. La -glucosidasa o celobiasa rompe el enlace b de la molcula de celobiosa, para obtener molculas de glucosa

celobiasa

Sinergsticamente despus de la endo- acta la exo -1,4-glucanasa que corta la cadena a partir del extremo no reductor de la molcula de celulosa, lo que provoca la remocin de unidades de celobiosa. Ambas enzimas Endoglucanasa y Exoglucanasa son inhibidas por la celobiosa, lo que disminuye la eficiencia de la hidrlisis. Una vez degradadas las zonas amorfas de la celulosa, la regin cristalina comienza a ser hidrolizada como resultado de la accin sinergstica de la endoglucanasa y la exoglucanasa. La degradacin de la celobiosa a glucosa mediante la accin de la -1,4-glucosidasa es requrida para desinhibir a las otras enzimas

La hiptesis C1-Cx se propuso para explicar la accin de las celulasas de hongos en la hidrlisis de la celulosa, en ella se denota a los componentes de la celulasa como C1 (a la CBH) y como Cx (a la EG), tambin se considera al componente G (glucosidasa), el cual completa la hidrlisis de las cadenas cortas de oligosacridos a celobiosa y glucosa.

EXOCELULASA: Acta en el extremo no reductor, obteniendo glucosas de la cadena de celulosa.

exocelulasa

(1) Transferencia de la mayor parte de las enzimas en fase acuosa a la superficie de las partculas de celulosa. (2) Adsorcin de las enzimas y la formacin de complejos enzima-sustrato (ES). (3) Hidrlisis . (4) Transferencia de la celulodextrinas, la glucosa y la celobiosa, desde la superficie de las partculas de celulosa a la fase acuosa. (5) Hidrlisis de celulodextrinas y celobiosa en glucosa en la fase acuosa.

La adsorcin de las enzimas y la formacin de complejos enzima-sustrato se consideran los pasos crticos en la hidrlisis enzimtica de celulosa. Una vez degradada las zonas amorfas de la celulosa, tiene lugar la hidrlisis de la regin cristalina como resultado de la accin sinergstica de la endoglucanasa y la exoglucanasa.

Mtodos de anlisis de actividad enzimtica

Papel filtro Cantidad de azcar que se forma en 1 hora cuando 50 mg de papel filtro Whatman #1 se incuba con 0.5 mL de enzima a pH 4.8 (buffer de citratos) en un vol. total de 1.5 mL Determinacin viscosimtrica Soluciones de CMC y Hidroxietilcelulosa (generan alta viscosidad), la adicin de celulasas disminuye la viscosidad del medio (actividad con HEC normalizadas) Actividad sobre celobiosa; Medicin de poder reductor. Avicel (micro-partculas cristalinas de celulosa), posee un menor grado de polimerizacin y una mayor nmero de extremos libres en comparacin con el algodn.

Microorganismos productores de celulasas

Las enzimas celulasas son producidas por una variedad de bacterias y hongos.
Sin embargo, slo algunos de ellos producen celulasa extracelular capaz de hidrolizar la celulosa.

Fuentes de celulasas
Trichoderma viride Fungales Trichoderma reesei Penicillum koningii Cellulomonas sp Celvibrio sp. Bacterias Microbispora bispora Therninibispora sp

Aerobios mesfilos fungales

Trichoderma viride Trichoderma reesei Penicillium pinophilum Sporotrichum pulverulentum Fusarium solani Talaromyces emersonii Trichoderma koningii

Trichoderma viride

Aparecen en cualquier tipo de suelo, produciendo colonias blancas, amarilla o ms tpicamente verdes cuando se cultivan.

Actividad especfica de T.viride con diferentes sustratos

Actividad especfica (mg/mL*min)
Enzima CMC Avicel

Endoglucanasa I
Endoglucanasa II Endoglucanasa III Exoglucanasa

17
2.5 1.2 1.0

19.4
0.6 2.3 1.7

Propiedades fisicoqumicas de las enzimas

Enzima T. optima (C) 53-58 58 5.0-55 70 pH ptimo 4.5 4.7-5.3 3.5-3.9 4.9-5.2 Carbohidratos (%) 20.9 2.3 10.0 5.8 Peso molecular (Da) 51,000 59,000 41,000 62,000

Endoglucanasa I Endoglucanasa II Endoglucanasa III Exoglucanasa

Mtodo Koji

Otros Mohos y Bacterias productoras

Sporotrichum thermophile Neocallimastix frontalis Piromonas communis Cellulomonas sp Acetivibrio cellulolyticus Clostridium thermocellum

 Las celulasas brindan una forma efectiva de degradar tejidos, aunque es mejor si se usa en combinacin con otras enzimas hidrolticas. Cules?

Preparados enzimticos comerciales:

Crystalzyme PML-MX de Valley Research Inc. Biocellulase A de Quest Intl. Celluclast 1.5 L de Novo Nordisk. Econase Ce-S de Enzyme Development Co. Cellulase AP30K de Amano Enzyme. Zymafilt L-300 y Macerex de Enmex S.A. de C.V. Novozym 342 de Novo Industries. Cellubrix L de Novo Nordisk. Cellulase de Bio-Cat Inc.

Genencor launches first ever commercial enzyme product for cellulose ethanol Genencor, a division of Danisco A/S, has announced a biomass enzyme developed specifically for second generation biorefineries called Accellerase 1000. The product is a mixture of enzymes that reduces complex lignocellulosic biomass into fermentable sugars -- a step in the production of cellulosic ethanol. Genencor has been developing its biomass enzymes for well over 10 years. The effort was partially supported by contracts with the US Department of Energys (DOE) National Renewable Energy Laboratory (NREL). Commercial interest in second generation biorefineries, driven in part by government policies to reduce the emission of greenhouse gases and increase energy independence, has accelerated over the past two years in the USA and around the world. The biofuels industry is at an inflection point with the development of cellulosic ethanol plants at the pilot and demonstration scale, Every biorefinery developer needs to know how enzymes will work in their system. This product aims to address that need and to start a dialogue with potential partners about customized solutions and supply at the industrial scale.

Cellulase enzyme gets GRAS for beverages 05-Oct-2009 Related topics: Industry The FDA has raised no objections to Florida-based Dyadic Internationals GRAS application for it cellulase enzyme derived from a GM strain of its patented and proprietary C1 organism. A new liquid enzyme product produced from its C1 technology platform called CeluStar CL will be immediately offered for sale for use in the production of wine, beer and fruit juices, said the company. Receiving this positive acknowledgement from the FDA regarding our GRAS notification culminates a multi-year product development process and affirms Dyadic's conclusion that its cellulase enzyme is safe for use by our customers. Dyadic intends to continue to utilize its C1 technology platform for the development of additional specialty enzyme products, said Richard Jundzil, Dyadic's director of development & quality. The GRAS notice is number: GRN 000292.

Extraccin de jugo
En la extraccin de jugo con preparados enzimticos se incrementa el rendimiento y la calidad del jugo, as como la diversidad de componentes.
El pretratamiento de la pulpa con enzimas provoca un aumento en el contenido de los slidos solubles comparado con una muestra testigo (sin enzima)

MACERACION ENZIMATICA

La ventaja de la maceracin enzimtica radica en que las enzimas rompan la pared de las clulas, provocando as un ablandamiento del tejido y facilitando la extraccin.
Se facilita por tanto la extraccin del jugo durante el procesamiento industrial, adems de que permite mejorar la palatabilidad del jugo.

Extraccin de leche de coco

La degradacin enzimtica con el preparado Trizyme P50 de Triton Chemicals ha mostrado una extraccin total de la leche de coco.

Los azcares, principalmente la glucosa que es producto de la degradacin de los polisacridos, permiti obtener una leche de coco con un mejor sabor, debido a que le imparten mayor dulzura a la leche.

Extraccin de aceites
El rendimiento del aceite de aguacate aumenta hasta un 30 % despus de someter la pulpa de aguacate a un proceso de extraccin acuosa enzimtica con los preparados comerciales Ultra-SP-L y Olivex.
En las soya tambin se ve un aumento de la cantidad de aceite extrado cuando se trata enzimticamente pasando de un 82.2% a un 99% de extraccin.

COST ANALYSIS OF ENZYME PROGRAME ASSUMPTIONS

Genencor CytolaseTM104@ $22.00/Kg Extra Virgin Olive Oil value is about $5.30/L Virgin Olive Oil value is about $4.00/L Olive Oil yield without enzymes is typically 125 L/1000 Kg of olives.
% Oil Yield Increase Requiered to Justify Enzyme Use Dosaje Enzyme % 0.1 0.2 0.5 Aprox. Enzyme Cost/1000 Kg Olives $22 $44 $110 Extra Virgin Oil 3.3 6.7 16.7 Virgin Oil 4.4 8.9 22.2

POTENCIAL EN BIOCOMBUSTIBLES

Desarrollo de tecnologa para la obtencin de biocombustibles , bioetanol, a partir de residuos celulsicos (bagazo, paja, papel, etc)

Iogen, an enzymes producer that operates the world's only cellulose ethanol facility. The plant, in Ontario, has the capacity to make 3 million to 4 million L of ethanol per year by breaking down and fermenting about 40 tons per day of wheat, oat, and barley straw with steam, enzymes, and yeast. In 2004, Iogen became the first company to produce large quantities of cellulosic ethanol, about 1 million gal per year from wheat straw, at a demonstration plant in Ottawa. Iogen has plans to begin construction in 2007, either in the U.S. or in Canada, on a commercial-scale plant that will produce 40 million gal per year of cellulosic ethanol. Iogen also has partnered with Volkswagen and Royal Dutch/Shell to explore cellulosic ethanol production in Germany. Bush's latest speech promoting the inclusion of $150 million in next year's federal budget for research into new ways of making ethanol. Extra development work has brought about a significant reduction in the enzyme cost of ethanol production using corn stover, in Novozymes' case from more than $5.00 per gal to between 10 and 18 cents per gal.

The new energy law includes a federal renewable fuels standard that requires 7.5 billion gal per year of ethanol be blended with gasoline by 2012. Currently, about 12 billion gal of ethanol is produced worldwide and about 4 billion gal in the U.S., nearly all of it made from cornstarch. Overall, the global bioethanol market is expected to grow to nearly 30 billion gal annually by 2020, according to the Renewable Fuels Association.

Composition and proporties of marigold petal carotenoids

Carotenoid

% 52.1 31.2 6.3 89.6 10.4

Rf-valuea 0.46 0.45 0.10 ------

Visible absorption in CS2, nm 474 474 475 ----505 505 506

Lutein dipalmitate Lutein dimyristate Lutein monoesters

Total
Unknowns (by difference)

Production of colorants from Marigold Flowers

Cultivation of marigold plants Harvesting of Marigold flowers Silage Pressing drying Cell dryer Dry flowers Milling Marigold meal Pelleting Hexane extraction Oleoresin Hidrolysis Stabilization & Poultry Products Purification Stabilization & Human Consumption Products

Overall extraction yield 95% Enzyme requeriments as a function of flower freshness (higher dosis to avoid silage)

Optimization of type, concentration, addition mode and reaction

conditions (temperature) of the enzyme system. Preincubation Relation Hexane/mass of flowers Control of water concentration Succesive extractions Type of agitation Higher concentration of Xantophylls in oleoresin Higher yields and less extraction steps Avoid contamination during silage