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Maduracin y Activacin de LT
CD4+
1.
2.
3.
TCR2(, ) MHC TCR1(, ) CD8+ MADURACION La enorme diversidad antignica potencial se reduce a un 2%. Durante la maduracin intratmica de los timocitos: slo llegan a madurar aquellas clulas restringidas a reconocer lo no-propio en el contexto del haplotipo MHC propio (autorrestriccin y autotolerancia). Las fases finales de la maduracin ocurren por dos rutas de desarrollo diferentes que generan dos subpoblaciones: LTCD4+(restringidos por MHC-II) y LTCD8+ (restringidos por MHC-I). TCR
Activacin de LT
La activacin de LT maduras perifricas se inicia con la interaccin entre el TCR y un pptido antignico enclavado en el MHC. La baja afinidad (10-5M) de esta interaccin ternaria se ve potenciada por la presencia de correceptores y otras molculas de membrana, que funcionan para fortalecer la unin TCRpptido-MHC, y para transducir la seal activadora al interior de la clula T. Desencadena la proliferacin clonal y diferenciacin en 2 subpoblaciones: T efectoras y otra de T de memoria.
Fases y elementos de la RI
En funcin del tiempo y [Ag]...
Tipos de respuesta
A nivel celular...
T
APC
Ag derivados APCa
Virgen
T
Th (CD4+)
Th1 Fagocitosis
Efector
Th2 RI humoral
Tc (CD8+) Citotoxicidad
Memoria
Desarrollo de LT
Los LT se desarrollan a partir de precursores hematopoyticos (clulas madre) y maduran en el timo Linfocito T CD4+ Linfocito T CD8+
Los timocitos DN se localizan en la zona subcapsular de la corteza. Los DP se localizan en la corteza. Los timocitos maduros CD4+ y CD8+ se ubican en la mdula. En la corteza, las clulas epiteliales corticales establecen contactos por sus largos procesos de membrana con los timocitos
El 95% de los timocitos que alcanzan el estado DP (doble positivo) son eliminados porque su receptor de antgeno (TCR) reacciona con demasiada intensidad a Ags propios (son demasiado autoreactivos) o no es capaz de reconocer a las CPA (seran intiles ya que no podrn ver ningn tipo de Ag ms adelante).
Los que superan este proceso se convierten en positivos simples (expresan CD4 o CD8 en la superficie) y son capaces de reconocer molculas especficas (MHC) en las CPA, que ms adelante les servirn para activarse en respuesta a Ags.
Linfocito T CD4+
Linfocito T CD8+
Los Ags son estructuras tridimensionales que encajan con alta afinidad en el receptor de la clula T (TCR) cuando son presentados por el MHC. Generalmente son fragmentos cortos de Pr- que pueden proceder de componentes de nuestro organismo o externos, que pueden ser patgenos o sustancias inocuas. Estas pr- han sido procesadas dentro de las CPA y sus fragmentos se unen al MHC, que los transporta a la superficie celular donde son expuestos. Otros tipos de molcula (no slo pptidos) tambin pueden funcionar como antgeno.
Clula presentadora
MHC
antgeno
TcR
Linfocito T
http://stratikos.googlepages.com/mhc
La mayora de los linfocitos producidos en el organismo se encuentran en un estado de reposo y tienen una vida corta. Para poder activarse y responder a Ags, necesitan de CPA
Linfocito
www2.cnrs.fr/sites/en/image/810color.jpg www.immunity.com/.../immuni/immuni.24.5.gif
Ambos tipos de clulas expresan molculas de superficie que al contactar con sus ligandos en la clula vecina emiten seales intracelulares
Linfocito
Adems, durante el contacto las clulas secretan pequeas molculas solubles, (citoquinas, interleuquinas), que tambin actan sobre receptores que trasducen seales
TcR
Sinapsis inmunolgica
LT
www.pasteur.fr/icono/RAR/RAR2004/photo2_Ubic.jpg
TCR
Molculas de adhesin
TCR
Diferentes combinaciones de seales intracelulares resultantes de la activacin del TCR: molculas coestimuladoras y citoquinas regulan a su vez combinaciones de factores de transcripcin que promueven la diferenciacin de los linfocitos hacia distintas subpoblaciones con funciones especficas.
citoquina
citoquina
www.nature.com/.../fig_tab/nature02762_F4.html
citoquina
citoquina
citoquina
CD4 o CD8
Clula T
TcR pptido
APC
MHC
CD28
CD80
citoquina
www.nature.com/.../fig_tab/nature02762_F4.html
citoquina
citoquina
CD4 o CD8
Clula T
TcR pptido
APC
MHC
CD28
CD80
citoquina
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citoquina
citoquina
CD4 o CD8
Clula T
TcR pptido
APC
MHC
CD28
CD80
citoquina
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citoquina
citoquina
CD4 o CD8
Clula T
TcR pptido
APC
MHC
CD28
CD80
citoquina
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citoquina
citoquina
CD4 o CD8
Clula T
TcR pptido
APC
MHC
CD28
CD80
citoquina
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Diferenciacin de LT hacia T cooperadores (Th) o reguladores/supresores (Treg) Linfocito T Th1 Linfocito T Clula presentadora Linfocito T CD4+ nave (APC) Th17
(AUTOINMUNIDAD)
Linfocito T Th2
citoquinas
Linfocito T Treg
Linfocito T anrgico
Diferenciacin de linfocitos T hacia T cooperadores (Th) o reguladores/supresores (Treg) IFN, TNF IL-2 (IgG1) Linfocito T Clula presentadora IL-17 CD4+ nave (APC)
citoquinas
Las CPA determinan la diferenciacin de los L hacia distintas subpoblaciones en funcin del entorno que las rodea (lesiones o traumatismos en tejidos, presencia de agentes infecciosos, contexto inflamatorio)
Seales de peligro (lesiones tisulares, traumatismos) Productos microbianos Citoquinas (p.ej. durante un proceso inflamatorio) Interaccin con linfocitos activados y sus citoquinas Maduracin (~ 6000 genes) Presentacin de pptido-MHC Migracin Expresin de molculas coestimuladoras
Clula dendrtica
citoquina
citoquina
CD4 o CD8
Clula T
TcR pptido
APC
MHC
CD28
CD80
citoquina
www.nature.com/.../fig_tab/nature02762_F4.html
La porcin carboxiterminal es la que tiene actividad de quinasa. La tirosina que est en la posicin 394 (Tyr de
regulacin +) es la tirosina que se fosforila al activarse el LT, En los LT en reposo la Tyr que est en posicin 505 (Tyr de regulacin -) est fosforilada (Tyr-P), y se desfosforila cuando las clulas se activan. En el primer tercio se encuentra una cistena que ser la encargada de unirse por puente disulfuro con CD4 (o en el caso de TC, con CD8). Tambin se asocia fsicamente con las cadenas x y e del CD3.
4. Fosfatasa CD45 (=LCA=T200) El CD45 es en realidad una familia de fosfatasas especficas de tirosina, se expresa en todas las clulas del linaje hematopoytico excepto en los eritrocitos. Existen varias isoformas, de entre 180200 kDa: - CD45RA se expresa en T vrgenes - CD45R0 en T cebados. Tiene un dominio extracelular, que est glucosilado; se une a la CD22. Su porcin citoplsmica es larga, y cuenta con dos dominios dotados de actividad fosfatasa de tirosinas (PTP). Parece ser que una de sus funciones es desfosforilar la Tyr-P situada cerca del extremo carboxi-terminal de las proten-quinasas (PTK) p56lck y p59fyn
La activacin de las dos PTK (p56lck y de p59fyn) por autofosforilacin provoca que a su vez stas fosforilen las cadenas del complejo CD3, reconociendo las secuencias ARAM en x y en e . A las colas fosforiladas de CD3 y CD4 se une ahora la ZAP-70, de modo que sta adquiere a su vez su actividad de protenquinasa, con lo que puede fosforilar a cadenas del CD3 y a otras pr-. La ZAP-70 activa y la Fyn activa, fosforilan a la fosfolipasa Cg 1 (PLCg 1), que originalmente es una pr- citoplsmica; al fosforilarse la PLCg1 se activa y emigra al lado citoplsmico de la membrana, reconociendo otras pr- que tienen tirosinas fosforiladas. Al hacer esto, se facilita que la PLCg 1 entre en contacto con su sustrato: el fosfatidilinositol-bifosfato (PIP2). Entonces, la PLCg 1 hidroliza a este PIP2, generando inositol-trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG), cada uno de los cuales suponen el arranque de sendas rutas dentro de esta compleja cascada activadora:
La seal coestimulatoria
Adems de las seales suministradas a partir del contacto entre el complejo TCR-CD3-pptido-MHC, la activacin del LTh requiere una seal adicional, coestimulatoria, que puede provenir de: la citoquina IL-1, suministrada por la CPA, la citoquina IL-6, de la CPA, La seal + potente es la que supone el contacto entre la molcula B7 (=CD80) de la CPA y la CD28 o la CTLA-4 del LTh.
B7 (=CD80) consta de dos cadenas idnticas con dos dominios de tipo Ig. Se expresa exclusivamente en CPA capaces de estimular a LT. Se puede presentar en dos versiones estructuralmente parecidas, denominadas B7.1 y B7.2. La CD28 es una glucoprotena homodimrica, cuyo monmero pesa 44 kDa, presente en LTh en reposo. Cada cadena presenta un dominio de tipo V-Ig, y est muy glucosilada. Tiene afinidad baja hacia la B7 La CTLA-4 est codificada por un gen cercano al de la CD28, presentando gran homologa. Pero la CTLA-4 slo se expresa en LTh activados, siendo su afinidad muy alta hacia la molcula B7
Activacin gnica
1. Genes de expresin inmediata (una media hora).
2. Genes de expresin temprana (1 a 2 horas): son esencialmente los que codifican las citoquinas IL-2 (as como el gen de su receptor IL-2R), IL-3, IL-6 e interfern gamma (IFN-g ). 3. Genes de expresin tarda (hasta 2 das o ms): los que codifican ciertas molculas de adhesin intercelular. Para que se produzca la expansin clonal de los LTh se necesita un incremento en la expresin del gen de la IL-2 y de su receptor (IL-2R). En esta tarea interviene una serie de pr- reguladoras y factores de transcripcin que se unen a secuencias especficas de la zona 5 no codificadora (promotor/intensificador) de los correspondientes genes:
Activacin gnica
1. complejo AP1 (c-Fos+c-Jun): se une al elemento TRE 2. factor nuclear NF-AT 3. factor {AP1+NF-AT}, que es especfico de las clulas T: se une al elemento ARRES 4. complejo Oct-1+Oct-2+OAP: se une a OBM factor NF-kB: se une a la secuencia kB-RE. La forma fosforilada (citoplsmica) de NF-AT, al activarse el LT, se desfosforila por la accin de la calcineurina, con lo que se activa y migra al ncleo; all forma complejo con AP1, reconociendo una secuencia especfica (ARRES) del promotor de los genes de IL-2 y de IL-2R. Esta desfosforilacin del NF-AT se puede inhibir por la accin de drogas como la ciclosporina A (Cs-A) o el FK506
Anergia clonal
La anergia clonal es la incapacidad proliferativa de un linfocito tras un contacto con el complejo pptido-MHC, y se debe a la carencia de la seal coestimulatoria proporcionada por la interaccin entre CD28 del LTh y B7 de la APC. No se trata de una mera no-respuesta pasiva, sino que la anergia es un estado activo de no proliferacin. Si ponemos en contacto linfocitos TH con APC fijadas por glutaraldehido (y que por lo tanto no expresan molculas B7 en su membrana), el linfocito entra en anergia. Esto se debe a que aunque ha contactado por su complejo TCRCD3 con el pptido-MHC (seal #1), la APC no le ha suministrado la seal coestimultoria (seal #2), con lo que el TH produce poca IL-2. .
Poblaciones de LT maduras
Linfocitos T , : Un 90-95% de los LT perifricas son de tipo , (o sea, TCR-2), existiendo una proporcin de CD4+ doble que las CD8+. En general, las CD4+ funcionan como clulas T coadyuvantes (TH) y las CD8+ lo hacen como T citotxicas (TC), aunque parece que ambas poblaciones expresan el mismo repertorio de segmentos variables (Va y Vb ). La poblacin circulante (perifrica) de clulas T consiste en T vrgenes, T efectoras y T memoria.
Regulacin de la diferenciacin de LT por factores de transcripcin en respuesta al TCR, molculas coestimuladoras y citoquinas.
Clula presentadora (APC) Ligandos para CD28/CTLA4 Factores de transcripcin en linfocitos T nave Correceptores CD28/CTLA4 NFATc AP-1 IL-12 IL-18 T-bet IL-2 IFN Th1 Th2 Citoquinas Subpoblacin producidas por linfocitos T
Foxp3
ROR
Treg
Th17
Regulacin de la diferenciacin de LT por factores de transcripcin en respuesta al TCR, molculas coestimuladoras y citoquinas.
Activacin de factores de transcripcin por seales producidas por el TCR en la sinapsis inmunolgica
El contacto linfocito-clula presentadora activa seales intracelulares (IP3-quinasa y entrada de Ca++, entre otras)
citoquina citoquina
CD4 o CD8
Clula T
TcR
APC
MHC-pptido
CD28
CD80
www.nature.com/.../fig_tab/nature02762_F4.html
citoquina
Combinaciones de factores de transcripcin dirigen la diferenciacin de los LT a clulas efectoras, reguladoras y anrgicas
Los factores NFATc son fundamentales en la activacin de la clula T por el TCR y regulan la diferenciacin hacia distintas subpoblaciones
Los factores NFATc son fundamentales en la activacin del LT por el TCR y regulan la diferenciacin hacia distintas subpoblaciones
Los factores NFATc pueden actuar sobre diferentes regiones reguladoras de diversos genes en funcin de su asociacin con otros factores
Jun Fos NFAT (RHR-N)
Los factores NFATc pueden actuar sobre diferentes regiones reguladoras de diversos genes en funcin de su asociacin con otros factores
NFAT (RHR-C)
NFAT (RHR-N)
Los factores NFATc pueden actuar sobre diferentes regiones reguladoras de diversos genes en funcin de su asociacin con otros factores
La manipulacin de la interaccin entre las clulas presentadoras (APC) y los linfocitos T para alterar sus respuestas a antgenos (cmo son presentados distintos antgenos y cmo responden a ellos las clulas T) puede servir para modificar el desarrollo de respuestas patolgicas del sistema inmunitario