UNIVERSIDADE ESTADUAL DO SUDOESTE DA BAHIA CURSO: Quimica DISCIPLINA: BIOQUMICA

JEFERSON 2011

Enzimas - Histrico
Histria da Bioqumica comea com pesquisas sobre enzimas. Catlise biolgica incio sc.XIX.
estmago - digesto da carne saliva - digesto do amido

Dcada de 30
1830 - amilase ou ptialina 1836 - pepsina e tripsina

 Dcada de 50 (1850) Louis Pasteur - concluiu que:

acar lcool pela levedura era catalisada por fermentos inseparveis da estrutura das clulas vivas do levedo

FERMENTAO Fermentos foram posteriormente denominados de ENZIMAS

Pasteur ( 1850) fermentos eram inseparveis das clulas Eduard Buchner (1897) Extratos de levedo (livre de clulas)

AUCAR

fermentao

LCOOL

Incio do Sculo XX
75 enzimas isoladas e cristalizadas
ficou evidenciado carter protico

James Sumner (1926): isolou e cristalizou a urease; Sumner demonstrou que tais cristais eram protenas e postulou que todas as enzimas eram protenas;

 John Northrop e cols.(dcada de 30): cristalizaram a pepsina e a tripsina bovinas e concluram que tambm eram protenas.
Atualmente + de 2000 enzimas so conhecidas

Enzimas
Com exceo de um pequeno grupo de molculas de RNA que possuem atividade enzimtica e so chamadas de RIBOZIMAS, todas as enzimas so PROTENAS.

Enzimas

Protenas especializadas

Aceleram reaes qumicas

Enzimas
Catalisadores de reaes nos sistemas biolgicos; Grande eficincia cataltica; Alto grau de especificidade por seus substratos; Funcionam
em solues aquosas em pH e temperaturas fisiolgicas

Algumas protenas, enzimas em especial, contm em sua molcula uma poro no protica, que essencial para atividade biolgica.

Estrutura Enzimtica

Holoenzima

Protena
Ribozimas Apoenzima

Cofator
Pode ser: on inorgnico molcula orgnica

RNA

Coenzima Se covalente Grupo Prosttico

Cofatores
Cofator um composto qumico, a parte noprotica ligada a uma enzima e necessria para a catlise

cofator

COENZIMAS
so pequenas molculas orgnicas, no- proticas que transportam grupos qumicos entre enzimas. algumas vezes so chamadas de co-substratos.

no fazem parte permanente da enzima.

Enzimas - Nomenclatura
No sculo XIX - poucas enzimas identificadas Adicionava-se sufixo ASE ao nome do substrato enzima que hidrolisam
gorduras (lipo - grego) - LIPASE amido (amylon - grego) - AMILASE protenas - PROTEASE

Nomes arbitrrios
Tripsina e pepsina - proteases Catalase - H2O2

 No sculo XX - quantidade de enzimas descritas Nomenclatura existente se tornou ineficaz Dcada de 60 - IUB - Unio Internacional de Bioqumica adotou um novo sistema de nomenclatura e classificao
mais

complexo sem ambigidades baseado no mecanismo de reao

 Sistema Oficial IUB Cada enzima - no de cdigo (E.C.- Enzyme Comission) com 4 dgitos que caracterizam o tipo de reao
1o 2o

dgito - classe dgito - subclasse 3o dgito - sub-subclasse 4odgito - indica o substrato

Enzimas
Nomenclatura e Classificao ATP + D-Glicose ADP + D-Glicose-6-fosfato

IUB - ATP:glicose fosfotransferase

E.C. 2.7.1.1
2 - classe - transferase 7 - sub-classe - fosfotransferase 1 - sub-subclasse - fosfotransferase que utiliza grupo hidroxila como receptor 1 - indica ser a D-glicose o aceptor do grupo fosfato

Hexoquinase

Enzimas = Catalisadores
Propriedades
Aceleram as reaes No so consumidas na reao Atuam em pequenas concentraes No alteram o equilbrio das reaes

Componentes da Reao Enzimtica

E+S

ES

E+P

E - Enzima S - Substrato(s) ES - Complexo Enzima -Substrato P Produto(s)

Centro Cataltico / Stio Ativo

Regio da molcula enzimtica que participa da reao com o substrato Pode possuir componentes no proticos cofatores Possui aminocidos auxiliares e de contato

Centro Cataltico / Stio Ativo

Stio ativo da enzima Enolase. Estabilizao do estado de transio e catlise por ons metlicos.

O stio ativo constitui uma cavidade com forma definida, formado por resduos de aminocidos, trazidos proximidade uns dos outros pelos dobramentos da cadeia polipeptdica que definem a estrutura terciria da protena e que permite enzima reconhecer seu substrato.

INTERAO ENZIMA-SUBSTRATO

H uma grande diferena de tamanho entre as molculas de enzimas e as de seus substratos.

Enzimas so protenas que agem como catalisadores biolgicos:

enzima

Composto B (produto)
Reao catalisada pela enzima

Composto A (substrato)
Centro ativo ou stio cataltico de uma enzima a poro da molcula onde ocorre a atividade cataltica

Observe que no h consumo ou modificao permanente da enzima

MUDANA CONFORMACIONAL PARA OCORRNCIA DA CATLISE

Hexoquinase

Hexoquinase + D-glicose

Mudanas conformacionais associadas com ligao do substrato

COMO AS ENZIMAS TRABALHAM?

As enzimas afetam a velocidade das reaes, mas no o equilbrio qumico delas; Existe uma barreira energtica entre S e P;

As molculas precisam superar esta barreira energtica e serem elevadas a um nvel superior de energia :estado de transio;
A diferena entre o estado basal e o estado de transio chamada de energia de ativao; A velocidade de uma reao reflete sua energia de ativao.

Teoria da catlise

O grfico mostra a variao de energia ao longo de uma reao.

Energia de ativao ou barreira energtica:

Estado de transio

Energia

Energia de ativao

Reao no catalisada

quantidade de energia que preciso fornercer aos reagentes para a reao ocorrer

Estado de transio ou complexo ativado: Reao catalisada Produto (P)

forma molecular intermediria entre o reagente e o produto, existe somente no alto da barreira energtica. altamente instvel.

Substrato (S)

Progresso da reao

Um Catalisador diminui a barreira energtica criando percursos alternativos da reao para formao do estado de transio.

COMO AUMENTAR A VELOCIDADE DE UMA REAO?

Elevando a temperatura: ocorre uma aumento no nmero de molculas com energia suficiente para vencer esta barreira energtica; Adio de catalisadores: Aumentam a velocidade das reaes pela diminuio da energia de ativao. Ex: Oxidao da glicose para formao de CO2 e H2O As energias de ativao so barreiras energticas para reaes qumicas cruciais para existncia da prpria vida; As enzimas evoluram para diminuir a energia de ativao de maneira seletiva para as reaes qumicas.


A energia de ligao a maior fonte de energia livre usada pelas enzimas para baixar a energia de ativao
H dois princpios fundamentais que explicam a ao das enzimas:

1- a fora cataltica das enzimas derivada da energia livre liberada durante a formao do complexo ES;
2- As interaes fracas atingem o estado timo no estado de transio das reaes que elas catalisam.

Modelo chave-fechadura

Modelo chave-fechadura?

FATORES QUE AFETAM A ATIVIDADE ENZIMTICA:

1. Condies do meio que afetam estabilidade

protica
pH temperatura

2. Concentrao dos reagentes

a enzima o substrato
3. Presena de inibidores

Fatores que controlam a atividade enzimtica: 1. Fatores que afetam a estabilidade proteica das enzimas Variaes de pH: pH timo

O pH timo de uma enzima reflete variaes no estado de ionizao de resduos de aminocidos do stio ativo. A enzima est pelo menos parcialmente desnaturada em pHs afastados do pH timo. Quando o substrato uma molcula ionizvel, o pH timo da enzima tambm reflete o seu estado de ionizao .
pH timo=1,5 pH timo=6,8 pH timo=9,9

% atividade enzimtica mxima

Influncia da temperatura do meio sobre a atividade enzimtica

Mantidas fixas as condies de -pH timo -concentrao de substrato -concentrao de enzima Temperatura tima

Ativao trmica

Desnaturao trmica

Influncia da concentrao da enzima sobre a atividade enzimtica

Mantidas fixas as condies de - temperatura tima - pH timo - [substrato] em excesso

[E]

Influncia da concentrao de substrato sobre a atividade enzimtica

Mantidas fixas as condies de - temperatura tima - pH timo - [enzima]

[S]

CONCENTRAO DOS SUBSTRATOS [S] varia durante o curso da reao medida que S convertido em P. Medir Vo = velocidade inicial da reao.

[E] = cte. vo [S] pequenas Vo linearmente. [S] maiores Vo por incrementos cada vez menores. Vmax [S] Vo insignificantes. Vmax atingida E estiverem na forma ES e a [E] livre insignificante, ento, E saturada com o S e V no com de [S].

Vmax

[S]

PRESENA DE INIBIDORES
Inibidor qualquer substncia que reduz a velocidade de uma reao enzimtica.

INIBIDORES

REVERSVEIS

IRREVERSVEIS

COMPETITIVOS

NO COMPETITIVOS

INCOMPETITIVOS

Enzimas Cintica enzimtica

1913 Leonor Michaelis -Enzimologista Maude Menten - Pediatra Representaram uma reao enzimtica em 2 etapas
K1

E+S
K2

ES

K3

E +P
K4

K= constante de velocidade=

[produto] [substrato]

V0 = V mx [S] Km+ [S]

Enzimas - Cintica enzimtica

Km
Constante de Michaelis
Medida da afinidade do complexo enzima-substrato (ES) Especfico para cada enzima

Cintica enzimtica

Km= [S] Numericamente, Km pode ser expresso como a [substrato] necessria para que a velocidade da reao seja metade da velocidade mxima

Km

Concluses sobre Km Pequena [substrato] necessria para a reao atingir metade da V mxima

Afinidade da enzima pelo substrato

Grande [substrato] necessria para a reao atingir metade da V mxima

Km

Afinidade da enzima pelo substrato

Cintica Enzimtica
Devido ascenso gradual da curva hiperblica difcil determinar quando foi atingida a Vmx

No se pode calcular com exatido os valores de Km e Vmx

[S]

INIBIDORES

INIBIDORES
Inibidor qualquer substncia que reduz a velocidade de uma reao enzimtica.
INIBIDORES

REVERSVEIS

IRREVERSVEIS

COMPETITIVOS

NO COMPETITIVOS

INCOMPETITIVOS

INIBIDORES REVERSVEIS COMPETITIVOS

CARACTERSTICAS DESTES INIBIDORES:
1- Neste tipo de inibio o substrato e o Inibidor ligam-se ao mesmo stio, pois estes: Apresentam configurao espacial semelhante do substrato; Conseguem estabelecer ligaes com o stio ativo da enzima.

E + I EI

O tipo de inibio reversvel precisamente identificada pela cintica da reao catalisada em presena do inibidor.

INIBIDORES REVERSVEIS NO COMPETITIVOS

CARACTERSTICAS DESTES INIBIDORES:
1- Neste tipo de inibio o Inibidor liga-se a outro stio independente do stio de ligao ao substrato, diminuindo a concentrao de enzima ativa e conseqentemente diminuindo a velocidade da reao.

Cintica da reao enzimtica catalisada em presena de inibidor no-competitivo

INIBIDORES REVERSVEIS INCOMPETITIVOS

Neste tipo de inibio o inibidor liga-se a outro stio somente no complexo ES.

INIBIDORES IRREVERSVEIS
inibidor se combina com um grupo funcional (stio ativo) da enzima inibidor se liga enzima formando um complexo ESTVEL forma-se uma ligao COVALENTE entre o inibidor e a enzima

ASPIRINA transfere de forma irreversvel seu grupo acetil para um grupo OH de um

resduo de serina da enzima cicloxigenase; PENICILINA ANTIBITICO liga-se especificamente a enzimas da via de sntese da parede bacteriana. COMPOSTOS ORGANOFOSFORADOS AGROTXICOS formam ligaes covalentes com o grupo OH de resduos de serina. IODOACETAMIDA reage com o grupo SH de resduos de cistena

REGULAO ENZIMTICA

NA VIA METABLICA EXISTEM DUAS GRANDES CLASSES DE ENZIMAS REGULADORAS:

ENZIMAS ALOSTRICAS

ENZIMAS REGULADAS POR MODIFICAO COVALENTE REVERSVEL

REGULAO ENZIMTICA-ENZIMAS ALOSTRICAS

POSITIVOS (MAP) EFETUADORES OU MODUALADORES NEGATIVOS (MAN)

ENZIMAS ALOSTRICAS
STIO ALOSTRICO STIO CATALTICO

Enzima Ativa

Enzima Inativa

O percentual de enzima que se encontrar na forma ativa ou inativa depende da concentrao do Efetuador Alostrico. A presena de stios distintos para efetores positivos ou negativos permite o ajuste da velocidade em uma ampla faixa de substrato.

REGULAO ENZIMTICA-ENZIMAS ALOSTRICAS

Efetores negativos

Efetores positivos

As enzimas alostricas: So encontradas em todas vias metablicas (fator de economia celular e etapa limitante); Tem Atividade aumentada ou diminuda em funo de sinais Catalisam reaes irreversveis (incio da via); So oligomricas com pelo menos dois stios distintos; Tem curva sigmide e efeito de cooperatividade.

Este tipo de inibio chamada de retroalimentao. O aumento da concentrao do produto final da via faz com que ela sofra uma desacelerao.

REGULAO ENZIMTICA MODIFICAO COVALENTE Ao contrrio da alosteria, em que os efetores ligam-se enzima apenas por ligaes fracas, na modulao covalente a enzima modificada covalentemente por duas outras enzimas: uma quinase fosforila a enzima s custas de ATP, e uma fosfatase remove o grupo fosfato da enzima fosforilada. A modulao covalente energeticamente cara, pois necessita duas outras protenas e ATP para regular a atividade de uma enzima. Ao contrrio, na alosteria a enzima controlada pelas concentraes relativas de seus efetores e a afinidade da enzima por estes.

REGULAO ENZIMTICA-MODIFICAO COVALENTE

Ativao de zimognios um caso especfico de modulao covalente exclusivo de alguns tipos de enzimas proteolticas.

zimognios: as proteases so sintetizadas numa forma inativa por estar em uma conformao desfavorvel, com bloqueio ou desalinhamento dos resduos do stio cataltico.

conformao desfavorvel resulta de pores adicionais da cadeia poli-peptdica, que devem ser retirados para que a protena assuma a forma ativa.

podem acontecer duas situaes, combinadas ou no: - zimognio tem uma extenso N-terminal (prosegmento) que precisa ser retirada. Pro-segmentos podem ter de 2 a 150 resduos a.a. - zimognio tem cadeia polipeptdica nica, que precisa ser clivada (protelise limitada) para formar duas ou mais subunidades. converso do zimognio protease ativa pode resultar da ao proteoltica de outra protease, ou de alterao do pH ou temperatura do meio, ou ainda, da adsoro do zimognio uma superfcie negativa. Esses eventos determinam mudana conformacional e/ou auto-hidrlise pela prpria protease. ativao irreversvel, e por isso, energeticamente cara para o organismo.

REGULAO ENZIMTICA-ZIMOGNIOS