Evidencias Cientficas en Medicinas Tradicionales: Fitoterapia.

El modelo Ua de Gato (Uncaria tomentosa) "

Dr. Jos L. Aguilar Olano

Jefe Seccin Inmunologa, Facultad de Ciencias y Filosofa. UPCH. Lima, Per

Mdico Asistente, Servicio InmunoReumatologa. Hospital Nacional Cayetano Heredia Presidente Asociacin Latinoamericana de Inmunologa (ALAI)

X CONGRESO DE LA ASOCIACIN LATINOAMERICANA DE INMUNOLOGA (ALAI).

Westin Hotel. Lima Per. Mayo 2012

www.inmunoperu2012.org

INFORMACION TRADICIONAL
ACEPTACION GLOBAL FORMAL

INVESTIGACION CIENTIFICA

INVESTIGACIN EN PRODUCTOS NATURALES

Primero: ESTANDARIZACION Segundo: ESTUDIOS PRE-CLNICOS:
EVALUACIN DE TOXICIDAD ENSAYOS BIOLGICOS Tercero: ENSAYOS CLNICOS (humanos): FASE I: SEGURIDAD Y TOLERANCIA FASE II: TOLERANCIA Y EFICACIA FASE III: ENSAYO CLNICO FASE IV: ESTUDIOS POST-MARKETING

ESTANDARIZACION DE PRODUCTOS NATURALES

UA DE GATO

Uncaria tomentosa (Willd. ex Roem. & Schult.) DC

Contiene muchos metabolitos secundarios: Flavonoides Taninos Procianidinas Triterpenos Esteroles Alcaloides Glicosidos del cido Quinvico cido Qunico

Phytother Res, 10 (suppl. 1): S18-19; 1996

Rev Cubana Plant Med 13(2); 2008

Phytochemistry 66: 8998; 2005 Phytochemistry 45(5): 1035-40; 1997 Plant Cell Physiol 43(12):1502-09; 2002 European J of Pharmacology 444:39-45; 2002 Inter. Immunopharmacology 5: 219-29; 2005 Journal of Ethnopharmacology 96: 577-84; 2005

Estructura qumica general de alcaloides oxindlicos pentaciclicos

ESTANDARIZACION DE PRODUCTOS NATURALES

Marcadores Fitoqumicos en

Uncaria tomentosa

Mejoras en proceso: Extracto Estandarizado

Alcaloides Oxindlicos (penta y tetra-cclicos) Perfil variable Calidad variable Dosaje preciso (cromatografa lquida de alta performance)

INVESTIGACIN EN PRODUCTOS NATURALES

Primero: ESTANDARIZACION Segundo: ESTUDIOS PRE-CLNICOS:
EVALUACIN DE TOXICIDAD: in-vivo, in-vitro ENSAYOS BIOLGICOS: in-vitro, in-vivo Tercero: ENSAYOS CLNICOS (humanos): FASE I: SEGURIDAD Y TOLERANCIA FASE II: TOLERANCIA Y EFICACIA FASE III: ENSAYO CLNICO FASE IV: ESTUDIOS POST-MARKETING

No evidencia de toxicidad en animales experimentales

Evaluacin de la citotoxicidad de Uncaria tomentosa

Ensayo de MTT
Determinacin de IC50 para Ua de Gato en PBMC humanos
100 90
% Actividad

% actividad LogIC50 = -1,774 IC50 = 16,82 mg/mL R2 = 0,9112

80 70 60 50 -3.00 -2.75 -2.50 -2.25 -2.00 -1.75 -1.50 -1.25

Log (Conc. UG)

A. Santa Mara, et al. Journal of Ethnopharmacology 57: 18387; 1997

Lozada-Requena, I Tesis de Maestra, UPCH, 2005

Clulas CHO

Clulas mononucleares de sangre perifrica humanas

No evidencia de toxicidad en cultivos celulares

Ausencia de apoptosis en CMSP humanas:Tincin con Naranja de Acridina y ELISA para caspasa 3

ndice de apoptosis
Concentracin Ctrl Positivo (EtOH) Ctrl Negativo 50 mg/mL 100 mg/mL 500 mg/mL 1 mg/mL 4 mg/mL 17 mg/mL 20 mg/mL 4h 20h 9,6 3,5 66,3 13,2 0 7,7 4,9 12,1 7,5 11,7 4,9 14,2 6,5 10,4 5,4 12,6 5,0 1,1 1,1 19,5 4,9 Efecto de UG sobre la induccin de apoptosis a CMSP 22,6 3,8
Caspasa 3 (U/mL)

humanas

800

16,8 2,0 23,1 8,8 21,1 3,8 9,8 8,9

600

400

200

13,5 6,3 13,4 12,0

CN

50 ug /

Ua de Gato

Lozada-Requena I, Alvarez Y, Nez C, Ocampo C y Aguilar JL, Seccin Inmunologa, UPCH 2009

10 00 ug /

10 0u g/

50 0u g/

Lozada-Requena, I Tesis de Maestra, UPCH, 2005

INVESTIGACIN EN PRODUCTOS NATURALES

Primero: ESTANDARIZACION Segundo: ESTUDIOS PRE-CLNICOS:
EVALUACIN DE TOXICIDAD: in-vivo, in-vitro ENSAYOS BIOLGICOS: in-vitro, in-vivo Tercero: ENSAYOS CLNICOS (humanos): FASE I: SEGURIDAD Y TOLERANCIA FASE II: TOLERANCIA Y EFICACIA FASE III: ENSAYO CLNICO FASE IV: ESTUDIOS POST-MARKETING

Extracto estandarizado de Ua de Gato: Estudios clnicos

ESTUDIO CLINICO (FASE I):
Ensayo con 52 voluntarios sanos Recibieron: * 300 mg una dosis diaria (qd) * 100 mg 3 veces al dia (tid) Evaluacin clnica Tests Lab: Hcto, hgma, VSG, Transaminasas, fosfatasa alcalina, creatinina, urea, LDH.

Ensayos clnicos con Ua de Gato. Fase I: TOLERANCIA Y SEGURIDAD

ESTUDIO CLINICO (FASE I):
Resultados demostraron:
Buena Tolerancia a esta dosis No efectos colaterales

No alteraciones de lab tests durante 45 das.

INVESTIGACIN EN PRODUCTOS NATURALES

Primero: ESTANDARIZACION Segundo: ESTUDIOS PRE-CLNICOS:
EVALUACIN DE TOXICIDAD: in-vivo, in-vitro ENSAYOS BIOLGICOS: in-vitro, in-vivo Tercero: ENSAYOS CLNICOS (humanos): FASE I: SEGURIDAD Y TOLERANCIA FASE II: TOLERANCIA Y EFICACIA FASE III: ENSAYO CLNICO FASE IV: ESTUDIOS POST-MARKETING

ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA DE LA UA DE GATO

ENSAYO BIOLOGICO

ANTI-INFLAM M ATORY EFFECT OF EXTRACTS OF CATS CLAW (4 HOURS)

60 50 40

% INH. 30
20 10 0 50 100 200 500 INDOM.

Aguilar et al, Journal of Ethnopharmacology, 2002;81:271-276

DEMOSTRACION DEL EFECTO BIOLOGICO

Extracto estandarizado de Ua de Gato: Estudios clnicos (Fase II)

24 patientes con dolor articular: osteoartrosis (70 %) o REAs (30 %) Recibieron 300 mg diario x 6 sem. Mayora: clara mejora a las 3 y 6 sem. De 100 % reciban analgsicos inicialm, 25 % los requeran en 3 sem y slo 10 % en 6 sem. No se vieron efectos colaterales ni alteraciones de laboratorio.

Mejora del dolor articular en la escala visual anloga (EVA) en pacientes que usaron UG
EFECTO ANTI-INFLAMATORIO DE UNCITOLINA EN ENFERMEDAD ARTICULAR INFLAMATORIA
8 7
REPOSO MOVIMIENTO NOCHE

Escala de dolor

6 5 4 3 2 1 0

Tiempo de Evaluacin (semana)

Aguilar JL, Barrantes F: Ist Internat Congress on Inmunol, 2001

PROFUNDIZAR CONCEPTOS BIOLGICOS: POR QU Y CMO FUNCIONA LA UG ?

INVESTIGACIN EN PRODUCTOS NATURALES

Primero: ESTANDARIZACION Segundo: ESTUDIOS PRE-CLNICOS:
EVALUACIN DE TOXICIDAD: in-vivo, in-vitro ENSAYOS BIOLGICOS: in-vitro, in-vivo Tercero: ENSAYOS CLNICOS (humanos): FASE I: SEGURIDAD Y TOLERANCIA FASE II: TOLERANCIA Y EFICACIA FASE III: ENSAYO CLNICO FASE IV: ESTUDIOS POST-MARKETING

AINEs
CORTIC
Metabolitos Acido Araquidnico Prostaglandinas

UG ?
Injuria inicial: Infeccin, trauma, etc

Leucotrienos

Citoquinas Proinflamatorias Fact Transcripc NF-B

TNF, otros

Sustancias Oxidativas

MECANISMO INFLAMATORIO

AINEs COx
Metabolitos Acido Araquidnico

Prostaglandinas
Leucotrienos

Injuria inicial: Infeccin, trauma, etc

Citoquinas Proinflamatorias

TNF

Fact Transcripc NF-B

Sustancias Oxidativas

Cort
Metabolitos Acido Araquidnico

Prostaglandinas
Leucotrienos

Injuria inicial: Infeccin, trauma, etc

Citoquinas Proinflamatorias

TNF

Fact Transcripc NF-B

Sustancias Oxidantes

Metabolitos Acido Araquidnico

Prostaglandinas

Leucotrienos

Injuria inicial: Infeccin, trauma, etc

Citoquinas Proinflamatorias Fact Transcripc NF-B

TNF

Sustancias Oxidativas

MECANISMO INFLAMATORIO

Inhibition of cyclooxygenase-1 and -2 by the Cc extract (50 ug/ml)*

Aguilar et al, Journal of Ethnopharmacology, 2002;81:271-276

Air Pouch Model

Groups, n= 4 mice BALB/c [UG] 100 y 250 mg/Kg Anesthetized with ketamine / xylaxine Inject carrageenan w/wt pentoxifylline lining layer sub-lining layer

skin

muscle tissue

Schema of a subcutaneous artificial cavity

Efecto de Ua de Gato en la produccin de una citoquina como TNF -.

*
4000 3500

% inh

TNF - ( pg/ml )

3000 2500

*
2000 1500 1000 500 0
PBS Carrageenan UG (100) UG (250) Pentoxifylline UG (100) Pentoxifylline

* *

48 54 74

96

+ carrageenan

The date are expressed as Media SEM; * P < 0.01

Rojas P, Aguilar JL, et al, LatinAmerican Congress Immunology, 2002: Award

Efecto de Ua de Gato sobre la produccin de citokinas Th1/Th2 en CMSP humanos estimulados con LPS Cytometric Bead Array (CBA) en sobrenadante de cultivo

IL-2 IL-4 IL-5 IL-10 TNF- IFN-g

IL-2 IL-4 IL-5 IL-10 TNF- IFN-g

CMSP

CMSP+LPS

IL-2 IL-4 IL-5 IL-10 TNF- IFN-g

IL-2 IL-4 IL-5 IL-10 TNF- IFN-g

CMSP+LPS + UG100mg/mL

CMSP+LPS + UG500mg/mL

TNF Expresin de molculas ICAM-1

Clula

The effect of the UG extract upon NF-kB DNA binding *

200 U/ml TNF-

UG
50 100 200 500

ug/ml Extract

NF-kB DNA complexes indicates the position of NF-kB DNA complexes Jurkat Cells were pretreated for 1 h. with various concentrations of the extracts and subsequently stimulated with TNF- for 1 h, and analyzed by EMSA (electrophoretic mobility shift assays)

Aguilar et al, Journal of Ethnopharmacology, 2002;81:271-276

ACTIVIDAD ANTITUMORAL DE LA UA DE GATO

Evaluacin de la citotxicidad, viabilidad celular e inhibicin de la proliferacin en clulas neoplsicas

Lnea celular IC50 Alcaloide / Droga referencial Tiempo tratamiento

(Glioma)
MHH-ES-1 Sarcoma 17,15 0,82 mM 67,60 2,3 mM 39,16 1,21 mM MT3 Cncer de mama 11,80 1,03 mM 38,01 2,21 mM 44,66 2,72 mM Mitrafilina 30h

Ciclofosfamida

30h

Vincristina

30h

Mitrafilina

30h

Ciclofosfamida

30h

Vincristina

30h

Garca Gimnez D et al. Planta Med 76: 133-36, 2010

(Neuroblastoma)

37
Garca Prado E et al. Phytomedicine 14: 280-84,

Efecto de un extracto hidro-alcohlico de UG sobre la produccin de IL-12 en CMSP humanas

Produccin de IL-12p70
300
IL-12p70 pg/mL

250 200 150 100 50 0

CP L 50 0u g/ m L 10 00 ug /m L CN /m L 50 ug 10 0u g/ m

Datos preliminares

Ua de Gato

Lozada-Requena I, Alvarez Y, Nez C, Ocampo C y Aguilar JL, Seccin Inmunologa, UPCH 20

Modelo in vivo de carcinosarcoma inducido con clulas tumorales Walker-256

Dreifuss A, Aguilar JL et al, Journal of Ethnopharmacology Julio 2010;130:127-133

Evaluacin de actividad antioxidante de un extracto hidro-alcohlico de UG sobre DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil)

Dreifuss A, Aguilar JL et al, Journal of Ethnopharmacology Julio 2010;130:127-133

Modelo melanoma C57BL/6 - B16

Lnea celular B16

Ratones C57BL/6

Aparicin de tumor: 20d

RIP

Melanoma subcutneo

Metstasis pulmonar 41

Seccin Inmunologa - UPCH

Diseo experimental
-Obtencin de sangre. -Aislamiento de PBMC. -Cultivo de PBMC -Medicin por citometra de flujo: -CD4,CD8a, CD45R -CBA Th1/Th2/Th17: -IL-2 -IL-4 -IL-6 -IL-10 -TNF- -IFN-g -IL-17

Tratamiento oral con distintas concentraciones de Ua de Gato antes, durante y despus de la aparicin del tumor.

..continuar
Seccin Inmunologa - UPCH

42

Participantes: Percy Rojas, Adolfo Marcelo, Fidel Barrantes, Arturo Dreifuss, Csar Nez, YubellAlvarez, Ives Carlier, Patricia Herrera, Abraham Vaisberg, Isabel Akamine, Silvia Dvila, Elizabeth Iparraguirre, Claudia Ocampo, Jos Aguilar

Tareas pendientes en investigacin en MTAC

Bases de Datos de Investigaciones en Medicinas Integrativas Diseo de Metodologas Aplicadas a Investigaciones en Productos Naturales y otras Medicinas Alternativas y Complementarias Trabajo colaborativo entre instituciones y entre medicinas Introduccin de Cursos sobre MTAC en Escuelas de Formacin de Profesionales de la Salud Permeabilizacin de Fondos para Investigacin en MATC Varias otras

www.inmunoperu2012.org
X CONGRESO DE LA ASOCIACIN LATINOAMERICANA DE INMUNOLOGIA (ALAI).

Lima Per. Hotel Westin. 28 Mayo 2 abril 2012