CIENCIAS Y TECNOLOGAS PARA LA SALUD HUMANA: INDICADORES DE C&T

Y TCNICAS BIOTECNOLGICAS
M.Sc. JOSE ROBERTO ALEGRIA COTO
Dpto. de Desarrollo Cientfico y Tecnolgico

MAESTRA EN SALUD PBLICA Sbado 14 de Universidad de El Salvador Septiembre 2002.

OBJETIVOS:
Presentar indicadores del 2000 sobre inversin en Ciencia.

Esbozar los aportes de la biotecnologa para la salud humana.

Promover la reflexin sobre el impacto que tendrn las tecnologas convergentes en la salud humana en los prximos diez aos. Estimular el anlisis desde el mbito profesional en que nos desenvolvemos para idear propuestas que permitan preparar a la sociedad salvadorea para enfrentarse exitosamente a estos cambios.

CONTENIDO:
Indicadores de Ciencia del 2000.
Aportes de la Biotecnologa a la salud humana. Tecnologas convergentes para mejorar el desempeo humano.
Propuestas.

EL ESTADO DE LA CIENCIA EN L.A. (2000)

En los pases industrializados, la investigacin les lleva al desarrollo tecnolgico (I+D).Los gobiernos promueven el financiamiento y a su vez, las empresas destinan fondos, en porcentajes que andan alrededor del 10% de sus ganancias para la investigacin interna o para financiar las lneas de su inters en las Universidades o Centros de Investigacin Tecnolgica. Sin embargo, en los Estados Unidos, Japn, ni en el promedio europeo, la inversin pblica en I+D alcanza el 1% del PIB.

EL ESTADO DE LA CIENCIA EN L.A. (2000)

EL ESTADO DE LA CIENCIA EN L.A. (2000)

Comparacin de nmero de investigadores e inversin en I+D, de L.A. con respecto a los pases ms desarrollados. La inversin en I+D de los Estados Unidos es casi treinta veces ms grande que la del conjunto de Amrica Latina; la de la Unin Europea es ms de quince veces mayor y la de Japn, diez veces. Canad invierte un 50% ms que la regin en su conjunto. En cuanto al nmero de investigadores, la brecha es menor que en lo que se refiere a la inversin.

EL ESTADO DE LA CIENCIA EN L.A. (2000)

Cuba ocupa el cuadrante de valores ms altos que la media y Chile. Costa Rica y Argentina, en el espacio que predomina la dotacin de investigadores por sobre la inversin. Brasil est en el cuadrante en el que predomina el esfuerzo de inversin, por sobre la densidad de la dotacin de investigadores en el conjunto de la fuerza de trabajo.

El grueso de los pases latinoamericanos se ubica en el cuadrante de valores inferiores a la media en ambas dimensiones.

C&T E INNOVACIN EN EL SALVADOR

Lo histrico en El Salvador, es que no hay cultura cientfica, ya que se ha subestimado la generacin endgena de conocimientos, faltan capacidades propias para la investigacin e innovacin (resolucin de problemas econmicos, sociales o ambientales), lo cual implica que no hay soluciones adecuadas a la problemtica del desarrollo nacional, dado que la misma presenta caractersticas especficas.

EN EL EL NUEVO NUEVO MILENIO MILENIO EN HABRA DOS DOS MUNDOS MUNDOS HABRA
EL MUNDO QUE EL MUNDO QUE RETROCEDE: AVANZA Y PROGRESA: Con pases que se Con pases libres, con quedarn estabilidad, crecimiento viviendo en el y bienestar, que estn pasado porque listos para el futuro y no tienen la que han aprendido el tecnologa, no lenguaje de la estn preparados o economa, la tecnologa no entienden que el y las nuevas ideas. mundo a cambiado. Fr ancisco Flores (2000)

FONDOS PARA CENTROS QUE PROVEEN SERVICIOS BASICOS DE APOYO A LA .INVESTIGACION

1995 Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa Centro Nacional de Tecnologa Agropecuaria y Forestal Centro de Desarrollo Pesquero Investigaciones Geotcnicas TOTAL 8,382,100 7,544,670 76,919,890 6,812,585 6,042,385 84,913,500 6,862,395 6,471,455 82,317,380 8,104,235 6,600,095 88,316,985 5,063,740 55,929,380 1996 5,274,130 66,784,400 1997 4,199,130 64,784,400 1998 4,499,440 69,113,215

Si la ciencia y la tecnologa cambian al mundo Cuando El Salvador invertir en estas, para que sean un pilar de desarrollo social econmico y ambiental?.

BIOTECNOLOGA
Biotecnologa es el medio o va de manipulacin de las formas de vida (organismos) para proveer un producto deseable para el uso del hombre. Areas cubiertas por el trmino biotecnologa incluyen: ADN recombinante, biologa molecular, cultivo de clulas animales, cultivo de tejidos vegetales, fermentacin, inmunologa, mejoramiento animal y vegetal, sistema de enzimas y otras.

AVANCES HISTRICOS DE GENTICA MOLECULAR

1991 Genes codifican las proteinas 1944 Prueba que ADN porta la informacin gentica 1949 Concepto de anemia falciforme como enfermedad molecular 1953 Determinacin de estructura de Insulina y de ADN 1956 Enfermedad monognica por sustitucin de un aa de cadena -hemoglobina 1960 Estructura cristalogrfica de rayos X de la hemoglobina 1961 Cdigo Gentico, ARN mensajero, regulacin gnica 1972 ADN recombinante, clonacin y aislamiento gnico 1974 Demostracin directa de deleccin gnica humana 1975 Southern Blotting 1976 Proto-oncogenes 1977 Secuenciacin gnica 1978 Biblioteca gnica humana 1979 RFPL para diagnstico prenatal, oncogenes celulares 1979-81 genes humanos clonados y secuenciados 1985 PCR, gen de enfermedad aislado por clonacin posicional 2000 90% borrador genoma humano. Feb 2001 completo

TCNICAS BIOTECNOLGICAS
Las Tcnicas Biotecnolgicas usadas en diagnstico mdico pueden ser divididas en dos grandes categoras: TCNICAS DE GENTICA MOLECULAR (tales como PCR, secuenciacin. ) y TCNICAS BASADAS EN INMUNOLOGA.

TCNICAS DE GENTICA MOLECULAR (a)

El desarrollo de tcnicas de diagnostico de biologa molecular ha sido muy rpido y han sido aprobadas organismos regulatorios mundiales (como la FDA). Algunas tcnicas bsicas son: i) Ensayos de hibridizacin de pares de bases (para identificar secuencias gnicas). ii) Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR): PCR transcriptasa reversa RT-PCR (para hacer ADN copia), PCR inversa (Estudios de tumorgnesis y aseguramiento de la clonalidad en tumores linfoideos); PCR alelo especfica, prueba de ARMS -Amplificacin de Mutacin Refractaria (para detectar mutaciones patognicas especficas); PCR Tiempo Real (PCR cuantitativo) es la tcnica de escogencia para estudiar el nivel de expresin de ciertos genes seleccionados; Ensayos de la Lnea Sonda (LiPA), kits para para realizar tipeo de HLA (Antgenos de Leucocitos Humanos) y deteccin de enfermedades infecciosas y predicin de resistencia a medicamentos; Tecnologa AMPLICOR, con kits para detectar enfermedades infecciosas tales como: HIV, HTLV, M. tuberculosis, CMV y otros.

PCR - REACCIN EN

CADENA DE LA POLIMERASA
El PCR utiliza la capacidad de las enzimas polimerasas que catalizan la formacin y reparacin de ADN (y ARN), mediante un mecanismo que permite iniciar y parar su actividad en un punto especfico de una hebra de ADN, para lo cual se emplean polimerasas obtenidas de arqueobacterias tales como la de Termophillus aquaticus que resisten temperaturas arriba de los 100C. Kary B. Mullis, de Cetus Corporation que fue el que concibi el mecanismo del PCR, en la dcada de los 80,s, recibi el Premio Nobel en 1993.

TCNICAS DE GENTICA MOLECULAR (b)

iii) Secuenciacin (secuenciacin de segmentos gnicos). iv) Microarreglos de ADN (investigacin exploratoria, descubrimiento gnico y usos diagnsticos. Puede ser usado para determinar niveles de expresin gnica, en este caso la transcripcin gnica es comparada entre dos o mas clases diferentes de clulas tipos o clulas tratadas y no tratadas, o para identificar secuencias (mutacin gnica). v) Ensayos de Ligacin Oligonucletida (OLA) esta tcnica es adecuada para la deteccin de mutaciones en un gen en donde ocurren un nmero de mutaciones conocidas o polimorfismos comunes. vi) Amplificacin in situ o PCR in situ (representa para los histopatlogos el matrimonio de la histopatologa estndar y la biologa molecular. Cuando se aplica para estudios de cncer permite observar la expresin de genes y la presencia de mutaciones en clulas o secciones de tejidos anormales. La tcnica es una herramienta importante para el estudio de patognesis viral).

BIOINFORMTICA
Campo convergente de la biologa, computacin e informacin tecnolgica en una misma disciplina. La ultimada meta de este campo es posibilitar el descubrimiento de nuevas ideas biolgicas, as como crear una perspectiva global de la que puedan ser discernidos principios unificadores de la biologa
(www.ncbi.nlm.nih.gov/Education/index.html).

En la Universidad Wisconsin Madison, USA (mayo, 2002), un equipo de sus cientficos de biologa y computacin, han recibido $ 5 millones para entrenar estudiantes, para que manejen los incrementados y complejos retos de la investigacin en biologa y medicina. El objetivo es que los estudiantes sean altamente calificados en biologa y reas cuantitativas como ciencias de la computacin y estadsticas.

GENMICA
GENMICA: es el estudio del genoma y su accin. En donde el genoma es la suma total del material gentico presente en un organismo particular e incluye el ADN presente en los cromosomas y en los orgnelos subcelulares (ej., mitocondrias) e incluye el genoma de ARN de algunos virus. El anuncio el 26 de junio de 2000, del borrador del genoma humano en un 90%, marc un hito histrico para la humanidad, el cual predice que puede llevar a una revolucin en la investigacin mdica y en el cuidado del paciente..

El Proyecto Genoma Humano se inici a mediados de los aos 80, previsto para el 2007, se present en Junio de 2000, el 90% del borrador con la secuenciacin de unos 30,000 genes y 3 mil millones de pares de bases (pb). El genoma humano es 10 veces mas pequeo que el genoma de la salamandra Bolitoglossa subpalmata y 200 veces menor que el de la Ameba
Entre una persona y otra el ADN solo difiere en 0.2% 20% idntico 60% idntico De 289 genes humanos implicados en enfermedades, hay 177 cercanamente similares a los genes de Drosophila.

GENOMICA

70% idntico

98% idntico

Humanos 30,000 genes

Chimpanc 30,000 genes

Ratn 30,000 genes

A. thaliana 25,000 genes

C. elegans 19,000 genes

D. melanogaster 13,000 genes

MICROARREGLOS DE ADN
El microarreglo de ADN pone secuencias de genes en una lmina. Los ARNm de una clula particular con tags fluorescentes, se hibridizan, a las secuencias cuando son complementarias. Un escaner mide la fluorescencia de cada muestra sobre la lmina, para determinar la presencia o actividad de los genes.
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FINGERPRINTING IDENTIFICACION GENES DE CELULAS MADRES

Dos equipos de investigadores han encontrado los genes que distinguen a las clulas madre. Buscaron genes en clulas madre embrionarias y en clulas adultas nerviosas y sanguneas, dedicadas a reparar tejidos especficos. Cerca de 200 genes son 2 a 3 veces ms activos en clulas madre que en clulas de cerebro maduro y sanguneas. Copiaron los genes activos en microchip y los genes activos de las clulas madres fueron apareados al ADN sobre el chip para identificarlos. Cerca de la mitad de los genes ms activos en las clulas madre estn involucrados en comunicacin celular, copia de ADN y respuesta al estrs, del resto se desconoce (www.nature.com/nsu/020909/020902-10.html)

TCNICAS DE GENTICA MOLECULAR (c)

vii) Hibridizacin Oligonucletida Alelo Especfica (ASO) o Dot Blotting (con muchas aplicaciones diagnsticas. LiPA y AMPLICOR usan esta tcnica). viii) Southern blotting (la sonda se une a determinado secuencia de ADN sobre el ADN blanco y puede estimarse su tamao). ix) Segmentos de Restriccin de Polimorfismos Largos RFLPs (usa Southern blotting (es una poderosa herramienta para el estudio de patogenicidad viral y clasificacin gentipica de virus). x) Mapeo de Restriccin (usa Souther blotting para detectar deleccin gnica. xi) Northern blotting (variante de Southern blotting en el cual el cido nuclico blanco es ARN en vez de ADN. Su principal funcin es obtener informacin sobre los patrones de expresin de genes especficos). xii) Bandeo cromosmico: Bandeo G, Bandeo Q, Bandeo R, Bandeo T, Bandeo C (usados en citogentica clnica para el diagnstico de muchas condiciones genticas). xiii) Hibridizacin in situ (ISH), es usada para localizar en la clula secuencias de acidos nuclecos especficas: Hibridizacin cromosmica in situ, Hibridizacin de tejidos in situ.

RFLPs / ADN FINGERPRINTING

A causa de que el ADN tiene muchas regiones que son muy variables en su estructura (RFLPs) pueden ser usadas por la medicina forense para hacer el ADN fingerprintings. El ADN puede ser obtenido de sangre, fluidos corporales y muchos otros tejidos incluyendo hueso y es relativamente estable, frecuentemente sobre muchos aos. Se requieren cantidades muy pequeas y las muestras pueden ser obtenidas de manera no invasiva.

TCNICAS INMUNOLGICAS
Tecnicas serolgicas (basadas en el uso de anticuerpos): i) A) Tipeo sanguneo (tcnica usada para el agrpamiento sanguneo) ii) Aglutinacin de Latex (micropartculas de latex de poliestireno cubiertas con virus u otros antgenos, aglutinan al mezclar con suero del paciente con anticuerpos especficos). iii) Hemaglutinacin (glbulos rojos cubiertos con antgenos) prueba para sfilis. iv) Tecnicas basadas en complemento (usa el complejo sistema de protenas del cuerpo para identificar individuos HLA no idnticos). v) Inmunoensayo en Lnea (LIA) para detectar y caracterizar anticuerpos especficos, microorganismos u otros antgenos, deteccin de HIV, Hepatitis C, anticuerpos de virus linfotrficos de clulasT humanas; deteccin de autoanticuerpos: lupus eritomatosos sistmico, lupus inducido por medicamentos, escleroderma difusa, mezcla de enfermedades del tejido conectivo, CREST, polimiositis / dermatomiositis vi) Western blotting (aplicada al campo de la virologa para la deteccin de anticuerpos especficos de ciertos virus. B) ELISA (muy empleada en diagnstico mdico). C) FLUJOCITOMETRIA (muy empleada en hematologa).

ADNr O INGENIERA GENTICA

La tecnologa del ADNr se inici en la dcada de los 70s. Ingeniera gentica se refiere a un grupo de tecnologas usadas para cambiar la composicin gentica de las clulas y mover genes a travs de las fronteras de las especies para producir nuevos organismos. Se pueden aislar genes, modificarlos, introducirlos a nuevos hospederos, y clonarlos para obtener una ventaja novedosa sobre el organismo natural.

ESTRUCTURA DE UN GEN
Los promotores pueden ser genricos o tejido especfico

Promotores Sitio de inicio de la Transcripcin Exones Intrones

Realzadores Sitio de terminacin de la Transcripcin

< 100 Kb

La actividad del gen depende de los FACTORES de TRANSCRIPCIN (FT) que activan las ARN pol. Los FT son: los Factores de Transcripcin General (se unen a secuencias promotoras genricas) y los Activadores de Transcripcin (se unen a secuencias promotoras especficas). Los FT pueden encenderse o apagarse en respuesta a estmulos del entorno del individuo. Entre los promotores de los genes que desarrollan la capacidad cerebral o talento de los individuos estn la alimentacin, la salud, el estmulo temprano con experiencias motivadoras (el juego), el amor.

METODOS PARA HACER INGENIERA GENTICA

1. Agrobacterium. Uso de la bacteria Como "Ingeniero Gentico". La bacteria conteniendo el inserto, infecta las clulas de la planta produciendo la recombinacin gentica. 2. Acelerador de Partculas (Gene Gun). Un can artificial bombardea micropartculas con el inserto, sobre la clula. 3. Electroporacin. Uso de carga elctrica para que el ADN atraviese la membrana nuclear. 4. Polietilenglicol. Exposicin de las membranas al PEG, facilita el movimiento de las molculas de ADN. 5. Silicon Wiskers. Inyeccin con fibras microscpicas, que atraviesan las membranas con los insertos.

TERAPIA GNICA ENSAYOS 2001

VECTOR ENSAYOS EJEMPLOS DE ENFERMEDADES SIENDO TRATADAS PRINCIPALMENTE DESORDENES NO GENTICOS

Retrovirus

157 Muchos cnceres, AIDS, Inmunodeficiencia combinada severa, artritis reumatoide, injertos vs enfermedades hospedero, esclersis mltiple, osteodisplasia, hemofilia 132 Muchos cnceres, enfermedad arterial perifrica, fibrosis cstica, enfermedad de Canavan 35 7 57 47 Muchos cnceres Cncer de prstata, fibrosis cstica, hemofilia B Muchos cnceres Muchos cnceres, enfermedad arterial perifrica, enfermedad arterial coronaria, neuropata periferica, fracturas seas expuestas Muchos cnceres Melanoma, sarcoma

Adenovirus Pox virus Adeno virus asociados Lipofeccin ADN desnudo

ARN de transferencia Gene gun

5 4

MODIFICACIONES GENETICAS EN ANIMALES

Cerdos para Xenotransplantes: inactivacin del gen 1,3 galactosil transferasa, disminucin de la expresin del gen antiVCAM, y transferencia del gen humano de anticoagulacin. Produccin de protena C humana en leche de cerdos, para tratar desrdenes como hemofilia. Expresin de precursor de la hormona de crecimiento proteasa resitente en tejido de msculo de cerdo. Secresin de hormonas de crecimiento humano en tejido seminal de cerdo. Produccin de lisostafina en glandulas mamarias de ratones que previene mastitis por S. aureus.

TERAPIA GNICA
Rafael Valdes del Hospital de Nios de Mxico Implant clulas de cerdo en 12 adolescentes en procura de curar su diabetes. En su mtodo, us clulas especializadas para proteger el transplante de los sistemas inmunolgicos de los pacientes hospederos, que nunca haba sido ensayado en humanos. Los implantes en los pacientes constan de clulas pancreticas de cerdo, las cuales producen insulina (hay 150 millones de diabticos en el mundo) . Para prevenir el rechazo del transplante implant clulas de Sertoli (de testculo de cerdo) que han mostrado que protegen a los tejidos transplantados del sistema inmune recipiente en algunos modelos animales. Uno de los pacientes ha dejado de inyectarse insulina y cinco otros estn tomando menos insulina que antes. Los resultados han llegado sin usar medicamentos Inmunosupresores, los cuales tienen que ser dados por el resto de sus vidas a recipientes de transplantes (Nature/Vol. 419/5 sept. 2002).