Presentacion Clase BVI 3-4-5-6 ENZIMAS

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE NICARAGUA-LEON
CENTRO UNIVERSITARIO REGIONAL-JINOTEGA

BIOQUIMICA VETERINARIA I
Lic. Francisco J. Martnez Cubillo
UNAN-LEON
CUR-JINOTEGA

CLASE N 3
UNIDAD: II, ENZIMAS
TEMA: GENERALIDADES, DEFINICIONES,
CLASIFICACION, PROPIEDADES,
NATURALEZA QUIMICA.
ENZIMAS
Las enzimas son protenas
Catalizan reacciones qumicas necesarias
para la sobrevivencia celular
Sin las enzimas los procesos biolgicos
seran tan lentos que las clulas no podran
existir.
Las enzimas pueden actuar dentro de la
clula , fuera de sta, y en el tubo de ensayo.
E + S ESEP E + P
E
E E E
SUSTRATO
Un Sustrato es una molcula sobre la que
acta una enzima, que catalizan reacciones
qumicas, que involucran al sustrato o los
sustratos. El sustrato se une al sitio activo de
la enzima, y se forma un complejo enzima-
sustrato. El sustrato por accin de la enzima
es transformado en producto y es liberado del
sitio activo, quedando libre para recibir otro
sustrato.

Enzima - Catalizador
Tanto la enzima como el catalizador
aceleran la velocidad de una reaccin
qumica.
Una enzima puede transformar 1000
molculas de sustrato/ segundo
Las enzimas tienen 3 propiedades que los
catalizadores NO tienen
Especificidad por el sustrato
Se inactivan por desnaturacin
Pueden ser reguladas

ALGUNOS RANGOS DE ACELERACION
PRODUCIDOS POR ENZIMAS
Clasificacin y
nomenclatura de enzimas

EC 2.7.1.1
Nmero Enzyme Commission:
Enzyme
Comission
Grupo
Subgrupo
Nombre comn (sustrato+asa): Hexokinasa
Clasificacin y nomenclatura
ATP: hexosa fosfotransferasa
Nombre sistemtico:
Donador Aceptor
Grupo transferido
Tipo de reaccin catalizada
Grupos
qumicos
Enzimas
EC 1.x Oxidorreductasas
EC 2.x Transferasas
EC 3.x Hidrolasas
EC 4.x Liasas
EC 5.x Isomerasas
EC 6.x Ligasas
Clasificacin de enzimas por Grupos
Grupo 1: Oxidorreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, en que tomos de
oxigeno hidrogeno son trasladados entre molculas:
En las reacciones redox, siempre tienen que estar presentes a
la vez el aceptor y el dador electrnico.
AH
2
+ B A + BH
2

A
red
+ B
ox
A
ox
+ B
red

Nombre: Dador:Aceptor oxidorreductasa
Nombre comn:
Glucosa oxidasa
|-D-Glucosa : O
2
1-oxidorreductasa
Dador Aceptor
EC 1.1.3.4
Nomenclatura del subgrupo en oxidorreductasas:
EC 1.1.x - Deshidrogenasas
EC 1.2.x - Oxidasas
EC 1.3.x - Peroxidasas
EC 1.4.x - Oxigenasas
EC 1.5.x - Hidroxilasas
EC 1.6.x - Reductasas
etc.
Aplicaciones: Ensayos de diagnostico clnico (glucosa oxidasa y colesterol oxidasa
Deslignificacin Bioblanqueamiento
A-X + B
A + B-X
Grupo 2: Transferasas
Catalizan reacciones de transferencia de tomos
grupo de tomos entre molculas:
Dador: Aceptor Grupo transferido - transferasa
ATP: D-Hexosa Fosfotransferasa
EC 2.7.1.1
Nombre comn: hexokinasa
Clasificacin de subgrupo de las transferasas:
EC 2.1.x - Grupos monocarbonados
EC 2.2.x - Grupos aldehido o ceto
EC 2.3.x - Aciltransferasas
EC 2.4.x - Glicosiltransferasas
EC 2.5.x - Alquil- o Ariltransferasas
EC 2.6.x - Grupos nitrogenados
EC 2.7.x - Grupos fosfato
EC 2.8.x - Grupos sulfato
EC 2.9.x - Grupos selenio
Grupo 2: Transferasas
Aplicaciones: Sntesis de oligosacridos
Grupo 3: Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrlisis y tambin su reverso. Son
las ms comunes en el dominio de la tecnologa enzimtica:
A-B + H
2
O A-OH + H-B
No se suelen utilizar nombres sistemticos en las
hidrolasas. Muchas de ellas conservan el nombre
Primitivo. Ejemplo: Quimosina EC 3.4.23.4.
Clasificacin de las hidrolasas:
3.1.-.- Esterasas (carboxilesterasas, fosfoesterasas, sulfoesterasas)
3.2.-.- Glicosidasas
3.3.-.- ter hidrolasas
3.4.-.- Pptido hidrolasas
3.5.-.- Acil anhdrido hidrolasas
etc.
Grupo 3: Hidrolasas
Aplicaciones: Lipasas Sntesis de tensioactivos
Proteasas Fabrico de quesos
Glicosidasas Clarificacin de jugos; liberacin de aromas en los
vinos; aplicaciones textiles
Caso particular Pptido hidrolasas: clasificacin comn (no
sistemtica)
I. Segn la situacin del enlace atacado:
- Exopeptidasas (extremos de la cadena) (Peptidasas)
- Endopeptidasas (interior de la cadena) (Proteinasas)
II. Segn el mecanismo cataltico:
- Serin proteinasas
- Tiol proteinasas
- Aspartil proteinasas
- Metaloproteinasas
Grupo 3: Hidrolasas
Grupo 4: Liasas
Catalizan reacciones reversibles de remocin de grupo de
tomos del sustrato (este grupo no incluye las hidrolasas):

A-B A + B
Ejemplo
Nombre sistemtico:
Histidina amonio-liasa (EC 4.3.1.3)

Nombre comn:
Histidasa
Clasificacin de las liasas:
4.1.x - Actan sobre enlaces C-C
4.2.x - Actan sobre enlaces C-O
4.3.x - Actan sobre enlaces C-N
4.4.x - Actan sobre enlaces C-S
4.5.x - Actan sobre enlaces C-Haluro (S
-
, Cl
-
, Br
-
, I
-
At
-
)
4.6.x - Actan sobre enlaces P-O
4.99.x - Otras liases
Aplicaciones: Pectato liasa Remueve los compuestos indeseables (ceras,
pectinas, protenas) en fibras en la industria textil bioscouring
Grupo 4: Liasas
Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacin moleculares
A B
Ejemplo:
Glucosa isomerasa (EC 5.3.1.5)
5.1.x - Rasemasas y Epimerasas
5.2.x - cis-Trans-Isomerasas
5.3.x - Oxidoreductasas Intramolecular
5.4.x - Transferasas Intramoleculares (mutases)
5.5.x - Liasas Intramoleculares
5.99.x - Otras Isomerasas
Grupo 5: Isomerasas
Clasificacin de las isomerasas:
Grupo 6: Ligasas
Catalizan la unin de dos grupos qumicos a expensas
de la hidrlisis de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.).
A + B + ATP A-B + ADP + P
i

Ejemplo: Glutationa sintasa (EC 6.2.2.3)

Nombre sistmico:
G-L-glutamilo-L-cisteina:glicina ligase

Grupo 6: Ligasas
Clasificacin de las ligasas:
6.1.x - Forman enlaces C-O
6.2.x - Forman enlaces C-S
6.3.x - Forman enlaces C-N
6.4.x - Forman enlaces C-C
6.5.x - Forman enlaces steres fosfricos
6.6.x - Actan sobre enlaces N-metal
MUCHAS GRACIAS

CONTINUA EN LA CLASE
N 4
La vida es muy peligrosa. No por las
personas que hacen el mal, sino por
las que se sientan a ver lo que pasa.

Albert Einstein
ACTIVIDAD GRUPAL
UNAN-LEON
CUR-JINOTEGA

CLASE N 4
UNIDAD: II, ENZIMAS
TEMA: NATURALEZA QUIMICA, EFECTO
SOBRE LA ENERGIA DE ACTIVACION
Las enzimas se unen a los reactivos
(sustratos) reduciendo la energa de
activacin

Cada enzima tiene una forma nica
con un sitio o centro activo en el que
se une al sustrato

Despus de la reaccin, enzimas y
productos se separan.

Las molculas enzimticas no han
cambiado despus de participar en la
reaccin

Las enzimas cumplen su papel cataltico gracias a:
Fijacin estereoqumicamente complementaria
del substrato
Transformacin cataltica del mismo

En ambas funciones participan:

Cadenas laterales de los aminocidos
Grupos o molculas no proteicas:
Grupos prostticos
Iones metlicos
Cofactores
Los siguientes hechos:
Especificidad de la reaccin enzimtica
Carcter heterogneo de la catlisis enzimtica

Nos llevan a postular la existencia de un Centro
Activo en la molcula de enzima, capaz de:

Fijar especficamente al substrato
Transformarlo catalticamente.

Complementariedad geomtrica
Complementariedad de cargas, uniones
inicas
Modelos:
Encaje inducido
Llave cerradura.
Estado de transicin
La unin del sustrato es muy
especfica
Enzima
Sitio activo
Sustrato
Teoras de la accin enzimtica, 1
Modelo de Llave y Cerradura (Emil Fischer)
Substrato y enzima se acoplan de forma estereospecfica,
de la misma manera que una llave se ajusta a su
cerradura.

Modelo aceptado durante mucho tiempo; hoy se
considera insuficiente al no explicar algunos fenmenos
de la inhibicin enzimtica
Modelo de Ajuste Inducido (Koshland)
Tanto la enzima como el substrato sufren una alteracin
en su estructura por el hecho fsico de la unin.

Est mucho ms de acuerdo con todos los datos
experimentales conocidos hasta el momento.
La teora del Ajuste Inducido se ampla en la actualidad
definiendo la accin enzimtica como
Estabilizacin del Estado de Transicin
Segn lo cual, el Centro Activo enzimtico es en realidad
complementario no al substrato o al producto, sino al
estado de transicin entre ambos.
Una enzima puede unir dos sustratos
en su sitio activo
La energa de activacin (Ea) en
qumica y biologa es la energa que
necesita un sistema antes de poder
iniciar un determinado proceso.
La energa de activacin suele
utilizarse para denominar la energa
mnima necesaria para que se
produzca una reaccin qumica dada.
Para que ocurra una reaccin entre dos
molculas, stas deben colisionar en la
orientacin correcta y poseer una cantidad
de energa mnima. A medida que las
molculas se aproximan, sus nubes de
electrones se repelen. Esto requiere energa
(energa de activacin) y proviene del calor
del sistema, es decir de la energa
traslacional, vibracional, etctera de
cada molcula.
ENERGIA DE ACTIVACION
Si la energa es suficiente, se vence la
repulsin y las molculas se aproximan lo
suficiente para que se produzca una
reordenacin de los enlaces de las molculas.
La ecuacin de Arrhenius proporciona la base
cuantitativa de la relacin entre la energa de
activacin y la velocidad a la que se produce
la reaccin. El estudio de las velocidades de
reaccin se denomina Cintica qumica.
ENERGIA DE ACTIVACION
La enzima disminuye la energa de
activacin
Tiempo de la reaccin
E + S
E + P
Sin enzima
Con enzima
La Ea de la hidrlisis de la urea
baja de 30 a 11 kcal/mol con la
accin de las enzimas, acelerando
la reaccin 10
14
x
El aumento de temperatura
necesario para producir la reaccin
no catalizada seria de 529C
Una de las principales caractersticas de las enzimas
es su alta especificidad. Las enzimas son especificas
para:
a) el substrato
b) la reaccin

Ello significa que las enzimas pueden catalizar la
transformacin de apenas un substrato o una
familia de substratos relacionados
estructuralmente, catalizando solo una de las
posibles reacciones que ese substrato puede
experimentar.

ESPECIFICIDAD ENZIMATICA
Cuando la enzima solo puede actuar sobre
un tipo de substrato, se dice que la enzima
muestra especificidad absoluta para el
substrato. Ese es el caso de la
deshidrogenasa succinica, que es
especifica para el succinato, o la L-
glutamico deshidrogenasa, especifica para
el glutamato.
Si la enzima puede actuar sobre substratos
con estructuras muy similares, se dice que la
enzima muestra especificidad relativa para
el substrato. La L-aminoacido oxidasa, por
ejemplo, puede catalizar la oxidacion de
diferentes aminoacidos de la serie L.
La especificidad de accin consiste en
que la enzima solo cataliza una de las
posibles reacciones que puede seguir un
substrato.

En el caso del glutamato, por ejemplo, que
puede experimentar diferentes
transformaciones, se requiere una enzima
diferente para cada una de esas
transformaciones.
Glutamato a:

Glutamina (Fijacion de amoniaco) : Glutamina sintetasa
GABA (Descarboxilacion): Glutamato Descarboxilasa
Alfacetoglutarato: Glutamato Deshidrogenasa

La especificidad de las enzimas depende
de las caractersticas del sitio o centro
activo. Esta es la regin de la enzima
donde esta se une al substrato antes de
que ocurran las transformaciones del
substrato.
MUCHAS GRACIAS

N 5
La grandeza e infinita sabidura del Creador la
reconocer realmente slo el que se esfuerce por
extraer sus ideas del gran libro que llamamos
naturaleza.

J. barn VON LIEBIG (qumico y fisilogo Alemn)
UNAN-LEON
CUR-JINOTEGA

CLASE N 5
UNIDAD: II, ENZIMAS
TEMA: CINETICA ENZIMATICA,
Cintica Enzimtica
Cintica Enzimtica
La cintica enzimtica es el anlisis cuantitativo del efecto
de cada uno de los factores que intervienen en la actividad
enzimtica, que se evala a travs de la velocidad de la
reaccin catalizada.
Las variables ms importantes son:
Concentracin de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
pH
Temperatura
Ella est basada en la medicin de la velocidad de reaccin. As en la reaccin:

Se tendr:

Como se observa en la figura, la velocidad de reaccin (pendiente) disminuye
continuamente a partir de un valor mximo inicial. Esto se puede deber a:
Desaturacin de la enzima con sustrato, por disminucin de la
concentracin del sustrato
Inactivacin de la enzima por su inherente inestabilidad
Inhibicin por el producto
Desplazamiento del equilibrio, si la reaccin es reversible
dt
ds
dt
dp
v = =
E
S P
Baja
concentracin
de sustrato
ALTA
concentracin
de sustrato
SATURACION
v
[s]
Efecto de la concentracin de substrato
.
.
.
.
.
. .
.
dt
t
s
p
[ ]
Concepto de velocidad inicial
d[P]
v =
, t 0
E + S
ES E + P
k
+1

k
-1

k
+2

Una cintica hiperblica implica un proceso saturante:
Hay un nmero limitado de sitios en la enzima
para fijar substrato; una vez que estn ocupados
todos, por mucho que aumente la concentracin
de substrato, la velocidad permanecer constante
tendiendo a un valor asinttico
El sistema de ecuaciones diferenciales que describe la dinmica
del sistema
E + S
ES E + P
k
+1

k
-1

k
+2

Sistema No admite solucin analtica.

- Simulaciones numricas
- Hiptesis que lo simplifiquen
Hiptesis de Michaelis - Menten
E + S
ES E + P
k
+1

k
-1

k
+2

- La primera parte del mecanismo,
E + S
ES
k
+1

k
-1

Tiene lugar mucho ms rpidamente que la segunda:
ES E + P
k
+2

| || |
| |
( )
K
E S
ES
es
x
e x s
x
m
= = =

0
x
e s
K s
m
=
+
0
v
k e s
K s
m
=
+
+2 0
k e V
+
=
2 0 max
v
V s
K s
m
=
+
max
Hiptesis de
Michaelis-Menten
Equilibrio rpido
v k x =
+2
Hiptesis de estado estacionario
Segn veamos en la simulacin numrica, hay un tiempo
relativamente prolongado en el curso de la reaccin en el
que la variacin de complejo [ES] es prcticamente igual
a cero:
dx/dt = k
+1
es - (k
-1
+ k
+2
) x = 0
A partir de esta expresin podemos llegar a obtener una
expresin que nos da la velocidad para la concentracin
de substrato
( )
dx
dt
k es k k x = = +
+ +
0
1 1 2
( ) ( ) k es k e x s k k x
+ + +
= = +
1 1 0 1 2
x
e s
k k
k
s
e s
K s
m
=
+
+
=
+
+
+
0
1 2
1
0
v
V s
K s
m
=
+
max
v k x =
+2
k e V
+
=
2 0 max
Hiptesis de
estado estacionario
A partir de las suposiciones de Michaelis-Menten y
Estado estacionario, llegamos a la ecuacin
K
m
+ s
v =
V
max *
s
La nica diferencia radica en el significado de K
m
:

K
m
= k
-1
/k
+1
en mecanismo de M.M.

K
m
= (k
-1
+ k
+2
)/k
+1
en mecanismo de E.E.
Significado de la constante K
m

1. Constante de equilibrio de disociacin del complejo ES
(en condiciones de equilibrio rpido)

2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato
(en condiciones de equilibrio rpido)

3. Mide la funcin de fijacin (en cond.de equilibrio rpido)

4. Concentracin de substrato para la que la velocidad se hace
igual a la mitad de la mxima (s
0.5
)

5. Se define para una pareja enzima-substrato

6. Se mide en unidades de concentracin
Significado de la constante V
max
= k
+2
e
0

1. Velocidad asinttica para s

2. Directamente proporcional a la concentracin de
enzima (hoy se prefiere caracterizar a la enzima
por k
+2
)

3. Mide funcin de transformacin cataltica

4. Se expresa en unidades de velocidad
Relacin entre Km y Vmax
Michaelis y Menten
Concentracin de Sustrato [S]
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

l
a

r
e
a
c
c
i
n

(
v
)

Km
Vmax
Vmax/2
La Km es la concentracin de sustrato
donde se obtiene la mitad de la Vmax
Concentracin de Sustrato [S]
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

l
a

r
e
a
c
c
i
n

(
v
)

Km
Vmax
Vmax/2

A mayor Km, menor es la afinidad de la enzima por el sustrato
A menor Km mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato
VALORES DE Km PARA ALGUNAS ENZIMAS Y
SUSTRATOS
Representacin directa
s
0 20 40 60 80 100
v
0
20
40
60
80
100
K
m

V
max

v
V s
K s
mx
m
=
+
Representacin recproca doble
(Lineweaver - Burk)
1/s
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6
1/v
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
1 1 1
v
K
V s V
m
mx mx
= +
-1/K
m

1/V
max

Representacin Lineweaver-Burke
Representacin s -s/v
(Eadie - Hofstee)
s
-20 0 20 40 60 80 100 120
s/v
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
s
v V
s
K
V
mx
m
mx
= +
1
-K
m

Representacin Hanes
Representacin v/s - v
(Wong - Hanes)
v/s
0 2 4 6 8 10 12 14 16
v
0
20
40
60
80
100
v K
v
s
V
m mx
= +
V
max

Representacin de Eadie-Hofstee
Mtodos de linealizacin para determinacin
parmetros cinticos
Mtodo Eje Y Eje X Intercepto
Eje Y
Intercepto
Eje x
Pendiente
Lineweaver-
Burke
1/v 1/s 1/V -1/K K/V
Hanes s/v s K/V -K 1/V
Eadie-
Hofstee
v v/s V V/K -K
GUIA DE TRABAJO GRUPAL
MUCHAS GRACIAS

N 6
Un cientfico debe tomarse la libertad de
plantear cualquier cuestin, de dudar de
cualquier afirmacin, de corregir errores.

Julius Robert Oppenheimer
UNAN-LEON
CUR-JINOTEGA

CLASE N 6
UNIDAD: II, ENZIMAS
TEMA: CALCULO DE ACTIVIDAD
ENZIMATICA, FACTORES QUE AFECTAN
LA FUNCION ENZIMATICA, INHIBICION
ENZIMATICA
Definicin Actividad Enzimtica
Es el nmero de moles de sustrato que
reaccionan para formar producto, por mol de
enzima y por unidad de tiempo. Esto supone
que la enzima est plenamente saturada con
sustrato y por tanto que la reaccin se efecta
con su mxima rapidez
El ndice de recambio muestra la eficiencia
impresionante de la catlisis enzimtica

A fin de normalizar la medicin de la actividad, se ocupa el valor de
la velocidad inicial de reaccin, donde eses factores son
despreciables. As,

Esta velocidad inicial no se espera que sea observada en un proceso
enzimtico donde, debido a los elevados tiempos de operacin, es
razonable suponer que esos factores ejercern su influencia.
0 0
0

|
.
|
\
|
=
|
.
|
\
|
= =
t t
t
dt
ds
dt
dp
v a
Clculo de Actividad Enzimtica
La velocidad de reaccin catalizada por 0,1ml
de una dilucin 1:100 de Fosfatasa Alcalina es
0,3umoles / min. de producto. Cul es su
actividad enzimtica?
0,1ml-------- 0,3umoles producto / min.
1,0ml------------3,0umoles producto / min.
dil 1:100-------------300umoles producto / min.
Respuesta: 300U/ml
Nmero o ndice de Recambio
Es til definir una constante de velocidad ms
general, k
cat
, para describir la velocidad
limitante de cualquier reaccin enzimtica a
saturacin
k
cat
x E
t
= V
mx

V
0
= k
cat
x E
t
x [S] / K
M
+ [S];
K
cat
es una constante de velocidad de 1
er

orden con unidades de tiempo
-1
, tambin
llamada Nmero de Recambio
Efecto del pH en la ENZIMA
Cada enzima tiene un pH ptimo para su actividad
El pH afecta las interacciones inicas
1. Sobre la fijacin del substrato al centro activo:
- Grupos disociables de la enzima
- Grupos disociables del substrato

2. Sobre la transformacin cataltica del substrato

3. Sobre la estructura de la protena enzimtica
Efecto del pH
En el efecto de la temperatura hay dos componentes:
1. Aceleracin de la reaccin segn la ecuacin
de Arrhenius

k = A exp (-E
a
/RT)

2. Desnaturalizacin trmica de la protena
Efecto de la temperatura en la ENZIMA
Cada enzima tiene una temperatura ptima.
Temperatura
15 40 75
Aumento de la
velocidad
Desnaturacin
por calor
ORGANISMOS TERMFILOS
Son organismos que viven a altas t y realizan
sus reacciones enzimticas a estas altas t
Ejemplos son los que viven en las aguas
termales
Es tema de investigacin el aislamiento de las
enzimas de estos organismos para desarrollar
procesos industriales en condiciones ms
extremas
Coenzimas
Las coenzimas son pequeas molculas
orgnicas, que se unen a la enzima.
Las coenzimas colaboran en la reaccin
enzimtica recibiendo transitoriamente
algn grupo qumico: H
+
, OH, CH
3
.
La enzima sin la coenzima recibe el nombre
de APOENZIMA
El NAD es una coenzima aceptora de H
Sustrato
oxidado
Algunas enzimas requieren metales para
mejorar su actividad
ALGUNOS ELEMENTOS INORGANICOS USADOS
COMO COFACTOR PARA ENZIMAS
Isoenzimas o Isozimas
Son formas moleculares diferentes de una
misma enzima
Catalizan la misma reaccin
Ejemplo: Lactato deshidrogenasa
Lactato + NAD ==== Piruvato + NADH
M
4
, M
3
H
1
, M
2
H
2
, M
1
H
3
y H
4

Se diferencian por su movilidad electrofortica
Usadas en clnica: sueros normales y sueros
con alguna patologa
As esta actividad corresponde al mximo potencial
cataltico que las enzimas poseen para un determinado
conjunto de condiciones ambientales. Luego, estas
deben ser consideradas en las expresiones matemticas
representativas del proceso enzimtico.
Existen situaciones (sustratos heterogneos) donde la
velocidad inicial de reaccin no es representativa del real
potencial cataltico de la enzima.
Se asume que la velocidad inicial de reaccin es
proporcional a la concentracin de protena enzimtica.
Inhibicin enzimtica

Inhibidor:

Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).

Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica

De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:

I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo

II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.
Inhibicin enzimtica
isostrica
Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:
1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,
con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E + I EI
2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:
E + I
E
ES + I
ESI
Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo
haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin
cataltica: Inhibicin No Competitiva

(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-substrato
una vez formado, impidiendo la accin cataltica; este tipo
se conoce como Inhibicin Anticompetitiva
Inhibicin Competitiva
Inhibidores Competitivos
Compiten con el sustrato por el sitio
activo de la enzima
Se une solo a la enzima libre
V
mx
no se altera y K
M
cambia
Inhibicin competitiva
Al aumentar la cantidad
de SUSTRATO el
inhibidor competitivo es
desplazado y se forma
producto
E
ES
EI
I
S
E + P
Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato
Se define una constante de
equilibrio de disociacin del
inhibidor:
K
i
=
[E] [I]
[EI]
En condiciones de equilibrio rpido, llamando y a la concentracin
del complejo EI, para la inhibicin competitiva obtenemos el siste-
ma de ecuaciones
v
V s
K
i
K
s
mx
m
i
=
+
|
\
|
.
| + 1
K
e x y s
x
K
e x y i
y
m
i
=

=

( )
( )
0
0
Que resuelto para x nos da
x
e s
K
i
K
s
m
i
=
+
|
\
|
.
| +
0
1
De donde
Por tanto, en la inhibicin competitiva,
1. El efecto cintico del inhibidor es el aumento aparente de la
K
m
, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/K
i
)

2. La V
max
no aparece modificada; para concentraciones muy
altas del substrato, v = V
max
, igual que en ausencia de inhibidor

3. Cuanto ms pequeo sea el valor de K
i
mayor ser la potencia
del inhibidor competitivo.
Km
Sin
inhibidor
Km
con
inhibidor
Sin inhibidor
Con inhibidor
El inhibidor competitivo
aumenta la Km
1/s
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
1/v
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
-1/K
m

-1/(K
m
(1 + i/K
i
))
1/V
max

Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble
Ejemplo Inhibidor Competitivo
cido succnico + FAD == cido
fumrico + FADH
2

El inhibidor competitivo es el cido
malnico
Es un anlogo estructuralmente
parecido al cido succnico
cido Flico y Sulfanilamida
La sulfanilamida es un anlogo estructural
del cido p - aminobenzoico (PABA)
PABA es el punto de partida para la sntesis
de cido flico en las bacterias
El cido flico es una vitamina esencial para
la proliferacin (divisin) bacteriana
Sulfanilamida se usa en el tratamiento
algunas infecciones
Metotrexato y Dihidrofolato
El cido flico en sus formas de dihidro y
tetrahidrofolato es coenzima de la reaccin
catalizada por la dihidrofolato reductasa
Esta reaccin es parte del metabolismo de
los nucletidos para la sntesis de DNA
Metotrexato se usa en la terapia de algunos
cnceres, inhibiendo la sntesis de DNA
Inhibidor competitivo
su estructura es similar a la del sustrato
No se forma producto
Inhibicin No Competitiva
Inhibidor No Competitivo
Se une a un lugar diferente del sitio
activo la enzima
Se une a la enzima libre y tambin al
complejo enzima-sustrato
Por accin del inhibidor disminuye la V
m

pero el valor de K
m
no se altera
Inhibicin NO competitiva
Inhibidor NO competitivo
El inhibidor NO competitivo se une a la enzima en un
sitio diferente del sitio activo
E ES
EI
I
S
E + P
I
ESI
S
Inhibicin
No Competitiva
El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E
y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos
Inhibicin
Anticompetitiva o
Incompetitiva
Inhibidor Incompetitivo
En este tipo de inhibicin el inhibidor se enlaza al centro
activo pero solo despus de que el sustrato lo haya hecho y,
por tanto, inhibidor y sustrato no compiten. De esta manera,
aunque todo el sustrato est saturando la enzima y toda la
enzima est como complejo ES, el inhibidor puede
enlazarse produciendo un complejo inactivo ESI.

Como I solo se une a ES estimula la formacin de ES y, por
tanto, incrementa la unin del sustrato a la enzima,
disminuyendo Km . Sin embargo, el complejo ESI no
conduce a productos y Vm disminuye.
Inhibidor Incompetitivo
Se une a un lugar diferente del sitio
activo de la enzima
Se une slo al complejo enzima-sustrato
Los efectos que tiene: disminuye el valor
de K
m
y tambin el de V
mx

E ES
S
E + P
I
ESI
Inhibicin
Anticompetitiva
El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES;
el complejo ESI no es productivo
Modelo Kap Vap
Inh comp Km(1+i/Ki) Vm
Inh no comp total Km Vm/(1+i/Ki)
Inh anticomp Km/(1+i/Ki)

Vm/(1+i/Ki)
Determinacin de parmetros cinticos de
inhibicin
Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente

- Su accin no se describe por una constante de equilibrio K
i
,
sino por una constante de velocidad k
i
:
E + I E
- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.
Inhibidores Irreversibles
Producen inactivacin permanente de la
actividad enzimtica
Se interfiere con el normal desarrollo de
una reaccin o va metablica
Ejemplos: p-cloromercuribenzoato,
yodoacetato, diisopropilfluorfosfato
Algunos tipos de inhibidores irreversibles
1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos

3. Ligandos de metales

4. Metales pesados
Inhibicin enzimtica
alosterica
Enzimas Alostricas
Son enzimas cuya estructura proteica est formada
de varias subunidades
No se rigen por la cintica de M - M
Adems del sitio o centro activo tienen sitios
alostricos o de regulacin
Sitio activo/sustratos;
Sitio alostrico/moduladores o reguladores
La relacin entre la velocidad de reaccin y la
concentracin de sustrato sigue cintica sigmodea
Enzimas alostricas
Las enzimas alostricas
presentan estructura
cuaternaria.
Tienen diferentes sitios
activos, unen mas de una
molcula de sustrato
La unin del sustrato es
cooperativa
la curva de velocidad
presenta una forma
sigmoidal
Concepto de Cooperatividad
La unin de los sustratos al sitio activo de
una subunidad produce un cambio
conformacional que por contacto fsico se
transmite a las subunidades vecinas,
facilitando las interacciones
Modelos de unin: secuencial y concertado
Ejemplos: unin Hb-O
2
, enzimas alostricas
y sus sustratos
Moduladores Alostricos
Tambin reciben el nombre de efectores
y pueden ser positivos o negativos
Se unen al sitio alostrico que puede
estar en la misma subunidad que tiene
al sitio activo o en las subunidades
regulatorias
Su unin produce un cambio
conformacional que afecta al sitio activo

Aspartato Transcarbamilasa
c L-asp + Carbamil-P === Carbamil-
asp + Pi . Primera reaccin en la sntesis
de pirimidinas
Efector positivo: CTP
Efector negativo: ATP
Tiene dos subunidades catalticas para
los sustratos y tres subunidades
regulatorias para los efectores
RESUMEN
Las enzimas son protenas que catalizan
las reacciones biolgicas
Presentan especificidad por su sustrato
Cada enzima presenta dos parmetros
importantes Vmax (saturacin de la
enzima) y la Km (medida de la afinidad
por el sustrato)

RESUMEN
La actividad enzimtica puede ser
inhibida, por inhibidores competitivos
(similares al sustrato) o por inhibidores
no competitivos.
La temperatura y el pH afectan a la
enzima en su actividad cataltica.
Algunas enzimas requieren de
coenzimas y/o cofactores para su
actividad.
GUIA DE TRABAJO GRUPAL
MUCHAS GRACIAS

N 7
Un cientfico debe tomarse la libertad
de plantear cualquier cuestin, de
dudar de cualquier afirmacin, de
corregir errores.

Julius Robert Oppenheimer

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