COPROCULTIVO

INT. T.M. FELIPE ROMERO CHIRI

INTRODUCCCION
La porcin inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal amplia, por lo que los agentes infecciosos causales de diarrea por diversos mecanismos y que pueden ser ubicados en diversos grupos de microorganismos

La mayor parte de estos microorganismos en el adulto en equilibrio, son anaerobio (90%) y son bifidobacterias y bacteroides; el resto esta constituida por germenes aerobios (colibacterias, enterococos y lactobacilos) que representan hasta el 9%, hasta que el restante 1% esta constituido por clostridios, estafilococos y algunas especies de hongo.

Las principales causas de trastornos gastrointestinales agudos incluyen: Toxinas (de: Estafilococos, Escherichia coli ), Bacilos entricos gram negativos invasores, Fermentadores lentos de la lactosa, Shigella, y la Salmonella.

 EL COPROCULTIVO : Es un prueba diagnostica que por medio del cultivo nos permite la informacin del origen de la causa de las gastroenteritis y tambin nos dan una idea de cual es el tratamiento mas optimo e idneo para el caso

Recoleccin de la muestra
La muestra del coprocultivo ser tomada en un vaso especial para recolectar muestra, es un frasco de boca ancha que debe de estar estril. Las muestras de heces para estudio bacteriolgico deben obtenerse en la etapa aguda de la enfermedad, antes de administrar antimicrobianos y deben ser transportadas con prontitud al laboratorio.

Tamao de la muestra
Heces Pastosas formadas: El tamao de un nuez ( 1-2gr) Heces Liquidas: volumen de 5-10 ml

Preservacin
El lquido o solucin conservadora se prepara de la siguiente manera: NaCl 4.2 g K2HPO4 3.1 g KH2PO4 1.0 g Glicerol 300 ml H2O 700 ml Aade rojo fenol Se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1 ml de este liquido

Transporte
Puede utilizar el medio de transporte Stuar o Cary Blair

Medio semislido, no nutritivo. tioglicolato de sodio, azul de metileno,

 Si la muestra no se enva en forma inmediata se debe refrigerar.4 C Si se va a procesar en el plazo de 1 o 2 horas despus de su emisin, no necesitan medio de transporte. Mientras tanto mantener refrigerada las muestras, para evitar el sobrecrecimiento de la flora normal que puede enmascarar o destruir a los enteropatgenos.

Reaccin Inflamatoria
Dentro de las pruebas de laboratorio recomendadas para abordar la enfermedad diarreica, se encuentra en primer lugar la citologa del moco fecal, la cual nos permite diferenciar la etiologa de una infeccin viral o bacteriana. Un reporte de ms de 10 leucocitos por campo orienta a una etiologa infecciosa: > MN: etiologa viral, > PMN: etiologa bacteriana.

Medios de Cultivo
Para facilitar el aislamiento de bacterias entricas patgenas se utilizan : Medios de enriquecimiento Medios selectivos.

Medios de enriquecimiento
Caldo con tetrationato (Mueller y Kauffmann). Contiene tiosulfato de sodio, sales biliares y yodo-iodurada, Salmonella Caldo con selenito (Leifson). Posee selenito, cido de sodio permite el rpido desarrollo de salmonelas y shigellas. Agua Peptonada Alcalina La viabilidad de los vibrios se mantiene intacta a pH alcalino

Medios Selectivos
Peptona Sales Biliares

Agar MacConkey

Cristal Violeta
Lactosa

Permite diferenciar las bacterias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras Sel-Dif

Citrato Fe, Tiosulfato Na Sales biliares

S.S agar

Verde brrillante Rojo Neutro Lactosa

Shigella y Salmonella lactosa neg, aparecen como colonias lisas, transparentes a opacas

Permite aislar a las bacterias del gnero de las salmonellas y shiguellas

xilosa, Lactosa sacarosa

lisina

Shiiguella: Rojas

Xilosa, Lisina, Desoxicolato

XLD agar

tiosufalto de sodio y citrato frrico amonio Desoxicolato de sodio Rojo Fenol

Salmonellas: Negras prod SH2 y rojas sin SH2

Permite aislar a las bacterias del gnero de las salmonellas y shiguellas

Inhib GP y coliformes alcalinizan el medio

Tiosulfato Na

Citrato Na
TCBS Agar

Bilis Sacarosa ClNa Cit ferrico

H2S Crecimiento

Permite aislar al gnero de los vibrios

la sacarosa es fermentada por los vibrios que dan colonias de tamao mediano, lisas, opacas, de color amarillo

MICROORGANISMOS PATGENOS CAUSANTES DE ENFERMEDADES ENTRICAS

SALMONELLA
MORFOLOGIA Bacilo Gram negativo. No forma esporas Mviles (flagelos pertricos). CARACT. COLONIAS: Catalasa positivos. Agar Mac Conkey las colonias son lactosa Oxidasa negativos. Transparente o incoloras 2-3 mm
Colonizan el intestino delg

CARACTERSTICAS NUTRICIONALES: No exigente. Fermenta Glucosa, maltosa y manitol Lactosa y sacarosa neg. Es aerobio anaerobio facultativo

Agar SS: colonias incoloras 1-2 mm, colonias con centro obscuro Agar XLD: color rojo con el centro negro debido a la produccin de H2S

Transmisin: alimentos de origen animal contaminados

La infeccin se localiza en el leon y colon

Epidemiologicamente :Las que infectan slo al hombre: S Typhi, S Partyphi A y S Partyphi C y que se transmiten en forma directa indirecta de una persona a otra

El aislamiento de salmonelas se puede realizar en medios poco selectivos como el agar MacConkey o en medios de cultivo con selectividad media como el agar S-S o agar Hektoen..
Los coprocultivos son positivos en aproximadamente la mitad de los casos durante la primera semana con fiebre, pero el mayor nmero de cultivos positivos se obtiene en la segunda y tercera semanas de la enfermedad

La identificacin bioqumica se debe complementar con la aglutinacin mediante antisueros polivalentes.

Positiva con antisuero Vi = S. Typhi Positiva con antisuero D = suspechoso de S. Typhi* No positiva con antisueros Vi o D = negativa

Tratamiento: Las quinolonas: Ciprofloxacina. Sulfametoxazol-trimetoprim. cefalosporinas de 3a generacin, ceftriaxona El cloramfenicol,

Bioqumica Diferencial Salmonella

TSI +K/A -, + LIA +K/K SH2 CITRATO + UREA SIM MOVILIDAD + INDOL H2S

SHIGUELLA
MORFOLOGIA BGN. Miden 0.7 m x 3 m No forma esporas No Mviles Catalasa positivos. Oxidasa negativos.
CARACTERSTICAS NUTRICIONALES: No exigente. Fermenta Glucosa, acido sin gas. Lactosa -Es aerobio anaerobio facultativo CARACT. COLONIAS: Agar Mac Conkey las colonias son lactosa Convexas incoloras 2-3 mm Agar SS: colonias incoloras Agar XLD: son transparentes 1-2 mm
Transmisin : alimentos contaminados

Cuatro especies y cada especie varios serotipos: Shigella dysenteriae (serogrupo A, 13 serotipos), Shigella flexneri (serogrupo B, 6 serotipos), Shigella boydii (serogrupo C, 18 serotipos) y Shigella sonnei (serogrupo D, 1 serotipo).

Ocasionan una diarrea disentrica por invasin de las clulas del colon. Los cultivos deben realizarse con muestras de las partes fecales con moco, pus o sangre. S. dysenteriae Y flexneri es el aislamiento ms comn en muchas partes del mundo, pero S. sonnei predomina en Amrica del Norte y en Europa. Identificacin serolgica
Antisuero monovalente A1
Antisuero polivalente B
.[

(Si aglutinacin + = S. dysenteriae 1)

(Si aglutinacin + = S. flexneri (Si aglutinacin + = S. sonnei)

Antisuero polivalente D

Debido a los elevados niveles de resistencia a la ampicilina y al trimetoprim-sulfametoxazol observados en los ltimos aos se ha sugerido como alternativa el tratamiento con: Fluoroquinolona : cido nalidxico, ciprofloxacina, norfloxacina, ofloxacina como tto 1 linea Cefalosporina de 3 generacin. ceftriaxona, pivmecilinam. Macrolidos: azitromicina

Diferencial de Shiguella
TSI K /A -- , -LIA K / A -CITRATO -UREA -SIM S -I -+ M --

E. Coli
MORFOLOGIA Bacilo Gram negativo.

tienen forma de barra o baston, poseen flagelos y pili.

No forma esporas Mviles (flagelos pertricos). Catalasa positivos. Oxidasa negativos. Reducen nitratos a nitritos. Producen vitamina B y K.

CARACTERSTICAS NUTRICIONALES: No exigente. Fermenta glucosa y lactosa con produccin de gas. Es anaerobio facultativo CARACT. COLONIAS: Agar Mac Conkey las colonias son rojas con halo turbio SS: colonias de color rosa a rojo XLD: grandes, amarillas con o sin precipitado de bilis

adherencia difusa (DAEC

Afecta: mucosa intestinal Diarrea secretora, fiebre

8-12 dia/ 4 dias diarrea del viajero 108 UFC Evacuaciones escasas Moco, sangre dolor, fiebre Diarrea inicio brusco, dolor Seguida hemorragia serotipo O157:H7 Paises en desarrollo Sindrome uremico hemolitico

Afecta: mucosa colon

Diarrea secretora acuosa con moco y sangre fiebre baja

Para identificar a E. Coli como Enteropatogena se utiliza antisuero POLIVALENTE A, B y C

Para identificar a E. Coli como Entero invasiva se utiliza antisuero A Y Antisuero B

Para identificar a E. Coli como Entero Hemorragica se utiliza antisuero 157

Diferencial E.Coli
Resultados TSI A/A +,LIA K/A CITRATO -UREA --SIM S -I + M +

VIBRION SPP
MORFOLOGIA CARACTERSTICAS NUTRICIONALES: BGN. Ligeramente curvado Poco exigentes aerobios y anaerobios facultativos No forma esporas fermentan la sacarosa, lactosa + Mviles (flagelos pertricos). Catalasa positivos. CARACT. COLONIAS: Oxidasa positivos. Agar Mac Conkey de incoloras a rosa claras
Agar TCBS: colonias amarillas brillantes de 2 a 4 mm de dimetro, lisas, opacas,Pueden ser planas con centro elevado
Habitat: ambiente hdrico, marino y fluvial. El Vibrio cholerae presenta serogrupos toxignicos O1 u O139 Serogrupo O1 estn clasificados en dos biotipos: El Tor y el clsico dos serotipos (Inaba y Ogawa) con base en la aglutinacin con antisueros

 Gastroenteritis : tipo colrico o no colrico. La forma epidmica de clera, cursa con vmitos y diarrea lquida secretora muy abundante, con prdida rpida de agua y electrolitos que causa una profunda deshidratacin. De distribucin prcticamente mundial, su prevalencia es baja, al menos en pases desarrollados.
La mayor parte de las especies son sensibles a : Tetraciclinas: Doxiciclina

Fluoroquinolonas: Ciprofloxacino, Norfloxacino. Macrolidos: Eritromicina, Azitromicina

Trimetoprina-sulfametoxazol,

Diferencial Vibrio
TSI A/A -,LIA K/K -,CITRATO -UREA -SIM S - I -M +

GRACIAS