PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

Las respuestas inmunitarias contra la mayora de los antigenos inducen la produccin especifica de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este reconocimiento entre el antigeno anticuerpo o linfocito sienta las bases del diagnostico inmunolgico.

El estudio de las inmunoreacciones se realiza mediante el empleo de tcnicas inmunolgicas basadas en la deteccin de y evaluacin de la respuesta humoral ( anticuerpos y complemento) o de base celular (linfocitos T y fagocitos).

SEROLOGIA

La medicin de las interacciones AntigenoAnticuerpo con fines diagnsticos. Se realizan en 2 vas: Utilizacin de anticuerpos especficos para detectar el antigeno.(diagnostico directo) Utilizacin de antigenos especficos para detectar anticuerpos. (diagnostico indirecto)

La reaccin entre el Ag y el Ac es de naturaleza fsica y qumica. La fuerzas que los mantienen unidos, son de tipo no covalente, como la atraccin electrosttica, los puentes de hidrgeno y las fuerzas de Van der Waals y la exclusin del agua.

Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o intensidad de la unin, entre un sitio de unin del anticuerpo y un determinante antignico. Avidez: es la fuerza con la que el anticuerpo multivalente se une a un antgeno multivalente.

Especificidad; capacidad de los anticuerpos de distinguir y reaccionar con una estructura qumica entre muchas. Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona con otro antgeno, cuando este y el antgeno que estimulo la produccin del anticuerpo especifico comparten un epitopo idntico o muy similar.

REACTIVOS

Muestra: suero. Se debe obtener en forma asptica. No usar anticoagulante. Dejar coagular la sangre en forma inclinada. No refrigerar hasta que el coagulo se haya retrado. Transportar en refrigeracin. Almacenar el suero en congelacin.

VOLUMEN RECOMENDADO

La cantidad de sangre que se obtendr depende de la especie animal: Bovinos 10 ml. Equinos 10 ml. Cerdos 5 ml. Ovinos y caprinos 5 ml. Pollos 1 ml. Gallinas 2 ml. Perros y gatos 2 3 ml.

REACTIVOS

ANTIGENOS.
Constituidos por el microorganismo o parsito. Antigenos crudos: presentan el inconveniente de dar reacciones heteroespecificas. Antigenos puros. Antigenos altamente purificados: Anticuerpos monoclonales. Grmenes recombinantes.

1.

2. 3.

BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO

Se debe leer con detenimiento los instructivos de la pruebas. Los sueros deben estar en buenas condiciones no hemolisados. El suero debe agitarse suavemente, pues los anticuerpos sedimentan. Los antigenos debern conservarse en refrigeracin. Realizar controles de calidad a los antigenos, peridicamente. Monitorear la temperatura del laboratorio (18 26 grados centigrados)

BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO

El tiempo de incubacin debe controlarse con precisin. No se debe mantener los reactivos a temperatura ambiente mas de lo necesario. Manejar los materiales que se usaron como si fueran infecciosos. Utilizar controles positivos y negativos. No se debe hacer modificaciones al protocolo de la prueba recomendado.

CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS DE INMUNODIAGNOSTICO

Utilizar pequeas cantidades de reactivos. Sensibles y especificas. Estandarizada y validada. Reproducible.(nter laboratorios) Antigenos inactivados. Sencilla. Equipo y reactivos accesibles, econmicos.

CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

1.

Pruebas de unin primaria. Miden la cantidad de inmunocomplejos (unin antigeno-anticuerpo), utilizando radioistopos, colorantes fluorescentes o enzimas. Radioinmunoanalisis (RIA) ELISA Inmunofluorescencia.

Los anticuerpos o antgenos marcados reciben el nombre de conjugado. Los anticuerpos conjugados suelen ser monoclonales o antinmunoglobulinas especificas. Se les llama sistemas competitivos. Se establece competencia por los sitos de unin disponibles entre el reactivo conocido, (ag, o ac) aadido al ensayo a concentracin limitada, y el elemento a investigar.

Pruebas de union secundaria

Los complejos se agregan y originan fenmenos perceptibles visualmente. Son reacciones no reversibles. Dependen en gran medida del estado fsico del antigeno, de la temperatura, de los electrolitos presentes en la reaccin, de la afinidad y avidez en la interaccin antigenoanticuerpo, proporcin entre ambos, tipo de inmunoglobulina presente.

CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

2.

Pruebas de unin secundaria: La reaccin antigeno anticuerpo va seguida de una segunda reaccion. Si el antigeno es soluble la reaccin que se da es de precipitacin. Si el antigeno es particulado (suspensin) la reaccin es de aglutinacin.

Son de menor sensibilidad que las primarias, pero mas clsicas.

PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA

Aglutinacin: en placa, en tubo. Precipitacin: Inmunodifusion en agar, inmunoelectroforesis Hemoaglutinacin. Inhibicin de la hemoaglutinacin. Fijacin de complemento. Neutralizacin y Seroneutralizacion realizadas in vitro.

CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

Pruebas de unin terciaria. Evalan la capacidad de los anticuerpos de neutralizar la capacidad biolgica de un antigeno ( virus, toxinas). Identificacin de toxinas. Identificacin de virus Medir la actividad de un anticuerpo para neutralizar a un microorganismo. Pruebas de proteccin (anticuerpos)

Se basan en la medicin de las manifestaciones biolgicas que el sistema inmune desarrolla frente a un antgeno en el animal, incluyendo la evaluacin del efecto protector real de los anticuerpos o su capacidad de neutralizar la accin biolgica del antgeno.

OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA

Identificacin de problemas de salud. Determinacin de la distribucin de una enfermedad. Determinacin de la incidencia y prevalencia de una enfermedad. Evaluacin del sistema inmune del individuo o de una poblacin. Medicin de la inmunidad materna. Programacin de calendarios de vacunacin. Evaluacin de programas o campaas de vacunacin.