PROCESSOS

FERMENTATIVOS


NUTRIENTE + MICRORGANISMO PRODUTO + MICRORGANISMO
(inicial) (final)

Componentes do processo
fermentativo



microrganismo (X)
nutrientes (substratos) (S)
produtos (P)
CLASSIFICAO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS
QUANTO A PRESENA DE OXIGNIO:
- aerbio
- anaerbio
QUANTO AO SUPRIMENTO DE OXIGNIO:
- aerado
- no aerado
OBS:
- aerado s pode ser aerbio
- anaerbio e aerado: impossvel (efeito pasteur...)
- no aerados podem ser aerbios e anaerbios
- aerbio e no aerado: placa de petri



QUANTO AO MODO DE CULTIVO:
- submerso
- semi-slido: matriz slida insolvel, no h separao da
matriz do meio lquido.
QUANTO A MANEIRA DE CONDUO DO PROCESSO:
1) descontnuo, batelada, batch
2) contnuo
3) semi-contnuo


1) descontnuo, batelada, batch:
a maioria das indstrias usa este processo
Batelada simples: colocado todo o meio e aps a
fermentao retirado todo o meio fermentado
Batelada alimentada: colocado meio no
fermentado no fermentador durante o processo. A
vantagem que reduz a quantidade de inculo.
2) contnuo:
Vantagens:
- uniformidade do processo
- operao nas condies timas
- reduo de custos
- reduo de tempo, aumento produtividade
- reduo de capacidade instalada
- facilidade de controle do processo
- reduo de mo de obra



Desvantagens:
- manuteno da assepsia
- mutao


3) semi-contnuo:
Alimentaes intermitentes
Retirada de produto ao longo da fermentao,
adicionado substrato, quando a concentrao de produto
ou clula chegar a uma determinada concentrao.



QUANTO A FORMAO DE PRODUTO:
1) associado ao crescimento
2) parcialmente associado ao crescimento
3) no associado ao crescimento

FORNECEM O TEMPO IDEAL DE FERMENTAO
1) Produtos associados ao crescimento: as taxas especficas
de formao do produto e de crescimento celular so
proporcionais.
Metablitos primrios,
enzimas constitutivas,
etanol, algumas
vitaminas, aminocidos,
etc.
2) Formao de produto parcialmente associado ao
crescimento: sua formao no est diretamente ligada ao
caminho metablico produtor de energia.
Ex: Produo de cido
ltico, ctrico, etc.
3) Formao de produto no associado ao crescimento: no h
uma associao clara entre as velocidades que permita
estabelecer uma relao.
Produo de penicilina,
outros antibiticos,
toxinas microbianas,
etc.
1 Produo de antibitico; 2- consumo de acar;
3 consumo de oxignio; 4 crescimento do MO
ESTUDO CINTICO DE UM PROCESSO
FERMENTATIVO

Anlise da Evoluo dos Perfis de Concentrao dos
Componentes do Sistema de Cultivo em funo do Tempo de
Fermentao


s
s
X
X
P
P
tempo
c
o
n
c
e
n
t
r
a

o

QUAIS SO AS SUBSTNCIAS QUE DEVEM SER
ESCOLHIDAS PARA O ESTUDO CINTICO?
- PRODUTO DE INTERESSE ECONMICO
- SUBSTRATO LIMITANTE
O QUE SUBSTRATO LIMITANTE?
aquele que limita a formao de biomassa ou
produto, em outras palavras o substrato cuja
concentrao inicial (S
o
) que definir a concentrao
mxima (X
m
) da populao microbiana.

COMO OBTM-SE OS DADOS PARA FAZERMOS O
ESTUDO CINTICO DO PROCESSO FERMENTATIVO?
1) Escolher as variveis
2) Escolher os mtodos de medida
3) Inocular o meio e conservar o sistema em condies
favorveis
4) Retirar as amostras periodicamente e determinar
as concentraes de S, P e X.



DIFICULDADES:

- Identificar o substrato limitante

- Verificar quais compostos devem ser monitorados

- Estabelecer tcnicas confiveis de determinao das
concentraes de clulas, nutrientes e produtos


CURVA TPICA DE CRESCIMENTO CELULAR EM BATELADA
A B C D E
=
MAX
<
MAX
=0
<
MAX
=0 <
MAX
Tempo de Cultivo
L
o
g


(
n

m
e
r
o

c

l
u
l
a
s

v
i

v
e
i
s
/
m
l
)

F
A: fase de latncia ou lag
B: fase de acelerao
C: fase log ou exponencial


D: fase de desacelerao
E: fase estacionria
F: fase de declnio ou morte
celular

Fase lag:
- Rearranjo do sistema enzimtico (sntese de enzimas)
- No h variao da concentrao de biomassa no tempo,
portanto:


Fatores que afetam a durao da fase: baixa
concentrao de nutrientes; inculo com concentrao celular
reduzida (normalmente 5 a 10%); meio de cultura (meio do
inculo deve ser o mais prximo possvel do meio usado na
fermentao); inculo com idade avanada.


constante = = Xo X

S
S
1
S
2
X

X

tempo


Diauxia
Mltiplas lag-fases,
devido a existncia de
mltiplas fontes de carbono;
Mudana nas vias
metablicas para se adaptar
ao novo S;
A fonte de carbono de
mais fcil utilizao (S1)
reprime a sntese de enzimas
requeridas para o
metabolismo da fonte (S2).





http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/Biotech-Environ/GrowPresent/diauxie.htm
Fase log ou exponencial
- Clulas plenamente adaptadas;
- Velocidades de crescimento elevadas;
- Massa celular e o nmero de clulas aumentam
exponencialmente com o tempo;
- Consumo de substrato;
- Formao de metablitos primrios

Fase intermediria:

-Aumento gradativo da concentrao celular
o | 1 | 0 | X
o

o o | 2 | 1 | X
o
2
1
o o o o | 4 | 2 | X
o
2
2
o o o o o o o o | 8 | 3 | X
o
2
3

| | |
Diviso Celular |N de clulas| N de geraes |Generalizao
| | |X
o
: n inicial de clulas
Para N geraes temos:

X = Xo.2
N
(1)
Se:
t
g
= tempo de gerao
t = tempo de crescimento

Teremos :
(2)

Substituindo (1) em (2):

(3)
g
t
t
N =
g
t
t
2 X X
o
. =
Reorganizando a equao (3) e aplicando ln:

(4)

g
t
t
2
X
X
o
ln ln =
A equao (4) fica:

(5)

Se 0,693/t
g
for constante e como:

(6)

O tempo de gerao fica:

(7)




g o
t
t
0,693
X
X
ln =

0,693
t
g
=
0
X
X
t
1
ln =
Fase estacionria
- Trmino do substrato limitante;
- Acmulo de produtos txicos;
- Concentrao celular constante em seu valor mximo
Fase de reduo de velocidade:

- Estresse induzido pela exausto de um nutriente ou
pelo acmulo de resduos
Fase declnio ou morte celular
- Ocorre devido diminuio da concentrao de
nutrientes e do acmulo de produtos txicos;


VELOCIDADES INSTANTNEAS
Crescimento celular:
Consumo de substrato:
Formao de produto:

dt
dX
r
x
=
dt
dS
r
s
=
dt
dP
r
P
=
POUCO UTILIZADA

VELOCIDADES ESPECFICAS
As velocidades especficas so usadas pois a
concentrao celular pode sofrer variao considervel em
um pequeno intervalo de tempo.

Crescimento celular:
Consumo de substrato:
Formao de produto:

dt
dX
x
X
1
=
|
|
.
|

\
|
=
dt
dS
S
X
1

dt
dP
P
X
1
=
A B C D E
=
MAX
<
MAX
=0
<
MAX
=0 <
MAX
Tempo de Cultivo
L
o
g


(
n

m
e
r
o

c

l
u
l
a
s

v
i

v
e
i
s
/
m
l
)

F
- taxa especfica de crescimento celular:
dT
dX
x
X
1
=
CINTICA DE CRESCIMENTO MICROBIANO

max

max
tempo
log

estacionria lag

mx

Qual a diferena entre a fase log e a fase linear de
crescimento?


Na fase log a velocidade especfica de crescimento
celular constante, podemos determinar graficamente.

s
s
X
X
P
P
[ ]
tempo
Integrando:



LnX =
max
At + LnXo
= constante =
max
} }
= dt
d
max

X
X
constante =
1
=
dt
dX
X

Y = a . x + b

tempo
L
n

X

mx

Tempo de duplicao celular na fase Log
} }
= dt
X
dX
max
|
.
|

\
|
= to t
X
X
Ln max
0
0
2

Tempo de gerao=t
g
max
693 , 0

= g t
g t
X
X
Ln max
0
0
2
=
Na fase linear de crescimento a velocidade de
crescimento celular constante.
constante = =
dt
dX
X
r
} }
= dt r dx
X
X
f
= X
0
+ r
X
(t
f
t
0
)
FATORES DE CONVERSO, FATORES DE
RENDIMENTO OU COEFICIENTES DE RENDIMENTO
Relacionam o X, P e S para um determinado tempo de
fermentao. Variam de acordo com a fase do cultivo celular e
so definidos com base no consumo de um material:

Rendimento de clula
por nutriente:
Rendimento de clula
por produto:
Rendimento do
produto por nutriente:

S S
X - X
S
X
Y
0
0
X/S

=
A
A
=
0
0
X/P
P P
X - X
P
X
Y

=
A
A
=
S S
P - P
S
P
Y
0
0
P/S

=
A
A
=
PRODUTIVIDADE

Taxa na qual o produto ou a biomassa formada.

Volumtrica: g/L
meio
/h

Especfica: g/g
biomassa
/h



F
0 F
t
X X
P

=
X
0
= Biomassa inicial;
X
F
= Biomassa final;
T
F
= Tempo total de cultivo.
F
0 F
t
P P
P

=
P
0
= Produto inicial = 0;
P
F
= Produto final;
T
F
= Tempo total de cultivo.
Exemplo: Dados os resultados obtidos em um processo
fermentativo calcule os valores de Y
X/S
, Y
P/S
, Y
X/P
,
produtividade em clula, em produto, r
S
, r
p
, r
x
,
S
,
P
,
X.



tempo(h) X(g/L) S(g/L) P(g/L) tempo(h) X(g/L) S(g/L) P(g/L)
0 0,89 106,90 0,00 15 3,31 65,70 21,80
1 0,89 106,90 0,00 16 3,600 59,20 24,40
2 0,89 106,90 0,00 17 3,89 52,50 27,00
3 0,91 106,30 0,04 18 4,18 45,70 29,60
4 0,97 105,60 0,68 19 4,45 38,90 32,10
5 1,07 104,60 1,59 20 4,71 32,20 34,40
6 1,19 103,10 2,76 21 4,95 25,90 36,60
7 1,35 101,10 4,17 22 5,17 20,00 38,60
8 1,52 98,60 5,80 23 5,35 14,80 40,30
9 1,73 95,60 7,65 24 5,49 10,50 41,70
10 1,95 91,90 9,68 25 5,57 7,40 42,70
11 2,20 87,70 11,90 26 5,57 7,00 42,80
12 2,46 82,90 14,20 27 5,57 7,00 42,80
13 2,73 77,60 16,70 28 5,57 7,00 42,80
14 3,01 71,90 19,20
0
1
2
3
4
5
6
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28
Tempo (h)
X (g/L)
0
20
40
60
80
100
120
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28
Tempo (h)
S (g/L)
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28
Tempo (h)
P (g/L)
g/g 0,43
7 106,9
0,0 42,8
S
0
S
0
P - P
S
P
P/S
Y
g/g 11 , 0
0 , 0 8 , 42
89 , 0 57 , 5
0
P P
0
X - X
P
X
X/P
Y
g/g 0,048
7 106,9
0,89 5,57
S
0
S
0
X - X
S
X
X/S
Y
=

=
A
A
=
=

=
A
A
=
=

=
A
A
=
g/L/h 0,192
24
0,89 5,49
F
t
0
X
F
X
P
g/L/h 0,167
28
0,89 57 , 5
F
t
0
X
F
X
P
24
X
28
X
=

=
=

=
g/L/h 1,73
24
0,0 ,7 1 4
F
t
0
P
F
P
P
g/L/h 1,53
28
0,0 8 , 2 4
F
t
0
P
F
P
P
24
p
28
p
=

=
=