FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA

SEMINARIO: FOSFATASA ALCALINA

ASIGNATURA : BIOQUIMICA CLINICA I SEMESTRE : III DOCENTE : Lic. TM Robert Ochoa ALUMNOS : Pacheco Quispe, Boris William Maccapa Roque, Yessica Roxana Joyo Huayta, Cindy Anabel Galdo Segura, Jerson Benjamn
CUSCO PERU 2012

FOSFATASA ALCALINA
Las fosfatasas alcalinas (FA) son un grupo de enzimas situadas en la membrana celular que intervienen a diferentes niveles en situacin fisiolgica: Precipitacin del fosfato clcico en los huesos. Absorcin de fosfatos por el intestino. Sntesis de protenas hsticas e hidrlisis de los esteres fosfticos del rin y el hgado.

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En el suero humano existen las isoenzimas sea. Heptica. Intestinal. Placentaria. Renal. leucocitaria (fosfatasa alcalina granuloctica). Ser primordial localizar el origen de la hiperfosfatasemia para poder establecer el diagnstico diferencial, ya que puede ser el primer hallazgo de patologas graves.

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45% en adultos, 5% en nios y 60% en ancianos est inducida por una sntesis de novo en el hepatocito, vinculada al proceso hepatobiliar y su separacin de la membrana celular del hepatocito por medio de una fosfolipasa D, produce el aumento en circulacin. En los ductos biliares esta liberacin es llevada a cabo por complejos macromoleculares (lipoprotena X), que se detectan por electroforesis de las isoenzimas en los casos de colestasis (fraccin biliar).

ISOENZIMA HEPTICA (I Y II)

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45% en adultos, 85% en nios y 30% en ancianos en condiciones normales, alcanza su mayor actividad en los nios en edad de crecimiento (llegando a triplicar los niveles del adulto) debido a que esta isoenzima se localiza en los osteoblastos (relacionados con la calcificacin y formacin de estructuras seas). Se detecta en el suero de individuos con grupo sanguneo O y B tras una comida grasa.

ISOENZIMA SEA

ISOENZIMA INTESTINAL

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ISOENZIMA PLACENTARIA

el aumento que se produce al final del primer trimestre del embarazo, a expensas de la isoenzima placentaria, que en este perodo alcanza niveles mximos (aproximadamente el doble de los valores normales), mantenindose durante todo el embarazo y decayendo a partir del parto, encontrndose los valores basales alrededor de un mes post-parto.

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Valores normales de fosfatasas alcalinas en nuestro medio
1 da < 600 (U/l) 2-5 das < 553 (U/l) 6 das-6 meses < 1.076 (U/l) 7 meses-1 ao < 1.107 (U/l) 2-3 aos < 673 (U/l) 4-6 aos < 644 (U/l) 7-12 aos < 720 (U/l) 13-17 aos Mujer < 448 (U/l) Varn < 936 (U/l) 18 aos Mujer < 240 (U/l) Varn < 270 (U/l)

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El rango normal es de 44 a 147 UI/L (Unidades internacionales por litro).
En adultos En nios menores de 2 aos 40 a 140 U/L 85-235 U/L

En nios entre 2 y 8
aos En nios entre 9 y 15 aos En adolescentes entre

65-120 U/L
60- 300 U/L 30- 200 U/L

16 y 21 aos

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ETIOLOGA: Edad: Durante el perodo de crecimiento las elevaciones deben considerarse normales hasta 3-4 veces por encima del valor de referencia. Este incremento es debido a la actividad osteoblstica en el hueso. En mayores de 60 aos, elevaciones de la fraccin sea hasta el 30% pueden considerarse normales y se deben al proceso de involucin sea.

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Embarazo: Principalmente durante el tercer trimestre, la isoenzima responsable del aumento es de origen placentario. Hiperfosfatasemia benigna familiar: Aumento persistente de las FA en miembros de una misma familia en ausencia de patologa o causa clara de hiperfosfatasemia. Es poco frecuente y de naturaleza hereditaria (autosmica dominante). El aumento puede ser ocasionado tanto por la fraccin sea como por la intestinal

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DIAGNSTICO: Descartar las causas fisiolgicas y las ms evidentes del aumento Repetiremos la determinacin analtica pasadas 3 semanas. Haremos hincapi en la historia clnica y la exploracin fsica.

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Se realizar una historia clnica detallada, investigando especialmente: Sospecha de gestacin. Toma de medicamentos y/o txicos Presencia de fiebre. Astenia / anorexia, Dolores seos (fracturas Oseas) Alteraciones digestivas (hepatopatas)/ respiratoria /genitourinarias (nefropatas, prostatismo), cardiacas. Sntomas paraneoplsicos.

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En la segunda analtica sangunea se debe incluir : Las isoenzimas de FA. Hemograma. Funcin heptica completa. Funcin renal.

Una vez obtenidas las isoenzimas y conocida la funcin heptica, se actuar segn el diagnstico de sospecha:
Origen heptico: La FA procede en proporciones casi iguales del hgado y del hueso. Por esta razn, para determinar el origen heptico del aumento de FA se analizarn las enzimas GGT, GOT, GPT, bilirrubina y la 5-nucleotidasa.

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La 5-nucleotidasa se utiliza nicamente para confirmar que un nivel elevado de FA es de origen heptico, aunque ocasionalmente puede ser normal y no por ello podemos descartar que el origen de la FA sea heptico. La GGT es un marcador muy sensible de enfermedad biliar, pero es muy poco especifica, permite determinar el origen heptico de una elevacin de FA. Por otra parte, es una enzima que puede ser inducida por el consumo de alcohol y de frmacos.

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Un aumento de FA no es especifica de colstasis, y un incremento inferior a 3 veces el valor normal puede verse en casi cualquier tipo de enfermedad heptica: hepatitis vrica o alcohlica, cirrosis, hemocromatosis...Elevaciones superiores a 4 veces el valor normal se producen en pacientes con trastornos hepticos colestticos, tumores, o enf. Con recambio seo acelerado (enf. Paget).

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Origen seo: completar analtica sangunea (calcio,
fsforo, paratohormona, proteinograma). En orina determinaremos calcio, fsforo, hidroxiprolina, 1,25-dihidroxivitamina D3, protenas (incluida la protena de Bence-Jones), radiografa y/o gammagrafa sea.

Si la sospecha es de origen diferente y/o no hallamos etiologa heptica u sea (causas ms frecuentes de hiperfosfatasemia), deberemos pensar en otras causas (neoplsicas, etc.).

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VARIABLES POR DROGAS: AUMENTADO: Acetaminofeno, cefotoxina, fluorescena, sales de magnesio, sales de manganeso, allopurinol, cido aminosaliclico, andrgenos, anticonvulsivantes, barbituratos, bromocriptina, captotril, carbamacepina, cefalosporina, ciclosporina, eritromicina, gentamicina, tetraciclina, ranitidina, verapramil, papaverina, penicilamina.

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DISMINUIDO: Anticonceptivos orales, 17--estradiol, etinilestradiol, fluspirileno, prednisona, -propiolactona, tamoxifeno. Clofibrate, anticonceptivos orales.

METODO CINETICO -APL COBAS

En presencia de iones de magnesio y de cinc, las fosfatasas desdoblan el p-nitrofenilfosfato a fosfato y p-nitrofenol.
ALP

p-nitrofenilfosfato + H2O fosfato + p-nitrofenol El p-nitrofenol liberado es directamente proporcional a la actividad cataltica de la ALP. Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.

REACTIVOS - SOLUCIONES DE TRABAJO

R1: 2-amino-2-metil-1-propanol: 1,724 mol/L, pH 10,44 (30 C); acetato de magnesio: 3,83 mmol/L; sulfato de zinc: 0,766 mmol/L; cido N-(2-hidroxietil) etelendiamino triactico: 3,83 mmol/L
R2: p-nitrofenilfosfato: 132,8 mmol/L, pH 8,44 (30 C); conservantes

MEDIDAS DE PRECAUCIN Y ADVERTENCIAS

Para el uso diagnstico in vitro. Eliminar los residuos segn las normas locales vigentes. R1 contiene 2-Amino-2-metil-1-propanol. Xi

OBTENCIN Y PREPARACIN DE LAS MUESTRAS

Emplear nicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las muestras. Suero. Plasma tratado con heparina de litio.

Definicin del test en el analizador cobas c 311

Tipo de medicin Cintica A Tiempo de reaccin /10 / 13-31 Puntos de medicin Longitud de onda (sub/princ) 480/450 nm Direccin de reaccin Incremento Unidades U/L (kat/L)

 CONTROL DE CALIDAD; emplear el material de control indicado en la seccin. Asimismo puede emplearse otro material de control apropiado. CLCULO Factor de conversin: U/L x 0,0167 = kat/L

INTERFERENCIAS
Ictericia: aprox. 1.026 mol/L o bien 60 mg/dL). Hemlisis: aprox. 124 mol/L 200 mg/dL). Lipemia :): Sin interferencia significativa hasta un ndice L de 2.000. En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos (gammapata )

MTODO COLORIMTRICO
La fosfatasa alcalina desdobla al fenilfosfato de sodio en medio alcalino tamponado con aminometil propanol (AMP). El fenol liberado se determina por reaccin con 4-aminoantipirina y ferricianuro como agente oxidante. El color desarrollado es directamente proporcional a la actividad enzimtica y se mide a 520 nm.

Buffer: 4-aminoantipirina 29 mmol/l en solucin de aminometil propanol 3 mol/l pH 10 (a 37oC).

Standard: solucin de fenol equivalente a 200 UI/l.

REACTIVOS PROVISTOS

NaFF: fenilfosfato de sodio, 1,4 mmoles.

Reactivo de color: ferricianuro de potasio, 10 mmol/l.

ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIE NTO

son estables (2-10C) hasta la fecha de vencimiento. Sustrato: una vez preparado es estable durante 5 meses en refrigerador (2-10C). Reactivo de color: una vez preparado es estable durante 5 meses a temperatura ambiente y al abrigo de la luz

INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS

Valores de Blanco de reactivos mayores a 0,120 D.O. indican contaminaciones, debindose descartar los reactivos.

MUESTRA

usarse nicamente SUERO fresco, no hemolizado.

Los anticoagulantes producen inhibicin de la reaccin en un 50 a 90%.

Estabilidad Y almacenamiento: si la determinacin no puede ser efectuada en un plazo de 6 horas, la muestra debe conservarse congelada (- 4C) ya que a temperatura ambiente o en refrigerador (2-10C) hay aumento de actividad de 30 a 50% en 24 horas.

CONDICIONES DE REACCIN
LONGITUD DE ONDA: 520 nm en espectrofotmetro o en fotocolormetro con filtro verde (500-550 nm). TIEMPO DE REACCIN: 10 MINUTOS

TEMPERATURA DE REACCIN: 37C

VOLUMEN DE MUESTRA: 50 ul

VOLUMEN FINAL DE REACCIN: 3,05 ml

ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIN FINAL El color de la reaccin es estable durante 30 minutos por lo que la absorbancia debe ser leda dentro de ese lapso.

CLCULOS DE LOS RESULTADOS

VALORES DE REFERENCIA

Adultos: 68 - 240 UI/l Nios: 100 - 400 UI/l

isoenzimas sea se encuentra aumentada en la niez

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver Sustancias Interferentes conocidas en MUESTRA.

Debe leerse un Blanco de Reactivo con cada lote de determinaciones.

El tiempo y la temperatura de reaccin son crticos. Un minuto o un grado en exceso o en defecto pueden producir un error de 10%.

Contaminacin con fenol

LINEALIDAD

La Rx. es lineal hasta 800 UI/l. A valores mayores, debe repetirse la determinacin diluyendo la muestra. . El resultado obtenido debe multiplicarse por la dilucin efectuada.

el mnimo cambio LIMITE DE de actividad DETECCIN detectable ser de 1 UI/l.

patologias

VARIABLES POR ENFERMEDAD

Colitis ulcerosa

Tirotoxicosis
Hipoparatiroidismo Mal absorcin intestinal (dficit de vitamina D) Infarto agudo de miocardio Infarto pulmonar Osteodistrofia renal. Acromegalia.

Enfermedades hepticas que cursen con algn grado de obstruccin biliar, hepatitis virales agudas crnicas, txicas o autoinmunes; cirrosis, cirrosis biliar primaria,etc. Enfermedades renal) renales (raquitismo

Fosfatasa alcalina elevada

VARIABLES POR ENFERMEDAD

Hipotiroidismo Hipotiroidismo Escorbuto Cretinismo Acondroplastia. Escorbuto Cretinismo Dficit calrico proteico Acondroplastia. Deficiencia de Mg. Enfermedad de Wilson. Dficit calrico proteico Hipofosfatasia familiar. Deficiencia de Mg. Enfermedad de Wilson. Hipofosfatasia familiar.

Fosfatasa alcalina disminuida

FOSFATASA ALCALINA
Hepticas:

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Neoplsicas: tumores pueden puedenproducir producir isoenzimas Neoplsicas: Algunos Algunos tumores isoenzimas tumorales: pulmonar, testicular (seminoma), ovrico (tumores tumorales: pulmonar, testicular (seminoma), ovrico mucinosos y mesonfricos), prosttico, larngeo, pancretico, (tumores mucinosos y mesonfricos), prosttico, larngeo, colon/recto, gstrico y linfoma intestinalpancretico, colon/recto, gstrico y linfoma intestinal-

Fosfatasa alcalina granulocitaria:

Fosfatasa alcalina granulocitaria

Aplasia medular
La aplasia medular es la desaparicin de las clulas encargadas en la mdula sea de la produccin de la sangre. A consecuencia aparecer una disminucin de los hemates (glbulos rojos), de los leucocitos (glbulos blancos) y de las plaquetas en la sangre perifrica.

Mielofibrosis idiopatica
La mielofibrosis idioptica es una enfermedad hematolgica rara, caracterizada por fibrosis (proliferacin del tejido conectivo fibroso) de la mdula sea, esplenomegalia (bazo anormalmente grande) y anemia (disminucin de los hemates o glbulos rojos circulantes) con hemates en forma de lgrima.

Policitemia Vera
Es una enfermedad crnica caracterizada por un anormal crecimiento de la cantidad de clulas sanguineas, en la mayora de los casos globulos rojos, producidos por la mdula sea.
La PV forma parte de un grupo de trastornos conocidos como enfermedades mieloproliferativas.

tricoleucemia
La tricoleucemia es una neoplasia linfoide caracterizada por citopenia, esplenomegalia y proliferacin de unas clulas tpicas (con proyecciones citoplsmicas caractersticas) en sangre y mdula sea. Las clulas malignas son casi siempre B son raras las variantes T. Las clulas se tien para fosfatasa cida tartrato resistente. Entre las complicaciones se encuentran la vasculitis y las infecciones.

BIBLIOGRAFIA
http://www.wiener-lab.com.ar http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/ www.sribd.com.net KRUPP, Marcus. Manual de Diagnostico Clnico y de Laboratorio. Octava Edicin. Edit. El Manual Moderno,S.A. de C.V. Mxico 1985