Introduo a Biologia Molecular

Prof Daniela de Oliveira Pinto

NOS SERES HUMANOS

NCLEO

DNA

CLULA

CROMOSSOMOS (DNA+PROTENAS)

- Informao

das protenas e RNAs que sero sintetizadas pelas clulas do organismo ao longo da sua vida. -Capacidade de se autoduplicar para originar outras clulas.

ORGANISMO

Envelhecimento...

AMBIENTE
CORPO

Molculas Organelas

Molculas Organelas

CLULAS

CLULAS

CLULAS

TECIDOS
RGOS

TECIDOS
RGOS

TECIDOS
RGOS

Acmulo de modificaes e disfunes

Embriologia

Amadurecimento e Fase reprodutiva

Envelhecimento

Morte

Desenvolvimento

A CLULA

Controla: 1) homeostasia 2) reproduo 3) morfologia 4) funo celular

MULTICELULARES

NVEIS DE ORGANIZAO

DNA

TECIDOS

RGOS E SISTEMAS

CORPO

AMBIENTE

1953: Watson and Crick

Estrutura do DNA

Dogma Central da Biologia Molecular

 1961 BRENNER, JACOB e MESELSON

mRNA a molcula que leva informao do DNA no ncleo para a maquinaria de produo de protenas no citoplasma

O CDIGO GENTICO DESVENDADO!!!

1966 NIRENBERG, KHORANA e OCHOA

Seqncias sucessivas de trs nucleotdeos do DNA (codon) determinam a seqncia de aminocidos de uma protena

A CLULA

DNA 1. Regulao transcricional

HnRNA

2. Regulao no processamento do RNA primrio 3. Regulao no transporte do mRNA para o citoplasma

RETCULO ENDOPLASMTICO RUGOSO

- DIFERENCIAO - CRESCIMENTO - FUNO CELULAR - RESPOSTA AO AMBIENTE

4. Regulao da sntese proteca 5. Regulao ps-sntese

Protena sintetizada

Ncleo Cromossoma

DNA

Gene Promotor Exon Intron

DNA

CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (DNA)

Contm toda a informao gentica de um organismo

Esta informao est arranjada em unidades hoje conhecidas como genes

ESTRUTURA DOS CIDOS NUCLEICOS

As molculas de DNA e RNA so compostas por quatro diferentes nucleotdeos:

Adenina, Guanina e Citosina comum para DNA e RNA

Timina encontrada somente no DNA Uracila encontrada somente no RNA

ESTRUTURA DOS CIDOS NUCLEICOS

Todos os nucleotdeos apresentam uma estrutura em comum:
radical fosfato

pentose

ESTRUTURA DOS CIDOS NUCLEICOS

As bases nitrogenadas podem ser divididas em dois grupos de acordo com sua estrutura:

ESTRUTURA DOS CIDOS NUCLEICOS

O grupo hidroxil ligado ao carbono 3 da pentose de um nucleotdeo forma uma ligao fosfodister com o fosfato do outro nucleotdeo

5 C-A-G 3

DNA
Duas fitas de polinucleotdios associadas formando uma estrutura
de dupla hlice onde as pentoses e os radicais fosfato compe a fita e as bases projetam-se para o interior da mesma

As fitas mantm-se unidas atravs da formao de pontes de

hidrognio entre as bases o que contribui para a estabilidade da dupla hlice

. Adenina (A) pareia com Timina (T) atravs de 2 pontes de

hidrognio
. Guanina (G) pareia com Citosina (C) atravs de 3 pontes de hidrognio

DNA

ESTRUTURA DO DNA
1) Estrutura primria
NUCLEOTDEO

- um polmero no ramificado - Formado por monmeros chamados de nucleotdeos - Cada nucleotdeo contm os seguintes elementos:

1 Base orgnica nitrogenada (Por que contm nitrognio na sua formao)

5C 4C 3C

1C
2C

1 Acar chamado DESOXIRRIBOSE Possui 5 Carbonos na sua molcula 1 grupo fosfato (PO4-)

As Bases Nitrogenadas podem ser de dois tipos:

PRICAS
H C N C CH N N

PIRIMDICAS
H C CH

HC
N

C
N H

HC
N

CH

ESTRUTURA QUMICA DA MOLCULA DO DNA

5
Desoxirribose
Carbono 5

CH2 O H H H O H O O CH2 O P O-

Base Nitrogenada

Carbono 3

Ligao Fosfodieste Grupo fosfato + Grupo hidroxila (OH) do Carbono 3

Base Nitrogenada H

Desoxirribose
H

H H

Como a ligao entre uma desoxirribose e outra desoxirribose s pode ser feita quando um grupo fosfato liga-se no Carbono 5do primeiro acar e no Carbono 3do segundo acar dizemos que a molcula de DNA cresce em direo 5 3
3

O
O

O-

Antiparalelismo

As fitas do DNA esto dispostas em direes opostas

Complementariedade
Cada base de uma fita pareada com a base complementar da outra fita

Complementariedade
Durante a replicao do DNA as duas fitas velhas ou mes servem de molde para cada fita nova ou filha complementar, que est sendo sintetizada.

Fita velha

Fita nova

A Dupla Hlice
Fatores que estabilizam a dupla hlice:
interaes hidrofbicas foras de van der Walls pontes de hidrognio Entre as bases nitrogenadas

interaes inicas

Entre os grupos fosfato do DNA e os ctions (Mg2+) presentes na soluo fisiolgica

A Dupla Hlice
A dupla hlice apresenta dois tipos de sulcos aos quais se ligam as protenas da cromatina
Sulco menor

Sulco maior

Protenas:nveis de complexidade estrutural

O Empacotamento do DNA: a estrutura terciria do DNA

DNA em procariontes: DNA circular nas formas no-superhelicoidal (esquerda) e super-helicoidal (direita)

A Dupla Hlice

O B-DNA o predominante em condies fisiolgicas

A Dupla Hlice
A forma predominante de toro da espiral do DNA para a direita ou sentido horrio

Propriedades Qumicas e Fsicas do DNA

REPLICAO DO DNA
Conservativa ou Semiconservativa?

Unidirecional ou Bidirecional?

REPLICAO SEMICONSERVATIVA
Evidncia baseada em um experimento clssico de Meselson-Stahl em 1958

Clulas de E. coli foram inicialmente colocadas em um meio para crescimento contendo sais de amnia preparados com 15N (nitrognio pesado heavy) at todo o DNA celular conter o istopo. As clulas foram, ento, transferidas para um meio contendo (nitrognio leve light).
14N

As amostras foram analisadas com gradiente de densidade que separa as duplas H-H, L-L e H-L em bandas distintas.

PNAS 44:671, 1958

A replicao semi-conservativa
The Meselson-Stahl experiment

ORIGEM DA REPLICAO
Experimento com SV40 (Simian Virus) DNA viral de clulas infectadas com SV40 foi cortado com a enzima de restrio EcoRI, que reconhece um stio nico. A partir de um ponto vai se formando uma bolha chamada bolha de replicao comprovando a existncia de um ponto de origem da replicao Caractersticas da origem de replicao: . estrutura repetitiva

. seqncias ricas em AT

ORIGEM DA REPLICAO

ORIGEM

Stio de restrio EcoRI

Cromossomo viral circular

EcoRI
Bolha de replicao

ORIGEM DA REPLICAO

REPLICAO BIDIRECIONAL
Um experimento atravs da autoradiografia de molculas de DNA marcadas de culturas de clulas mamrias revelou grupos de replicons (unidades de replicao) com um ponto de origem de replicao central
OR OR

Sntese de DNA em Eucariontes: As Bolhas de

Replicao Nos eucariontes, a replicao requer mltiplas origens, devido ao tamanho de seu genoma. A replicao bidirecional e, em ambas as fitas, simultnea. Este processo gera bolhas de replicao.

Regies Codificadoras e No-Codificadoras do DNA

O DNA formado por 2 regies:
Intergnicas Gnicas Intergnicas Gnicas

Regio Gnica a poro que codifica para um produto final, que pode ser uma cadeia polipeptdica ou um RNA

Regio Intergnica a poro regulatria, que sinaliza o incio ou o final de um gene, que influencia a transcrio gnica, ou que o ponto de incio para a replicao do DNA

PROCESSO DE REPLICAO

Os mecanismos celulares responsveis pela replicao do DNA foram descobertos primeiramente em bactrias.

A replicao em eucariotos ocorre atravs de protenas anlogas e com processos semelhantes replicao do DNA de E. coli

PRINCIPAIS ENZIMAS ENVOLVIDAS (SISTEMA DE REPLICAO DO DNA) 1. 2. 3. 4. 5. 6. DNA Polimerases Endonucleases Helicases Topoisomerases Primases Telomerases

DNA POLIMERASE
So incapazes de quebrar as pontes de hidrognio que ligam as duas fitas do DNA S alongam uma fita de DNA/RNA pr-existente Catalisam a adio de um nucleotdeo no radical hidroxil da extremidade 3 da cadeia que est se formando. Desta forma, as fitas s podem crescer no sentido 5 3

DNA Polimerases
principais enzimas envolvidas no processo; responsveis pela adio de nucleotdeos e reparo requerem um modelo e um primer (segmento de RNA sintetizado pela primase) complementares para incio alongamento 3 tipos principais : I, II, III I : importante no sistema de reparo III: principal e mais complexa (mais de 10 subunidades)

Adio de nucleotdeos
1

NUCLEASES
- Degradam o DNA, clivando-o em pedaos menores 1. EXONUCLEASES: clivam o DNA a partir do final da molcula 2. ENDONUCLEASES: clivam em qualquer local da molcula

OUTRAS ENZIMAS ENVOLVIDAS NO PROCESSO DE REPLICAO

HELICASES constituem uma classe de enzimas que podem se mover ao longo da fita dupla de DNA utilizando a energia da hidrlise de ATP para separar as duas fitas da molcula. SSB (single-strand-binding) ligam-se a cada uma das fitas impedindo o reanelamento das mesmas.

PRIMASE RNA polimerase que sintetiza pequenas molculas de RNA utilizadas como iniciadores durante o processo de replicao do DNA.
TOPOISOMERASES Responsveis por aliviar a toro na parte da fita que no est sendo replicada.

PROCESSO DE REPLICAO
O movimento da forquilha de replicao revela uma fita molde no sentido 3 5 e outra no sentido oposto 5 3

Desta forma, as fitas novas so sintetizadas em sentidos opostos FITA LEADING crescimento segue a direo do movimento da forquilha de replicao
FITA LAGGING crescimento no sentido oposto ao movimento da forquilha de replicao

PROCESSO DE REPLICAO
FITA LEADING sintetizada continuadamente a partir de um iniciador na fita molde 3 5

FITA LAGGING sintetizada descontinuadamente a partir de mltiplos iniciadores

Stios descobertos no molde da fita lagging so copiados em pequenos iniciadores de RNA pela primase. Cada iniciador alongado pela DNA polimerase resultando na formao dos FRAGMENTOS DE OKAZAKI. DNA polimerase remove o primer do RNA do fragmento adjacente e preenche os gaps entre os fragmentos que, ento, so unidos pela DNA ligase.

PROCESSO DE REPLICAO

PROCESSO DE REPLICAO
A sntese de DNA feita na direo 5 3 e semidescontnua

TELOMERASE
Os cromossomos de eucariotos so lineares e apresentam seqncias repetitivas em suas extremidades denominadas telmeros
A sntese da fita leading continua at o trmino da fita molde de DNA, no entanto, no telmero a extremidade feita pela primase na fita lagging no digerida. Como o iniciador instvel, ele se degrada com o tempo diminuindo, assim, o tamanho do cromossomo. Telomerase age evitando a perda do fim do cromossomo.

TELOMERASE

ESTGIOS DA REPLICAO

1. INICIAO 2. ALONGAMENTO 3. TERMINAO

1. INICIAO
ORIGEM DA REPLICAO OriC : - 245 pb ;

- 3 repeties de 13 pb;
- 4 repeties de 9 pb; (A=T)

2. ALONGAMENTO
Envolve duas operaes distintas, mas relacionadas: 1. Sntese da fita lder

2. Sntese da fita tardia

Incio comum na forquilha de replicao envolvendo: helicases

topoisomerase
DNA binding proteins

SNTESE DA FITA LDER

1. Sntese de um RNA primer pela primase na origem de replicao 2. Desoxirribunocleotdeos so adicionados pela DNA polimerase III continuamente a partir da forquilha de replicao

3. TERMINAO
-Procariotos: DNA circular, quando as duas forquilhas de replicao se encontram ela termina. -Eucariotos: seqncias de nucleotdeos especficas no final dos cromossomos, incorporadas a telmeros.

REGULAO
-nica fase regulada da replicao, de forma que s ocorra uma vez por ciclo celular ; -afetada pela metilao de DNA -DAM metilase na (5) GATC sobre a fita parental

Ncleo RNA polimerase

Gene

Transcrio
hnRNA

Processamento
mRNA

Traduo
Citoplasma

protena