Mdulo: Infectologa

Exudado Farngeo

David Marcelo Casanova Garza

Objetivos
Determinar el agente causal de la patologa
presente en la faringe.

Fundamento

La anatoma del tracto respiratorio est diseada para la proteccin contra agentes externos:

Cornetes nasales: Vellosidades, pasajes cornorneados y mucus.

Secreciones: IgA secretora y sustancias respiratorias.

Trquea: Cilios y mucus

Reflejos: Tos, estornudo y deglucin

Fundamento
Si logran pasar:
Macrfagos los ingieren Linfticos
Flora normal de nasofaringe y orofaringe Previene
colonizacion del tracto respiratorio.

Patgenos poco frecuentes

Estreptococos no hemolticos
Estafilococos Micrococos Corynebacterium spp Estafilococos cuagulasa (-)

Patgenos posibles
Acitenobacter
E. Viridians E. Betahemolticos E. Aureus Corynebacterium diphtheriae Neisseria meningitidis

Neisseria spp (n.meningitidis, n. ghonorrhoeae)

Lactobacillis spp Veillonella spp Espiroquetas Mycooplasma spp H. Influenzae H. Parainfluenza

Branhamella cararrhalis
Candida albicans VHS Enterobacteriaeceae Mycobacterium spp Pseudomonas spp Hongos filamentosos

Indicaciones
No tomar antibiticos 10 das antes de la
muestra.

Presentarse en COMPLETO AYUNO (No ingerido

alimentos ni tampoco tomar lquidos).

No realizarse aseo bucal.

Materiales
AS EMB MANITOL SAL Hisopos Mechero Cinta masking tape Incubadora (37 C )

Procedimiento
1. Se pide al paciente que se siente y haga su
cabeza hacia atrs.

2. Se ilumina la cavidad orofarngea. 3. Se abre, por un extremo, el depresor de

madera, sin tocar el otro extremo para mantenerlo estril.

Procedimiento
4. Con
un abatelenguas, se empuja la lengua hacia abajo para facilitar el acceso a la parte posterior de la faringe. un hisopo de algodn, se hace un raspado de las amgdalas, reas hipermicas, purulentas o necrticas, as como a las manchas de Koplic, si es que estn presentes.

5. Con

Procedimiento
6. Evitar contacto con la lengua u otras zonas. Es
normal que se provoque el reflejo de arcada.

7.

Al finalizar, se tira el depresor al contenedor de desechos orgnicos. Se tapa la torunda y se rotula, con el nombre del paciente y la fecha; indicando que se trata de un frotis farngeo.

Procedimiento
8
Si la muestra no se va a procesar de inmediato, el hisopo se mantiene en un medio de transporte y se enva de inmediato con refrigerante.

Agentes virales: El hisopo con la muestra se introduce en un tbulo de tapn de rosca con 2 ml de solucin isotnica estril. Se tapa hermticamente.

Procedimiento
10.Agentes bacterianos: El hisopo con la muestra se introduce
en un tubo de tapn de rosca con medio de Amies o de Stuart. Se tapa hermticamente.

11. Si la muestra se va a procesar inmediatamente se siembra

un agar sangre, un agar sal y manitol y un agar EMB. Se estiran las placas a los agares antes mencionados con el hisopo en la zona de descarga (zona 1). Despus se siembra la placa con una asa bacteriolgica en la 2da y 3er zona.

Procedimiento
12.Se etiquetan y colocan donde indique el profesor para
incubarse a 37 C por 24 hrs.

13. Despus de la incubacin se checan las placas. Anotar

resultados.

Agar Sangre

Concentracin de sangre en medio de 5-10% Aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes. Observacin de hemlisis. Medio base para Agar Chocolate. Alto valor nutritivo: Infusin de m. cardiaco y peptona. Balance osmtico: NaCl

Agar Sangre
1. 2. 3. 4. 5.
Suspender 40g del medio de 1L de agua purificada.
Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin. Hervir 1 min. Esterilizar en autoclave a 121C Enfriar a 45-50C. Aadir sangre de carnero estril y desfibrinada al 5%. Homogenizar y vaciar en placas de Petri estriles.

Agar Sangre
Sembrar muestras en placas por el mtodo
de estra.

Encajar varias veces el asa en el medio para

depositar los estreptocococ beta hemolticos.

Incubar placas a 35-37C por 18-24 horas y

48 horas de aerobiosis, anaerobiosis o bajo atmsfera parcial de CO2.

Agar Manitol Sal

Es
un medio selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacion de estafilococcos.

Es recomendado a partir de muestras clinicas, alimentos,

productos cosmeticos, y otros materiales de importancia sanitaria.

Se puede usar para cultivar especies halofilas de Vibrio si no hay medios adecuados (TCBS medio, medio marino,etc) aunque algunas no se desarrollan.

Agar Manitol Sal

[Fundamento]
Es un medio altamente selectivo por su
alta concentracion salina.

Las bacteria que crecen en un medio con

alta concentracion de sal y fermenta el manitol producen acidos. Con lo que se modifica en pH del medio y se mueve el indicador de pH de rojo a amarillo.

Los estafilococcos crecen en altas

concentraciones de sal, pueden o no fermentar el manitol.

Agar Manitol Sal

[Frmula]
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona,
constituyen la fuente de carbono, nitrogeno, vitaminas y minerales. El manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (en altas concentraciones) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de flora acomapaante y el rojo fenol es el indicador de pH.

PROCEDIMIENTO

Inocular las placas por el metodo de estria

Incubar a 35C+- 2 por 24-48hrs y observar desarrollo.

Agar Manitol Sal

[Resultados]
Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococcos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o purpura Este medio es mas utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos gram+ de rapido desarrollo y escasas exigencias nutricionales Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae

Agar EMB
[Fundamento]
Combina Holt- Harris y Teague con
Levine

Diferencia entre organismos

capaces de utilzar lactosa y/o sacarosa y cuales no.

Las cepas que usan la lactosa tienen

centro oscuro con periferia azulada o rosada. Las que no son incoloras

Agar EMB
[Procedimiento]
1.
Sembrar en la superficie, por estriado a partir de un inulo poco denso Colonias aisladas
Sembrar en profundidad favorece desarrollo de clamidosporas

2.

3.

Incubar por 24 a 48 hrs a 35-37C

Agar EMB
[Resultados]

E. coli y citrobacter: Brillo metlico Candida: Colonias rosadas y puntiformes Enterococcus: Puntiformes y transparentes En profundidad clamidosporas en C. albicans Buen desarrollo de Salmonella y Shigella Acintobacter: Azul lavanda (no lactosa)

Prueba de la bacitracina
Prueba utilizada para la diferenciacin de estreptococos beta hemolticos del grupo A de otros estreptococos beta hemolticos.
Estreptococos

-Hemolticos

-Hemolticos

No Hemolticos

Neumococo

A S.pyogenes Amigdalitis

B S.agalactiae Neumona Meningitis

C
S.equi Caballos Ganado

D S.bovis S.avium

Fiebre reumtica

Prueba de la bacitracina
[Fundamento]

Bacitracina: Antibitico que inhibe:

Sntesis de la pared celular bacteriana. Crecimiento de los estreptococos beta hemolticos

No inhibe el desarrollo de otros beta hemolticos. Micrococcus y Estomaticoccus tambin son Los estafilococos coagulasa negativos son
resistentes. inhibidos.

del grupo A.

Prueba de la bacitracina
[Fundamento] Los estafilococos coagulasa negativos son
resistentes.

Un resultado sensible es presuntivo de la

presencia de estreptococo grupo A. Se puede incrementar el valor diagnstico mediante la
realizacin de la prueba del PYR.

Prueba de la bacitracina
[Procedimiento] 1. Realiza una suspensin densa del
microorganismo en estudio (de turbidez igual a la del standard 0.5 de la escala de Mac Farland).

2. Utilizando un hisopo, estril, hisopar una palca

de agar sangre.

3. Aplica un disco de Bacitracina de 0.04 U sobre la

superficie de la placa.

4. Incubar durante 24 horas a 35-37C en

atmsfera 5-10% de CO2.

Prueba de la bacitracina
[Restulados] Examinar la placa para observar cualquier zona de
inhibicin del desarrollo alrededor del disco.

Sensible: presencia de halo de inhibicin del desarrollo

alrededor del disco.

Informar: Estreptococos beta hemolticos presuntivamente del grupo A por la prueba de bacitracina.

Resistente: Ausencia de halo de inhibicin.

Informar: Estreptococos beta hemolticos que presuntivamente no pertenecen al grupo A por la prueba de bacitracina.

Prueba de la bacitracina
[Limitaciones]
1.
2. 3.
Solo deben ser investigados los estreptococos -hemolticos debido a que muchos estreptocos -Hemolticos (incluso S.pneumoniae) son sensibles a concentraciones bajas de bacitracina. El crecimiento del inculo bacteriano debe ser confluente, un inculo demasiado escaso producir que los estreptococos que no son del grupo A parezcan sensibles a la bacitracina. La prueba de bacitracina es bastante exacta como una prueba presuntiva pero no es bastante especfica. Ms de 10% de los estreptococos del grupo C y G, y 5% de las capas de estreptococos del grupo B tambin son sensibles a la bacitracina.

4.