CITOGENETICA

Enfermedades Genticas

Enfermedades Monognicas: regulada por un solo Par de genes que cumplen con la Ley de segregacin Mendeliana.

Enfermedades Cromosmicas: Ocasionadas por Alteraciones en los cromosomas.

Enfermedades Multifactoriales: Producidas por varios pares de genes que regulan el carcter y la interaccin con el ambiente que favorece la expresin de este.

Citogentica
rea de la Gentica que estudia todo comportamiento celular, basado en el anlisis de la estructura y funcin de los cromosomas y el ncleo interfsico, encaminado a establecer sus asociaciones con el desarrollo orgnico, fsico y poblacional de los organismos.

Convencional

Molecular

CROMATINA NUCLEAR La molcula de ADN de un cromosoma existe como un complejo formado por una familia de protenas bsicas denominadas histonas y de un grupo heterogneo de protenas cidas no histonas con un importante papel en la estructura y expresin apropiada de los genes. La cromatina nuclear depende entonces, del estado de condensacin y descondensacin del ADN. Hay dos formas de cromatina de acuerdo con lo hasta aqu descrito: La eucromatina,: estado de condensacin que permite la expresin gnica. La heterocromatina: estado mucho ms condensado que, atendiendo a sus caractersticas de activacin o inactivacin, se clasifica en dos grupos:

- la constitutiva, siempre inactiva y que se encuentra en sitios especficos de la estructura de los cromosomas.
- la facultativa, que puede existir en forma genticamente activa (descondensada) o en forma inactiva y condensada situacin sta propia del cromosoma X.

ORDEN DE LOS CROMOSOMAS EN EL CARIOTIPO

GRUPO A B C PARES 1 al 3 4y5 6 al 12 y X CARACTERSTICAS Metacntricas (1 y 3) Submetacntricas grandes Submetacntricas grandes Submetacntricas grandes

D
E F G

13 al 15
16 al 18 19 y 20 21, 22 y Y

Acrocntricas grandes
16 Metacntrico, 17 y 18 Submetacntrico pequeo Metacntrico pequeo 21 y 22 Acrocntricos pequeos. Y Acrocntrico si satlites

ESTUDIO DE LOS CROMOSMAS HUMANOS EN CLULAS EN INTERFASE: CROMATINA SEXUAL Estudio del cuerpo Y El cromosoma Y puede ser identificado en clulas en interfase tratando una extensin de un tejido con colorantes fluorescentes. El tejido obtenido se coloca sobre un portaobjeto para ser coloreado. La muestra puede ser obtenida por medio de raspado de la mucosa bucal. Este tipo de colorante tie intensamente la regin de heterocromatina constitutiva que caracteriza al ADN de los brazos largos del cromosoma Y, observable slo con el uso de luz ultravioleta, por lo que se requiere un microscopio con estas caractersticas. El cuerpo Y, slo es observado cuando el cromosoma Y esta presente en el genoma del individuo en estudio, de tal modo que es positivo en las muestras obtenidas de individuos masculinos y negativo en el sexo femenino. Tambin se tiene en cuenta el nmero de cuerpos Y que se observan por cada ncleo examinado.

Estudio del cromosoma X Fenmeno de inactivacin (heterocromatina facultativa) de uno de los dos cromosomas X en estadios tempranos de preimplantacin del cigoto.

En el ao 1949, dos investigadores Barr y Bertran, observaron diferencias entre los ncleos de las clulas de tejido nervioso de los animales sobre los que realizaban sus experimentos. A partir de esta observacin, se vio la presencia de uno de los cromosomas X en el sexo femenino. La muestra se obtiene de raspado de la mucosa bucal, la coloracin puede realizarse con colorantes habituales y la observacin bajo microscopio comn. En el ncleo se observa una pequea masa heterocromtica, en forma convexa con uno de sus lados como fijado a la envoltura nuclear que se tie ms intensamente Cuerpo Cuerpo Barr

La mujer presenta en el anlisis de 100 clulas, aproximadamente un 40% de clulas en las que se observa un cuerpo Barr, que corresponde con el nmero de cromosomas X-1.

CUERPOS DE BARR TCNICA ACETO ORCENA

Corpsculo o cuerpo Barr: Uno de los cromosomas X, el que completa su replicacin ms tarde que su homlogo, queda condensado e inactivo durante la interfase de clulas somticas. # cuerpos Barr = # cromosomas X 1 # cuerpo Barr 0 1 2 3 Hembra 45,X 46,XX 47,XXX 48,XXXX Varn 46,XY 47,XXY 48,XXXY 49,XXXXY

Ventajas de la tcnica de Cromatina Sexual: Rpida y sencilla, Puede realizarse en ncleos interfsicos. No requiere de cultivo de clulas. Da el estado de los cromosomas sexuales de forma inmediata. Cuerpo Y. Cromatina Y: Se visualiza un punto fluorescente dentro de la clula debido a la tincin. De la heterocromatina del cromosoma Y. # Cuerpos Y = # cromosomas Y

Citogentica convencional
Estructura, alteraciones cromosmicas EL CARIOTIPO HUMANO

46, XY

CARIOTIPO
Ordenamiento de los cromosomas de acuerdo al tamao, posicin del centrmero y patrn de bandas en especfico.
Cultivo de tejidos: sangre perifrica, mdula sea, piel, lquido amnitico, vellosidades coriales Cultivo de sangre perifrica. Medio de cultivo Fitohematoglutinina Colchicina o colcemid Solucin Hipotnica Fijacin Idiograma: No es ms que la representacin esquemtica de un cariotipo y puede utilizarse de gua en la clasificacin de los cromosomas. Ventajas: Ha permitido la identificacin longitudinal de los cromosomas y clasificar con mayor seguridad los pares de cromosomas homlogos. Posibilita determinar regiones cromosmicas que permanecen constantes para cada cromosoma, haciendo posible su clasificacin. Deteccin de las alteraciones de los cromosomas, que resultaba imposible en algunos casos e inseguro en otros

Tcnicas de Bandas

Se nombran de acuerdo con las iniciales del mtodo empleado en las mismas y con ellas se logra el reconocimiento individual de los cromosomas o regiones dentro de la estructura de los mismos. Bandas Q: Colorante fluorescente ( Quinacrina). Bandas G: Se emplea una enzima proteoltica (Tripsina), seguido de colorante (Giemsa), la ms utilizada en los laboratorios. Bandas R: (reverse) Se utiliza calor, el patrn de bandas es inverso al patrn de bandas G. Bandas C: Desnaturalizacin con lcalis y tincin con Giemsa, tincin de la heterocromatina centromrica y las regiones polimrficas de los cromosomas 1, 9, 16 y Y. Bandas NOR: Se utiliza el nitrato de plata y se tien las regiones del organizador nucleolar (tallos y satlites de acrocntricos). ALTA RESOLUCIN: Se realiza en cromosomas prometafsicos y profsicos, no en metafsicos. Se obtienen cromosomas ms largos, bandas que se desdoblan en subbandas. Se detectan alteraciones del orden de 3 Mb. UTILIDADES DE ESTA TCNICA: Da la posibilidad de detectar aberraciones cromosmicas ms pequeas. Resulta muy til en la definicin exacta de puntos de ruptura en aberraciones cromosmicas muy sutiles.

ANORMALIDADES O DEFECTOS CROMOSMICOS

A las anormalidades o defectos cromosmicos, se les denomina aberraciones

cromosmicas, se clasifican en dos grandes grupos: numricas

estructurales.
Entre las primeras se incluyen aquellas en las cuales el componente cromosmico normal de 46 est alterado, por exceso o por defecto. Estas alteraciones numricas reciben el nombre de poliploidas y aneuploidas. En el segundo grupo se afecta solamente la estructura de uno o varios cromosomas y reciben el nombre de aberraciones estructurales.

Aberraciones Cromosmicas
Numricas Poliplodias: Mltiplo
exacto del nmero haploide de cromosomas superior a dos.

Estructurales Deleciones Duplicaciones Isocromosomas Inversiones Inserciones Translocaciones

Aneuplodias: Mltiplo no
exacto del nmero haploide de cromosomas

Aberraciones cromosmicas no balanceadas: Todas las numricas y

las delecciones, duplicaciones, e isocromosomas (todas las que afecten el complemento cromosmico por exceso o por defecto). Aberraciones cromosmicas balanceadas: Inversiones y Translocaciones (defectos de la estructura sin que se altere el complemento cromosmico).

Aberraciones cromosmicas de nmero

Este tipo de aberraciones cromosmicas se clasifica atendiendo al nmero de cromosomas involucrados y a que sean o no un mltiplo exacto del nmero haploide de cromosomas en: Poliploidas y aneuploidas.
Las poliploidas: son defectos que involucran un conjunto o juego cromosmico haploide extra a los dos juegos haploides que se esperan y que originan el nmero diploide del cariotipo normal, por lo que se caracterizan por presentar un mltiplo exacto del nmero haploide de cromosomas superior a dos. Se expresan como 3n, 4n, etc., y se les nombra triploidas, tetraploidas, pentasomas, etc.
Las poliploidias no solo suelen ser frecuentes en especies como los vegetales, sino que se logran artificialmente con el propsito de investigaciones o para obtener variantes ms apetitosas y voluminosas. En el humano son eventos poco viables, pero ocasionalmente se reportan triploidas (3n) o tetraploidas (4n). Las triploidas son el resultado de una anormalidad en la maduracin tanto de la ovognesis como de la espermatognesis.

Las aneuploidas como eventos precigticos

Las aneuploidas se deben a una falla en la segregacin de los cromosomas en los gametos durante la divisin meitica, o tambin en la primera divisin mittica del cigoto. A diferencia de las poliploidas, las aneploidas se producen debido a fallas de segregacin de un par cromosmico especfico, durante la anafase de cualquiera de las dos divisiones meiticas o en la primera o las primeras divisiones mitticas del cigoto. Este defecto de segregacin se conoce con el nombre de no disyuncin y da lugar a un mltiplo no exacto del nmero haploide de cromosomas. La no disyuncin puede involucrar a cromosomas autosmicos como las trisomas 21, 13, 18 y a cromosomas sexuales como el sndrome Klinefelter que presenta dos cromosomas X y un cromosoma Y (trisoma XXY) o el sndrome Turner que presenta una mososoma del cromosoma X. Uno de los aspectos ms interesantes es poder conocer en qu momento de la divisin celular ocurre la no disyuncin.

Desde el punto de vista gentico cuando la no disyuncin ocurre en la meiosis I, el gameto dismico resultante tiene informacin heterodismica, porque en esta divisin celular se separan los cromosomas homlogos que tienen una informacin gentica procedentes a su vez de los gametos parentales. La no disyuncin en la segunda divisin meitica es el resultado de la separacin de las cromtidas de un cromosoma especfico que van juntas al mismo gameto por lo que recibe el nombre de isodisoma, ya que la informacin gentica contenida es muy parecida si no totalmente igual, lo que depende de la magnitud o tamao de los segmentos de cromtidas intercambiados entre los cromosomas homlogos de la profase de la meiosis I

Las aneuploidas como eventos postcigticos La no disyuncin en la primera divisin mittica postcigtica, origina, al menos tericamente, dos lneas celulares (mosaicismo). Cuando la no disyuncin ocurre en la primera divisin mittica se obtienen dos lneas celulares una mosmica y otro trismica. Sin embargo, las clulas con monosomas de cromosomas autosmicos no son viables por lo que, en estos casos desaparece la lnea celular monosmica quedando finalmente solamente la lnea celular trismica, pero cuando la no disyuncin involucra al cromosoma X entonces quedan dos lneas celulares 45,X / 47,XXX. Cuando la no disyuncin ocurre en la tercera divisin mittica y estn involucrados cromosomas autosmicos, quedarn dos lneas celulares por ejemplo 46, XX / 47, XX, +21 ya que las clulas con monosoma 21 no son viables. Si el cromosoma involucrado es el X entonces se pueden observar tres lneas celulares 45, X / 46, XX / 47, XXX.

La anafase retardada

Se trata de un defecto de la anafase, cuando un cromosoma queda retrasado y se pierde una de las dos clulas resultantes. Siempre origina prdida de un cromosoma o monosomas. Si ocurre durante las primeras divisiones mitticas de un cigoto cromosmicamente 46, XY y el cromosoma retardado en anafase fuera el Y, este mecanismo dara lugar a dos lneas celulares una 45, X y la otra 46, XY.

Cariotipo ABERRACIONES CROMOSMICAS DE Que tipo de alteraciones se pueden estudiar?

ESTRUCTURA

Translocaciones Inversiones Deleciones amplificaciones

Monosomas trisomas

Estructurales

Numricas

Deleciones,
Prdida de un segmento del cromosoma. Las deleciones pueden ser terminales, intersticiales, de acuerdo con el nmero de puntos de rupturas, uno en el caso de las terminales y dos en las intersticiales, perdindose el segmento roto. Tambin las deleciones producen cromosomas en anillo, cuando se presentan doble delecin terminal y el ADN se repara perdindose los extremos rotos. Este tipo de defecto genera en el cariotipo, una monosoma parcial de los brazos cortos o largos del cromosoma involucrado del cual puede perderse todo el telmero, solamente un pequeo fragmento de ste o puede perderse un segmento subtelomrico mayor.

Estructurales Deleciones

Duplicaciones
Como su nombre indica hay una duplicacin de segmentos cromosmicos. Un mecanismo puede ser el entrecruzamiento desigual entre cromosomas homlogos que tiene lugar en la profase de la primera divisin meitica y que puede generar tambin deleciones intersticiales. Este tipo de defecto genera en el cariotipo trisomas parciales.

Duplicacin

Isocromosomas,
Anormalidades en la separacin de las cromtides hermanas. Es un defecto que ocurre durante la separacin de cromtides hermanas en la meiosis II, generando cromosomas anormales que contienen doble la informacin de los brazos involucrados. Este defecto se ha observado en el cromosoma X. La mujer que porta este tipo de defecto puede presentar trisoma parcial de este brazo y monosoma parcial del brazo corto, cuando el isocromosoma es de brazos largos. Otro mecanismo de formacin del isocromosoma sera el intercambio que involucra el extremo proximal al centrmero entre cromtidas hermanas de cromosomas homlogos generando isocromosomas isodicentrcos en los cuales el centrmero doble no se detecta citogenticamente por estar muy unidos.

Translocaciones
Intercambio de ADN entre dos cromosomas. Este tipo de defecto ocurre cuando hay ruptura de al menos dos cromosomas y la reparacin se produce uniendo los segmentos rotos de un cromosoma en el otro cromosoma roto. Los cromosomas involucrados suelen ser no homlogos. Hay dos tipos de translocaciones: Las recprocas que involucran a cualquier cromosoma Por fusin centromrica, que consiste en la ruptura al nivel de los centrmeros y reparacin fusionando centrmeros o compartiendo uno . Estas ltimas tambin reciben el nombre de Robertsonianas y ocurren entre cromosomas acrocntricos.

Estructurales Translocaciones

Translocacin Recproca

Cromosoma 4 Normal

Cromosoma 8 Cromosoma 4 Cromosoma 8 Normal Derivativo Derivativo

Translocacin robertsoniana

Cromosoma 13 Cromosoma 14 Normal Normal

Translocacin robertsoniana (13q 14q)

Las inversiones
Consisten en rupturas y reparaciones invertidas del segmento cromosmico involucrado. Se clasifican en dos grupos: Paracntricas (si no incluyen al centrmero) y pericntricas (si lo incluyen). Los individuos portadores de estos defectos tampoco presentan perdida aparente de material gentico, pero su gametognesis ser anormal pues en el apareamiento de los cromosomas homlogos el contacto entre las secuencias de bases requiere acomodar el segmento invertido dando lugar a lo que se denomina bucle de inversin. Las inversiones pericntricas al configurar la sinapsis entre cromosomas homlogos y ocurrir entrecruzamiento entre sus cromtidas incluidas en el bucle de inversin, generan cromosomas recombinantes que se caracterizan por duplicaciones y deleciones de segmentos cromosmicos con lo que se forman cuatro posibles gametos: normal, portador de la inversin, y gametos con los cromosomas recombinantes anormales que al ser fecundados pueden originar cigotos trismicos o monosmicos para estos fragmentos. De igual forma ocurre para las inversiones paracntricas. Pero en estos casos los cromosomas recombinantes sern acntricos o dicntricos y los gametos resultantes generalmente al ser fecundados no llegan a ser viables de manera que los individuos portadores de esta inversin tienen historia de infecundidad o abortos mas que de hijos malformados mltiples

Estructurales Inversiones

Podemos entonces resumir que los tres primeros tipos de aberraciones cromosmicas estructurales, se caracterizan por ser no balanceadas, mientras que las dos ltimos generalmente se presentan como balanceadas. El trmino balanceado significa desde el punto de vista gentico, que a pesar de la existencia del defecto genmico, el individuo se comporta fenotpicamente sano, sus defectos fenotpicos generalmente se expresan en la etapa reproductiva, presentndose en ellos fallas que van, desde infertilidad y abortos espontneos hasta malformados mltiples y muerte neonatal.

Expresin de las aberraciones cromosmicas autosmicas no balanceadas Estos criterios pueden ser resumidos como:

. Anormalidades anatmicas que varan de acuerdo con el cromosoma involucrado y la magnitud del segmento involucrado, pudiendo tratarse de defectos congnitos, debido a anormalidades de los genes del desarrollo, como veremos en el Captulo 17, y de pequeos defectos de crneo, cara, manos, pies y genitales (regiones acrales del cuerpo) que generalmente se producen por crecimientos desproporcionados de ellas durante el desarrollo embriofetal.
. Anormalidades del crecimiento y del desarrollo que pueden estar presentes al nacimiento o que comienzan a observarse en etapas postnatales. . Anormalidades del funcionamiento del sistema nervioso central, que dan lugar a discapacidades mentales variables, que incluyen desde trastornos del aprendizaje hasta retraso mental o defectos conductuales.

Malformaciones congnitas asociadas a un patrn dismrfico, se observan en el fenotipo de aberraciones cromosmicas autosmicas.

Defectos congnitos del corazn y de los grandes vasos. Paladar hendido, labio leporino o ambos. Atresia esofgica, fstula traqueoesofgica, atresia anal, fstula anal. Malrotacin del intestino, mesentrca comn, onfalocele. Malformaciones renales y del tracto urinario. Ciertas malformaciones cerebrales, las ms frecuentes: la holoprosencefalia y la agenesia del cuerpo calloso. Ausencia o hipoplasia del radio y del pulgar. Polidactilia post-axial y pre-axial de los pies. Microftalmia, coloboma ocular. Espina bfida (occipital o lumbar). Genitales ambiguos, hipospadia.

Anencefalia. . Gastroquisis. . Extrofia de vejiga o cloaca. . Siringomelia. . Peromelia, amelia, facomelia, ectrodactilia. . Atresia del yeyuno o leo.. . Situs inverso total. . Artrogriposis congnita. . Defectos perineales o cubitales.

Citogentica molecular FISH

SONDA
FLUORESCENTE

SECUENCIA
COMPLEMENTARIA

Deteccin de anomalas no detectables por tcnicas de citogentica de rutina

Hibridacin in situ fluorescente FISH

Hibridizacin in situ: Es una tcnica que permite la deteccin de

secuencias especficas de cidos nucleicos (ADN o ARN), en cromosomas o ncleos interfsicos utilizando sondas o probes marcados. Puede ser FISH (fluorescente) o RISH (radioactiva).

Ventajas:
-Detectar aberraciones cromosmicas (microdeleciones y pequeas translocaciones) que no pueden ser vistas por tcnicas tradicionales. -Conocer la procedencia de minicromosomas marcadores. -Permite trabajar en ncleos interfsicos Ej: Diagnstico prenatal

Desventajas:
-La tcnica resulta cara. -Confirmacin de estudios citogenticos.

TRISOMA DEL CROMOSOMA 8 EN INTERFASE

TRISOMA 18 EN NCLEO EN MDULA SEA

TIPOS DE SONDAS Locus-especificas

Secuencia especifica del ADN LOCUS DETERMINADO Reordenamiento estructurales Anormalidades estructurales

1p19q Sondas locus especificas

1p: Sonda verde, 19q: Sonda roja

NEUROCITOMA CON COMPLEMENTO NORMAL OLIGODENDROGLIOMA: CO-DELECIN 1P19Q

TIPOS DE SONDAS Centromericas (CEP)

Reconoce 2 - 3% secuencias centromericas. Deteccin de cromosomas concretos Anormalidades numricas

PTEN EN CA PROSTATA Sondas centromericas + Locus especificas

Cromosoma 10: Sonda verde, PTEN: Sonda roja

NORMAL

CARCINOMA

TIPOS DE SONDAS De tincin cromosmico

Deteccin de cromosomas concretos

Anormalidades numricas

M FISH

CARIOTIPO ESPECTRAL SKY

SKY

SKY METAFASE NORMAL

Conclusiones
Aunque en biologa molecular existen muchas tcnicas para deteccin de cambios tanto a nivel del ADN como a nivel cromosmico, el secreto esta en seleccionar la mas adecuada dependiendo de los requerimientos y la disponibilidad