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Introduo
Transcrio
Transcrito primrio
RNA funcional
PROCESSAMENTO de RNA
Introduo
Processamento de RNA
Eucariotes RNAs ribossmicos e RNAs transportadores Procariotes
Modificaes de bases e outros processos
Continuao
1)
Remoo de seqncias intervenientes (ntrons); 2) Adio de seqncias no codificadas pelo gene correspondente; 3) Modificao covalente de certas bases.
Processamento de tRNA-eucariotos
1-Encadeamento
Ocorre clivagem endonuclesica nas extremidades do ntron, liberando-o. Aps, ocorre a ligao dos dois xons por uma RNA ligase. Reconhecimento pelas seqncias das junes exn-ntron.
3- Modificao de bases
Ocorre substituio de bases ou adio de um grupo qumico metila ou etila;
Processamento de rRNA-eucariotos
1- Clivagem dos rRNAs
Ribonucleoprotenas clivam O quarto tipo (5S) de rRNA transcrito separadamente.
2-Modificaes de bases
Ainda durante a transcrio ocorrem modificaes, como metilaes e converses de uridina em pseudouridina ();
Processamento de mRNA
Eucariotes:
Precursores mRNA hnRNA
Molculas grandes e instveis associadas a ribonucleoprotenas
Processamento de mRNA-eucariotos
1. Modificao na extremidade 5
Perda de um grupamento fosfrico cap-sofre metilao Grupamento difosfato reage com uma molcula de GTP- 5-5 com a guanina recm inserida inversa
Processamento de mRNA-eucariotos
2- Modificaes da extremidade 3
conservada
Processamento de mRNA-eucariotos
3-Exciso de ntrons-Introduo
ntrons so seqncias que interrompem os RNAs. Eles so encontrados principalmente em mRNA de eucariotes, mas alguns rRNA e tRNA tambm possuem; So retirados do transcrito primrio e, assim, no fazem parte do RNA funcional;
Processamento de mRNA-eucariotos
3- Exciso de ntrons (encadeossomo)
Organizao do ntron
xon 5
xon 3
Seqncias
GT (DNA)/GU (hnRNA): comeo do ntron 3: AG: final do ntron A no stio de ramificao (dentro do ntron) Comprimento dos ntrons: de 65 a mais de 10.000 nt. Mutaes nas seqncias consensuais ou no stio de ramificao causam um encadeamento anormal.
Processamento de mRNA-eucariotos
3- Exciso de ntrons (encadeossomo)
O encadeossomo um complexo grande e estvel. Devido ao seu tamanho ele no passa pelos poros nucleares. Talvez seja por isto que apenas RNA totalmente processados vo para o citoplasma
Primeira clivagem
Segunda clivagem
Mecanismos do encadeamento:
A 1a reao gera 3OH livre na extremidade do xon 1; A 2a reao liga esse 3OH ao 5P do xon 2; O nmero de ligaes fosfodister permanece o mesmo durantes esses passos; At que os dois xons sejam unidos, os produtos das reaes so mantidos juntos pelo ENCADEOSSOMO: conjunto de ribonucleoprotenas que reconhece a extremidade 5 do stio de encadeamento, a extremidade 3 e o stio de ramificao do mRNA precursor. Encadeossomo: composto por 45 protenas (snRNPs = small nuclear ribonucleoproteins) e 5000 nt de RNA (snRNA = small nuclear RNA); tem em torno de 3X103 kDa Tipos de snRNPs: U1, U2, U4, U5, U6. Todas, exceto U6, possuem um cap = 2,2,7-trimetilguanosina)
Formao do encadeossomo:
1) U1snRNP pareia com a extremidade 5 do stio de encadeamento, cobrindo uma regio de 15 a 17 nt. O snRNA tem 165 nt e contm uma seqncia complementar ao stio de encadeamento; 2) U2snRNP liga-se, juntamente com um fator adicional U2AF, no stio de ramificao do ntron, cobrindo ~ 40 nt. O snRNA tem 185 nt. 3) U5snRNP, mais um fator adicional IBP, se associa com a seqncia 3 do stio de encadeamento, cobrindo 15 nt do ntron. Tem um snRNA de 116 nt. 4) U4 e U6 snRNPs se unem ao complexo e todas as snRNPs so unidas para formar o encadeossomo. Total de RNA coberto de ~ 65 nt (tamanho mnimo observado para um ntron). O ntron s ser removido aps a transcrio ter sido finalizada.
O encadeossomo
O processo de encadeamento:
Controle de qualidade
Processamento de mRNA-eucariotos
4- Encadeamento Alternativo
O que encadeamento alternativo?
Um transcrito primrio pode ser encadeado de diferentes
maneiras;
H situaes em que um mesmo RNA precursor origina dois ou mais mRNA funcionais, dependendo da forma como ele encadeado;
Diferena de processamento- diferena de encadeamento. Onde, em eventos de encadeamento, alguns xons podem ser considerados como ntrons e serem excisados; Assim, a partir de um mesmo gene, formam-se vrias protenas;
Processamento de mRNA-eucariotos
4- Encadeamento Alternativo
Algumas caractersticas O genoma humano contm de 25 a 30 mil genes que codificam protenas; evidenciado que 40-60% dos genes humanos apresenta encadeamento alternativo; 70-88% dos eventos de encadeamento alternativo mudam o produto da protena; Este processo faz com que a diversidade genmica seja maior sem aumentar o nmeros de genes;
Processamento de mRNA-eucariotos
4- Encadeamento Alternativo-Exemplos
A) Calcitonina Humano
B) Intersectina 1
Processamento de mRNA-eucariotos
4- Encadeamento Alternativo-Exemplos C) a-tropomiosina: rato
Processamento de mRNA-eucariotos
4- Encadeamento Alternativo-Exemplos
D) Diferenciao de sexo em Drosophila
melanogaster
Processamento de mRNA-eucariotos
5- Auto-Encadeamento
A remoo de ntrons neste processo envolve tambm a quebra de uma ligao fosfodister nas junes xon-ntron;
H duas formas conhecidas deste processo que depende dos ntrons presentes;
ntrons do grupo 1 ntrons do grupo 2
Processamento de mRNA-eucariotos
ntrons do grupo 1
Possuem seqncias conservadas que formam estruturas secundrias para ocorrer o encadeamento; Foi descoberto em precursores de rRNA 26S do protozorio Tetrahymena 1a reao transesterificao
Guanosina exgena
thermophila;
2a reao transesterificao So encontrados em alguns genes nucleares, mas, principalmente, em rRNA, Forma linear tRNA de mitocndrias e cloroplastos e em mRNAs de eucariotes inferiores (fungos) e bacterifagos
Processamento de mRNA-eucariotos
ntrons do grupo 2
Possuem as seqncias GU e AG e a adenina conservada; Estes ntrons so tambm retirados, de forma semelhante a de ntrons tradicionais (podem ser os ancestrais); 2a reao transesterificao Encontrados em mRNA mitocondrial de fungos e de cloroplastos de organismos unicelulares; forma de lao 1a reao transesterificao
Reaes de auto-encadeamento podem ser classificadas de acordo com a unidade que ataca o stio 5 de encadeamento:
ntrons do grupo 1: cofator Guanosina ntrons do grupo 2: cofator Adenina Nos ntrons removidos via encadeossomo o cofator tambm uma Adenina. Liberao do ntron na forma de lao nos dois ltimos casos