El ncleo de cido 6-aminopenicilnico (6-APA) consta del anillo betalactmico y del anillo tiazolidnico.

En celeste se muestra el radical acilo, que se puede modificar para generar distintas penicilinas semisintticas con propiedades diferentes a la penicilina natural.

 Las

penicilinas naturales tienen su origen en distintas especies de hongos del gnero Penicillium sp, principalmente las especies Penicillium notatum y Penicilium chrysogenum. Dichas especies producen diferentes penicilinas naturales, entre las cuales ocupa un lugar destacado la conocida como penicilina G.

Molcula orgnica que puede ser incorporada a la molcula final con actividad antibitica.

Precursor Fenilacetato Fenoxiacetato

Antibitico Penicilina G Penicilina V

cido fenilactico
cido 6-aminopenicilnico cidos benzoicos sustituidos cido 7-aminocefalospornico

Bencilpenicilina
Amoxicilina y Ampicilina Novobiocinas Cefalexina

La va metablica esta dividida en dos ramas Su va metablicas requiere de enzimas especializadas En esta va, los m o. son capaces de llegar a la isopenicilina N (intermediario)
Penicilina hidrofbicas Penicilina benzoica/G Penicilina N Penicilinas hidroflicas Cefalosporina

Isopenicilina N

Representacin catablica por glucosa Es la mejor fuente de carbono y energa para el crecimiento de m.o. productores de antibiticos. El empleo de sta, disminuye notablemente la produccin de -Lactamicos. fuentes de carbono, la glucosa se ocupa primero y se detiene la biosntesis del antibitico. .

Regulacin catablica: La combinacin entre glucosa y con otra azcar, reprimen la produccin de la enzima ACV sintetasa e Isopenicilina N sintetasa. En la produccin industrial se utiliza lactosa, con la cual se obtienen rendimientos mas altos A niveles industriales, se emplea combinacin de glucosa-lactosa y medios de glucosa a bajas concentraciones.

 El

suministro de oxigeno Temperatura La agitacin Velocidad de agregado de nutrientes El tipo de reactor Concentracin de sodio para la cristalizacin Secado y lavado de cristales

 Son

molculas de bajo peso molecular, que intervienen como productos finales o intermediarios. a la produccin de biomasa o energa por las clulas.

Contribuyen

 Son

necesarios para el crecimiento del m.o. que lo produce. producidos durante crecimiento o trofofase. la fase de

Son

Ejemplos:

aminocidos, los nucletidos, las vitaminas, los cidos orgnicos, y enzimas.

Son sintetizados a partir de intermediarios del metabolismo primario por enzimas especficas.
No

son esenciales para el crecimiento. a producirse en la fase de idiofase

Tienden

 Son

especficos para cada especie.

Penicillium notatum

Penicillium chrysogenum

Penicillium chrysogeizuin

 Cepa pH Fuente

de Nitrogeno Fuente de Carbono Temperatura Aireacin y agitacion Velocidad especfica de crecimiento

El nitrgeno es utilizado para:

La biosntesis de protenas, cidos nucleicos y polmeros de la pared celular.

Para la sntesis de protena se requieren en general Laminocidos. Para su incorporacin a la pared de la clulas algunos aminocidos de la serie D como D-alanina y D-asprtico. En algunos casos se requieren tambin pptidos de histidina

INORGNICAS

ORGNICAS

Amonaco Sales de amonio.

Hidrolizados de protenas (Peptonas) Extracto de carne. Extracto de levadura, es bsicamente una mezcla de aminocidos, pptidos, vitaminas solubles en H2 O y carbohidratos. Extracto de malta. "Cornsteep", el agua de maceracin de la industria del maz.

Caractersticas Aumenta los rendimientos de los antibiticos al suministrar compuestos como aminocidos, factores de crecimiento, precursores de la cadena lateral, adems de elementos trazas. Fuente importante de fsforo. Si se desea obtener un determinado tipo de penicilina, se debe incluir inicialmente, o bien por alimentacin en los medios, una cantidad relativamente grande de precursor. El requerimiento terico de fenilacetato sdico, es 0.47 g g-1 de penicilina G cida, y de fenoxiacetato de sodio, 0.50 g g-1 de penicilina V cida.

Pruebas para Evaluar la Potencia Microbiologica

 La

potencia o actividad de los antibiticos se calcula comparando el grado de inhibicin de microorganismos sensibles y especficos producida por concentraciones conocidas del antibitico analizando y una sustancia de referencia.

Para valorar microbiolgicamente un antibitico, se pueden emplear dos mtodos: Mtodo: cilindro-placa (mtodo de difusin en agar) Mtodo turbidimtrico

 Se

basa en la difusin del antibitico desde un cilindro vertical, a travs de una superficie con agar inoculado con el m.o. de prueba. difusin origina zonas de inhibicin del m.o. cuyo dimetro esta en relacin con la concentracin del antibitico.

La

Se basa en medir espectrofotomtricamente el crecimiento del m.o. de prueba en un medio de cultivo liquido que permite su rpido crecimiento y en el que al adicionar concentraciones crecientes del antibitico se inhibe el crecimiento en forma proporcional a la concentracin adicionada.

 Alimentacin

con (NH4 )2SO4 ) permite mantener niveles del mismo de aproximadamente 20 mM. El requerimiento de grandescantidades de NH4+ se puede reflejar a su necesidad para la sntesis de glutamato, el cual es requerido para producir valina y cistena.

 Determinar

la potencia de un antibitico producido por va microbiana, comparndolo con uno comercial utilizando una tcnica microbiolgica.

 Crecimiento

y produccin Determinaciones: Peso hmedo Determinacin de azucares reductores por el mtodo de DNS Bioensayo

MEDIO SEMILLA

Preparar 50mL de medio semilla en un matraz de 250mL Inocular con una suspensin de esporas de Penicillium chrysogenum Incubar en agitacin a 200rpm a 25C durante 48hrs.

MEDIO DE PRODUCCIN

Preparar 200mL de medio de produccin y colocarlo en un matraz de 500mL e inocular con 10mL de medio semilla con crecimiento. Incubar con agitacin an200 rpm a 25C durante 96hrs. Tomar 10mL de la muestra antes y despues de inocular y cada 24hrs. (colocarlas en tubos con tapon de rosca y guardar en congelacin

 Peptona

8g Extracto de carne 3g Cloruro de manganeso 10x10-3 Agua destilada 1L

AMORTIGUADOR

DE FOSFATOS Fosfato de potasio monobasico 6.4g Fosfato de potasio dibasico 0.25g Agua destilada 1L Ajuste de pH a 5.5

 Preparar

una solucin patrn de penicilina de 10g/L y realizar las siguientes soluciones

Solucin patrn (mL)
1 0.8 0.6 0.4 0.2

Amortiguador de Concentracin (g/mL) fosfatos (mL)

0 0.2 0.4 0.6 0.8 10 8 6 4 2

0.1

0.9

Preparar 100mL del medio para crecimiento del microrganismo en un matraz de 250mL, esterilizar e inocular con el microrganismo Incubar con agitacin a 200rpm y 37C durante 24hrs.

Inoculacin del medio Bacillus subtilis

Preparar 350mL de caldo soya tripticaseina y agregue agar bacteriolgico necesario para que la concentracin final sea de 1% Esterilice durante 15 min. A 15 libras de presin. Enfriar a 45C e inocular con 0.6mL de cultivo Bacillus subtilis

Lavar y desinfectar una caja de acrlico de 30x30cm con metanol y vaciar el agar soya inoculado y dejar solidificar Hacer pozos con un horador de 8mm de dimetro e identifquelos Colocar 60L de solucin patrn de penicilina (diluir con solucin de fosfatos). Poner cuidadosamente la placa en refrigeracin durante 30 min. E incubar a 35C de 24 a 48hrs y medir halos

Medio de Bacillus subtilis

Adicin de solucin patrn

 http://www.science.oas.org/Simbio/mbio_in

d/cap9_mi.pdf