Regulacin de la actividad enzimtica, 1

Regulacin de la actividad enzimtica

v=

k+2e0 s

Km + s

Vmax s

Km + s

I. Sobre e0: Regulacin de la concentracin enzimtica II. Sobre Km y k+2: Regulacin de la actividad intrnseca de la enzima 1. Regulacin alostrica 2. Regulacin por modificacin covalente

Regulacin alostrica Procesos a nivel celular; regulacin de ajuste fino de la actividad enzimtica, a travs de efectos de retroalimentacin (negativa o positiva)

Regulacin por modificacin covalente

Procesos a nivel supracelular (orgnico); regulacin a gran escala de actividades enzimticas, a travs de modificacin covalente de enzimas, provocadas por seales (transduccin de seales)

Retroalimentacin negativa en vas metablicas, 1

Sntesis de Isoleucina Thr

Treonina desaminasa

a-cetobutirato

Ile

El producto final de la ruta, Isoleucina, inhibe a la primera enzima de la misma, Treonina desaminasa

Retroalimentacin negativa en vas metablicas

Sntesis de pirimidinas

ATP
+ Asp + CP ATCasa Carbamil aspartato CTP

El producto final de la va, CTP (citidin trifosfato) inhibe a la primera enzima de la ruta metablica, Aspartato transcarbamilasa Al mismo tiempo, dicha enzima puede ser activada por ATP

Rutas metablicas controladas por retroalimentacin

Ruta Glicolisis Neoglucognesis Bios. cs. Grasos Bios. Colesterol Bios. Purinas

Enzima

Inhibidor

Fosfofructokinasa ATP FBP fosfatasa AMP AcetilCoA carboxilasa AcilCoA HMGCoA reductasa Colesterol PRPP sintetasa AMP,GMP,IMP

En el estudio de las enzimas controladas por realimentacin negativa, se comprobaron una serie de regularidades en las mismas:

1. Primer paso de una ruta metablica o punto de ramificacin 2. Enzimas de naturaleza compleja: subunidades; la enzima puede desensibilizarse a sus inhibidores por diversos mtodos. 3. Los inhibidores se comportan como competitivos (elevan el valor de la Km aparente, pero sin embargo no son anlogos estructurales del substrato
Estas ltimas caractersticas lleva al concepto de alosterismo: Una accin sobre la actividad enzimtica que se desarrolla fuera del Centro Activo (Jacob y Monod, 1960)

Centro alostrico

Centro activo

Centro alostrico

Centro activo

En ausencia de inhibidor, el substrato se fija normalmente al centro activo

Cuando el inhibidor ocupa el centro alostrico, tiene lugar un cambio conformacional en el centro activo que impide la fijacin del substrato

Inhibicin alostrica

Otra caracterstica importante de las enzimas alostricas es que presentan cinticas anmalas, normalmente cinticas sigmoides:

La presencia de una sigmoide implica la existencia de cooperatividad en la fijacin del substrato

s

La cooperatividad (positiva) consiste en que la fijacin de una molcula de substrato favorece la fijacin del siguiente, y as hasta ocuparse toda la molcula

+
1

s s

+
2

s s s

+
3

s s s s

En trminos de Km veramos que Km1 > Km2 > Km3 Existe tambin cooperatividad negativa, cuando la fijacin de una molcula de substrato dificulta la fijacin del siguiente.

El comportamiento cooperativo implica:

1. Que hay ms de un sitio de fijacin de substrato por molcula de enzima (estr.cuaternaria) 2. Que hay interacciones entre los sitios de fijacin

Un sistema alostrico clsico es la Hemoglobina:

1. La fijacin de su substrato, O2, es de tipo sigmoide

2. La fijacin del substrato puede inhibirse por efectores (H+, CO2, 2,3-BPG) que no actan sobre el Centro Activo (grupo hemo) 3. Las subunidades, por separado, presentan cintica michaeliana en la fijacin de O2

Cinticas michaeliana y sigmoide: Mioglobina y Hemoglobina

1.0

Y
0.8

Mioglobina

0.6

0.4

Hemoglobina
0.2

0.0 0 2 4 6 8 10 12

Efecto del pH sobre la saturacin de la hemoglobina

(Efecto Bohr)
100

80

pH 7.0
pH 7.4

Saturacin de O2, %

60

pH 6.6
40

20

0 0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg

Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG) sobre la saturacin de la hemoglobina

100

80

Saturacin de O2, %

0
60

0.1 mM 1 mM

40

20

0 0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg

Inhibidores y activadores alostricos

1.0

(+ Activador)

0.8

V+
0.6

(sin efectores)

V0
0.4

(+ Inhibidor)
0.2

V0.0 0 2 4 6 8 10

s
12

Los efectores alostricos operan sobre el grado de cooperatividad del sistema:

- Los inhibidores alostricos aumentan el grado de cooperatividad

- Los activadores alostricos disminuyen el grado de cooperatividad; a concentraciones elevadas de activador, la cintica pasa a ser michaeliana, y deja de ser sigmoide.

Ecuacin de Hill

Ks y h 1 Ks
_

h > 1, cooperatividad positiva h = 1, no hay cooperatividad

h < 1, cooperatividad negativa

Obsrvese que para h=1, esta ecuacin se reduce a una forma normalizada de la ecuacin de Michaelis-Menten:

v k 2 x s Ka s Km s y Vmx k 2 e0 Km s 1 1 s 1 Ka s Km
_

Forma R s L s s

Modelo MWC
s s s s s s s

i i Forma T i i i i

i i

i i

a 1 a y n L 1 a
_ n 1

a: Concentracin normalizada de substrato, s/Km L: Constante alostrica: a mayor valor de L, mayor grado de cooperatividad (positiva)

n: Nmero de sitios de fijacin de substrato