CONTROL DE CALIDAD DE PRODUCTOS BIOLGICOS Y BIOTECNOLGICOS

Definiciones
Medicamentos de Origen Biolgico: Son productos obtenidos a partir de organismos vivos o de sus tejidos, como virus, sueros, toxinas, antitoxinas, sangre, componentes derivados de la sangre, productos alergnicos, hormonas, factores estimulantes de colonias, citoquinas, anticuerpos, entre otros. Las fuentes y mtodos de produccin comprenden pero no se limitan al cultivo de clulas, cultivos de microorganismos, extraccin a partir de tejidos o fluidos biolgicos, tcnicas de ADN recombinante, transgnesis, tcnicas de hibridoma, propagacin de microorganismos de embriones o animales, entre otros. Medicamentos de Origen biotecnolgico: son productos cuyo ingrediente farmacutico activo se ha obtenido mediante el empleo de microorganismos o clulas vivas por la tecnologa del ADN recombinante y/o tcnicas de hibridoma, entre otros. Ministerio de salud y Proteccin Social (Modificacin parcial Decreto 677 de 1995, Versin 24-01-2012)

Definiciones continuacin I
Vacunas: Preparaciones que contienen sustancias antignicas capaces de inducir en humanos una inmunidad activa y especfica contra un agente infeccioso, sus toxinas o los antgenos elaborados por ste. Toxinas/Toxoide: Agentes utilizados para diagnosticar el estado de inmunidad o en teraputica como inmunomodulador. Producto Alergnico: Todo producto destinado a identificar o provocar una modificacin especfica adquirida de una respuesta inmunolgica a un agente alergizante. Ministerio de salud y Proteccin Social (Modificacin parcial Decreto 677 de 1995, Versin 24-01-2012)

Definiciones continuacin II
Vacuna : Preparaciones que contienen antgenos como ingrediente farmacutico activo, capaces de inducir una inmunidad activa y especfica, con potencial protector frente al agente infeccioso ( sus toxinas y/o toxoides) del cual provienen dichos antgenos. Estas preparaciones incluyen, las vacunas basadas en microorganismos atenuados, fracciones de microorganismos atenuados productos de microorganismos generados mediante procesos biotecnolgicos. Toxinas/Toxoide: SE SUGIERE ELIMINAR ESTE PUNTO del decreto 677 de 1995 . Producto Alergnico: Producto basado en alergnos, destinado a identificar la reactogenicidad que frente a este estos, puede exhibir un individuo con respuesta de hipersensibilidad inmediata (alergia). Facultad de Ciencias, Departamento de Farmacia, Grupo de investigacin en inmunotoxicologa. Observaciones y sugerencias a la segunda versin fase dos de discusin decreto biotecnolgicos. Mayo 30 de 2012.

Definiciones continuacin III

Producto biolgico: cualquier derivado de la materia viva como virus, suero, toxina o antitoxina. Virus: cualquier agente infeccioso que pasa a travs de los filtros de porcelana que varan entre 0,2 y 0,01 Suero: producto obtenido de la sangre humana o animal al eliminar de sta los componentes del cogulo y las clulas sanguneas. Toxina: sustancia soluble, venenosa, que administrada al hombre o a los animales, en dosis no mortal, tiene la propiedad de producir otra sustancia soluble que neutraliza especficamente la sustancia venenosa. Antitoxina: sustancia producida como respuesta a la administracin de toxinas, con las cuales reacciona especficamente, neutralizndolas. Vacuna: Todo agente capaz de producir inmunidad activa, contra una enfermedad determinada. Antgenos: sustancia proteica que introducida en el organismo animal provoca la formacin de anticuerpos. Toxoides: toxina cuya toxicidad ha sido destruida, pero que conserva todava el poder antignico. NTC 997

Segn la OMS, los siguientes medicamentos son productos biolgicos: Vacunas Derivados de sangre y plasma humano Alergenos Sueros inmunes Antgenos Inmunoglobulinas Hormonas Anticuerpos Citocinas Productos de fermentacin Enzimas Reactivos empleados para diagnstico in vitro

 PRODUCTO BIOLGICOTodo virus, suero teraputico, toxina, antitoxina o producto anlogo aplicable a la prevencin, tratamiento o cura de enfermedades o lesiones en seres humanos. (El trmino producto anlogo indica que incluye esencialmente productos obtenidos por biotecnologa y procedimientos que incluyen la terapia gnica, los productos transgnicos y la terapia celular somtica). USP

Vacunas y Bacterias Antgenos Inmunizacin Activa

Toxoides

Clasificacin productos biolgicos, segn su uso

Antitoxinas

Inmunizacin Pasiva

Antiponzoas

Sueros Productos Biolgicos

Agentes de Diagnostico

Toxinas

Tuberculinas Antgenos diversos Ponzoas

Productos Varios

Alrgenos

Pirgenos Protenas; Extractos Alergenicos

NTC 997

Productos biolgicos (USP)

Deben contar con una licencia segn la Ley y cumplir con el Reglamento sobre Alimentos y Medicamentos.
Disposiciones generales: Pruebas de potencia. Pruebas de seguridad general. Pruebas de esterilidad. Pruebas de pureza. Pruebas de agua (humedad residual). Pruebas de pirgenos. Pruebas de identidad. Pruebas de materiales constituyentes. Se deben cubrir aspectos de: Identidad Calidad Pureza Potencia Envasado Almacenamiento

Etiquetado
Nombre Nombre, direccin y # de licencia de fabricante Fecha de caducidad

# de lote

Etiquetado

Dosis individual recomendada (para envases multidosis)

ADICIN: Conservante utilizado y la cantidad. # de envases ( si hay mas de uno) Cantidad de producto contenida en el envase. Temperatura de almacenamiento recomendada. Una leyenda.

virus

producto anlogo

suero teraputico

Medicamento obtenido a partir de Microorganismos Sangre u otros Tejidos

Antitoxina toxina

Agentes Inmunizantes activos (Vacunas) Extractos alergnicos Modificadores de la respuesta biolgica (citocinas) Sangres y derivados de la sangre Terapias celulares Productos diagnsticos
Anticuerpos y antgenos in vitro Antgenos de prueba cutneos diagnsticos in vivo

Enzimas y venenos Agentes inmunizantes pasivos (productos con anticuerpos)

Lotes aprobados:

si cumplen con los requisitos de Control Especficos para dicho producto segn est establecido.

Licencias:
Aprobacin de serie de pasos de produccin Pruebas durante el proceso, Especificaciones sobre el producto final.

 Pruebas que aseguren que el material contenido en el envase se corresponde con lo indicado en la etiqueta del Identidad: mismo. Pruebas especficas para cada producto que indiquen si ste, al ser administrado a un individuo, estimular una Potencia: respuesta inmune adecuada. Pruebas que permiten detectar la ausencia de productos extraos en la preparacin (sean o no peligrosos para el individuo o dainos para el producto).

Pureza

Esterilidad <71>

Pruebas que demuestren la ausencia de organismos vivos en la preparacin.

Endotoxinas Bacterianas <85>

Las endotoxinas son un subconjunto de pirgenos que vienen de bacterias gram negativas, son txicas

Seguridad General <88>:

esta diseada para detectar cualquier reactividad biolgica imprevista e inaceptable en un artculo.

 esta diseada para limitar a un nivel aceptable el riesgo de reaccin febril en pacientes a los que se inyecta un determinado producto. La prueba mide el aumento de la temperatura corporal en conejos a los que se inyecta una Pirgenos <151> solucin de prueba por va intravenosa.

Agua (Humedad Residual) <921>:

Permite cuantificar la cantidad de agua presente , en forma de hidratos o agua en forma adsorbida.

Productos Biolgicos
Auxiliares y diversos materiales, para su produccin
Conservantes Diluyentes Adyuvantes

Medios de Cultivo

Todo material y compuesto usado debe cumplir con las normas Farmacopicas.

 Obtenida de suero o plasma sanguneo Potencia: ensayo de neutralizacin en cultivos de tejido o en ratones

Preparacin en cultivo del virus en embriones vivos en huevos de gallina Suspensin Secado

Potencia: DL 50 en ratones Unidades Formadoras de placas

Producto Biolgico Medicamento

Producto Biotecnolgico Medicamento

Protenas Recombinantes, Anticuerpos Virus, Suero Teraputico, Monoclonales, Vectores para el transporte de Toxina, Antitoxina o Producto material gentico, Fragmentos de Anticuerpo, Anlogo cidos Nuclicos, Oligonucletidos Antisentido, Vacunas, etc Obtenido a partir de Microorganismos, Sangre u otros Tejidos Tejidos aplicable a la prevencin, tratamiento o cura de enfermedades o lesiones del hombre.

Obtenidos a partir de tcnicas de biotecnologa

Comparten la caracterstica de ser productos medicinales

Terapia
celular: ingredientes activos clulas vivas de mamferos gnica: incluye fragmentos de acido nucledos (ADN)
Vectores virales cidos nuclecos en formulacin simple cidos nucledos formulados liposomas.

Halogenicos

Autologos

Xenogenicos

Aptitud

Identificacin

Caracterizacin

Materias Primas

Identificacin.
Toxicidad Disponibilidad Uniformidad Uniformidad Rastreabilidad

Aptitud: : su fin es estimar riesgo para la seguridad , potencia y pureza.

Biocompatibilidad con materiales polimricos. Toxicidad

Caracterizacin:
Identidad Pureza Funcionalidad Ausencia de contaminante adventicios.

Metodologas analticas

Pruebas de identidad

Pruebas de seguridad

Pruebas de pureza

Celular
Citometria de flujo.

Gnica Viral
Mapeo de enzimas de restriccin

Isoenzimas

Inmunoensayos

Morfologa y tiempo de duplicacin.

 Prevenir el uso inadvertido de clulas las, tejidos o agentes de terapia gnica contaminados y con riesgo de transmitir enfermedades infecciosas. Evitar el uso de productos mal manejados o procesados y en consecuencia contaminados. Garantizar la seguridad cuando se adaptan terapias celulares y gnicas par un uso diferente del de sus funciones o contextos normales.

VIH tipo 1, VIH tipo 2, hepatitis B, hepatitis C y sfilis

Pruebas especificas:

deteccin sistmica, indicacin de alto riesgo de infeccin

antecedentes mdicos

PCR y el anlisis de hibridacin del ADN o ARN por dot blot

Terapia celular

Terapia viral.
Citometria de flujo Electroforesis PAGE no desnaturalizante. Seguido de westerm blot

Hibridacin de ADN dot blod

ELISA cuantitativo

HPLC analtica
Secuenciacin de pptidos Espectroscopia de masas.

Anlisis General
DESCRIPCIN IDENTIFICACIN

VALORACIN
- Titulaciones

IMPUREZAS
- Metales pesados

- Titulacin
- Electroforesis - Perdida por secado - Espectrometra de masas - RMN - Determinacin de agua

- Espectrofotometra - Cromatografa - Color - Electroforesis - Espectrometra de masas - RMN

- Cromatografa - Electroforesis - Espectrometra de masas - RMN

- Cristalinidad
- pH

- Rotacin ptica

Ensayos
Fisicoqumicos
RMN, cromatografa, electroforesis, Masas, distribucin de partculas, pH, ndice de refraccin, espectrofotometra

Caracterizacin
Funcionalidad Seguridad

Cromatografa, electroforesis, masas, RMN, Valoraciones de contenido proteico, secuenciacin de protenas

Reactividad biolgica in vivo, in vitro. Anlisis biolgico, Adecuacin biolgica de Protenas Test limite microbiano, Pruebas de esterilidad, Prueba de endotoxinas, Prueba de pirgenos, Seguridad viral.

Anlisis de construccin expresable

en clulas usadas para la produccin de productos proteicos obtenidos con ADN recombinante

DEFINICIONES
Construccin Expresable
Vector de expresin que contiene la secuencia codificadora de la protena recombinante y los elementos necesarios para su expresin

Banco de Clulas Madre BCM

Es una alcuota de una combinacin nica de clulas que se ha preparado por lo general a partir de un clon celular seleccionado en condiciones definidas, dispensada en mltiples recipientes y almacenada en condiciones definidas

Banco de Clulas de Trabajo BCT

Alcuotas de una suspensin homognea de clulas obtenidas del cultivo del material del BCM en condiciones de cultivo definidas

Evaluacin general de calidad

Anlisis de cidos nuclecos

Evaluacin de la protena final purificada

Anlisis de segmentos de la construccin expresable

Anlisis de segmentos
Asegura calidad y uniformidad del producto final Evala la secuencia codificadora de un gen recombinante IMPORTANTE Incorporacin de la secuencia codificadora correcta La secuencia se mantiene sin cambios desde el comienzo del cultivo hasta el final de la produccin

Tcnicas empleadas
Anlisis de cidos nuclecos
Asegura que la protena expresada tendr la secuencia de aa correcta Estado fsico de la construccin expresable

Anlisis de la protena Evala secuencia de aa y caractersticas recombinante estructurales purificada.

Anlisis del producto de la transcripcin Determina que copia integrada de la construccin expresable es activa

Anlisis de ARNm.

Caracterizacin del sistema de expresin

Id y fuente de la clula originaria

Mtodo empleado para la preparacin de ADN

Detallar secuencia completa del plsmido

Pasos empleados para ensamblar la construccin expresable Cuantas protenas expresables son codificadas por el plsmido Determinar secuencia nucleotidica de la regin codificadora del gen de inters y de las regiones adyacentes

Evaluacin de seguridad viral

en productos biotecnolgicos obtenidos de lneas celulares de origen humano o animal

La seguridad de estos productos respecto a la contaminacin viral se garantiza mediante: Aplicacin de un programa de pruebas de deteccin viral Evaluacin de procesos de eliminacin e inactivacin viral efectuados durante la fabricacin

Enfoques en el potencial de contaminacin viral

1.
Determinacin de ausencia de virus indeseables, infecciosos y/o patgenos para los seres humanos, en lneas celulares y otras materias primas

2.

Evaluacin de la capacidad de los procesos de produccin para eliminar los virus infecciosos

3.

Realizacin de pruebas de producto en fases apropiadas de la produccin para verificar la ausencia de virus infecciosos contaminantes

Limitaciones
Capacidad de detectar concentraciones virales bajas
Depende por razones estadsticas del tamao de la muestra

Aplicar un solo enfoque no establecer la seguridad de un producto La certeza de ausencia de virus no se establece nicamente con pruebas directas
Demostrar la capacidad de eliminar o inactivar los virus

Alcance
Depende de

Caracterizacin del banco de clulas Naturaleza de virus detectados

Componentes del medio de cultivo Mtodos de cultivo

Diseo de instalaciones

Equipos
Capacidad del proceso para eliminar virus

Tipo de producto Uso clnico del producto

Fuentes de potenciales de contaminacin viral

Fuente original de las lneas celulares
Derivacin de lneas celulares de animales infectados Empleo de virus para establecer la lnea celular Empleo de reactivos biolgicos contaminados Contaminacin durante la manipulacin de las clulas

Introduccin accidental de virus durante los procesos de produccin

Empleo de reactivos biolgicos contaminados Empleo de virus para inducir la expresin de genes especficos que codifican la protena deseada Reactivo contaminado Excipiente contaminado durante la formulacin Contaminacin durante la manipulacin de las clulas y del medio

Pruebas para la deteccin del virus

Sugeridas para BCM, BCT y clulas en el limite de edad celular in vitro empleadas para produccin

Procedimientos de Depuracin Viral

Objetivo Evaluar el paso o los pasos del proceso que pueden considerarse eficaces para la inactivacin o eliminacin de los virus Hacer el clculo cuantitativo del nivel general de reduccin viral obtenido por el proceso

Procedimiento
Introduccin deliberada de cantidades significativas de un virus al material crudo y/o diferentes fracciones obtenidas durante los diversos pasos del proceso

Comprobar la eliminacin o inactivacin durante los pasos posteriores

Infectividad viral
Inactividad

Eliminacin

Seleccin de Virus
Virus relevantes
son virus id o de la misma especie que los virus conocidos que contaminan las clulas sustrato o en el proceso

Virus modelo especficos

Virus modelo no especficos

Virus relacionado estrechamente con el virus conocido o presunto (mismo genero o familia), con propiedades FQ similares a las del virus observado

Cualquier virus que demuestre la capacidad del proceso de fabricacin para eliminar y/o inactivar los virus en general (robustez del proceso de depuracin)

Bibliografa
USP 30, Farmacopea de Estados Unidos de Amrica, 2007, Volumen 1. NTC997 1975 Productos biolgicos, definicin y clasificacin. Facultad de Ciencias, Departamento de Farmacia, Grupo de investigacin en inmunotoxicologa. Observaciones y sugerencias a la segunda versin fase dos de discusin decreto biotecnolgicos. Mayo 30 de 2012. Modificacin parcial Decreto 677 de 1995, Versin 24-01-2012