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Los microorganismos que generan productos tiles para el hombre representan algunos cientos de especies de las ms de 100,000 que existen en la naturaleza.
Los microorganismos :
Son qumicamente similares a las clulas de animales superiores Pueden realizar muchas reacciones bioqumicas Existen como clulas simples o como colonias no especializadas, sin capacidad para controlar la temperatura celular Requerimientos para el crecimiento: sales inorgnicas solas o suplementadas de una hexosa simple
Bacterias
Fungi
Algas
Protozoarios
Hongos
Levaduras
Euc.
1 -
>1 + + +
DNA en organelos
Euc.
80S 70S + +0
3x10-12 o 0.5x10-12
Ejemplos de microorganismos:
AEROBIOS:
Estreptomicetos procaritidos (fuente de antibiticos) La mayora de los hongos filamentosos (quesos y alimentos fermentados)
ANAEROBIOS ESTRICTOS:
Clostridium Levaduras
FACULTATIVOS:
HETEROFERMENTATIVOS:
Generan dos o ms productos principales. Ejemplos: bacterias lcticas que convierten la glucosa en cido lctico, etanol y CO2. Clostridium acetobutylieum convierte la glucosa en acetona, etanol, isopropanol y butanol
2.1.1. Procariotas
Bacterias:
Clulas simples que en base a su forma y tamao se dividen en: Cocos: 0.5 a 4 m de dimetro Bacilos: bastones de 0.5 a 20 m de largo por 0.5 a 4 m de ancho Espiroquetas: espirales de ms de 10 m de largo y 0.5 m de ancho
Flagelos bipolares
De los subgrupos de bacterias, slo uno de ellos, EUBACTERIA, tiene microorganismos de inters industrial, como por ejemplo: Bacterias productoras de cido actico Bacterias aerbicas productoras de esporas Bacterias anaerbicas productoras de esporas Bacterias acidolcticas
Acetobacter: bacterias gram (-), capaces de oxidar el cido actico hasta formar CO2 y H2O.
Bacterias acidolcticas
Leuconostoc: son bacterias heterofermentativas que transforman los CHOs en cido lctico, etanol y CO2 Streptococcus: son bacterias homofermentativas que generan slo cido lctico Lactobacillus
ACTINOMICETOS
Grupo de microorganismos pertenecientes a los procaritidos Aerobios estrictos Gram (+) No forman endoesporas El gnero ms grande es el de los Streptomicetos los cuales secretan antibiticos Otro gnero de inters es el de los Micromonospora algunas de cuyas especies tambin secretan antibiticos
2.1.2. Eucariotas
Hongos:
Gran importancia econmica, tanto por su utilidad como por el dao que provocan Importancia industrial:
Enzimas: amilasas, proteasas, pectinasas cidos orgnicos: ctrico, lctico Antibiticos: penicilina Quesos especiales: Camembert, Roquefort
Levaduras:
Las ms de 500 especies que existen se clasifican, normalmente, de acuerdo a su forma de reproduccin, SEXUAL Y ASEXUAL. Las tres principales clases de levaduras son:
Ascomicetos (sexual)
Basidiomicetos (sexual)
Deuteromicetos (asexual)
Ascomicetos:
Saccharomyces cerevisiae: cervecera, vinos, panificacin, preparacin de alcoholes Kluyveromyces fragilis: levadura fermentadora de lactosa explotada en pequea escala para elaborar alcohol a partir de suero de leche Saccharomyces lipolytica: capaz de metabolizar hidrocarburos como una fuente de cido ctrico
Deuteromicetos:
Candida utilis Trichosporun cutaneum: juega un papel importante en los sistemas de digestin aerbica de desechos. Gran capacidad de oxidar compuestos orgnicos Phafta rhodozyma: puede sintetizar carotenoides (astaxantincarotenoide)
Bacterias
Bastn, esferas, espirales 0.5 - 3
Levaduras
Elipsoides, esferas, micelios, cadenas 1-5
Mohos
Micelios, esferas
Ejem:
Bacillus
En algunas
(aerobio),
Clostridium
(anaerobio)
Bacterias
65 75 %
Levaduras
45 55%
Mohos
25 55%
15 25% 5 30%
5 12% 10 50%
5 10 % 10 50%
0.0005 0.022.9
10 - 25
40 - 50 10 60 (50)
1-3
4 - 10 15 (3)
2-7
1-6 4 80 (10) 1.4x108 4.8x107
3-5
15 0.4 0.9
El AISLAMIENTO consiste en la obtencin de un cultivo ya sea PURO o MEZCLADO seguido por una comprobacin para saber si se llevar a cabo la reaccin deseada para obtener el producto deseado
Aislamiento de m.o.
Antes de que el proceso se ponga en operacin comercial se debe confirmar la toxicidad del producto y m.o. Los cultivos deben ser aislados a partir del medio ambiente natural, sin embargo, el Ingeniero Bioqumico puede aislar m.o. a partir de colecciones de cultivo comerciales.
Gmax
Gmax
Cy
LIPASAS: Digestin de un lpido patrn emulsificado en agar. Se presenta por zonas claras o por la precipitacin de cidos grasos liberados por la adicin de Ca2+ en el agar PECTINASAS: licuefaccin de un gel de pectato. El agar de pectina con buffer (pH 5 o 7) presenta zonas muy definidas cuando se les agrega bromuro de cetilmetilamonio (CTAB) para las ENDOPOLIGALACTURONASA o PECTATONASA respectivamente CARBOXIMETILCELULASA: Zonas claras en agar CMC cuando se trata con CTAB
1.
2. 3. 4. 5.
6.
Preparar una serie de medios en los cuales diferentes tipos de nutrientes sean limitantes (C, N, P, O) Usar diferentes formas del nutriente necesario para el crecimiento Usar formas polimricas o complejas del nutriente limitante del crecimiento Evitar usar formas fcilmente asimilables de carbono (glucosa) o nitrgeno (NH4+) que pueden causar represin catablica Asegurarse de que los cofactores conocidos estn presentes (Co3+, Mg2+, Mn2+, Fe2+) Usar buffer para minimizar cambios en pH
Gua para el diseo de un medio en el que se permita una buena formacin de producto (Nisbet, 1982)
Aislamiento antibiticos
de
m.o.
productores
de
La accin antimicrobiana se detecta haciendo crecer al producto potencial, sobre una placa con agar, en presencia del m.o. contra el que se requiere la accin antimicrobiana
Zanher (1978) determin que se pueden aislar antibiticos con un espectro determinado de accin utilizando la combinacin de: Bacillus subtilis y Streptomyces viridrochronisgenes o Clostridium pasteurianum (Ejem: Kirromycina)
Aislamiento antibiticos
de
m.o.
productores
de
En la actualidad, la mayora de pruebas de actividad antimicrobiana se efectan con gnero raros de Actinomycetos con las siguientes caractersticas:
Velocidades de crecimiento bajas Requerimientos nutricionales mayores Esporulacin pobre Baja estabilidad en poblaciones de m.o. provenientes del suelo
ENZIMAS
Histamina-N-metiltransferasa
Antilipidamica
Protelisis
3-HMG-CoA reductasa, enzima condensante Tripsina, plasmina, papana, pepsina a amilasa, sucrasa, b galactosidasa neuraminidasa
Glicohidrolosas
Objetivos: Evitar cambios genticos para retener las caractersticas deseables Proteger contra la contaminacin Retener la viabilidad Un m.o. se puede conservar viable mediante subcultivos repetidos en medio nuevo, pero existe probabilidad alta de mutacin y degeneracin Las tcnicas de conservacin mantienen al cultivo en un estado de animacin suspendida, almacenndolos a temperatura reducida o deshidratados
2. Almacenamiento deshidratada
en
una
forma
Pridham y col. (1973) observaron que de 1800 actinomicetos secos sobre tierra, cerca del 50% eran viables despus de 20 aos de almacenamiento
Liofilizacin
Hacer crecer al cultivo a su mxima fase estacionaria Resuspender las clulas en un medio protectivo como leche, suero o glutamato de sodio Transferir la suspensin a ampolletas Congelar y liofilizar Sellar la ampolleta Almacenar, si es en refrigeracin los m.o. se pueden conservar viables por 10 aos o ms