Introduccin a la Histologa

Jos Roberto Guajardo Martnez

Histologa
Rama de la anatoma que estudia los tejidos animales y plantas, sinnimo de anatoma microscpica, ya que su materia no slo incluye la estructura microscpica de los tejidos sino tambin la de la clula, rganos y sistemas. El cuerpo est compuesto de: - Clulas - Matriz intercelular - El lquido extracelular - (derivado del plasma sanguneo) - que transporta nutrientes y sustancias - de desecho.

Preparacin de los tejidos

Los pasos para la preparacin de tejidos para la microscopia de la luz son: - Fijacin - Deshidratacin y aclaramiento - Inclusin - Corte - Montaje e inclusin de los cortes

Fijacin
Tratamiento del tejido con sustancias qumicas que retardan las alteraciones celulares subsecuentes de la muerte y conservan su estructura. -Formalina y fijador de Bouin: que permite el entrecruzamiento de las protenas y por lo tanto una imagen similar al tejido vivo.

Fijador de boiun: 75 ml de solucin acuosa saturada de cido pcrico, 25 ml de formol y 5 ml de cido actico glacial.

Deshidratacin y aclaramiento
Se realiza la deshidratacin con alcohol empezando con el 50% hasta el 100% para eliminar el agua despus, el tejido se trata con xileno, una sustancia qumica que es miscible con parafina fundida. Este proceso se conoce como aclaramiento, ya que el tejido se torna transparente en xileno.

Inclusin
Con objeto de distinguir entre s las clulas superpuestas en un tejido y la matriz extracelular, se debe incluir los tejidos en un medio apropiado y a continuacin seccionarlos en cortes delgados. Se coloca el tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta que se infiltra por completo. Una vez que se impregna el tejido con parafina, se coloca en un rectanguloulo pequeo, recubierto con parafina fundida y se deja endurecer para formar un bloque de parafina que incluya al tejido.

INCLUSION Estufa a 58 grados con los tres baos de parafina (wax en ingls).

Seccin
Se realiza con un micrtomo, un aparato equipado con una hoja y un brazo que desciende en el bloque de tejido para el corte de 5-10 micras. Tambin se pueden efectuar cortes en tejidos congelados, usando nitrgeno liquido, se seccionan a temperaturas inferiores a 0 C. En ambos casos se procede a teir con colorantes especficos.

Montaje y tincin
Los cortes para microscopia de luz convencional , son seccionados por hojas de acero inoxidable, se montan portaobjetos de vidrio recubiertos con un adhesivo La tincin para microscopia de luz se llev a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles despus se elimina la parafina del corte, despus de lo cual se rehidrata y tie el tejido. Una vez teido, se deshidrata el corte de nueva cuenta

3 clases de colorantes
- Colorantes que diferencian los componentes cidos y bsicos de la clula - Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular - Sales metlicas que se precipitan en los tejidos y forman depsitos de metales en ellos

Los colorantes mas usados son hematoxilina y eosina

Hematoxilina: Es una base que tie los componentes cidos de la clula en azul (DNA, RNA, ribosomas y ncleo; se denominan basfilos) Eosina: Es un acido que tie los componentes bsicos de color rosado (los componentes del citoplasma son bsicos en su mayora; acidofilos)

Microscopio
La calidad tambin depende de la resolucin (la capacidad de la lente que tiene para mostrar 2 puntos separados entre si).

Procedimientos avanzados de observacin

Aprovechan la actividad enzimtica, qumica y otros fenmenos fisicoqumicos relacionados con el mtodo en cuestin. Histoqumica Las reacciones de inters se tornan evidentes mediante la formacin de un precipitado insoluble que toma cierto color. Con frecuencia, la histoqumica se efecta en tejidos congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de luz como en la electrnica. En una reaccin histoqumica se utiliza el reactivo cido perydico de Schiff (PAS ), que forma un precipitado de color magenta con molculas ricas en glucgeno y carbohidratos.

Inmunocitoquimica
En la inmunocitoqumica se utilizan anticuerpos marcados con fluorescena y anti anticuerpos para identificar una localizacin intracelular y extra celular de las macromolculas ms precisa de la que es posible con la histoqumica. Este procedimiento exige desarrollar un anticuerpo contra la macromolcula particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colorante fluorescente (fluorescena o rodamina). Hay procedimientos directo e indirecto

 Microscopia electrnica de transmisin:

Cortes mucho ms delgados, en comparacin con los de la microscopia de luz, para teir los tejidos y se requieren tcnicas de precipitado de metales pesados en lugar de colorantes hidrosolubles. Microscopio electrnico requiere enlaces cruzados de protenas ms finos y especficos. Estos fijadores, por ejemplo soluciones amortiguadas de glutaraldehdo, paraformaldehdo, tetrxido de osmio y permanganato de potasio.

 Microscopia electrnica de barrido

La microscopia electrnica de barrido proporciona una imagen tridimensional del espcimen. A diferencia de la microscopia electrnica de transmisin, la de barrido se usa para observar la superficie de un espcimen slido. Con esta tcnica es posible ver una imagen tridimensional del objeto. Por lo general, el objeto que se observa se prepara en una forma especial que permite depositar en la superficie del espcimen una capa delgada de un metal pesado, como oro o paladio.