MEDIOS DE CULTIVO

Katherine B. Tejada Castillo

Material alimenticio para el desarrollo de microorganismos Los medios de cultivo contiene como minimo: carbono, nitrogeno, azufre, fosforo y sales inorganicas Los colorantes se aaden como indicadores

Medios Medios Medios Medios Medios

sinteticos de enriquecimiento selectivos diferenciales especializados

CLASIFICACION DEL MEDIO DE CULTIVO

qumicamente definidos. Llevan puente de carbono, fuente de nitrgeno: Como agar nutritivo o agar mac Conkey

Medios Artificiales o sintticos

aislamiento de microorganismos poco exigentes No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrgeno para el desarrollo bacteriano

AGAR NUTRITIVO

Xanthomonas campestris

medios complejos con aditivos adicionales para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos Puede o no llevar inhibidores caldo selenito (salmonella typhi), caldo tetrationato para salmonelas en general, caldo lactosado

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO

CALDO TETRATIONATO

Peptona: provee los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos txicos. La selectividad est dada por la presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato y sales biliares, los cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa, como ser la Salmonella spp.

Destinados a facilitar la discriminacin de microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en dichos medios. Ejemplo: agar sangre diferencia hemolticos de no hemolticos; mackonkey diferencia lactosa (+), lactosa (-)

MEDIOS DIFERENCIALES

Este medio s e utiliza para el aislamiento de Gram negativo de fcil desarrollo, permite diferenciar bacterias que utilizan o no la lactosa

las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de de la flora Gram positiva. Por fermentacin de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras

AGAR MAC CONKEY

Peptona Pluripeptona Lactosa

17.0 3.0 10.0

Mezcla de sales biliares Cloruro de sodio

Agar Rojo neutro Cristal violeta

1.5 5.0
13.5 0.03 0.001

Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de hemlisis. Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate

AGAR SANGRE

Frmula (en gramos por litro) Infusin de msculo de corazn Peptona Cloruro de sodio Agar pH final: 7.3 0.2 375.0 10.0 5.0 15.0

Favorecen el crecimiento especfico de un microorganismo particular. Presentan el medio base, adems llevan un sustrato mas indicadores y de manera especial inhibidores A medida que son mas complejos o llevan inhibidores mas selectivos, pasan a la categora de poco, mediano y altamente selectivos

MEDIO SELECTIVO

POCO SELECTIVO: Agar Mac Conkey, agar EMB, ENDO agar, agar brolacin, en ellos desarrollan las entero bacterias, enterococs, pseudomonas, alcaligenes, candida

MEDIO SELECTIVO

medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.

EMB AGAR

eosina y azul de metileno: Diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. lactosa (+): poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada Lactosa (-) : incoloras

EMB AGAR

Frmula (en gramos por litro) Peptona Lactosa Sacarosa Fosfato dipotsico Agar Eosina 10.0 5.0 5.0 2.0 13.5 0.4

Azul de metileno

0.065

Instrucciones Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos hasta su disolucin. Esterilizar en autoclave a no ms de 121C durante 15 minutos. Enfriar a 45C y distribuir agitando suavemente.

pH final: 7.2 0.2

AGAR SS Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. sales biliares y el verde brillante inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas. La salmonella, shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes. La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de hierro.

MEDIAMENTE SELECTIVO

A: Klebsiella pneumoniae. Acid + Lac + B:Escherichia coli.Acid + Lac + C: Salmonella sp..H2S / D:Proteus mirabilis H2S E: Pseudomona aeruginosa

ALTAMENTE SELECTIVOS Son mas especficos, desarrollan pocas especies bacterianas ; as en el agar Chapman o manitos salado o MH desarrollan las micrococaceas, en el sulfito bismuto agar, desarrollan salmonelas especficamente la S. typhi, agar verde brillante es propio para salmonelas, agar XLD

MEDIOS SELECTIVOS

La degradacin de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa, lactosa y sacarosa) genera la produccin de cido haciendo virar el indicador (rojo fenol) de rojo a amarillo. En este medio se incorpora la xilosa porque es prcticamente fermentada por todas las entero bacterias con excepcin de los microorganismos pertenecientes al gnero Shigella.

AGAR XLD

shiguella

La lisina para aumenta la diferenciacin de los microorganismos pertenecientes al gnero Salmonella, ya que sin la lisina estos microorganismos rpidamente fermentan la xilosa produciendo la acidificacin del medio y no se pueden diferenciar de otras especies no patgenas. Como la cantidad de este carbohidrato es limitada, una vez que estos microorganismos lo consumen, comienzan a utilizar la lisina lo cual produce la alcalinizacin del medio

AGAR SAL Y MANITOL

medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el rojo fenoles el indicador de pH .

Fundamento su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayora de los patgenos crece satisfactoriamente Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es til para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos Caractersticas del medio Medio preparado: mbar

AGAR MUELLER HINTON AGAR

Chromobacterium violaceum

Pseudomona aeruginosa

Streptococcus pyogenes

De propagacin Medios que sirven para que la bacteria en estudio se multiplique sin inconvenientes, se usara para antgenos, extractos bacterias, cada especie o genero bacteriano puede tener su propio medio de propagacionel BIH, liquido o en agar, tripticasa soya agaer

Medios Especializados

Medio lquido adecuado para el enriquecimiento y cultivo de bacteriasa erobias y anaerobias, de microorganismos exigentes. Fundamento Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de corazn vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad buffer.

CEREBRO CORAZN INFUSIN

PRUEBAS BOQUIMICAS

Frmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar 3.0 20.0 5.0 10.0 10.0 1.0 0.2 0.2 0.025 13.0 pH final: 7.3 0.2

Instrucciones Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.

TSI

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la de carboxilacin / desaminacin de la lisina y en la produccin de cido sulfhdrico.

AGAR LIA

Frmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Prpura de bromocresol 5.0 3.0 1.0 10.0 0.5 0.04 0.02

Agar

15.0

Instrucciones Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber unos 15 minutos. Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolucin completa. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la puncin.

pH final: 6.7 0.2

triptena aporta triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol. el prpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color prpura y en medio cido es amarillo. Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina de carboxilasa e indol.

MIO MEDIO

La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea de inoculacin. La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al amarillo El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo.

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.

MEDIO SIM

indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac s o deErlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.

El extracto de levadura es la nica fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y cofactores, y aporta los nutrientes esenciales para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfatos constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es el indicador de pH y la urea es el sustrato de la enzima ureasa. Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrogeno proveniente de la urea, la hidrolizan, liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos metablicos alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador rojo fenol del amarillo al rojo. Su uso, se recomienda para diferenciar Proteus spp. de otros gneros

UREA

Urea 1- Uninoculated Control, 2-Proteus Vulgaris 3-E. coli

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad. -Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color

SIMMONS CITRATO AGAR

fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico azul de bromotimol es el indicador de pH. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamientodel citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccinde citrato permeasa.