BIOLOGIA MOLECULAR

Biologa Molecular
Comprensin del funcionamiento de la informacin gentica; cidos nucleicos y sntesis de protenas a nivel molecular
Qu se entiende por un ser que est vivo? (funciona) Cul es la estructura del material gentico? Cmo se replica con tanta exactitud? Cmo se transcribe la informacin gentica? Cmo se traduce, resultando protenas funcionales?

PREGUNTAS

VIDA = CRECER Y MULTIPLICARSE MATERIAL GENETICO = ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO

replicacin

ADN

transcripcin

ARN

traduccin

PROTEINA

ADN

Estructuras de ADN, ARN y Protena

ADN

ARN

PROTEINA

Dogma (las molculas)

(Sntesis de ADN) ADN

replicacin (Divisin celular)

replicacin

ADN ADN

transcripcin

ARN

traduccin

PROTEINA

Replicacin semiconservadora

Divisin celular

Clula madre

ADN nuevos:

Clulas hijas

replicacin
Caractersticas:

(Biosntesis de ADN)

Nuclesidos trifosfato (ATP, GTP, CTP y TTP) (material y energa) Semiconservadora (Una hebra vieja y una nueva a cada hija) Crece desde 5 hacia 3 (la nueva cadena) (ADN polimerasa) Contnua y discontnua (hebra lder y hebra tarda) Bidireccional (ambas hebras viejas sirven de molde)

Etapas:

Iniciacin

Desenrrolla Abre (separa las hebras) Continua: Discontinua: Partidor ARN

(Girasa)
(Helicasa)

Alargamiento

(ADN polimerasa) (ADN primasa)

Segmentos Okasaki (ADN polimerasa) Remocin partidor (ADN polimerasa) Relleno del espacio (ADN polimerasa)

Finalizacin

(Unin fragmentos de ADN)

(ADN ligasa)

Girasa ADN Primasa ADN Polimerasa III

Helicasa
ADN Polimerasa I (Nucleasa) ADN Ligasa SSB protenas (Single Strand Binding)

Replicacin (procariontes)

3 5

3 5 5

Hebra lder (ADN)

3
Partidor ARN
Segmento de Okasaki (ARN-ADN)

Remocin del partidor

Relleno del espacio

Unin de fragmentos de ADN

3 5

Dogma:

ADN

ARN

Protena

Dogma:
transcripcin traduccin

ADN

ARNm ARNt ARNr

PROTEINA

transcripcin
Caractersticas:

(Biosntesis de ARN)

Nuclesidos trifosfato (ATP, GTP, CTP y UTP) (material y energa) Factores de Iniciacin s (sigma) y de Trmino r (rho) No necesita partidor La nueva cadena crece de 5 a 3 (Enzima ARN polimerasa) Molde o Modelo es el gen en la hebra con sentido del ADN Asimtrica (una sola hebra sirve de molde) Punto de partida y punto final definidos

Etapas: Iniciacin

La enzima ARN polimerasa se une al factor s

Reconocimiento del sitio Promotor (P) y se abre la doble hebra Reconocimiento del sitio de Iniciacin (I) ADN

Alargamiento

Formacin de hbridos momentneos ARN (6 a 10 p. b.) La cadena nueva crece (apareamiento de bases complementarias)

Finalizacin

Factor r unido a ARN polimerasa o al ADN, reconoce el sitio final (es un factor de liberacin)

Transcripcin de un gen
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Sense strand

Dogma:
ADN
transcripcin

ARN

traduccin

PROTEINA

transcripcin reversa

Infeccin viral

(Virus ADN)

Transcripcin
ARN m Origen viral

Traduccin

ADN Viral
Protena

Replicacin ADN

ADN Viral

Protena

ADN Viral

ADN Viral

Protena

ADN Viral

Protena

Dogma:
transcripcin traduccin

ADN

ARN

PROTEINA

transcripcin reversa

ARN

ADN

Infeccin viral

(Virus ARN)

Transcriptasa reversa

Replicacin ADN viral

ADN 1 hebra Origen viral

ADN 2 hebras Origen viral

Transcripcin
ARN Viral

Replicacin ARN

ARN mensajero Origen viral

ARN Viral
Protena

Traduccin

ARN Viral

ARN Viral

ARN Viral
Protena

Protena

Protena

Dogma:
ADN
(polinucletido)

transcripcin

ARN
(polinucletido)

traduccin

PROTEINA
(polipptido)

Tanto en la replicacin como en la transcripcin existe una cadenade ADN molde Las cadenas nuevas de ADN o de ARN son sintetizadas por complementaridad de bases. En todos estos casos son polinucletidos sintetizados por complementaridad de bases Las protenas no son polinucletidos sino polipptidos formados por aminocidos

Estructuras de ARN y Protena

Hay una gran necesidad de buscar la relacin que existe entre secuencia de bases (nucletidos) y secuencia de aminocidos.
Se descubri la existencia de un cdigo gentico, que rene las claves, que relacionan un triplete de bases (Codn), con cada aminocido. El cdigo gentico establece la relacin entre codones y aminocidos, pero se presenta otra necesidad, la lectura de los codones con anticodones, por complementaridad de bases

ARN

PROTEINA

traduccin

(Biosntesis de Protenas)

CODIGO GENETICO Relaciona a cada uno de los aminocidos con la secuencia de 3 bases en el ARNm (codn)

El cdigo gentico

(Relaciones entre aminocidos y codones en el mARN) 3

mRNA 5

Ejercicio de relaciones del Dogma

ADN

3'

CCTCAGGATGGATGCTCC 5' 5' GGAGTCCTACCTACGAGG 3'

(Cadena con sentido)

transcripcin

ARNm

traduccin

PROTEINA

Ejercicio de relaciones del Dogma

ADN

3'

CCTCAGGATGGATGCTCC 5' 5' GGAGTCCTACCTACGAGG 3'

(Cadena con sentido)

transcripcin

ARNm

5'

GGAGUCCUACCUACGAGG 3'

traduccin

PROTEINA

Ejercicio de relaciones del Dogma

ADN

3'

CCTCAGGATGGATGCTCC 5' 5' GGAGTCCTACCTACGAGG 3'

(Cadena con sentido)

transcripcin

ARNm

5'

GGAGUCCUACCUACGAGG 3'
Codones de aminoacidos:

traduccin

Pro: CCU, Leu: CUA, Gly: GGA, Val: GUC, Arg: AGG, Thr: ACG.

PROTEINA

Ejercicio de relaciones del Dogma

ADN

3'

CCTCAGGATGGATGCTCC 5' 5' GGAGTCCTACCTACGAGG 3'

(Cadena con sentido)

transcripcin

ARNm

5'

GGAGUCCUACCUACGAGG 3'
Codones de aminoacidos:

traduccin

Pro: CCU, Leu: CUA, Gly: GGA, Val: GUC, Arg: AGG, Thr: ACG.

PROTEINA

(N)

Gly Val Leu Pro Thr Arg ( C )

traduccin

(Biosntesis de Protenas)

ACTIVACIONES:
Aminocidos activos
Unin: Aa ARNt (especficos) (Aminoacil ARNt sintetasa)

Polisomas activos
Unin: Ribosomas - ARNm

Activacin de un aminocido(x)
Unin a ARNt(x)
Anticodn(x)

Anticodn(x)

Aminoacil ARNt sintetasa(x)

x
ARNt(x)

Aax + ATP

Aminocido(x)

Aax
Aminoacil(x) ARNt(x)

Unin de partculas del ribosoma de E. coli

+
30 S 50 S 70 S

Activacin de ARNm (Unin a ribosomas)

Codones en el ARNm

+
ARNm varios ribosomas Polisoma activo

traduccin
REQUERIMIENTOS:

(Biosntesis de Protenas)

-Aminocidos activos (Aminoacil - tARN)n

- ARNm activo (ARNm Ribosoma) - Lectura ARNm (Codn - Anticodn) - Enzima (Peptidil transferasa) - Energa (ATP, GTP) - Ribosomas funcionales (2 partculas) - Ribosoma (Sitios A y P)

COMPLEMENTARIEDAD DE BASES

Codn ARNm

Anticodn ARNt

A U G C

traduccin
(Biosntesis de Protenas)

Iniciacin
Unin mARN a ribosoma (partc. pequea) Reconocim. codn inicial: F-MettARN (AUG) Unin de las 2 partculas del ribosoma

Alargamiento
Reconocimiento de codones internos Avance del ribosoma Transferencia del pptido (sitio P A) (Peptidil transferasa) Crecimiento de la cadena ( N C)

Finalizacin
Reconocim codn final (UAA, UAG, UGA)

Factores de liberacin:

Protena +
2 part ribosoma + mARN + tARN + Met + Ac frmico

http://www.dnai.org/a/index.html

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/0072437316/student_view0/chapter15/animations.html#

http://science.nhmccd.edu/biol/bio1int.htm#chemistry

Control Metabolico
Represin e Induccin
A nivel de enzimas

Control sobre la sntesis de enzimas

Dogma:
ADN
(Genes)
transcripcin

ARN
(m, r, t)

traduccin

PROTEINA
(Enzimas)

Control sobre la sntesis de enzimas

Sistema del Opern

Represin:
Cuando no se necesita una enzima, sta dejar de sintetizarse

Induccin:
Cuando se requiere una enzima, sta deber sintetizarse

Sistema del Opern en el ADN:

Las 4 zonas que se encuentran en el ADN:
1.- Gen regulador:
Ubicado en alguna parte del ADN

2.- Regin Promotora (P):

3.- Regin Operadora (O): 4.- Gen(es) estructural(es):

Zona donde se une la ARN polimerasa

Zona por donde debe avanzar la ARN polimerasa Codifica(n) para la(s) enzima(s) regulada(s)

Gen Regulador

Gen(es) Estructural(es)

ADN

ARN polimerasa

Represin enzimtica
Est relacionada con la sntesis de algn metabolito, es decir con procesos anablicos
La represin tiene lugar cuando un metabolito se encuentra presente en la clula, por lo tanto no se requiere producirlo por medio de una enzima, la que deber ser reprimida para evitar un excesivo gasto de energa por parte de una clula viva

Experimentos con bacterias

Represin enzimtica

Cultivo

Ensayo
Trp sintetasa ( + )

1)
2)

Sin Trp
24 h

Con Trp
24 h

Trp sintetasa ( _ )

Funcionamiento normal del Opern de represin

Gen Regulador P O Gen(es) Estructural(es)

ADN
ARN Polimerasa transcripcin

transcripcin

ARN
traduccin traduccin

PROTEINA REPRESORA (Inactiva) Trp Sintetasa

Represin
ADN

Funcionam. del Opern en represin

P O Gen(es) Estructural(es)

Gen Regulador

ARN Polimerasa transcripcin transcripcin

ARN
traduccin traduccin

PROTEINA REPRESORA (Inactiva)

+
Trp
Correpresor
PROTEINA REPRESORA (Activada)

Trp Sintetasa

Trp

Induccin enzimtica
Est relacionada con la degradacin de algn metabolito, es decir con procesos catablicos Tiene lugar cuando se requiere utilizar como nutriente una sustancia, que se encuentra en el medio y necesita ser degradada por medio de una enzima cuya sntesis deber ser inducida para el normal funcionamiento de una clula viva

Experimentos con bacterias

Induccin enzimtica

Cultivo

Ensayo
Galactosidasa ( _ )

1) 2)

Sin Lactosa
24 h

Con Lactosa
24 h

Galactosidasa ( + )

Funcionamiento normal del Opern de induccin

Gen Regulador P O Gen(es) Estructural(es)

ADN
ARN Polimerasa transcripcin transcripcin

ARN
traduccin traduccin

Galactosidasa
PROTEINA REPRESORA (Activa)

Permeasa

Transacetilasa

Induccin
Gen Regulador

Funcionam. del Opern en induccin

P O Gen(es) Estructural(es)

ADN
ARN Polimerasa
transcripcin transcripcin

ARN
traduccin traduccin

Galactosidasa
PROTEINA REPRESORA (Inactivada) Permeasa

PROTEINA REPRESORA (Activa)

Lactosa
Inductor

Transacetilasa

Modificaciones de la informacin gentica

Cambios producidos en la secuencia de bases del ADN, en forma natural o artificial, que producen alteraciones en las caractersticas funcionales de las clulas. Los cambios definitivos, que permanecen a travs de generaciones son considerados como mutaciones. Varios de los daos que se pueden haber generado en la molcula de ADN pueden ser reparados.

Reparacin de daos en el ADN

El ADN es la nica molcula celular

cuyo dao puede ser reparado.

Por el hecho de existir dos cadenas

que son complementarias, significa

que son el respaldo, una de la otra.

Daos en el ADN
- El ADN es la molcula que guarda la informacin gentica. - Los daos producidos, originan variedad de problemas.

FACTORES QUE PUEDEN PRODUCIR DAOS: Radiaciones:

- Dmeros de timina - Corte de cadenas

Productos qumicos:
- Defecto de una base - Defecto estructural - Falta de una base

Problemas de la replicacin:
- Base incorrecta

Daos en una sola cadena de ADN

El ADN tiene dos hebras
Cuando el dao en el ADN se produce en una sola hebra, se dispone de la otra que es complementaria como respaldo, para poder utilizarla de molde o modelo a objeto de proceder a la reparacin. REPARACIN: 1 Eliminacin del segmento daado 2 Sntesis de un segmento correcto 3 Unin al ADN del nuevo segmento sintetizado.

Dao por luz UV

UV T=T Fotoliasa

Defecto en una base

x
Excisin Remocin

Insertasa

Incisin

Sntesis

Unin

Defecto estructural
Incisin Excisin

Sntesis

Unin

Corte por Rayos X

Rayos X Unin

Dmeros de timina producidos por luz UV

Incisin
T=T Excisin

Sntesis

Unin

Falta de una base

Insertasa

Enzimas involucradas en la reparacin del dao al ADN

Remocin: Insercin: Incisin: Excisin: Sntesis: Unin: Dmeros T = T: ADN glucosilasa Insertasa Endonucleasa Exonucleasa ADN Polimerasa ADN Ligasa Fotoliasa

Ingeniera Gentica

Manipulacin de la informacin gentica

Intervenir la secuencia del ADN, para modificar la informacin de uno o ms genes.

Cambios producidos por ingeniera gentica

- Recuperacin de la funcin normal de clulas que han sufrido alteracin, con fines aplicados a la salud. - Produccin industrial de nuevas protenas. - Alimentos transgnicos. - Clonacin.

Un ejemplo es el trabajo con bacterias

E. coli original

Extraccin

Endonucleasa

Plasmidos

Cromosoma Plasmido Plasmido abierto

ADN extrao (humano) Plasmido abierto

Endonucleasa

Gen de la insulina

Insercin

Gen de la Insulina humana insertado en el plasmido

Cierre del anillo por ADN ligasa

Plasmido quimera

Produccin industrial de insulina humana.

E. coli modificada Produce insulina Incorporacin en la clula huesped

Plasmido quimera

Replicacin

Hijas modificadas Producen insulina

Mapa Metabolico
Es un cuadro resumen de los metabolismos de glcidos, lpidos, protenas

Muestra una gran cantidad de metabolitos que sufren reacciones catalizadas por enzimas.
En el centro del esquema se encuentra el Ciclo de Krebs, integrando y relacionando los metabolismos ms importantes.

Ciclo de Krebs

Fin