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CULTURA DE BACTRIAS

Introduo terica

As bactrias so conhecidas desde 1674, mas a sua estrutura ainda objeto de estudo, so os seres vivos mais simples do ponto de vista estrutural, e de menor tamanho, podendo ser conhecidas tambm como micrbios. As bactrias so microorganismos unicelulares, procariontes, e algumas causam doenas. So abundantes no ar, no solo e na gua, e na sua maioria inofensivas para o ser humano, sendo algumas at benficas. Por serem microrganismos procariontes, no apresentam um ncleo definido, estando o seu material gentico compactado e enovelado numa regio do citoplasma chamada de nucleide. As bactrias apresentam uma membrana plasmtica recoberta por uma parede celular, o seu tamanho pode variar entre 0,2 a 5,0 micrmetros, sendo por isso observvel apenas ao microscpio. As bactrias reproduzem-se por diviso celular, as causadoras de doenas denominam-se patognicas. Estas possuem diversas formas, que podem variar de acordo com o meio e com o tipo de associao. A cultura de bactrias o crescimento de colnias de microorganismos induzida pelo Homem para facilitar o seu estudo. Para a realizao de uma cultura bacteriana, precisamos de um inoculo e de um meio de cultura. O meio de cultura uma substncia lquida ou slida, simples ou complexa, que permite a nutrio, o crescimento e a multiplicao dos microorganismos do inoculo. Os meios de cultura so selecionados consoante o tipo de bactria a observar. As bactrias multiplicam-se em meios de cultura apropriados desde que sejam respeitadas as condies de temperatura, pH, humidade e composio. Esta atividade tem como objetivo inocular, introduzir artificialmente microrganismos num meio especfico, qualquer objeto de uso corrente num meio

de cultura esterilizada, com o intuito de as bactrias que se encontravam nesse objeto se multiplicar, formando colnias.

Procedimento experimental

Material utilizado: - Bales de Erlenmeyer; - Filtro de papel para caf; - Funil; - gua destilada; - Fita adesiva; - Lamparina de lcool; - gua destilada; - Vareta de vidro; - Placa eltrica; - Placas de Petri; - Agar Agar; - Caldo de carne; - Autoclave; - Etanol 95 %; - Algodo cardado; - Papel de Kraft; - Estufa; - Contador de bactrias. Protocolo experimental: Preparao do meio de cultura: 1 Colocou-se um caldo de carne num litro de gua destilada a ferver. Deixou-se ferver durante 5 minutos;

2 Filtrou-se e juntou-se, cuidadosamente, 20g de Agar Agar; 3 Baixou-se a temperatura e deixou-se ferver durante algum tempo, mexendo sempre com a vareta de vidro; Preparao das placas: 1 Tapou-se o erlenmeyer com uma rolha de algodo cardado e protegeu-se com papel de Kraft; 2 Embrulhou-se as placas de Petri em papel Kraft; 3 Colocou-se as placas de Petri na autoclave a 1atm. Durante 15 minutos (em alternativa esterilizar as placas de Petri em estufa, a 160C durante 2horas ou 170C durante 1hora); 4 Distribuiu-se o meio de cultura, ainda quente pelas placas de Petri esterilizadas: para o efeito levanta-se ligeiramente a tampa, de modo a ficar destapado s o espao necessrio colocao do meio de cultura; 5 Manteve-se as placas tapadas e deixou-se arrefecer at o meio de cultura solidificar; Inoculao das placas: 1 Manteve-se uma das placas fechadas; 2 Retirou-se a tampa a uma das placas e deixou-se o meio de cultura em contacto com o ar durante a execuo do resto do protocolo; 3 Levantou-se ligeiramente a tampa de uma das restantes placas e tocou-se no meio de cultura com objetos de uso corrente (neste caso uma lapiseira); 4 Fixou-se as tampas com fita adesiva e identificou-se a placa inferior com o nome do grupo, turma, data e o processo de inoculao; 5 Colocou-se as placas na estufa a 30C durante 8 dias Precaues: As placas devem ser colocadas na estufa com a tampa para baixo. Se a gua condensar cair na tampa e no no meio de cultura. Podem formar-se colnias de bactrias patognicas, por isso, no devem abrir-se as placas nem tocar nas colnias. A observao atravs da tampa.

Esterilizar novamente as placas no final do trabalho.

Resultados Obtidos

A placa de controlo, colocada com as restantes na estufa, no apresentava colnias de bactrias, enquanto que a placa exposta ao ar (fig.1) possua um elevado nmero de colnias de bactrias de diferentes tipos. Em relao inoculao preparada (fig.2), no se obteve resultados, ou seja no se observou colnias de bactrias. Foram recolhidos, resultados de outros colegas, para comparao: Objeto inoculado Anel Caneta Fsforo Lpis de carvo Lapiseira Mos limpas Mos sujas Moeda Moeda Tampa da caneta Tampa da caneta Nmero de colnias observadas 150 2 0 (apenas foram observados fungos) 61 (observou-se tambm um fungo) 0 70 1 6 0 6 0 Discusso de resultados Aps a realizao desta atividade prtica, os resultados obtidos no foram os esperados. Em relao placa de controlo, no se obteve nenhuma colnia, provando que o meio de cultura estava bem esterilizado. Quanto inoculao executada na atividade prtica conclumos, que a mesma no foi bem executada por alguns colegas, dando origem a placas, nas quais no observamos nenhuma colnia. Comparando os resultados obtidos, podemos observar que o mesmo objeto, foi utilizado por pessoas diferentes, originando resultados diferentes, enquanto que um apresenta colnias de bactrias, o outro no apresenta qualquer tipo de desenvolvimento.

A existncia de fungos em algumas placas, um dos inconvenientes da inoculao, normalmente quando as inoculaes so realizadas, utiliza-se um antifngico para impedir que estes fungos cresam significativamente, mas como a nossa cultura de tamanho reduzido, no valia a pena utiliz-lo.

Concluso

Aps a realizao desta atividade pratica, conclumos que os objetos normais, de uso corrente possuem variados tipos de bactrias que em condies propcias se podem desenvolver e at provocar doenas. Recorre-se assim cultura, em meios apropriados, para se conseguir um elevado nmero de microorganismos, de modo que seja possvel estudar as suas caractersticas. Observamos ainda que as bactrias em colnia so possveis de observar a olho nu aps algum tempo de encubao.

Bibliografia

PINTO,

Ana; FIALHO, Elisa; MASCARENHAS, Maria; INCIO, Maria.

Tcnicas Laboratoriais de Biologia I 10 ano. 3 Edio; Texto Editora, Lisboa, 2002 (p58)
http://www.biotecnologia.com.br/bioglossario/c.asp Procedimentos

laboratoriais em bacteriologia clnica; 1Edio; editora santos;

1994
Microbiologia,

conceitos e aplicaes; 2 Edio; Brasil editora; 1996