UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUIMICA AREA DE BIOQUIMICA

Syllabo de Bioqumica II CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

Aspartato transcarbamilasa, con funcin enzimtica Profesora del curso: Mg. Emma Urrunaga Soria

Cusco, 2009-II

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS, FISICAS Y MATEMATICAS DEPARTAMENTO ACADEMICO DE QUIMICA CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA I.- DATOS GENERALES 1.1 ASIGNATURA 1.2 CATEGORIA 1.3 CODIGO 1.4 CREDITOS 1.5 CARGA HORARIA

1.6
BIOQUIMICA I 1.7 HORARIO Y AULA

BIOQUIMICA II OE QU-207AQF 05 04 T y 02 PL SEMANAL PRE-REQUISITO

MARTES 7 9 AM, AULA N -207 MIRCOLES 15 -17 PM, AULA N-207 1.8 SEMESTRE ACADEMICO 2009-II 1.9 PROFES. RESPONSABLE Mg. EMMA URRUNAGA SORIA 1.10 Email : emurru21@yahoo.es

II.- SUMILLA El curso de Bioqumica II es una continuacin de Bioqumica I y comprende el estudio de las reacciones de sntesis de los lpidos de membranas, teniendo en cuenta las alteraciones relacionadas al padecimiento de las enfermedades, as como otras molculas lipdicas con funcin fisiolgica importante como las hormonas esteroideas, protaglandinas, prostaciclinas, tromboxanos y leucotrienos. En lo sucesivo, el estudiante de Farmacia estar preparado para comprender a cabalidad la estructura y dinmica de las membranas biolgicas, cuyo conocimiento permitir una mejor comprensin de los sistemas de transporte (bombas y compuertas) y del papel que cumplen en el control del flujo de la informacin entre las clulas y su medio ambiente, a travs de receptores especficos y de la generacin de seales por algunas membranas. Tambin se estudiarn aspectos relacionados a la degradacin y biosntesis de los aminocidos, las poliaminas y aminas biognicas, estos ltimos como productos derivados de aminocidos de gran importancia fisiolgica. Finalmente se desarrollarn aspectos estructurales de los cidos nucleicos, la sntesis y degradacin de las purinas y pirimidinas, as como la naturaleza macromolecular y las caractersticas del DNA y RNA, para luego estudiar los eventos moleculares del flujo de la informacin gentica y su proceso de regulacin en procariotas. Al trmino del los dos cursos los estudiantes de la Carrera Profesional de Farmacia, sern capaces de interrelacionar todos los procesos de metabolismo que se suscitan en el organismo humano y aplicarlos en el entendimiento a nivel molecular, del beneficio teraputico que producen los productos medicamentosos. III.- COMPETENCIAS GENRICAS PARTE I Los estudiantes de Farmacia adquieren conocimientos actualizados sobre la biosntesis de molculas lipdicas, esto es, aquellas que son componentes de membranas y lo aplican en el entendimiento de las alteraciones de los procesos metablicos que provocan la aparicin de la enfermedad. PARTE II Sistematizan los procesos de la dinmica de las membranas biolgicas a travs de sus funciones ya como conductos, bombas y receptores membranales. Tambin complementan sus conocimientos en relacin al metabolismo nitrogenado en los procesos de sntesis y degradacin de los aminocidos; relacionan las patologas genticas conjuntamente con la biotransformacin de los aminocidos en molculas fisiolgicamente activas. PARTE III

Se imparte aspectos estructurales de las bases nitrogenadas, nucleosidos, nucleotidos y polinucleotidos; sus procesos digestivos, de absorcin y de metabolismo. Finalmente el estudiante descubre en forma simple y activa que la transmisin de la informacin gentica a nivel molecular y sus sistemas de regulacin son procesos vinculados directamente al metabolismo de protenas, as como tambin relacionados al metabolismo de los carbohidratos, lpidos y otros en condiciones normales y entiende que las patologas gnicas alteran la fisiologa humana drsticamente. IV.- CONTENIDO TEMTICO El curso de Bioqumica II est estructurado en 3 unidades acadmicas las que deben desarrollarse en 18 semanas, necesarias para poder concluir al cien por ciento, el contenido del curso. Se inicia el 14 de Diciembre del 2009 el curso terico, mientras que el curso prctico se iniciar el viernes 18 de Diciembre del 2009 en el horario de 15:00 a 18:00 horas, el segundo grupo el 21 de Diciembre de 17 a 20:00 horas (total 2 grupos, cada uno de 15 alumnos). La conclusin del dictado del curso, tanto el terico como el prctico ser en concordancia con las disposiciones emanadas de la autoridad. CAPITULO I: BIOSNTESIS DE LPIDOS DE MEMBRANA, FUNCION ESTRUCTURAL Y DINMICA DE LAS MEMBRANAS, RECEPTORES COMPETENCIAS ESPECFICAS Entiende la biosntesis y degradacin de los fosfolpidos y glucolpidos, componentes de membranas biolgicas y los padecimientos relacionados a estos procesos. El estudiante reconoce el metabolismo del colesterol, su regulacin y utilizacin en la biosntesis de sales biliares, colesterol esterificado y biosntesis de la vitamina D, desde el punto de vista de las patologas frecuentes. Intuye el mecanismo de accin de las hormonas esteroideas y sus efectos sobre la fisiologa humana. Expone sus inquietudes sobre los mecanismos de sntesis de Prostaglandinas, prostaciclinas y tromboxanos. Sus aplicaciones farmacolgicas. Conceptualiza adecuadamente la composicin y disposicin molecular de los integrantes de las membranas biolgicas. Observa como trabajan lo diferentes conductos y bombas de membrana en los procesos de transporte de sustancias al espacio intracelular y entre clula y clula. Conoce los procesos de cascadas de traduccin de seales y se explica los mecanismos de comunicacin celular. Conoce los mecanismos de funcionamiento de los receptores con actividad de tirosina quinasa y su relacin con la produccin del cncer. Biosntesis de Lpidos de Membranas: Aspectos estructurales de Fosfolpidos: Fosfoglicridos, plasmalgenos y Esfingolpidos, glucolpdos y colesterol. 3.4 Funciones de lpidos de membrana. Biosntesis de Lpidos de Membranas: Fosfogliceridos (fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, cardiolipinas). Modelacin de acidos grasos. 5.6 Biosntesis de Esfingolpidos y glucolpidos: cerebrsidos y gangliosidos. Degradacin de fosfolpidos, esfingolpidos y glucolpidos. 7.8 Metabolismo de colesterol: reacciones, regulacin . 9.10 Sntesis de cidos biliares, Sntesis de hormonas esteroideas: Progestgenos, mineralocorticoides y glucocorticoides 11 Hormonas sexuales masculinas y femeninas. 12.13 Biosntesis de protaglandinas, tromboxanos y prostaciclinas. 14 Biosntesis de leucotrienos. 15.16 Membranas biolgicas: Definicin, Funciones, Caractersticas comunes y Lpidos de membranas. Lpidos de arqueobacterias. 17.18 Disposicin espacial de los lpidos de membranas: Molculas anfipticas, formacin de monocapas y capas bimoleculares en medio acuoso. Permeabilidad de las bicapas lipdicas. 19.20 Protenas de membrana: contenido, localizacin, interaccin, asociacin con membranas y prediccin de hlices transmembranales. 1.2

21.22 Difusin de lpidos y protenas, Modelo del Mosaico fluido, Fluidez de las membranas y asimetra. 23.24 Glicoforina en membranas de eritrocitos. PRIMERA EVALUACION 25.26 Conductos y bombas de membranas: Transporte de molculas puede se activo o pasivo, Bombeo de iones por hidrlisis del ATP, ATPasas del Tipo P, transportadores secundarios 27.28 Conductos especficos 29. Vas de la transduccin de seales: Visin General. 30.31 Receptores de siete hlices transmembranares, unin con el ligando y activacin de protenas G. 32.33 Hidrlisis del Fosfatidilinositol bifosfato como generador de dos mensajeros intracelulares. 34.Ion calcio como mensajero citoslico, manos EF y calmodulina.

CAPITULO II: METABOLISMO NITROGENADO COMPETENCIAS ESPECFICAS: Tiene conocimiento vasto de la organizacin estructural de las protenas . Explica las vas de sntesis y degradacin de los aminocidos su relacin con el ciclo de la urea y la amoniognesis. Enfatiza el aspecto funcional de los aminocidos como precursores de aminas biognicas. Entiende la importancia del estudio de las poliaminas como factores que intervienen en el proceso de divisin celular. 35.36. Protenas: Generalidades, Fuentes, Digestin gstrica, Digestin pancretica y Digestin intestinal. 37. Absorcin, Metabolismo de aminocidos: Vas, funciones y vas generales para el metabolismo de los aminocidos. 38.39.Transaminacin, Desaminacin: Desaminacin oxidativa, Desaminacin por aminocido oxidasas, Desaminacin eliminadora (no oxidativa), 40.41. Va nitrgeno hasta urea y amoniaco: Ciclo de la urea, regulacin, Amoniognesis y balance energtico. 42. Va del carbono hasta piruvato o CO 2 : Degradacin de la familia del alfa-cetoglutarato, Degradacin de la familia del Succinil-CoA. 43.44. Degradacin de la familia del oxalacetato y fumarato, Degradacin de la familia del piruvato. 45. Degradacin de la familia del acetoacetil-CoA. 46.47. Formacin y Funciones de las aminas biognicas: Serina, Histidina, triptofano, glutamato, tirosina y catabolismo de las catecolaminas. 48. Formacin de creatina y creatinina.- Fosfocreatina y metabolismo muscular.- Eliminacin de creatina y creatinina. 49. Poliaminas: Biosntesis de putrescina, espermina y espermidina SEGUNDA EVALUACION 50.51 Biosntesis de los aminocidos: Familia del alfa-cetoglutarato o Glutamato (Glutamato, glutamina, prolina,e hidroxiprolina y lisina en levaduras y mohos.) 52.53 Familia del Aspartato y piruvato: Lisina en bacterias, treonina y metionina. 54 Biosntesis de isoleucina, Familia del piruvato, Regulacin de la familia del aspartato. 55 Familia de las triosas: serina, glicina, cisteina y cistina. 56.57 Biosntesis de aminocidos aromticos. 58.59 Biosntesis de histidina, Regulacin de la biosntesis de aminocidos por retroinhibicin: control secuencia feedback, multiplicidad de enzimas, control feedback concertado y control feedback acumulativo.

CAPITULO III:

METABOLISMO DE NUCLEOTIDOS Y ACIDOS NUCLEICOS. MECANISMOS MOLECULARES DE LA TRANSMISIN DE LA INFORMACIN GENTICA

COMPETENCIAS ESPECFICAS: Estudia las bases nitrogenadas, nucleosidos, nucleotidos y polinucleotidos en funcin de las frmulas qumicas propuestas. Entiende la biosntesis de nucleotidos y su catabolismo. Prepara, resume y presenta los aspectos estructurales y caractersticas de los cidos nucleicos DNA y RNA. Interpreta y comparte adecuadamente los procesos de la sntesis proteica y su control gentico a nivel de los organismos procariontes. 60. Acidos Nucleicos: Definicin, Funcin, bases pricas y pirimidnicas, nucleosidos, nucleotidos y sus funciones, polinucleotidos. 61. Digestin y absorcin de nucleoprotenas de la dieta.- Destino metablico de los cidos nucleicos.Degradacin de purinas. 62. Catabolismo de pirimidinas. 63.64 Biosntesis de nucleotidos purnicos y su regulacin. 65.66 Biosntesis de nucleotidos pirimidnicos y su regulacin, Gota. 67.68 DNA: Estructura, tipos y teora que explica el proceso de replicacin, Desnaturalizacin y Renaturalizacin. 69. RNA : Estructura, tipos, funciones, cromosomas y nucleosomas 70.71.Proceso de Replicacin: Reacciones, etapas de replicacin y Topoisomeras. Las DNA polimerasas y Sistemas de reparacin. 72. Proceso de transcripcin : Reacciones y etapas 73. Cdigo gentico: Universalidad, Degeneracin y ambigedad.- Naturaleza molecular de la mutacin: tipos, agentes mutgenos. Significado biolgico. 74.75 Sntesis proteica: Etapas. Inhibicin por antibiticos. Requerimientos energticos. 76. Procesamiento postraduccin de las protenas. Sistemas no ribosmicos de pptidos. 77 Regulacin gentica de la sntesis proteica: Modelo de Operon-Lac, 78 Operon-Trp , operon-Hys, y operon arabinosa. TERCERA EVALUACION V.- ESTRATEGIAS DE ENSEANZA APRENDIZAJE CAPITULO I: BIOSNTESIS DE LPIDOS DE MEMBRANA, FUNCION ESTRUCTURAL Y DINMICA DE LAS MEMBRANAS, RECEPTORES En lo referente al curso terico, se emplearn tcnicas motivadoras interactivas, como el uso de los medios audiovisuales, pelculas y otros, a fin de enfocar los temas bioqumicos como el instrumento mas fino para el entendimiento de las vida humana y las causas de su desequilibrio hasta donde sea posible; as mismo se utilizar el mtodo inductivo-deductivo, expositivo, dialogal y grupal Las prcticas de laboratorio, utilizar el mtodo experimental demostrando en todo momento sus habilidades, aptitudes y en general sus competencias en la obtencin de resultados fiables. La exposicin de una pelcula en el presente semestre tiene como fin motivador conocer las clases, causas, complicaciones, diagnstico, control y tratamiento de la leucemia, un tipo de cncer maligno, que aqueja a un porcentaje apreciable de la poblacin mundial causando la muerte y cuyo entendimiento molecular se basa en procesos anmalos de las clulas madre precursoras de leucocitos y glbulos rojos. Los seminarios , el mtodo expositivo, dialogal y de debate. A. Clases tericas: El curso presenta (03) captulos y comprenden el anlisis, sntesis y evaluacin de temas bsicos actualizados considerados en el contenido silbico propuesto en el presente semestre acadmico y tendr una duracin de 4 hrs. semanales. B. Prcticas de Laboratorio: Servirn para que el alumno correlacione e integre en forma experimental los principios tericos impartidos en el curso, con una duracin de 2 hrs. semanales o ms. La asistencia es obligatoria

C. Exposicin de la pelcula de Nick Cassavetes LA DECISIN MS DIFCIL. Cuyo trama principal relaciona al padecimiento de la enfermedad conocida como leucemia mieloide aguda infantil. La asistencia es obligatoria. Se ha de exponer el sbado 26 de diciembre de 9 a 12 horas (aula virtual de la Carrera Profesional de Farmacia) CAPITULO II: METABOLISMO NITROGENADO En lo referente al curso terico, se emplear el mtodo inductivo-deductivo, expositivo y dialogal. Las prcticas de laboratorio, utilizar el mtodo de ensayo o de experimentacin. A. Clases tericas: El curso presenta (03) captulos y comprenden el anlisis, sntesis y evaluacin de temas bsicos actualizados considerados en el contenido silbico propuesto en el presente semestre acadmico y tendr una duracin de 4 hrs. semanales. B. Prcticas de Laboratorio: Servirn para que el alumno correlacione e integre en forma experimental los principios tericos impartidos en el curso, con una duracin de 3 hrs. semanales como mnimo. C. Seminarios: Los temas a ser tratados son de actualidad, por tanto el profesor asignar por sorteo a un estudiante que deber buscar bibliografa adicional a fin de comprender, preparar y exponer el tema en la fecha prevista, los dems estn obligados a rendir un examen terico acerca de lo expuesto .La exposicin del seminario requiere de 45 minutos y 15 minutos de preguntas. La evaluacin escrita, tendr una duracin de 30 minutos. La finalidad de los seminarios es la de actualizar, motivar, estimular y generar ideas concretas en la investigacin y desarrollo de posibles trabajos de tesis y/o estudios de perfeccionamiento en la especialidad. La fecha de exposicin ser el 06 de febrero del 2010 de 9 a 12 horas, en el aula N-203 o N-207. CAPITULO III: METABOLISMO DE NUCLEOTIDOS Y ACIDOS NUCLEICOS. MECANISMOS MOLECULARES DE LA TRANSMISIN DE LA INFORMACIN GENTICA En lo referente al curso terico, se emplear el mtodo inductivo-deductivo, expositivo y dialogal. Las prcticas de laboratorio, utilizar el mtodo de ensayo o de experimentacin. Los seminarios , el mtodo expositivo, dialogal y de debate. A. Clases tericas: El curso presenta (03) captulos y comprenden el anlisis, sntesis y evaluacin de temas bsicos actualizados considerados en el contenido silbico propuesto en el presente semestre acadmico y tendr una duracin de 4 hrs. semanales. B. Prcticas de Laboratorio: Servirn para que el alumno correlacione e integre en forma experimental los principios tericos impartidos en el curso, con una duracin de 2 hrs. Semanales o ms. C. Seminarios: Los temas a ser tratados son bsicos y de actualidad. El profesor asignar por sorteo los temas y los estudiantes debern buscar bibliografa adicional a fin de comprender, preparar y exponer el tema en la fecha prevista y de modo correlativo. La exposicin del seminario (02 alumnos) requerir de un mximo de 45 min. y 10 min. de preguntas. Los temas corresponden al sillabo, a partir del item 67.

VI.- MATERIAL EDUCATIVO Los materiales a utilizar, son: - Pizarra acrclica y plumones. - Copias adicionales. - Retroproyector de transparencias. - Proyector - DVD - Pizarra Interactiva VII.- EVALUACION La evaluacin del curso de Bioqumica se realizar mediante el promedio de 3 notas por parcial, las mismas que correspondern a los siguientes rubros: Examen parcial escrito: Se darn en nmero de 3 exmenes parciales y son de naturaleza cancelatorio, sern rendidas en fechas programadas por la autoridad universitaria. Tendr peso 2. En cada evaluacin sumativa se abonar 01 punto al parcial por asistencia al 100% o punto por asistencia al 80%, lo que equivale aprox. al 5% de la nota promedio o menos. Exposicin de pelcula: El estudiante debe estar presente durante la exposicin. Al trmino de la misma, se les explicar la finalidad del mismo. En seguida formaran grupos de 8 a 10 estudiantes y darn

respuesta a 5 preguntas en forma individual (duracin max. 20 min.). La asistencia es obligatoria e irrecuperable, en caso de no concurrencia, se le asignar la nota de cero para la primera evaluacin. Tendr peso 1. Evaluacin de seminarios; Se sortear 01 tema de actualidad relacionado al silabo en lo que respecta a la primera parte y de la tercera parte se asignar temas del silabo a desarrollar, con un enfoque actualizado. Todos los alumnos estn obligados a participar. Los temas sern sorteados en clases. Cada dos estudiantes debern exponer el tema en la fecha indicada por el profesor y tendr una duracin mxima de 45 min. Los seminarios se desarrollarn fuera del horario de clases, siendo este de carcter obligatorio. Tendr peso 1. La calificacin se promediar con la correspondiente a la segunda y tercera evaluacin sumativa. Prcticas de laboratorio; la evaluacin se llevar a cabo permanentemente y al final de 4 prcticas se rendir una prueba escrita, la nota mxima ser de 15 puntos. La asistencia es obligatoria. Se tolera una falta justificada, caso contrario no tiene derecho al examen escrito y se considerar la nota de cero puntos. Tendr peso 1. El promedio de 03 notas, constituir la nota de cada sumativa, la que se repetir de acuerdo al creditaje (05 crditos). La nota final ser el promedio de las 03 evaluaciones sumativas, de acuerdo al reglamento actual de nuestra Universidad.

Primer Parcial Segundo Parcial Tercer parcial Sustitutorio

CRONOGRAMA FECHA HORA 30 de enero 11 horas 03 de marzo 18 horas 03 de abril 11 horas 07 de abril 11 horas

AULA B-102 B-102 B-102 N-207

VIII. BIBLIOGRAFIA: - BIOQUIMICA : Stryer Lubert, Jeremy M. Berg y John L. Tymoczko.- Editorial Revert S.A., Quinta Edicin, 2008. - BIOQUMICA : Devlin M. Thomas.- Editorial Reverte, S.A..- Volumen I y II, 1999. - BIOQUIMICA : Horton, Moran, Ochs, Rawn y Scrimgeour.- Prentice-Hall Hispanoamericana S.A., 1995. - BIOQUIMICA : Jungermann Mohler.- Editorial Pirmide S.A., Madrid 1985 - BIOQUIMICA : Mathews, Van Holde y Ahern.- Editorial Pearson Educacin, S.A., Madrid 2002. - BIOQUIMICA HUMANA : Orten Neuhaus.- Editorial Mdica Panamericana , 10a. edicin, 1993 - BIOQUIMICA MEDICA : Pacheco Leal, Daniel.- Editorial Limusa, S.A., Primera Edicin, Mxico 2004 - BIOQUIMICA : Stryer Lubert.- Editorial Revert S.A., I y II Tomo, 1995. - BIOQUIMICA : Stryer Lubert, Jeremy M. Berg y John L. Tymoczko.- Editorial Revert S.A., Quinta Edicin, 2003.

Exposicin de la pelcula :

'LA DECISIN MS DIFCIL', de Nick Cassavetes

'LA DECISIN MS DIFCIL'

Titulo: LA DECISIN MAS DIFICIL Titulo Original: 'My Sister's Keeper' Gnero: Drama, amistad, enfermedad Ao: 2009

Director: Nick Cassavetes Reparto: Cameron Diaz, Alec Baldwin, Abigail Breslin, Joan Cusack, Jason Patric, Thomas Dekker, Elizabeth Daily, Sofia Vassilieva, Evan Ellingson, Nicole Marie Lenz Ao de produccin: 2009 Pas: EE.UU. Sinopsis:
El mismo equipo que en 2004 realizara 'El diario de Noa' es ahora el encargado de sacar adelante un nuevo proyecto titulado 'La decisin ms difcil', adaptacin de la novela de Jodi Picoult, 'My Sister's Keeper'. Dicho equipo no es otro que el formado por: Nick Cassavetes, un realizador de gran vala que ha dirigido pelculas como 'John Q' (2002), 'Alpha Dog' (2006) o la mencionada 'El diario de Noa'; Jeremy Laven como encargado de plasmar el guin de esta historia, un guionista que ya ha adaptado obras como 'Don Juan DeMarco' (1995) o 'La leyenda de Bagger Vance' (2000); y Mark Johnson, productor de 'Las Crnicas de Narnia' que har lo propio con esta cinta para New Line Cinema. Como protagonista de esta historia cuentan con Cameron Diaz, actriz que salt a la fama tras co-protagonizar con Jim Carrey, 'La mscara'. La pelcula narra la historia de una nia de 13 aos que presenta un recurso para emanciparse de sus padres. El motivo no es otro que la joven fue concebida para intentar salvar a su hermana con leucemia, motivo por el cual desde que naci no ha parado de estar sometida a pruebas para conseguir sanar a su hermana mayor. Como se ve una historia bastante controvertida en la que Cameron dar vida a la mam de la nia y a su vez a

una antigua abogada defensora que se ver obligada a volver a los tribunales para defenderse de su propia hija.

Seminario: PROTEINA QUE ENVEJECE LA PIEL

Investigadores de la Escuela de Medicina de Stanford, en California, aislaron una protena que sera la responsable del envejecimiento de la piel. En la investigacin llevada a cabo en ratones de dos aos de edad, se demostr que la protena NF-kappa-B interviene en todos los genes que hasta ahora se identificaron como los causantes del envejecimiento epidrmico, y que limitando su presencia se obtienen resultados sorprendentes: las clulas se reproducen ms rpidamente, y la piel adquiere mayor espesor. Los resultados completos de la investigacin se publicaron en la revista Genes and Development. Howard, Chang, responsable del estudio dice que el envejecimiento se debe no simplemente al paso del tiempo, sino tambin a pequeas y especficas modificaciones genticas que van surgiendo en las clulas, debidas en este caso a la presencia de la protena NF-kappa-B. Adems, se observ que bloquear la protena no solo detiene el envejecimiento sino que tambin el fenmeno es reversible: Al bloquear la protena se observ un regreso a las prestaciones de reparacin de la piel comparables a las de generaciones ms jvenes de ratas, coment el doctor Chang.

PROFESORAS DE PRACTICAS EN EL SEMESTRE 2009-Il

Mg. Emma J. Urrunaga Soria : Viernes 15:00-18:00 hrs. Quim. Juana Graciela Torres Polanco : Jueves 17:00-20:00 hrs.