Universidade Federal do Rio de Janeiro Instituto de Qumica Programa de Ps-Graduao em Qumica

Desenvolvimento de novos compostos de coordenao a base de Tc(I) para aplicaes radiofarmacuticas em exames de diagnstico por imagem.

Aluno: GUILHERME CAMELIER ALMEIDA Nvel: Doutorado DRE: 110192923 Proposta de Projeto para o Exame Geral de Conhecimentos

I) Introduo As tcnicas no invasivas de diagnstico por imagem constituem-se em uma das reas mais importantes da medicina diagnstica. Somente nos Estados Unidos so feitos anualmente mais de dez mil procedimentos baseados em medicina nuclear, dos quais 85% envolvem procedimentos de imagem que utilizam radiofrmacos a base de tecncio (Tc). Suas propriedades nucleares nicas, bem como a praticidade dos radiofrmacos poderem ser preparados no local de uso, por meio de uma simples reao de complexao entre um agente complexante (frmaco) e o tecncio-99m[1-2] fazem deste elemento sinttico, uma matria prima de alto valor para o desenvolvimento da medicina nuclear. O tecncio produzido a partir do decaimento do Mo 99 produzido nos reatores de fisso nuclear conforme o esquema mostrado na Figura 1:

Figura 1: Decaimento radioativo do Mo99 [3]

O Tc99m sofre decaimento de primeira ordem para Tc99, com meia vida de apenas seis horas. Os raios gama emitidos neste decaimento esto numa faixa de energia que no facilmente absorvida pelos tecidos vivos, o que evita danos s clulas humanas, mas tima para deteco via cintilao[4]. Isto faz do Tc99m o istopo radioativo ideal para a formao de imagens dos tecidos e rgos internos. Outra grande vantagem do uso do Tc 99m o seu tempo de meia vida reduzido, o que minimiza o tempo de exposio do paciente a radioatividade que neste caso torna-se equivalente a exposio de um simples exame de raios-X. Para se sintetizar compostos de Tc99m para o uso em exames de imagem, necessrio que os hospitais e clnicas, onde so feitos tais procedimentos possuam um gerador de Tc99m. Este gerador, mostrado na Figura 2, consiste basicamente de uma coluna cromatogrfica recoberta com alumina (fase estacionria), onde o Mo 99 na forma aninica de molibdato (Mo 99O4)-2, produzido em um reator nuclear, carregado no topo da coluna. Quando se necessita de Tc99m para um exame de imagem, faz-se uma eluio na coluna com uma soluo salina de

NaCl, conseguindo-se assim uma separao eficiente das fraes de [Tc99mO4]- e [Tc99O4]- da frao de [Mo99O4]-2 que ainda no decaiu, isto possvel porque os nions molibdato duplamente carregados possuem uma mobilidade mais lenta na coluna que os nions monecarregados de pertecnetato [TcO4]-. As fraes de [Tc99mO4]- e [Tc99O4]- so coletadas em frascos estreis, contendo um agente redutor, normalmente SnCl2 ou BH4-, e os agentes complexantes, a soluo resultante ento levemente aquecida para garantir a completa reduo e coordenao do tecncio e, aps o resfriamento e adio da soluo tampo, o radiofrmaco est pronto para ser administrado no paciente, servindo como contraste em exames de diagnstico por imagem. Quando a maior parte do Mo 99 encontra-se decado, o gerador deve retornar a instalao nuclear de origem para ser recarregado com (Mo99O4)-2. Comunmente, os hospitais e clnicas que dispem do gerador de Tc 99m realizam este procedimento de recarga semanalmente [4].

Figura 2: Gerador de Tc

99m

para uso comercial.

Os radiofrmacos utilizados em diagnstico so classificados em radiofrmacos de perfuso e radiofrmacos especficos. Os radiofrmacos de perfuso so transportados no sangue e atingem o rgo alvo na proporo do fluxo sanguneo, no possuindo locais especficos de ligao, so distribudos de acordo com tamanho, carga, hidrofilicidade e lipofilicidade do composto. Os radiofrmacos especficos so direcionados por molculas ativas biologicamente, como por exemplo, anticorpos e peptdeos que se ligam a receptores celulares ou so transportados para o interior de determinadas clulas [5]. Para um radiofrmaco ser realmente efetivo em um exame de diagnstico por imagem, sua formulao deve obedecer aos seguintes critrios[3].

(I) (II)

Deve ter baixo teor de radioatividade e de toxicidade qumica. Deve ser de fcil preparao em um ambiente clnico a partir de um radionucldeo fornecido com pureza adequada.

(III)

O tempo de preparao deve ser aceitvel com relao ao tempo de meia vida do radionucldeo.

(IV) (V) (VI)

Deve ser suficientemente estvel para alcanar o tecido alvo intacto. Deve apresentar seletividade pelo tecido alvo. Deve permanecer por tempo suficiente no tecido alvo para a concluso do exame de imagem, no apresentando redistribuio significativa pelo organismo durante este tempo.

(VII)

Os produtos do decaimento e os mecanismos de excreo e degradao do radiofrmaco no devem apresentar riscos sade do paciente.

Uma abordagem que vm sendo utilizada com algum sucesso por alguns grupos de pesquisa em qumica de coordenao, visando atender aos requisitos acima descritos, sintetizar o complexo precursor fac-[Tc(CO)3(H2O)3]+, este complexo de geometria octadrica, obtido a partir da reduo do [TcO4]- por borohidreto de sdio (BH4-) em meio aquoso e atmosfera de monxido de carbono, torna o tecncio em estado de oxidao (+1) estvel no meio aquoso, fazendo dele um precursor extremamente verstil na sntese de complexos a base de Tc(+1). A estabilizao do Tecncio em baixos estados de oxidao importante para a sua aplicao biolgica, pois os baixos estados de oxidao conseguem formar complexos mais estveis com grupamentos ligantes base de tomos macios como enxofre, fsforo e nitrognio amplamente presentes nas molculas biolgicas que compem os organismos vivos. Devido a sua elevada labilidade, os ligantes H2O no fac-[Tc(CO)3(H2O)3]+ podem ser facilmente trocados em soluo por ligantes macrocclicos a base de nitrognio ou ainda ligantes cclicos ou alifticos, a base de fsforo e/ou enxofre
[3-6]

. Estudos preliminares in vitro, indicam que os

ligantes mais indicados para coordenar com o caroo fac-[Tc(CO)3]+, com respeito as potenciais aplicaes radiofarmacuticas, devem conter ao menos um ou mais grupamentos funcionais

amina (NH2) em combinao com um ou mais grupamento funcional carboxila (COOH)[7]. A natureza das cadeias destes ligantes tem papel primordial na biodistribuio do radiofrmaco ao longo dos tecidos e rgos internos do organismo, um ligante inico e hidroflico, favorece a manuteno do radiofrmaco na corrente sangunea e sua absoro pelos rins. Um ligante lipoflico (hidrofbico) favorece a absoro do radiofrmaco pelo fgado, vescula biliar e intestinos. Um ligante neutro de baixo peso molecular e com carter hidroflico e lipoflico equilibrado pode favorecer a absoro do radiofrmaco pelo crebro
[3]

II) Objetivos e metas a serem alcanadas O presente projeto tem como objetivos principais a sntese e caracterizao de novos complexos base de Tc+1, tendo como ponto de partida o complexo precursor fac[Tc(CO)3(H2O)3]+, visando o desenvolvimento de novos radiofrmacos de perfuso com especificidade para a formao de imagens do tecido heptico e do tecido renal. Na tentativa de maximizar a especificidade dos compostos propostos para cada um dos tecidos, sero conduzidos ensaios fsico-qumicos de lipofilicidade e de estabilidade em condies fisiolgicas, utilizando-se de metodologias descritas na literatura[8-15]. Os resultados obtidos sero comparados com os principais radiofrmacos disponveis comercialmente para a formao de imagem de cada um destes rgos. III ) Justificativa Os radiofrmacos a base de Tc99m para exames de imagem do tecido heptico e do tecido renal disponveis no mercado atualmente, so feitos respectivamente com tecncio em estado de oxidao (+3), [Tc(III)], e estado de oxidao (+5), [(TcO+3)] e [(TcN+2)]. Do ponto de vista qumico, o tecncio em estado de oxidao (+1), [Tc(CO)3]+, tem potencial para conferir maior estabilidade aos radiofrmacos produzidos, o que pode contribuir significativamente para a melhora da qualidade da imagem produzida. IV) Metodologia a ser empregada Primeiramente sero sintetizados derivados do cido N-(2-nitrofenil)etilenodiamina-N,Ndiactico (o-NO2Ph-EDDA), Figura 3, com radicais hidroflicos (nitro e amino) e radicais

hidrofbicos (t-butil, benzil e isooctil). Estes novos derivados sero caracterizados por espectroscopia vibracional na regio do infravermelho resolvida por transformada de Fourier (IVTF), ressonncia magntica nuclear (RMN), espectrometria de massas, anlise elementar do tipo CHN e pela determinao do ponto de fuso.

OH O N NH NO 2 O OH

Figura 3: Estrutura Qumica do ligante o-NO2Ph-EDDA Os derivados do ligante o-NO2Ph-EDDA sintetizados e corretamente caracterizados, sero complexados com Tc(I), atravs de uma reao de troca com o complexo fac-[Tc(CO)3(H2O)2Cl], esquematizada na Figura 4 [6,7]. Os complexos resultantes (Radiofrmacos) sero caracterizados por, IV-TF, anlise elementar do tipo CHN, determinao ponto de fuso e RMN.
3

R R
2

OH R
4

Cl
O

OH2

H2O Tc CO CO

N NH NO2 O OH

OC

1) HCl (1M)

2) Et3N (3M) , MeOH, 4h

R R
3

R O

NO 2 NH

O N OC OC OC Tc O O

HNEt3

Figura 4: Reao de troca entre os derivados do ligante o-NO2Ph-EDDA com o complexo fac[Tc(CO)3(H2O)2Cl].

Em uma segunda etapa do projeto, sero realizados os estudos de lipofilicidade e estabilidade (in-vitro) dos complexos obtidos. A lipofilicidade dos complexos obtidos ser estimada atravs do clculo dos parmetros de reteno (Rm) e das constantes de Hansch () (Equaes 1 e 2), que podem ser obtidas com o auxlio da tcnica de cromatografia em camada delgada (CCD) com fase reversa[9], tambm conhecida como (RP TLC)[16]. Para fins de comparao, tambm sero obtidos os parmetros de reteno para os principais radiofrmacos para a formao de imagens do tecido renal e do tecido heptico disponveis comercialmente.

Rm = log(1/Rf -1)
Equao 1: clculo do parmetro de reteno (Rm), onde (Rf) o ndice de reteno na fase estacionria do composto.

x = Rmx - RmH
Equao 2: Clculo da constante de Hansch, onde Rm x o parmetro de reteno do ligante com um ou mais substituintes e Rm H o parmetro de reteno do ligante padro, sem os substituintes.

Os estudos in vitro de estabilidade em meio biolgico sero realizados em duas etapas: 1a etapa (Estabilidade s condies de pH e isotonicidade): Os complexos obtidos sero dissolvidos em uma soluo EtOH/Salina (NaCl) (9:1) e diludos a um volume equivalente de tampo fosfato (0,1M, pH= 7.4) acrescido de uma soluo aquosa 25% de propilenoglicol. 2 etapa (Estabilidade de perfuso): 100L de uma soluo 0,9% NaCl, 12% propileno glicol de cada complexo obtido ser incubada em um amostra de plasma sanguneo de roedores 370C por 24h. O objetivo principal deste ensaio ser verificar eventuais perdas de estabilidade dos complexos obtidos por transquelao frente aos componentes do plasma sanguneo.

Em ambas as etapas, alquotas das solues resultantes sero analisadas por cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC) em um intervalo de tempo pr-estabelecido.

Referncias Bibliogrficas:
[1] SAHA, G. B. Fundamentals of nuclear pharmacy, 5th Ed. Springer-Verlag, New York, USA 2003.383pp. [2] Marqures, F.L.M.; Okamoto, M.R.Y; Buchpiguel, C.A. Radiol Bras, 34(4), 233239, 2001. [3] Dabrowiak J.C. Metals in Medicine, 1st Ed. John Wiley & Sons, West Sussex, UK, 2009, 334pp. [4] Jones C.; Thornback J. Medicinal Applications of Coordination Chemistry, RSC Publishing, Cambridge, UK, 2007, 353pp. [5] Oliveira, R.; Santos D.; Ferreira, D.; Coelho P.; Veiga, F. RBCF, 42, n. 2, 152-165, 2006.

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Impacto de eltrons e ftons em molculas orgnicas Nitrogenadas e Oxigenadas condensadas e em fase gasosa: Relevncia para a Astroqumica.

Aluno: GUILHERME CAMELIER ALMEIDA DRE: 110192923

Projeto de pesquisa de tese de doutorado

Orientadoras:

Profa. MARIA LUIZA ROCCO DUARTE PEREIRA (DSc.) Profa. CSSIA CURAN TURCI (DSc.)
A busca por molculas pr-biticas no meio interestelar um dos maiores desafios da astroqumica, da astrobiologia e do estudo da origem da vida. Em diversos objetos astrofsicos, como cometas e nebulosas, j foram encontradas molculas precursoras da vida como amnia (NH3), acetonitrila (CH3CN), cido frmico (HCOOH), cido actico (CH3COOH), metanol (CH3OH) e etanol (CH3CH2OH). Compostos orgnicos nitrogenados e oxigenados so abundantes no meio interestelar, podendo ser encontrados tanto em fase gasosa como em fase slida. No entanto, a razo por trs desta abundncia relativa ainda no completamente esclarecida. O presente projeto tem como objetivo simular em laboratrio as condies do meio interestelar, visando estudar os processos de dissociao molecular e de fragmentao inica, quando submetemos molculas precursoras da vida ao impacto de eltrons, ftons e ons. O presente projeto dar continuidade aos estudos de dessoro inica induzida pela interao de eltrons e ftons das regies do ultravioleta de vcuo (UVV) e de raios-X moles com superfcies slidas, iniciados no Laboratrio de Qumica de Superfcies (LAQUIS), do Instituto de Qumica da UFRJ e no Laboratrio Nacional de Luz Sncrotron (LNLS), em Campinas-SP, com a implantao das tcnicas de ESD (Electron Stimulated Desorption) e PSD (Photon Stimulated Desorption). O conhecimento destes processos de importncia fundamental para a compreenso da qumica do meio interestelar, uma vez que a fragmentao e a dissociao de molculas orgnicas em regies de formao estelar, em cometas e em outros ambientes astrofsicos podem levar formao de molculas cada vez mais complexas.