VARIABLES PTICAS ESPECTROFOTMETROS

1. Conceptos bsicos

La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones qumicas y biolgicas. La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas. Se denomina espectro electromagntico a la distribucin energtica del conjunto de las ondas electromagnticas.Las cargas elctricas estacionarias producen campos elctricos, las cargas

elctricas en movimiento producen campos elctricos y magnticos. Los cambios cclicos en estos campos producen radiacin electromagntica, de esta manera la radiacin electromagntica consiste en una oscilacin perpendicular de un campo elctrico y magntico. La radiacin electromagntica transporta energa de un punto a otro, esta radiacin se mueve a la velocidad de la luz (siendo la luz un tipo de radiacin electromagntica).

Si las ondas electromagnticas se organizan en un continuo de acuerdo a sus longitudes obtenemos el espectro electromagntico en donde las ondas mas largas (longitudes desde metros a kilmetros) se encuentran en un extremo (Radio) y las mas cortas en el otro (longitudes de onda de una billonsima de metros) (Gamma). Las radiaciones de IR estimulan el movimiento vibracional de las molculas cuando la absorben, y las radiaciones UV/VIS hacen que los electrones pasen a orbitales de mayor energa. Los rayos X y la radiacin UV de longitud de onda corta rompen enlaces qumicos y ionizan las molculas.
Las ondas de radiacin electromagntica se componen de crestas y valles, convencionalmente las primeras hacia arriba y las segundas hacia abajo. La distancia entre dos crestas o valles se denomina longitud de onda (). La frecuencia de la onda esta determinada por las veces que ella corta la lnea de base en la unidad de tiempo (casi siempre medida en segundos), esta frecuencia es tan importante que las propiedades de la radiacin dependen de ella y est dada en Hertz. La amplitud de onda esta definida por la distancia que separa el pico de la cresta o valle de la lnea de base (A). la energa que transporta la onda es proporcional al cuadrado de la amplitud. La unidad de medida para expresar semejantes distancias tan pequeas es el nanmetro (10 -9 metros).

Luz Visible. Isaac Newton fue el primero en descomponer la luz visible blanca del Sol en sus componentes mediante la utilizacin de un prisma. La luz blanca est constituida por la combinacin de ondas que tienen energas semejantes sin que alguna predomine sobre las otras. La radiacin visible va desde 384x1012 hasta 769x1012 Hz. Las frecuencias mas bajas de la luz visible (longitud de onda larga) se perciben como rojas y las de mas alta frecuencia (longitud corta) aparecen violetas. Rayos infrarrojos. La radiacin infrarroja fue descubierta por el astrnomo William Herschel (1738-1822) en 1800, al medir una zona ms caliente ms all de la zona roja del espectro visible, razn por la cual es asociada con el calor. La radiacin infrarroja se localiza en el espectro entre 3x1011 Hz. hasta aproximadamente los 4x1014 Hz. La banda infrarroja se divide en tres secciones de acuerdo a su distancia a la zona visible: prxima (780 - 2500 nm), intermedia (2500 - 50000 nm) y lejana (50000 - 1mm). Toda molcula que tenga un temperatura superior al cero absoluto (-273 K) emite rayos infrarrojos y su cantidad esta directamente relacionada con la temperatura del objeto. Usada en los controles remoto Microondas. La regin de las microondas se encuentra entre los 109 hasta aproximadamente 3x1011 Hz (con longitud de onda entre 30 cm a 1 mm). Usadas en redes inalmbricas y radares Ondas de Radio. Heinrich Hertz (1857-1894), en el ao de 1887, consigui detectar ondas de radio que tenan una longitud del orden de un metro. La regin de ondas de radio se extiende desde algunos Hertz hasta 109 Hz con longitudes de onda desde muchos kilmetros hasta menos de 30 cm. Rayos X. En 1895 Wilhelm Rntgen invento una mquina que produca radiacin electromagntica con una longitud de onda menor a 10 nm a los cuales debido a que no conoca su naturaleza las bautiz como X. La denominacin rayos X designa a una radiacin
electromagntica, invisible, capaz de atravesar cuerpos opacos y de impresionar las pelculas fotogrficas.

Radiacin Ultravioleta. Sus longitudes de onda se extienden entre 10 y 400 nm ms cortas que las de la luz visible. Rayos Gamma. Se localizan en la parte del espectro que tiene las longitudes de onda mas pequeas entre 10 y 0.01 nm. La radiacin gamma es un tipo de radiacin electromagntica
producida generalmente por elementos radioactivos o procesos subatmicos como la aniquilacin de un parpositrn-electrn. Este tipo de radiacin de tal magnitud tambin es producida en fenmenos astrofsicos de gran violencia. Debido a las altas energas que poseen, los rayos gamma constituyen un tipo de radiacin ionizante capaz de penetrar en la materia ms profundamente que la radiacin alfa o beta. Dada su alta energa pueden causar grave dao al ncleo de las clulas, por lo que son usados para esterilizar equipos mdicos y alimentos.

2.

Tipos de espectrofotmetros.

Los equipos comnmente utilizados en las tcnicas analticas de espectrofotometra son los espectrofotmetros y los fotocolormetros o fotmetros. Los espectrofotmetros son equipos que tienen en su sistema un monocromador que permite la seleccin de la longitud de onda con una alta resolucin. Un fotocolormetro a diferencia del espectrofotmetro utiliza slo sistemas de filtros para seleccionar un intervalo de longitudes de onda con una menor resolucin que el espectrofotmetro.
3. Partes principales de un espectrofotmetro

Manual: Para esta operacin son utilizadas celdas de vidrio o de cuarzo (dependiendo de la longitud de onda que indica el mtodo) donde se coloca la muestra y sta a su vez se introduce en un compartimiento especfico del espectrofotmetro. El espesor de las celdas utilizadas comnmente es de un cm, sin embargo, es factible contar con espesores hasta de 10 cm de espesor, teniendo influencia directa en la cantidad de luz absorbida por la muestra. Flujo continuo: Los espectrofotmetros tambin cuentan con bombas peristlticas para la inyeccin de flujo continuo de muestras, sin embargo, stas slo son para facilitar la introduccin de la muestra que finalmente llega a una celda de vidrio o cuarzo que podr tener caractersticas similares a las mencionadas en el prrafo anterior.
4. 5. Calibracin Prctica de calibracin

NDICE DE REFRACCIN
Dado que, en el caso de unas condiciones estables y de unas propiedades de material conocidas, se trata de un valor constante, es posible medir el ndice de refraccin de un segundo medio a travs de la inversin de la ley. Los ngulos de haz nico y de radiacin se pueden representar mediante la tcnica de medicin, el ndice de refraccin de uno de los materiales (el prisma del refractmetro) es conocido, por lo que, una vez invertida la frmula, el clculo del ndice de refraccin del material desconocido es pura matemtica. La medicin del ndice de refraccin depende de la temperatura y de la longitud de onda de la luz utilizada. La determinacin del ndice de refraccin ofrece informacin sobre la pureza de una sustancia,

DESCRIPCIN

DEL

SISTEMA

TRANSPARENTE.

En la figura de abajo la deteccin es hecha utilizando el fenmeno refractivo producido en el limite del prisma. El indice de refraccin del prisma es mucho mas grande que el del ejemplo. si la muestra es de baja concentracin, el ngulo de refraccin es grande (vea "A") debido a la gran diferencia en el ndice de refraccin entre el prisma y la muestra Si la muestra es concentrada, el ngulo de refraccin es pequeo (vea "B") debido a la pequea diferencia en el ndice de refraccin entre el prisma y la muestra. El sistema de refraccin para el refractmetro digital (sistema de reflexin) se detallar mas abajo. En la figura debajo, haz de luz A, que incide desde la parte baja izquierda del prisma, no es reflejada por el limite, pero pasa a travs de la muestra. El haz de luz B se refleja por la cara derecha, directamente a lo largo del lmite del prisma. El haz de luz C, incide en un ngulo demasiado grande para pasar a traves de la muestra, si no que es totalmente reflejado hacia el lado bajo y derecho del prisma. Como resultado, la lnea lmite es producida dividiendo la luz y la sombra en el otro lado de la lnea punteada B en la figura. El ngulo de reflexin de esta lnea es proporcional al ndice de refraccin, la posicin de la lnea lmite entre la luz y los campos oscuros son captadas por un sensor y convertidas en ndices refractivos.