Dissertacao Jacques

UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLNDIA INSTITUTO DE QUMICA PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM QUMICA
CARACTERIZAO FOTOFSICA DE DERIVADOS DE CUMARINAS
Jacques Antonio de Miranda

Dissertao apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Qumica como parte dos requisitos para obteno do ttulo de MESTRE EM QUMICA.
Orientador: Prof. Dr. Antonio Eduardo da Hora Machado

Bolsista Capes Uberlndia MG 2001
Por que eles falam to difcil? perguntou certa noite ao Ingls. Notou
tambm que o Ingls andava meio aborrecido e sentindo falta de seus livros.
Para que s os que tm responsabilidade de entender que entendam disse

ele. Imagine se todo mundo sasse transformando chumbo em ouro. Daqui a pouco o ouro no ia valer nada. S os persistentes, s aqueles que pesquisam muito, que conseguem a Grande Obra. Por isso estou no meio deste deserto. Para encontrar um verdadeiro Alquimista, que me ajude a decifrar os cdigos. O Alquimista
Dedico este trabalho minha famlia
Agradecimentos
A Deus, pela oportunidade de concluir mais uma etapa dessa breve passagem. Ao Prof. Dr. Antonio Eduardo da Hora Machado pela orientao, apoio e ateno dedicados durante a realizao desse trabalho. Prof. Dra. Ana Maria Ferreira de Oliveira Campos, da Universidade do Minho, Portugal, pela gentil cesso dos derivados de cumarinas estudados neste trabalho. Aos colegas do Grupo de Fotoqumica e Qumica de Lignocelulsicos pelo convvio e longa amizade. Aos Profs. Dr. David E. Nicodem e Dr. Ira Mark Brinn do Laboratrio de Espectroscopia Resolvida no Tempo - IQ/UFRJ. Aos Profs. Dr. Miguel Guillermo Neumann e Dr. Marcelo Gehlen do Laboratrio de Fotoqumica - IQSC/SP. Aos colegas Divinomar Severino, Valdemir Velani e Hosana M. Maciel Velani pelas contribuies durante algumas discusses. Aos colegas Alex F. de Paulo, Anderson A. Tossani, Cssio C. de Oliveira, Daniel R. Borges, Paulo R. Ramos Costa, Wilson J. Rosa Jr., pela amizade e companherismo. UFU e CAPES, pelo apoio financeiro. Todos os colegas, amigos, tcnicos e professores do IQ-UFU, em especial Prof. Dr. Evandro A. Nascimento, Prof. Dr. Maurcio Santos Matos, Prof. Dr. Reinaldo Ruggiero, Profa. Dra. Silvana Guilardi e Prof. Dr. Welington de Oliveira Cruz.
ndice
Resumo................................................................................................................................. I Abstract ............................................................................................................................. III 1 Introduo .................................................................................................................. 1 1.1 As cumarinas ......................................................................................................... 1 1.1.1 1.1.2 1.1.3 1.1.4 1.1.5 1.1.6 1.1.7 1.1.8 1.2.1 1.2.2 1.2.3 Cumarinas como agentes anticncer ............................................................ 4 Atividade mutagnica de cumarinas ............................................................. 6 Atividade anti-HIV de cumarinas.................................................................. 7 Atividade das cumarinas sobre o sangue e seus componentes...................... 8 Interaes de cumarinas com espcies ativas de oxignio ........................... 9 Cumarinas em sistemas de laser de corante ............................................... 11 Cumarinas como sondas de fluorescncia .................................................. 12 Furano-derivados de cumarina................................................................... 14 Espectroscopia no Visvel e UV-prximo.................................................... 16 Fotofsica Molecular: Diagrama de Jablonski e Princpio de FranckDeslocamento de Stokes e o efeito dos solventes ........................................ 22 1.2.3.1.1 Compostos solvatocrmicos ............................................................. 25 1.2.3.1.2 Teoria do efeito do solvente sobre o espectro de absoro no UVVisvel .. ........................................................................................................... 25 1.2.3.2 Efeitos do Solvente no Espectro de Emisso. ......................................... 27 1.2.3.3 Mecanismos para o Deslocamento Espectral e a Equao de Lippert. . 29 1.2.3.4 Outras Escalas de Polaridade. ............................................................... 32 1.2.4 Cintica dos processos fotofsicos............................................................... 36 1.2.4.1 Tempos de vida radiativos. ..................................................................... 36 1.2.4.2 Medidas de tempo de vida....................................................................... 38 1.2.4.3 Rendimentos Qunticos. ......................................................................... 41 1.2.4.3.1 Medidas experimentais de rendimento quntico de fluorescncia. .. 44 1.3 A fotofsica de cumarinas..................................................................................... 46 1.4 Objetivos .............................................................................................................. 50 2 Experimental ............................................................................................................ 51
1.2 Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. .......................... 16 1.2.1.1 A Lei da Absoro................................................................................... 16 Condon. .................................................................................................................... 18 1.2.3.1 Efeitos do solvente no espectro de absoro .......................................... 23
2.1 Materiais e reagentes........................................................................................... 51 2.2 Experimental ........................................................................................................ 54 2.2.1 Medidas temperatura ambiente................................................................ 54 2.2.1.1 Efeito do solvente sobre a fotofsica das cumarinas............................... 54 2.2.1.2 Comportamento fotofsico das cumarinas 2 e 3 frente a variaes no pH do meio..................................................................................................................55 2.2.1.3 Comportamento fotofsico da cumarina 2 em diferentes misturas dioxano/gua ....................................................................................................... 55 2.2.1.4 Comportamento fotofsico da cumarina 3 em diferentes misturas metanol/DMF: Efeito do carter nucleoflico dos solventes orgnicos .............. 56 2.2.2 2.2.3 3 Medidas fotofsicas a baixa temperatura .................................................... 56 Eficincia quntica de gerao de oxignio singlete.................................. 56
Resultados e Discusso ............................................................................................ 58 3.1 Absortividade molar das cumarinas estudadas. .................................................. 58 3.2 A Natureza do Estado S1 ...................................................................................... 63 3.3 Efeito do Solvente Sobre a Transio S1 S0 ..................................................... 78 3.4 Energias de singlete e a capacidade de gerao de oxignio singlete para as cumarinas estudadas .................................................................................................. 112
4 5 6 7 8
Concluso............................................................................................................... 117 Sugestes para trabalhos futuros ........................................................................... 120 Apndice................................................................................................................. 121 Referncias Bibliogrficas ..................................................................................... 129 Produo Bibliogrfica (2000-2001)..................................................................... 141 8.1 Trabalhos em Eventos........................................................................................ 141 8.2 Artigos Publicados em Peridicos..................................................................... 143 8.3 Artigos em Redao ........................................................................................... 144
ndice de Figuras
Figura 1 - Cumarina e cromona. ........................................................................................ 1 Figura 2 Rota biosinttica da cumarina. ......................................................................... 1 Figura 3 Formas cis e trans do cido cinmico. ............................................................. 2 Figura 4 Estruturas cis e trans glicosiladas.................................................................... 2 Figura 5 - Umbeliferona, a 7-hidroxicumarina.................................................................. 2 Figura 6 Cumarinas comumente encontradas na natureza............................................. 3 Figura 7 Cumarina e compostos similares. ..................................................................... 4 Figura 8 Cumarinas isoladas da Calophyllum Linn. Inophyllum. .................................. 7 Figura 9 Cumarinas isoladas da Calophyllum lanigerum. ............................................. 8 Figura 10 Cumarinas extradas da Zanthoxylum schinifolium com atividade antiagregante de plaquetas ................................................................................................ 9 Figura 11 Cumarina isolada da Peucedanum japonicium. ............................................. 9 Figura 12 Algumas cumarinas comumente utilizadas em laseres de corante . ............. 12 Figura 13 Cumarinas utilizadas na sntese do dendrmero, (a) utilizada na periferia e (b) utilizada no ncleo. ..................................................................................................... 13 Figura 14 Dendrmero contendo vrios substituintes constitudos de cumarinas ........ 14 Figura 15 Estrutura bsica dos psoralenos................................................................... 14 Figura 16 Exemplos de psoralenos utilizados em fotoquimioterapia ........................... 15 Figura 17 Esquema dos processos radiativos em um sistema de dois nveis. Probabilidade de transio para a absoro (Blu), para a emisso espontnea (Aul) e para a emisso estimulada (Bul)........................................................................................ 18 Figura 18 - Diagrama de Jablonski.................................................................................. 21 Figura 19 Curvas de energia potencial mostrando os nveis vibracionais em relao ao processo de absoro relacionado ao princpio de Franck-Condon................................ 22 Figura 20 - Diagrama de Jablonski para fluorescncia com relaxao pelo solvente. ... 28 Figura 21 Dipolo em meio dieltrico............................................................................. 29 Figura 22 Estrutura do iodeto de 1-etil-4-metoxicarbonilpiridnio. ............................. 32 Figura 23 Estrutura do corante de Reichardt, utilizado como padro de polaridade. . 33 Figura 24 Derivado do corante de Reichardt utilizado para estudos em solventes de baixa polaridade. .............................................................................................................. 34 Figura 25 Perfil bsico de uma curva de absoro Lorentziana. ................................. 37 Figura 26 Diagrama de Jablonski modificado, mostrando a competio entre fluorescncia, converso interna e cruzamento entre sistemas. ....................................... 38 Figura 27 Estrutura bsica das cumarinas. .................................................................. 47 Figura 28 Derivados de cumarina estudados................................................................ 50
Figura 29 Espectros de absoro em metanol das cumarinas estudadas. R = H (cumarina 1); R = NEt2 (cumarina 2); R = OH (cumarina 3)......................................... 58 Figura 30 Esquema do equilbrio cido-base proposto para a cumarina 2.................. 61 Figura 31 Esquema do equilbrio cido-base proposto para a cumarina 3................. 62 Figura 32 Espectros tpicos de absoro e emisso de fluorescncia para as cumarinas estudadas: (a) cumarina 1 em metanol (exc = 352 nm); (b) cumarina 2 em metanol (exc = 442 nm); (c) cumarina 3 em metanol (exc = 381 nm); (d) cumarina 3 em DMF, onde favorecida a desprotonao do substituinte OH da posio 7 do anel cumarnico (exc = 468 nm)................................................................................................................ 63 Figura 33 Espectros de absoro da cumarina 3 em acetona, (a) em acetona pura (abs = 374 nm e 460 nm) ; (b) ----- em acetona e cido clordrico (abs = 372 nm); (c) em acetona e NaOH (abs = 456 nm)....................................................... 65 Figura 34 - Espectros de emisso de fluorescncia da cumarina 3 em acetona, (a) em acetona pura, excitao a 374 nm; (a) em acetona pura, excitao a 460 nm; (b) em acetona e cido clordrico, excitao a 372 nm; (c) em acetona e NaOH , excitao a 456 nm............................................................................................................................... 66 Figura 35 Bandas de absoro e curvas de monitoramento da absorvncia do mximo de absoro da espcie desprotonada da cumarina 3 a diferentes valores de pH em mistura metanol/gua: (a) mistura (1:4 v/v); (b) mistura (1:99 v/v)................................ 67 Figura 36 Comportamento das bandas de emisso de fluorescncia da cumarina 3 a diferentes valores de pH em mistura metanol/gua: (a)mistura (1:4 v/v); (b) mistura (1:99 v/v)........................................................................................................................... 69 Figura 37 Espcies geradas pela protonao e desprotonao do substituinte OH..... 70 Figura 38 Espectros de absoro (a) e emisso de fluorescncia (b) para a cumarina 3 a diferentes propores na mistura metanol/DMF........................................................... 71 Figura 39 Espectros de emisso de fluorescncia (a) e monitoramento da variao da absorvncia a 382 nm, ocorrida para a cumarina 3 (b) em diferentes misturas de metanol/DMF.................................................................................................................... 72 Figura 40 Espectros de absoro e emisso de fluorescncia da cumarina 3 em diisopropilamina (exc = 384 nm). .................................................................................. 73 Figura 41 Bandas de absoro (a) e curvas de monitoramento da absorvncia do mximo de absoro ( = 452 nm) da espcie protonada da cumarina 2 (b) a diferentes valores de pH em mistura metanol/gua (1:99 v/v).......................................................... 74 Figura 42 - Comportamento das bandas de emisso de fluorescncia (a) e monitoramento da intensidade de fluorescncia a 497 nm (b) da cumarina 2 a diferentes valores de pH em mistura metanol/gua (1:99). .............................................................. 75
Figura 43 Cumarinas estudadas por Jones e colaboradores [129]. ............................. 76 Figura 44 - Espectros de absoro e emisso de fluorescncia para a cumarina 2 a diferentes pH em mistura metanol/gua (1:99): (a) cumarina 2 a pH = 1,67 (exc = 495 nm); (b) cumarina 2 a pH = 5,65 (exc = 452 nm); (c) cumarina 2 a pH = 9,31 (exc = 452 nm). ............................................................................................................................ 77 Figura 45 Deslocamento de Stokes em funo da polarizabilidade de orientao (f) para a cumarina 1 em solventes aprticos. (a) metilciclohexano; (b) tetracloreto de carbono; (c) tolueno; (d) dioxano; (e) clorofrmio; (f) acetato de etila; (g) THF; (h) DMSO; (i) DMF; (j) acetona; (k) acetonitrila.................................................................. 80 Figura 46 Deslocamento de Stokes em funo do parmetro de polaridade ETN para a cumarina 1 em solventes aprticos. (a) tetracloreto de carbono;(b) tolueno;(c) dioxano; (d) THF; (e) acetato de etila; (f) clorofrmio; (g) acetona; (h) DMF; (i) DMSO. .......... 81 Figura 47 Deslocamento de Stokes em funo do parmetro do solvente prtico para a cumarina 1. (a) 2-butanol; (b) 2-propanol; (c) etanol; (d) metanol; (e) etilenoglicol. . 82 Figura 48 Relao entre o rendimento quntico de fluorescncia da cumarina 1 e a polarizabilidade de orientao (f) do solvente utilizado. Pontos fechados ( ): (a) metilciclohexano;(b) tetracloreto de carbono;(c) tolueno; (d) dioxano; (e) clorofrmio; (f) acetato de etila; (g) THF; (h) DMSO; (i) DMF; (j) acetona; (k) acetonitrila. Pontos abertos (): solventes prticos.......................................................................................... 83 Figura 49 Relao entre o rendimento quntico de fluorescncia da cumarina 1 e o parmetro para solventes prticos. (a) 2-butanol; (b) 2-propanol; (c) etanol; (d) etilenoglicol; (e) metanol. ................................................................................................. 84 Figura 50 Deslocamento de Stokes em funo da polarizabilidade de orientao para a cumarina 2 em solventes aprticos. (a) tetracloreto de carbono, (b) tolueno, (c) dioxano, (d) acetato de etila, (e) DMSO, (f) DMF, (g) propanona, (h) acetonitrila. ...................... 88 Figura 51 - Espectros de emisso de fluorescncia da cumarina 2 em (a) diisopropilamina, (b) clorofrmio e (c) metanol. Dois mximos de emisso de fluorescncia podem ser visualizados: o primeiro, a 473 nm relativo ao estado LE, e a 490 nm relativo ao ICT. ................................................................................................... 90 Figura 52 - Comportamento do rendimento quntico de fluorescncia da cumarina 2 em solventes aprticos de polaridade intermediria a alta: (a) clorofrmio, (b) acetato de etila, (c) THF, (d) acetona, (e) acetonitrila, (f) DMF, (g) DMSO. ................................... 91 Figura 53 Comportamento do rendimento quntico de fluorescncia da cumarina 2 em funo do parmetro do solvente: (a) 2-butanol, (b) 2-propanol, (c) etanol, (d) etilenoglicol, (e) metanol, (f) gua.................................................................................... 92
Figura 54 Relao entre a constante de desativao no-radiativa para a cumarina 2 em funo do parmetro do solvente: (a) 2-butanol, (b) 2-propanol, (c) etanol, (d) etilenoglicol, (e) metanol, (f) gua.................................................................................... 93 Figura 55 - Espectros de absoro da cumarina 2 a diferentes propores de gua em dioxano. () 0 % gua; () 5 % gua; () 25 % gua; (--------) 50 % gua; () 75 % gua; (*****) 100 % gua........................................................................................ 94 Figura 56 - Espectros de emisso de fluorescncia da cumarina 2 em diferentes concentraes de gua, para misturas gua dioxano....................................................... 95 Figura 57 - Deslocamento de Stokes da cumarina 2 para diferentes misturas de dioxano/gua..................................................................................................................... 97 Figura 58 - Rendimento quntico de fluorescncia para diferentes misturas dioxano/gua..................................................................................................................... 97 Figura 59 - Relao de Stern-Volmer para a supresso da fluorescncia da cumarina 2 em misturas dioxano/gua. (a) variao entre 0 e 55,56 mol.dm-3 de gua; (b) variao entre 0 e 25 mol.dm-3 de gua.......................................................................................... 98 Figura 60 Valores relativos de absorvncia no mximo de absoro (a), deslocamento de Stokes(b) e rendimento quntico de fluorescncia (c) para a cumarina 2 em funo do pH do meio...................................................................................................................... 100 Figura 61 Relao de Stern-Volmer para a cumarina 2 utilizando-se H3O+ como supressor. (a) pH variando entre 1,67 e 9,31; (b) pH variando entre 1,67 e 2,15 (abaixo do pKa).. ......................................................................................................................... 100 Figura 62 Espectros de absoro e emisso de fluorescncia para a cumarina 3 em gua a pH 5,45................................................................................................................ 104 Figura 63 Deslocamento de Stokes em funo da polarizabilidade de orientao para a cumarina 3 desprotonada em solventes aprticos. (a) clorofrmio, (b) acetato de etila, (c) THF, (d) DMSO, (e) DMF. ............................................................................................. 106 Figura 64 Espectros de emisso de fluorescncia a 77 K em metilciclohexano para as cumarinas estudadas: (a) cumarina 1; (b) cumarina 2; (c) cumarina 3; (d) cumarina 3 desprotonada (soluo contendo 20 % de piridina). ...................................................... 112 Figura 65 Espectros de emisso de fluorescncia a 77 K para a cumarina 2 em: (a) acetato de etila; (b) etanol 99,8 %.................................................................................. 113 Figura 66 - Decaimento do 1O2, com emisso a 1270 nm, gerado por fotosensitizao pela: (a) cumarina 1; (b) cumarina 3. ............................................................................ 115 Figura 67 Curvas para a determinao da eficincia de gerao de oxignio singlete para as cumarinas. (P) fenalenona; (1) cumarina 1; (2) cumarina 2; (3) cumarina 3. . 115
ndice das Tabelas

Tabela 1- Efeito inibitrio de cumarinas na gerao de superxido por leuccitos humanos PMN PMA-estimulada ...................................................................................... 10 Tabela 2 -Caractersticas tpicas de alguns cromforos. ................................................. 24 Tabela 3 Caractersticas dos principais padres utilizados na determinao de rendimentos qunticos de fluorescncia . ......................................................................... 45 Tabela 4 Valores estimados para os coeficientes de extino molar em diferentes solventes, obtidos para as cumarinas estudadas. ............................................................. 60 Tabela 5 Mximos de absoro e emisso, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos da cumarina 1................................................... 79 Tabela 6 Mximos de absoro e emisso, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos para a cumarina 2. .......................................... 87 Tabela 7 Comprimentos de onda nos mximos de absoro e emisso, deslocamentos de Stokes e rendimentos qunticos de fluorescncia para a cumarina 2 em diferentes composies dioxano/gua ............................................................................................... 96 Tabela 8 Mximos de absoro e emisso, deslocamentos de Stokes e rendimentos qunticos de fluorescncia da cumarina 2 para diferentes [H3O+], em misturas metanol/gua (1:99 v/v).................................................................................................... 99 Tabela 9 - Mximos de absoro e emisso, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos para a cumarina 3. .......................................... 102 Tabela 10 Mximos de absoro e emisso, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural e tempo de vida natural para a cumarina 3 desprotonada.................................................................................... 105
Tabela 11 Efeito da composio da mistura metanol/DMF sobre a fotofsica da cumarina 3. ..................................................................................................................... 108 Tabela 12 Mximos de absoro e emisso, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos para a cumarina 3 em mistura metanol/gua (1:4 v/v) a diferentes pH......................................................................................................... 109 Tabela 13 Mximos de absoro e emisso, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos para a cumarina 3 em mistura metanol/gua (1:99 v/v) a diferentes pH. .............................................................................................. 110 Tabela 14 Energias de singlete e rendimentos qunticos de fluorescncia para as trs cumarinas estudadas....................................................................................................... 113 Tabela 15 Propriedades fsicas dos solventes utilizados............................................. 121 Tabela 16 Dados solvatocrmicos dos solventes utilizados ........................................ 122
ndice de Termos Adotados

s, constante dieltrica; n, ndice de refrao; , absortividade molar (coeficiente de extino molar); IC, converso interna; ISC, cruzamento entre sistemas; RV, relaxao vibracional; exp, tempo de vida experimental; f, tempo de vida de fluorescncia; kr0, constante natural radiativa; r0 , tempo de vida natural radiativo; kf, constante de fluorescncia; knr, constante para os demais processos; ~ , deslocamento de Stokes; f, rendimento quntico de fluorescncia; DMF, N,N-dimetilformamida; DMSO, dimetilsulfxido; THF, tetrahidrofurano; f, polarizabilidade de orientao; ET(30), energia de transio da banda de transferncia de carga da Betana 30, corante de Reichardt; ETN, valor normalizado do ET(30); abs, comprimento de onda de absoro; em , comprimento de onda de emisso; , diferena entre o momento de dipolo do estado excitado e o momento de dipolo do estado fundamental; a, raio de Onsager; , parmetro solvatocrmico que relaciona o carter doador de prton de um solvente em uma ligao de hidrognio; , parmetro solvatocrmico que relaciona o carter aceptor de prton de um solvente em uma ligao de hidrognio; solvente prtico, que possui um tomo de hidrognio hbil a formar uma ligao de hidrognio; solvente aprtico, que no possui um tomo de hidrognio para formar ligao de hidrognio.
Resumo
A fotofsica de trs derivados de cumarina foi estudada para uma srie de solventes orgnicos, mediante medidas de fluorescncia no estado estacionrio e resolvida no tempo. As medidas foram feitas tanto temperatura ambiente como a 77 K. As elevadas absortividades molares, em torno de 104 mol-1dm3cm-1, associadas transio S0S1, sugerem para essa um carter ,*. Esse carter ,* decorre principalmente do efeito aceptor de eltrons do grupo benzoxazol localizado na posio 3 do anel cumarnico. A transio sofre ainda uma contribuio n,*, resultado da interao de substituintes doadores de eltrons da posio 7 do anel cumarnico. Os resultados mostram que as cumarinas so fortemente fluorescentes, havendo, no entanto, certas particularidades relacionadas ao tipo de substituinte na posio 7 do anel cumarnico. No caso do derivado 3-benzoxazol-2-il-7dietilamino-cromen-2-ona, a combinao dos dois substituintes nas posies 3 e 7, faz com que ocorra uma transferncia intramolecular de carga (ICT), j no estado fundamental, sendo essa intensificada no estado excitado. O estado excitado observado a partir da emisso fluorescente provavelmente um estado TICT (Estado de Tranferncia Intramolecular de Carga Torcido). O comportamento desse composto afetado pela polaridade do solvente, sobretudo solventes prticos, onde a formao de ligaes de hidrognio favorece a desativao noradiativa do estado S1. Tanto para esse composto como para o derivado hidroxilado desprotonado, observa-se uma dependncia entre f e a temperatura. O efeito do pH sobre as caractersticas espectroscpicas foi investigado para a aminocumarina e para a hidroxicumarina. Nessa ltima, uma espcie aninica formada mostra propriedades fotofsicas distintas da forma neutra. Foi estimado um pKa de 6,20 para o equilbrio cido-base das duas espcies. A participao de processos no-radiativos de desativao favorecida quando a forma aninica predomina, decorrente, sobretudo do aumento das interaes entre pares inicos (espcie desprotonada e seu contra-on). Um comportamento similar observado em solventes nucleoflicos, como DMF e DMSO. A espcie desprotonada exibe um estado de transferncia intramolecular de carga, formado a partir da nova carbonila gerada na posio 7 do anel cumarnico. No estado
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excitado possvel ainda observar um terceira espcie a pH inferior a 2, atribuda forma catinica, obtida pela protonao do grupo hidroxila. Para a aminocumarina, foi estimado um pKa de 2,36. O estado de transferncia de carga inviabilizado pela protonao do grupo amino, uma vez que nessas condies desfavorecida a induo eletrnica para o anel cumarnico. A espcie catinica no estado excitado fortemente desativada por converso interna. O derivado 3-benzoxazol-2-il-cromen-2-ona apresentou uma eficincia quntica de gerao de oxignio singlete de aproximadamente 15 %, enquanto que os demais derivados indicaram uma eficincia em torno de 6 %.
II
Abstract
The photophysics of three coumarins derivatives has been studied in different organic solvents, by steady-state and time-resolved fluorescence measurements. These measurements were performed both at room temperature and at 77 K. The high molar absorptivities, approximately 104 mol-1dm3cm-1, associated to S0S1 transition, suggest a ,* character. This ,* character is principally due to the electron-withdrawing effect of the benzoxazole group located at 3-position of the coumarin ring. An n,* perturbational contribution can also occur due to the interaction of eletron donor substituents at 7-position. The results show that the coumarins studied here are very strongly fluorescent. However, the kind of substituent at 7-positoin of coumarin ring has an important effect on the properties. For the 3-benzoxazol-2-il-7-diethylaminocromen-2-one derivative, the combination of the two substituents at positions 3 and 7 can viabilize an intramolecular charge transfer (ICT) at the ground state; effect which increases in the first excited singlet state. The excited state observed from fluorescent emission has a TICT character. The behaviour of this compound is affected by solvent polarity, principally protic solvents, where the formation of hydrogen bonds favors the non-radiative deactivation of S1 state. This compound and the deprotonated hydroxylated derivative show a temperature dependence for f . The pH effect on spectroscopic properties was investigated for aminocoumarin and hidroxycoumarin. In the latter an anionic specie is formed. It shows distinct photophysical properties from the neutral species. A pKa of 6.20 was estimated for the acid-base equilibrium. Non-radiative deactivation processes increase when the anionic form predominates, due to the interactions between the anionic specie and its counter ion. A similar behaviour is observed in nucleofilic solvents, like DMF and DMSO. The anionic species present an intramolecular charge transfer originating from the ketonic group at 7 position, formed due to the deprotonation. In the excited state is still possible to observe a third species at below pH 2, that is attributed to the cationic form, formed by the protonation of hidroxyl group.
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A pKa of 2.36 was estimated for aminocoumarin. The intramolecular charge transfer state is inviabilized after protonation of the amino group, where there is no eletronic coupling with the coumarin ring. The cationic specie at the excited state is strongly deactivated by internal conversion. The 3-benzoxazol-2-il-cromen-2-one derivative showed a singlete oxygen generation quantum efficiency of 15 %, whereas the others an efficiency of approximately 6 % was found.
IV
Introduo-As cumarinas 1
1
1.1
Introduo
As cumarinas [1]
Cumarinas so benzo-derivados da pirona, de ocorrncia natural ou sinttica, classificadas como benzo--pironas. As benzo--pironas so comumente conhecidas por cromonas. Cumarinas foram primeiramente isoladas de uma espcie de feijo em 1820, combinadas com glicose, sendo que a primeira sntese foi realizada em 1868 pelo qumico ingls Sir William Henry Perkin. Quando o aldedo saliclico aquecido com anidrido actico e acetato de sdio, o cido formado instvel e se cicliza espontaneamente, dando origem a lactona conhecida como cumarina.
O
O benzo- -pirona
O benzo- -pirona
Figura 1 - Cumarina e cromona.
Na sua biosntese, os ncleos benzo-2-pirona de cumarinas simples, derivam do esqueleto fenilacrlico do cido cinmico.
COOH (a) OH
cido cinmico cido o-cumrico
COOH
(b) COOH
h ou enzima
COOH Oglicose
-D-glicosdeo do cido o-cumrico
(c)
Oglicose
-D-glicosdeo do cido o-cumrico
(d)
O
cumarina
Figura 2 Rota biosinttica da cumarina.
Introduo-As cumarinas 2 A estrutura da cumarina derivada do cido cinmico via ortohidroxilao (a), trans-cis isomerizao da dupla ligao da cadeia lateral (b) e (c), e lactonizao (d). A forma trans estvel e no se cicliza. Portanto, dever existir algum tipo de isomerizao, e a enzima isomerase estar envolvida.
H COOH H
trans cis
H H COOH OH
Figura 3 Formas cis e trans do cido cinmico.
A forma cis muito instvel; portanto, tender para a configurao trans. Glicose um bom grupo de sada, o qual ajuda na converso cis-trans. Uma enzima especfica, encontrada na Melilotus alba (leguminosae), hidrolisa especificamente o cis-glicosdio (beta-glicosidase).
COOH Oglicose
trans cis
COOH Oglicose
Figura 4 Estruturas cis e trans glicosiladas.
Este caminho biosinttico dever ser seguido por todas as cumarinas, especialmente aquelas oxigenadas na posio 7.
OH COOH o-glicose
HO
glicose 5 4 3 2 O 1 O
6 7 HO
7-hidroxicumarina (UMBELLIFERONA)
Figura 5 - Umbeliferona, a 7-hidroxicumarina.
Umbeliferona, esculetina e scopoletina so as cumarinas mais comuns na natureza.
HO O cumarina O HO O Umbelliferona CH3O HO O Scopoletina O O HO O Esculetina O
Figura 6 Cumarinas comumente encontradas na natureza.
As cumarinas constituem uma classe de metablitos secundrios derivados do cido cinmico, amplamente distribudos no reino vegetal (em gramneas, cascas de citros e em folhas de alguns vegetais), podendo tambm ser encontradas em fungos e bactrias, sendo, hoje, identificadas mais de 1300 estruturas [1,2]. Podem ser encontradas sozinhas ou combinadas com acares ou cidos. Suas caractersticas odorferas permitem o uso na fabricao de perfumes e agentes flavorizantes, bem como repelente de insetos. Outra propriedade interessante a de inibir a germinao de alguns tipos de sementes [1]. A cumarina foi o primeiro perfume natural sintetizado a partir de produtos qumicos derivados do alcatro da hulha [1]. Em 1940, a FDA (Food and Drug Administration, USA) proibiu seu uso como aditivo alimentcio, devido sua potencial hepatotoxicidade [3,4]. H evidncias de que algumas cumarinas possam ser carcinognicas [1]. No entanto, as aplicaes desses compostos esto superando os aspectos negativos. A elas atribuda uma grande variedade de atividades biolgicas, como a ao antimicrobiana, antiviral, antiinflamatria, antiespasmdica, antitumoral e antioxidante, dentre outras, as quais podem estar relacionadas com a inibio de enzimas e com a sua capacidade de suprimir espcies ativas de oxignio (EAO) [2], alm tambm de, em alguns casos, ger-las [5,6]. No que diz respeito s aplicaes tecnolgicas, sua utilizao na indstria txtil vale-se da propriedade, como caso da 4-metil-7-dimetilaminocumarina, em aumentar a aparncia branca de tecidos, especialmente algodo, aps vrias lavagens [1]. O uso em sistemas de laser de corante tem tambm alcanado merecido destaque, uma vez que os rendimentos qunticos de fluorescncia de vrias cumarinas so bastante elevados [7]. Modificaes na estrutura bsica das cumarinas podem fornecer outras classes de compostos (figura 7). A importncia de se explorar as propriedades
Introduo-As cumarinas 4 desses compostos pode ser explicada pelo 6-metxi-8-hidrxi-3-metil-3,4dihidroisocumarina, que possui atividade antibitica e produzida pela cenoura aps infestao por fungos [2].
O O O O O O O O O O
cumarina
isocumarina
furanocumarina
piranocumarina
Figura 7 Cumarina e compostos similares.
1.1.1
Cumarinas como agentes anticncer
Vrios agentes teraputicos, contendo cumarinas como princpio ativo, tm sido testados como agentes anticncer [8-16]. Tanto compostos sintticos quanto extratos naturais esto sendo testados em diferentes tipos de clulas por diferentes mtodos teraputicos. Okuyama [8,9], estudando o extrato da ashitaba, uma espcie consumida como legume no Japo, observou um potente efeito inibitrio sobre o tumor induzido in vitro pelo 12-o-tetradecanoilforbol-13-acetato (TFA). Dentre os compostos ativos, destacam-se seis furanocumarinas do tipo linear e trs cumarinas de mesma estrutura, psoraleno, bergapteno e xantotoxina. Nishino [10] estudou o efeito da Pd-II [(+) anomalina, (+) praeuruptorina B)], um tipo de cumarina, sobre o tumor de pele em ratos, induzido pelo TFA, iniciado por 7,12-dimetilbenzoantraceno. Pd-II, aplicado 40 minutos aps a induo do tumor, suprimiu completamente sua formao sem apresentar qualquer toxicidade. Alm do Pd-II, foram identificadas vrias cumarinas de ao antitumor, todas isoladas do medicamento chins Qian-Hu, do qual o Pd-II foi obtido. Outro grupo de drogas que se mostraram ativas na inibio do crescimento de tumores induzidos pelo TFA foram as piranocumarinas de tipo angular, isoladas da Bai-Hua Qian-Hu [11]. Uma frao inibiu duas fases na formao de tumor pulmonar gerado por glicerol em ratos, utilizando 1-xido-4-nitroquinolina (4NQO) como iniciador [11]. Cumarinas obtidas de frutas da anglica (Archangelica officinalis) e parsnip frutfera (sativa de Pastinaca) inibiram o crescimento de clulas cancergenas HeLa-S3 in vitro, em concentraes de 5 mg/mL [12].
Introduo-As cumarinas 5 Warfarina, uma cumarina anticoagulante, mostrou-se citotxica sobre a metstase de clulas Mtln3, um carcinoma mamrio de ratos. A metstase espontnea de tais tumores nos pulmes de fmeas de ratos F344 tratadas com Warfarina foi inibida [13]. Cumarina uma substncia natural que apresenta atividade antitumor in vivo [15]. Apesar de no se conhecer o mecanismo exato de atuao da droga, Marshall e colaboradores, observaram a atividade inibitria, bem como a atividade imunomodulatria in vitro e in vivo, da cumarina e da 7hidroxicumarina (7-HC). As duas espcies mostraram-se citotxicas sobre as seguintes clulas malignas humanas: A549, ACHN, Caki-2, Dakiki, HS-sulto, H727, HCT-15, HL-60, K562, LNCaP, PC-3, Du145 COLO-232, MCF-7 e RP1788. A inibio do crescimento mostrou-se dependente do tempo e da dose, sendo reversvel quando as clulas eram retiradas do meio que continha a droga. De modo semelhante, tanto a cumarina quanto a 7-HC, inibiram a produo intracelular de antgeno prstata-especfico de clulas LNCaP [14]. Um estudo envolvendo essas duas cumarinas foi realizado tambm por Prosser, onde foi testada a toxicidade dessas espcies na presena e na ausncia de radiao sobre clulas LAT, um tumor asctico [15]. As duas cumarinas no mostraram nenhum efeito at o perodo de 18 horas. No entanto, a cumarina apresentou um significativo efeito sobre a viabilidade celular da LAT em um perodo superior a nove dias, verificado com estudos de transplantabilidade [15]. O efeito antitumor da cumarina (1,2 benzopirona) foi tambm evidenciado por Myers sobre quatro linhagens de clulas tumorais: 786-O e A498, clulas de carcinoma renal e, DU145 e LNCaP, clulas malignas prostticas. Aps cinco dias de tratamento, a cumarina inibiu o crescimento das quatro linhagens de clulas [16]. Gu observou que a administrao de 1,2 benzopirona (25 a 50 mg/kg) leva a uma citotoxicidade seletiva em mucosa olfativa de ratos Wistar e camundongos C57BL/6 [17]. Em comparao, grandes doses mostraram-se hepatotxicas em ratos [18]. A anlise dose-resposta da toxicidade da cumarina indica que ratos Wistar so mais sensveis do que camundongos C57BL/6 [17]. Outras espcies similares mostraram-se sensveis hepatoxicidade cumarinainduzida em estudos iniciais no fgado. Contudo, so diferentes no que diz respeito biotransformao da cumarina no fgado [19,20]. Em humanos, 7-
Introduo-As cumarinas 6 hidroxicumarina o metablito predominante in vivo e in vitro nos microssomos do fgado [21,22]. Com relao s cumarinas sintticas, tm-se obtido resultados interessantes. Dentre esses, pode-se destacar a sntese de derivados cumarnicos buscando a obteno de drogas onde, principalmente, seja eliminado o efeito carcinognico da espcie. Harvey e colaboradores sintetizaram derivados de cumarina, onde se destacam os anlogos de cumarinas policclicos de fenantreno, benzoantraceno e benzopireno. Os ensaios preliminares de atividade biolgica indicam que o anlogo do benzopireno um inibidor potente do tumor induzido por 7,12-dimetilbenzoantraceno, alm de no apresentar efeito carcinognico [23].
1.1.2
Atividade mutagnica de cumarinas
Dentre os problemas relacionados s cumarinas, est a sua ao mutagnica. Essa propriedade tem sido bastante estudada, numa tentativa de elucidar seus mecanismos e causas [24-28]. Grande nfase tem sido dada aos efeitos provocados por esses compostos sobre a estrutura do DNA, uma vez que vrias cumarinas antibiticas so conhecidas inibidoras de Girase de DNA bacteriano in vivo e in vitro. Kranz, por exemplo, observou a inibio das caractersticas capsulantes da Girase de DNA e a atividade ATP-dependente, ambas relacionadas cumarina [24]. Contreras, estudando a hidrlise do ATP e o enovelamento do DNA, atravs da Girase de DNA de Escherichia Coli, observou a inibio desses dois processos pela cumarina [25]. A genotoxicidade desses compostos ainda vem sendo testada [26-28]. O estudo mais detalhado para determinar a existncia ou no da ao mutagnica foi realizado por Goeger e colaboradores [28], estudando a co-mutagenicidade da cumarina com aflatoxina B1 em clulas S9 de fgado humano. Os resultados no mostraram nenhum sinal de mutagenicidade na ausncia de aflatoxina. Quando incubadas com 1 ou 10 M de aflatoxina, a cumarina produz um aumento da dose-dependncia na freqncia mutante e na citotoxicidade [28].
Introduo-As cumarinas 7 1.1.3 Atividade anti-HIV de cumarinas
A AIDS hoje uma das doenas para onde mais convergem os esforos cientficos na tentativa de alcanar uma cura. Dentre os diferentes mtodos existentes, baseados de drogas especficas, como o AZT, ou at mesmo nos modernos coquetis, misturas de inmeros agentes teraputicos, uma modalidade teraputica baseada no uso de cumarinas, tem sido desenvolvida. Os principais relatos de atividade anti-HIV so observados em extratos naturais [29-34]. Patil isolou alguns compostos, predominando duas cumarinas, da Calophyllum Linn. inophyllum, uma rvore tropical, que possuem atividade inibitria sobre o HIV (figura 8). As espcies inibiram a HIV transcriptase, com valores de IC50 de 38 e 130 NM e ambas eram ativas sobre culturas de clulas HIV-1 (IC50 de 1,4 e 1,6 mM) [35].
Me Me O Ph Me Me O Ph
O Me Me (I) OH
O Me
O Me Me Me Me O Ph (II)
O Me Me (III) OH
Figura 8 Cumarinas isoladas da Calophyllum Linn. Inophyllum.
Kashman e colaboradores, tambm estudando uma rvore tropical, a Calophyllum lanigerum, isolaram oito cumarinas. As espcies I e II, mostradas na figura 9, agiram inibindo a replicao de HIV-1 com considervel citopaticidade (EC50 de 0,1 e 0,4 mM, respectivamente), mas mostraram-se inativas contra o HIV-2. Estudos com transcriptase reversa (TI) bacteriano recombinado revelaram que os caloneldeos so inibidores de HIV-1 RT especficos, o que promissor para a sntese de uma nova droga [36].
Me
Me O Pr (I) R = OH; R 1 = H (II) R = H; R 1 = OH
O R Me Me R1
Figura 9 Cumarinas isoladas da Calophyllum lanigerum.
A baixa bioviabilidade oral e excreo biliar de inibidores peptdeoderivados HIV protease, limitam sua utilizao como potenciais agentes teraputicos. Isso levou Thaisrivongs e colaboradores a desenvolver modelos que contivessem inibidores peptdeo-derivados e inibidores no-peptdeo, carboxiamida contendo 4-hidroxicumarinas e modelos 4-hidroxil-2-pirona. Os estudos resultaram em uma srie promissora de novos inibidores no-peptdicos HIV protease, com afinidade com a enzima ligante [33].
1.1.4
Atividade das cumarinas sobre o sangue e seus componentes
Sem dvida alguma, dentre todas as propriedades teraputicas das cumarinas, a mais explorada sua aplicao como agente anticoagulante [37-43]. Anticoagulantes orais so derivados da 4-hidroxicumarina ou da indan-1,3-diona. Estruturalmente, os derivados de cumarina com ao anticoagulante assemelhamse vitamina K, um importante elemento na sntese de inmeros agentes coagulantes [37]. No entanto, interferncias no metabolismo da vitamina K no fgado, causadas por derivados de cumarina, levam a um aumento no contedo de agentes coagulantes defeituosos e incapazes de se ligar a ons clcio (outro importante elemento na ativao de agentes coagulantes nas vrias etapas da coagulao) [37]. Os estudos nessa rea concentram-se fortemente na descoberta de novas drogas com atividade antiagregante de plaquetas. Dentre os produtos naturais isolados e que apresentaram tais propriedades, pode-se destacar o Schiifolina (I) e acetoxischilnifolina (II) (figura 10), identificados juntamente com mais cinco compostos j conhecidos (auraptena, dictamina, scoparona, skimmianina e bsitosterol) no extrato das razes da Zanthoxylum schinifolium [38].
Me Me2C=CHCHCH2C=CH2O R OMe I, R = H II, R=OAc O O
Figura 10 Cumarinas extradas da Zanthoxylum schinifolium com atividade antiagregante de plaquetas [38].
Uma nova cumarina isolada da Peucedanum japonicium (Umbelliferae) mostrou boa atividade em doses de 50 mg/mL. A figura 11 traz a estrutura da droga, onde R1 = senecioil e R2 = isovaleril [39].
O Me Me
O OR1 OR2
Figura 11 Cumarina isolada da Peucedanum japonicium.
Outro composto que vem sendo bastante estudado o AD6 (8-monocloro3-beta-dietilaminoetil-4-metil-7-etoxicarbonilmetoxicumarina). Este um derivado de cumarina capaz de inibir a agregao de plaquetas e liberao de cido araquidnio causado por vrios agentes como adrenalina, on Ca2+ e outros. Esse composto diminui a produo de araquidonato livre e diglicerdeo em plaquetas humanas, sugerindo ainda ser capaz de inibir fosfolipase A2 [44,45].
1.1.5
Interaes de cumarinas com espcies ativas de oxignio
Uma srie de dezesseis cumarinas simples foi testada por Pay e colaboradores em vrios sistemas envolvendo espcies ativas de oxignio para caracterizao de seus perfis antioxidantes [2]. Foram testadas suas habilidades de remover nions-radicais superxido gerados por leuccito polimorfonuclear humano quando estimulado por PMA (meristato acetato forbol). O mtodo de monitoramento foi baseado na reduo de ferricitocromo c e nitroblue tetrazolium (NBT). Outra caracterstica observada foi que tais compostos no
Introduo-As cumarinas 10 inibem a NADPH oxidase, responsvel por sua gerao [46]. Os resultados obtidos por Pay esto dispostos na tabela 1.
Tabela 1- Efeito inibitrio de cumarinas na gerao de superxido por leuccitos humanos PMN PMA-estimulada [46].
Mtodo do cit. c N Composto 1 2 3 4 5 %Inibio em 100 M IC50, M Mtodo do NBT %Inibio em 100 M IC50, M
4-hidroxicumarina 7-hidroxicumarina 7-metilcumarina 7-metoxicumarina 7-hidroxi-4metilcumarina 7-metoxi-4metilcumarina 7,8-dihidroxi-6metoxicumarina 6,7-dihidroxicumarina
1,1 0,6 26,7 3,3 8,3 3,4 4,4 0,6 21,7 2,2 8,7 2,7 99,1 0,5 9,0 1,8 6,7 0,9 44,2 6,4 2,0 0,5 0,6 0,4 99,3 1,0
2,3 3,1 U/mL
2,7 0,7 77,4 5,2 58,1 2,9 95,4 1,9 97,0 2,4 93,3 2,3
5,8 33,9 82,0 10,6 8,5 11,1 U/mL
8 9
6,7-dihidroxi-4metilcumarina 10 7-hidroxi-6metoxicumarina
11 7-hidroxi-6-O-
glicosilcumarina
12 7-hidroxi-6-metoxi-8-O-
glicosilcumarina
13 5,7,-dihidroxi-4-
metilcumarina
14 3,4-dihidrocumarina 15 7,8-dihidroxicumarina 16 7,8-dihidroxi-4-
metilcumarina
*
Superxido (70 U/mL)
dismutase
(-) no testados; * Referncia
De especial interesse foram os resultados obtidos com o composto 13, pois em experimentos mais especficos, Pay observou uma variedade de
Introduo-As cumarinas 11 caractersticas potencialmente benficas. O composto um ativo inibidor da peroxidao lipdica e removedor de radicais alquilperxido, inativa radicais superxido e foi o mais ativo na remoo de cido hipocloroso, alm de ser no pro-oxidante [2].
1.1.6
Cumarinas em sistemas de laser de corante
A utilizao de cumarinas em sistemas de laser de corante tem sido bastante explorada [7,47-50], uma vez que os rendimentos qunticos de fluorescncia de inmeros compostos dessa classe so elevados. Quando uma soluo concentrada de um corante, com considervel rendimento quntico de fluorescncia, irradiada na banda do mximo de absoro, por um laser ou por uma lmpada pulsada, ocorre uma elevada populao eletrnica nos nveis vibracionais do estado S1 [75]. As populaes so rapidamente relaxadas atravs de colises para o mais baixo nvel vibracional de S1, de onde a emisso estimulada deve ocorrer [75]. Essa energia pode ser conduzida por um sistema de espelhos e ento reutilizada, possibilitando ento deslocar o comprimento de onda de irradiao do laser [7]. Inmeras cumarinas j foram estudadas e esto sendo utilizadas nesse tipo de sistema. Algumas delas foram dispostas na figura 12 [47].
HO
H2N
O (H C ) N 5 2 2
O N
CH3 cumarina 4 H5C2HN H3C CH3 cumarina 2 ou 450 (H5C2)2N O O (H C ) N 5 2 2 O O (H C ) N 5 2 2
CH3 cumarina 120 ou 440 O O (H C ) N 5 2 2
cumarina 7 ou 535 O O S N
cumarina 466 O O
cumarina 6 ou 540
N CF3 cumarina 152A, 481 ou 35 CH3
C cumarina 47 ou 460 O cumarina 334 ou 521
CH3
Figura 12 Algumas cumarinas comumente utilizadas em laseres de corante [47].
1.1.7
Cumarinas como sondas de fluorescncia
Alm da aplicao nos sistemas de laser de corante, as cumarinas podem ser utilizadas como sondas de fluorescncia. Uma vez que a fluorescncia desses compostos pode, em muitos casos, sofrer fortes interferncias do meio, possvel realizar experimentos de sondagem sobre certos ambientes, de modo a caracteriz-los. Em geral a sondagem realizada estudando-se as alteraes nas propriedades fotofsicas da sonda, de acordo com o microambiente, seja pelo efeito da polaridade ou at mesmo de interaes especficas, tais como ligaes de hidrognio. Alm da sondagem convencional, possvel ainda, caracterizar microambientes, construindo-os a partir dessas sondas. Um exemplo o estudo das macromolculas, conhecidas como dendrmeros [50]. Frchet e colaboradores, por exemplo, sintetizaram um dendrmero contendo diferentes cumarinas comumente utilizadas em sistemas de laser de corantes nas regies perifricas e central. As cumarinas escolhidas foram as cumarinas dispostas na figura 13.
o
OH N H (a) (b) O O N O O
Figura 13 Cumarinas utilizadas na sntese do dendrmero, (a) utilizada na periferia e (b) utilizada no ncleo [50].
Do ponto de vista sinttico, as duas cumarinas apresentam caractersticas especficas. A cumarina (a) contm um grupo amino nucleoflico e a (b) um grupo eletroflico. Essa caracterstica permitiu a sntese de uma macromolcula contendo um grupo nucleoflico como grupo terminal, o que no ocorre na estratgia clssica (onde o grupo terminal sempre eletroflico). As cumarinas utilizadas possuem elevados rendimentos qunticos de fluorescncia e permitem ainda a transferncia de energia da cumarina (a) da periferia para a cumarina (b) do ncleo, permitindo obter informaes sobre as diferentes regies da macromolcula. Para que fosse possvel explorar as caractersticas ticas das duas cumarinas, a rota sinttica utilizada teve de considerar alguns aspectos importantes. Por exemplo, a amidao da cumarina b reduziria significativamente a magnititude da transferncia intramolecular de carga, que a origem das propriedades ticas desse composto. Caso fosse utilizada uma outra molcula espaadora para unir as cumarinas estrutura do dendrmero, o mecanismo de Frster seria desfavorecido ( necessrio que haja uma distncia mnima entre os cromforos envolvidos na transferncia de energia). A sada foi a sntese reversa, o que levou alterao das posies dos grupos com relao sntese clssica, mencionada anteriormente. Isso pode servir como um parmetro bastante favorvel para a construo de novos dendrmeros [50]. A macromolcula sintetizada por Frchet e colaboradores [50], est apresentada na figura 14.
O O O O N N N O O O N O O O O N N O O O O
O O O N N O
O O O
O O O O N N N O O O O
N
O O O O N O O O
O O O O
O N O O O O N O
N N
O O
Figura 14 Dendrmero contendo vrios substituintes constitudos de cumarinas [50].
1.1.8
Furano-derivados de cumarina
Psoralenos so furano-derivados da cumarina (figura 15) com potencial aplicao em fototerapia ou fotoquimioterapia [51-68]. O princpio dessa modalidade teraputica a combinao de uma droga especfica com luz UVA (em alguns casos pode ser utilizada radiao UVB), permitindo atuar no tratamento de pele e doenas do sangue, bem como na descontaminao de componentes do sangue, alm de ser utilizada tambm como modalidade teraputica no tratamento de alguns tipos de cncer [51-53]. Aps a irradiao os psoralenos induzem leses em vrios componentes da clula: protenas, lipdios e cidos nucleicos [54,55].
4' 5' 5 4 3
O
Figura 15 Estrutura bsica dos psoralenos.
O
1
O mecanismo da fototerapia baseada no psoraleno tem sido relacionado com a formao de mono e bis-fotoadutos DNA-psoraleno no ncleo celular [56]. Os monoadutos so responsabilizados pela inibio da mitose celular [57]. Vrias tentativas tm sido feitas para a elucidao do mecanismo da terapia em sistemas
Introduo-As cumarinas 15 imunolgicos, como por exemplo, o monitoramento atravs de estudos da funo e estrutura de cidos nucleicos antes e aps o tratamento [58]. Este tipo de estudo tem mostrado que os psoralenos se intercalam a cidos nucleicos e promovem processos de fotocicloadio nas bases pirimidinas adjacentes [59], atravs de mecanismos tipo III. Alm disso, os psoralenos podem ser utilizados em reaes do tipo I e II, decorrentes dos processos de transferncia de eltrons e energia, respectivamente. Nas reaes do tipo I, radicais superxido so gerados como intermedirios reativos e nas do tipo II, oxignio singlete produzido [60]. Isso permite utiliz-los em propsitos prticos, como no tratamento de psorases [61], fotoquimioterapia de cncer [62], inativao de vrus [63,64], estudo da estrutura do cido nucleico [65] e investigao dos mecanismos de reparo do DNA [66]. Em geral as ligaes duplas C3C4 e C4C5 so fotoreativas, mas em soluo apenas a C3C4 est envolvida, mostrando que essa ligao particularmente reativa no estado triplete [52]. A substituio nas posies 3, 4, 4 e 5 por grupos volumosos ou com propriedades doadoras de eltrons pode reduzir a fotoreatividade das ligaes duplas, e impoem limites para a capacidade de intercalao desses compostos [52]. Compostos hbeis para atuar em fototerapia, mas que, no entanto, evitem a formao de ligaes cruzadas com as bases do DNA tm sido sintetizados. Um exemplo desse tipo de composto o anlogo benzodioxnico (a) do 8metoxipsoraleno (b), sintetizado por Besson e colaboradores [68].
O O OMe (a) O O O OMe O O
(b) Figura 16 Exemplos de psoralenos utilizados em fotoquimioterapia [68].
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 16
1.2
Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico.
O entendimento da fotofsica e da fotoqumica de um dado composto ou classe de compostos nos permite compreender e explorar vrias de suas propriedades. Se por um lado o mapeamento das possveis rotas de desativao de um certo estado excitado, atravs da compreenso da sua fotofsica, permite explorar melhor uma dada caracterstica de interesse, a fotoqumica permite expandir os limites dos conceitos das reaes qumicas, tratando os ftons como reagentes fundamentais, permitindo promover reaes que no ocorreriam com a espcie em seu estado fundamental.
1.2.1
Espectroscopia no Visvel e UV-prximo.
A medida experimental do espectro eletrnico de absoro requer um instrumento que contenha uma fonte de radiao estvel variando continuamente dentro da regio do visvel e ultravioleta-prximo, e um detetor capaz de responder linearmente intensidade da radiao transmitida pela amostra. A amostra pode estar na fase gasosa, lquida ou slida, estando, contudo diluda em um recipiente confeccionado em material que exiba transparncia na regio de trabalho. O quartzo prefervel quando se deseja trabalhar no visvel e em regies inferiores a 300 nm [70].
1.2.1.1 A Lei da Absoro.
O espectro de absoro obtido experimentalmente consiste de sinais caractersticos exibidos em diferentes comprimentos de onda com diferentes intensidades, caractersticos da estrutura eletrnica de cada espcie [70]. Uma medida experimental da intensidade de absoro fornecida pela lei de LambertBeer:
= IO e
- klc
(Eq. 01)
onde: I a intensidade transmitida pela amostra I0 a intensidade de radiao incidente l o caminho tico a ser percorrido pela luz c a concentrao da amostra k o coeficiente molar neperiano de absoro dependente do comprimento de onda. Esta equao pode ainda ser escrita como:
ln I
( )
IO
= kcl
(Eq. 02)
o termo absorvncia neperiana definido como,
B
onde B= -ln (I/I0).
= kcl
(Eq. 03)
A IUPAC recomenda que as unidades de k sejam dadas em m2.mol-1. No entanto, desde que c e l so usualmente reportados em unidades de mol.dm-3 e cm, respectivamente, a unidade tpica de k dm3.mol-1.cm-1. Contudo, os livros texto e artigos cientficos fazem referncia ao coeficiente de extino molar, :
log I
Onde: = k/ln(10) = k/2,3026.
( )
IO
= cl
(Eq. 04)
Assim, a equao 03, ento, pode ser escrita como:
A = cl
(Eq. 05)
O clculo das intensidades de absoro (ou emisso) feito considerandose as probabilidades de absoro (Blu) e emisso (Aul) entre os estados energticos envolvidos na transio [71], como ilustrado na figura 17.
n u Blu Aul m l
Figura 17 Esquema dos processos radiativos em um sistema de dois nveis. Probabilidade de transio para a absoro (Blu), para a emisso espontnea (Aul) e para a emisso estimulada (Bul) [71].
Bul
Mulliken [71] relacionou a quantidade (Blu) com uma medida de intensidade, qual denominou fora de oscilador,
4,315 x 10 f = n
(Eq. 06)
~ onde n o ndice de refrao do solvente e d a diferencial do nmero de onda.
1.2.2
Fotofsica Molecular: Diagrama de Jablonski e Princpio de FranckCondon.
A absoro de radiao eletromagntica resulta na excitao de um eltron a estados eletronicamente excitados. Cada estado eletrnico (Eel), envolve um conjunto de estados vibracionais (Evib), cada um dos quais, por sua vez compreende estados rotacionais (Erot), de tal forma que a energia total (ET) de cada nvel, dada por [72]: ET = E el + E vib + E rot (Eq. 07)
A cada um desses estados est associada uma funo molecular (e,v,r), de modo que,
(e, v, r ) = E(e )V(v )R (r )
(Eq. 08)
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 19 Ou seja, (e,v,r) o produto das funes eletrnica, vibracional e rotacional. As coordenadas nucleares tendem a se alterar nas transies eletrnicas. No entanto, em funo do princpio de Born-Oppenheimer [73], temos que admitir que as transies eletrnicas ocorrem muito mais rpido que as nucleares. Assim, possvel o tratamento matemtico em separado das transies eletrnicas. Dessa forma, a eq 08 pode ser rescrita como,
(e, v, r ) = E(e )N(v, r )
(Eq. 09)
onde: E(e) se relaciona aos termos eletrnicos e N(r,v) aos termos nucleares. A partir do esquema disposto na figura 17, podemos expressar os estados energticos em termos de funes de onda. A funo a seguir
(e, v, r ) = E (e)N (v, r )

lm l lm
(Eq. 10)
refere-se ao emsimo estado vibracional do estado eletrnico l, enquanto a equao
(e,v, r ) = E (e)N (v, r )

un u un
(Eq. 11)
corresponde ao ensimo estado vibracional do estado eletrnico u. Uma molcula excitada energeticamente instvel com relao ao estado fundamental [75]. Se a molcula no se rearranjar ou fragmentar (processo qumico), ela buscar perder energia para retornar ao estado fundamental (processo fsico). De fato, existe um nmero de diferentes possibilidades fsicas para a desexcitao, onde alguns processos podero ser mais favorecidos, dependendo do tipo de molcula e da natureza dos estados excitados envolvidos. Esses caminhos so caracterizados por velocidades muito rpidas, e so comumente classificados em trs categorias principais [75]: Processos radiativos, envolvendo a desexcitao por emisso do excedente de energia sob a forma de radiao eletromagntica pela molcula excitada;
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 20 Processos no-radiativos, onde os eltrons inicialmente em estados excitados so transferidos a outros de menor energia, sem que haja emisso de radiao eletromagntica; Processos de supresso, onde a energia transferida a outra espcie (aceptor). Os processos radiativos so geralmente classificados como fenmenos de luminescncia, que ocorrem a partir de estados eletronicamente excitados [69,76]. A luminescncia formalmente dividida em duas categorias, fluorescncia e fosforescncia, dependendo da natureza do estado excitado. Em estados excitados singlete, o eltron que foi excitado, preserva a multiplicidade que tinha quando no estado fundamental. Assim, seu retorno ao estado fundamental tende a ocorrer rapidamente pela emisso de um fton [69,76]. Esse processo chamado de fluorescncia. A velocidade de fluorescncia tipicamente da ordem de 108 s-1, com tempo de vida da ordem de 1-102 ns [76]. J a fosforescncia a emisso da luz a partir de estados triplete excitados, onde o eltron no estado excitado tem o mesmo spin do eltron remanescente no estado fundamental. Isto leva a transies com velocidades lentas (103 a 100 s-1), com tempos de vida que podem variar de milisegundos a segundos [76]. importante ressaltar que tanto a fluorescncia quanto a fosforescncia (levando-se em conta que o povoamento dos estados triplete ocorre pelo ISC a partir do estado S1) ocorrem usualmente a partir do estado S1. Isso porque a desativao de estados singlete superiores (S2, S3, etc), at S1 ocorre usualmente por via no-radiativa (converso interna) e extremamente rpida [69,76]. As transies no-radiativas envolvem a converso de um estado eletrnico para outro, sem emisso de radiao eletromagntica [75]. Apesar de todas as transies que no geram emisso de luz serem no-radiativas, incluindo a perda de energia por interaes particulares com o solvente, o termo noradiativo usado preferencialmente para indicar processos intramoleculares. Identificam-se dois processos para transies no-radiativas, de acordo com a multiplicidade do spin dos estados participantes: Converso interna (CI), envolve a transferncia de eltrons entre estados eletrnicos de mesma multiplicidade de spin;
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 21 Cruzamento entre sistemas (ISC), envolve a transferncia de eltrons entre estados de diferentes multiplicidades de spin [75]. Todos os processos acima citados so usualmente ilustrados pelo digrama de Jablonski. O diagrama de Jablonski o ponto-de-partida para a discusso da absoro e emisso de luz [69,75].
S2
CI
Abs
T2
RV
Re
S1
Abs
CI
ISC RV 5 4 3 2 1 0
F
ISC 5 4 3 2 1 0
T1
P
Re
RV
S0
Figura 18 - Diagrama de Jablonski.
Num diagrama de Jablonski tpico, os estados eletrnicos singlete fundamental, primeiro e segundo so descritos por S0, S1 e S2, respectivamente. Os subnveis denotados pelos nmeros qunticos 0, 1, 2, etc. representam os estados vibracionais (os quais so desativados por processos de relaxao vibracional, RV). As transies eletrnicas entre estados so indicadas por linhas verticais, ilustrando a natureza quase instantnea da absoro e emisso de luz. A absoro de radiao eletromagntica ocorre em aproximadamente 10-18 s, um tempo muito curto comparado ao movimento nuclear [76]. Assim, a transio vibrnica mais provvel ser aquela em que no esto envolvidas mudanas nas coordenadas nucleares. Essa transio chamada de mximo de Franck-Condon (FC), e representa uma transio vertical no diagrama de energia potencial [69,75]. O
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 22 mximo de FC corresponde superposio mxima entre a funo de onda vibracional do estado fundamental e a funo de onda vibracional do estado excitado. O envelope de bandas vibracionais do sistema de bandas de absoro chamado de envelope de FC e seus mximos correspondem ao mximo de FC. Esse mximo se aproxima da posio da absoro vibrnica mais intensa. Se a ltima for a transio 0-0, como o caso da absoro S0S1 de muitos hidrocarbonetos aromticos, isto significa que a configurao nuclear mdia do estado eletrnico excitado similar quela do estado fundamental, visualizada na figura 19 [77].
E S1 E S1
0'
1'
2'
4' 3' (a) S0 0' 1'
2'
4' 3' (b) S0
4 0 1 2
x-y
x-y
Figura 19 Curvas de energia potencial mostrando os nveis vibracionais em relao ao processo de absoro relacionado ao princpio de Franck-Condon.
Todas estas observaes fazem parte do princpio de Franck-Condon.
1.2.3
Deslocamento de Stokes e o efeito dos solventes
A natureza do solvente (principalmente em termos da polaridade) e o ambiente local produzem profundos efeitos sobre o espectro eletrnico das espcies. Esses efeitos so a origem do deslocamento de Stokes ( ), que foi uma das primeiras observaes do fenmeno conhecido como fluorescncia, descrito por G. G. Stokes, em 1852 [76]. Uma causa comum para o deslocamento de Stokes a rpida relaxao da estrutura para nveis vibracionais mais baixos a partir de S1. A esse efeito so somados ainda os efeitos de acomodao do solvente frente espcie excitada, interaes especficas entre o solvente e o estado excitado da molcula, possveis reaes qumicas a partir do estado
~
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 23 excitado, formao de complexos, alm da transferncia de energia [76]. Todas essas perdas de energia fazem com que a quantidade de energia absorvida seja maior que a emitida. Desse modo, Stokes estabeleceu um parmetro que permite relacionar a solvatao dos estados fundamental e excitado atravs do nmero de onda dos mximos de absoro e emisso, ou seja, = a -
~
~ f
[76].
1.2.3.1 Efeitos do solvente no espectro de absoro
Quando o espectro de absoro de uma molcula obtido em solventes com diferentes polaridades, a posio, a intensidade e a largura da banda podem ser modificadas [76,78,79]. Essas mudanas so resultado de interaes fsicas intermoleculares soluto-solvente (tais como on-dipolo, dipolo-dipolo, dipolodipolo induzido, ligao de hidrognio, dentre outras), que tendem a alterar a diferena de energia entre os estados fundamental e excitado [78]. Esse fenmeno est intimamente associado natureza dos cromforos presentes na molcula. Cromforos so tomos ou grupos de tomos associados a uma molcula que possuem caractersticas bem definidas de absoro da radiao eletromagntica. A tabela a seguir lista os principais cromforos e algumas de suas caractersticas [69].

Tabela 2 - Caractersticas tpicas de alguns cromforos.
Cromforo C-C C-H C=C C=C-C=C Benzeno Naftaleno Antraceno C=O N=N N=O C=C-C=O C=C-C=O
mx (nm)
<180 <180 180 220 260 310 380 280 350 660 350 220
mx
1000 1000 10000 20000 200 200 10000 20 100 200 30 20000
Tipo de transio ,* ,* ,* ,* ,* ,* ,* n,* n,* n,* n,* ,*
As caractersticas das transies envolvidas dependem dos diferentes tipos de orbitais moleculares envolvidos [75]. Para a fotoqumica orgnica esses orbitais moleculares originam-se principalmente da sobreposio dos orbitais atmicos s e p, subdividindo-se em trs classes principais, os orbitais e ligantes, os orbitais * e * antiligantes e os orbitais no-ligantes, n [69]. As transies eletrnicas descritas ento na tabela anterior so aquelas que envolvem a promoo de um eltron (que ocupa um orbital , ou n) do HOMO (Highest Occupied Molecular Orbital) para o LUMO (Lowest Unoccupied Molecular Orbital) (* ou *) [75]. A influncia do meio sobre o espectro de absoro pode ser percebida na comparao entre as mudanas espectrais observadas (a) na passagem da fase gasosa para a soluo, ou (b) simplesmente pela mudana da natureza do solvente. Como em muitos casos no possvel medir o espectro de absoro em fase gasosa, seu tratamento realizado em termos de aproximaes. Isto possvel, porque existe uma crescente evidncia de que no h uma grande diferena entre a magnitude das mudanas espectrais, na passagem da molcula isolada na fase gasosa para um meio lquido, exceto quando se observa a participao de interaes por meio de ligao de hidrognio ou complexaes (doador/aceptor) [78].
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 25 Todas as mudanas espectrais que surgem da alterao da natureza qumica das molculas que contm o cromforo, provocada pelo meio, podem ser analisadas por diferentes teorias. Algumas dessas teorias sobre o efeito do solvente na absoro assumem, principalmente, que os estados qumicos de molculas contendo cromforos isolados ou solvatados so os mesmos e ento os efeitos observados podem ser tratados apenas como perturbaes fsicas dos estados moleculares relevantes dos cromforos [78].
1.2.3.1.1
Compostos solvatocrmicos
O termo solvatocromismo usado para descrever a mudana pronunciada na posio (e algumas vezes na intensidade) de uma banda de absoro UVVisvel, em funo de mudanas na polaridade do meio. Um deslocamento hipsocrmico (para a regio do azul), observado com o aumento da polaridade do solvente, usualmente chamado de solvatocromismo negativo. O deslocamento batocrmico (para a regio do vermelho) chamado de solvatocromismo positivo [78]. Entretanto, os deslocamentos podem fornecer informaes adicionais quando interpretados em termos do cromforo e da natureza de sua transio [76,78]. Como conseqncia disso, os deslocamentos, quando interpretados considerando-se a polaridade do meio, podero fornecer informaes importantes sobre o soluto. Por exemplo, um deslocamento batocrmico com o aumento da polaridade do meio indica que o estado excitado da molcula mais polar que o estado fundamental. No caso de um deslocamento hipsocrmico, o momento dipolar do estado excitado menor que o do estado fundamental.
1.2.3.1.2
Teoria do efeito do solvente sobre o espectro de absoro no UV-Visvel.
Uma interpretao qualitativa dos deslocamentos em termos dos solventes deve levar em considerao (a) o momento de dipolo momentneo durante a absoro ptica, (b) a diferena no momento de dipolo permanente entre o estado fundamental e o estado excitado, (c) a mudana no momento de dipolo do estado
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 26 fundamental do soluto, induzida pelo solvente, e (d) o princpio de FranckCondon [78]. De acordo com Bayliss e McRae [90], quatro casos limitantes podem ser distinguidos para as transies eletrnicas intermoleculares em soluo: Soluto apolar em solvente apolar: nesse caso, somente foras de disperso contribuem para a solvatao do soluto. Essas foras so funo do ndice de refrao, da intensidade da transio, e do tamanho da molcula do soluto. Soluto apolar em solvente polar: na ausncia de um momento de dipolo do soluto, no h uma orientao significativa das molculas do solvente ao redor das molculas do soluto, sendo desse modo, novamente dependente do ndice de refrao do solvente. Soluto polar em solvente apolar: as foras que contribuem para a solvatao so foras dipolo-dipolo induzido e foras de disperso. Se o momento de dipolo do soluto aumenta durante a transio eletrnica, o estado excitado de Franck-Condon mais solvatado pela polarizao dipolo-solvente, favorecendo um deslocamento batocrmico. No caso do deslocamento hipsocrmico, o estado excitado de Franck-Condon menos solvatado. Soluto polar em solvente polar: uma vez que a solvatao do estado fundamental resulta das foras dipolo-dipolo, nesse caso existe uma gaiola orientada pelo solvente ao redor do soluto, resultando em uma rede de estabilizao do estado fundamental das molculas do soluto. Se o momento de dipolo do soluto aumenta durante a transio eletrnica, o estado excitado de Franck-Condon formado em uma gaiola de solvente orientado pelos dipolos do solvente. A melhor estabilizao do estado excitado com relao ao estado fundamental, com o aumento da polaridade do solvente, resultar em um deslocamento batocrmico. Se o momento dipolar diminui durante a transio eletrnica, o estado excitado de Franck-Condon est em uma gaiola de solvente onde os dipolos orientados esto incorretamente dispostos para estabilizar de maneira eficiente o estado excitado.
Para compostos fortemente solvatocrmicos, os deslocamentos de comprimento de onda induzidos pelo solvente no podem ser explicados apenas em termos de uma mudana no momento de dipolo permanente na transio eletrnica. Nesse ponto, deve-se levar em conta o chamado campo de reao, ou seja, o campo eltrico que surge entre um dipolo ideal no-polarizvel e o continuum dieltrico homogneo, polarizvel, no qual o dipolo est imerso, o que vem afetar o momento dipolar do estado fundamental do soluto. Isto , a interao das molculas do soluto polar com o campo de reao induzido, devido ao momento de dipolo total das molculas de solvente, causa uma alterao na estrutura eletrnica do cromforo.
1.2.3.2 Efeitos do Solvente no Espectro de Emisso.
A polaridade do solvente um dos fatores que provoca grandes efeitos na emisso de fluorforos (tomo ou grupo de tomos que atuam na emisso de fluorescncia) polares [76, 80-85]. Esses efeitos so melhor compreendidos partindo-se dos princpios bsicos envolvidos nas interaes soluto/solvente. Por exemplo, na fase vapor, as transies 0-0 de absoro e fluorescncia coincidem e se as relaes de simetria especular so aplicveis, tem-se ~ ~ ~ ento ( f )v = ( a )v = ( 0 )v . Em soluo, cada um dos parmetros espectrais deslocado para energias mais baixas, e as transies 0-0 no mais coincidem, de tal forma que = a -
~ ~
~ f
> 0. H tambm um aumento na intensidade de
absoro, e o espectro em soluo geralmente mais difuso que o correspondente espectro na fase vapor. O fluorforo excitado ao primeiro estado singlete (S1), geralmente para um nvel vibracional excitado dentro do estado S1, libera o excesso de energia rapidamente (10-10 s) para o solvente. Se o fluorforo excitado ao segundo estado singlete (S2), ele rapidamente decai ao estado S1 em 10-12 s atravs de converso interna [76]. O solvente ento desloca a emisso para um estado de mais baixa energia, estabilizando a espcie excitada. Usualmente, o fluorforo tem um momento de dipolo maior no estado excitado (E) que no estado
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 28 fundamental (F) [76]. Acompanhando a excitao, os dipolos do solvente podem se reorientar ou relaxar em torno da molcula, minimizando a energia do estado excitado. Assim, medida que a polaridade do solvente aumenta, o deslocamento de Stokes tende a aumentar. No entanto, para molculas apolares, como alguns hidrocarbonetos aromticos no substitudos, a polaridade do solvente no induz grandes deslocamentos espectrais [76]. Tempos de vida de fluorescncia da ordem de 1-10 ns so usualmente muito maiores que o tempo necessrio para a relaxao pelo solvente. Para solventes fluidos, temperatura ambiente, a relaxao pelo solvente ocorre em 101000 ps [76]. Por essa razo, os espectros de emisso de fluorforos so representativos do estado relaxado pelo solvente. Espectros de absoro no so afetados pelo decrscimo na energia do estado excitado, que ocorre apenas aps a absoro [76]. A perda de energia observada entre a absoro e a emisso atribuda a uma variedade de processos dinmicos que ocorrem a partir da absoro. As interaes entre solvente e fluorforo, por exemplo, tendem a afetar a diferena de energia entre os estados fundamental e excitado. Esse tipo de comportamento ocorre uma vez que a molcula excitada se polariza, induzindo o alinhamento dipolar do solvente circundante [76]. A figura a seguir sistematiza a perda de energia observada entre a absoro e emisso,
Converso interna e relaxao vibracional -12 (10 s)
S2
S1
solvente menos polar solvente mais polar
Relaxao pelo -10 solvente (10 s)

.
hA S0
hF g
h'F
Figura 20 - Diagrama de Jablonski para fluorescncia com relaxao pelo solvente.

1.2.3.3 Mecanismos para o Deslocamento Espectral e a Equao de Lippert.
Existem dois tipos de interaes intermoleculares responsveis pelas mudanas espectrais em meio solvatado. Existe uma interao universal que devida influncia coletiva do solvente como meio dieltrico, e que depende da constante dieltrica s e do ndice de refrao n. H outras interaes em certos solventes, chamadas interaes especficas, como a ligao de hidrognio, complexos ou exciplexos, que so resultado das propriedades do solvente e do soluto [76,86,87]. As mudanas espectrais devidas s interaes universais so descritas em termos da teoria de dieltricos [88] e do princpio de Franck-Condon. Enquanto a teoria geral do efeito do solvente tenta explicar os detalhes do comportamento de vrios fluorforos, a teoria baseada nas relaes de Lippert fornece uma valiosa base para consideraes acerca dos deslocamentos espectrais solvente-dependentes [76]. Na descrio geral do efeito do solvente, o fluorforo considerado como um dipolo em um meio contnuo de constante dieltrica uniforme (figura 21). Dentro dessa base, interaes especficas solventefluorforo, ou formao de estados de transferncia intramolecular de carga, podem ser detectadas como desvios da teoria. Desde que o modelo seja destitudo de interaes qumicas, espera-se que a teoria consiga explicar os efeitos especficos das interaes solvente-fluorforo [76].
-- - - + a G ou E + + + ++
Figura 21 Dipolo em meio dieltrico.
As interaes entre o solvente e o fluorforo afetam a energia entre o estado fundamental e o estado excitado. Para uma primeira aproximao, a

diferena de energia entre os estados fundamental e excitado, dada em cm-1, descrita pela equao de Lippert [89], equao 10.
2 s 1 n2 1 e g 2 ~ ~ + CONSTANTE a f = hc 2 + 1 2 s a3 2n + 1
(Eq. 10)
Nesta equao, a e
~ f
so os nmeros de onda (cm-1) de absoro e
emisso, respectivamente, h = 6,6256 x 10-27 erg s a constante de Planck, c =
2,9979 x 1010 cm/s velocidade da luz, a o raio da cavidade onde se encontra o

fluorforo, o momento de dipolo (e, da molcula excitada e g da molcula no estado fundamental), s a constante dieltrica do solvente, e n o ndice de refrao do solvente. Contudo, a equao 10 apenas uma aproximao, existindo uma correlao razovel entre as perdas de energia calculada e observada em solventes aprticos [90]. Os solventes aprticos no possuem um grupo hidroxila ou outros grupos capazes de doar prtons na formao de ligaes de hidrognio [76]. As correlaes lineares entre n e foram propostas para diversos compostos aromticos [90]. A equao de Lippert obtida pela considerao das interaes do fluorforo com o solvente dentro de uma escala de tempo para estas interaes [91]. Dentre outros requisitos para se entender essa relao necessrio recordar o princpio de Franck-Condon, no qual o esqueleto da molcula no se modifica durante uma transio eletrnica (10-15 s). Em contraste, os eltrons das molculas de solvente podem redistribuir-se ao redor do novo dipolo estado-excitado durante este intervalo de tempo. Em acrscimo, porque para tempos de vida relativamente longos dos estados excitados (10-8 s), as molculas de solvente podem orientarse em suas posies de equilbrio em torno do estado excitado do fluorforo antes da emisso [76]. A energia do dipolo no meio dada por:
E dipolo = R
(Eq. 11)
onde R campo reativo induzido pelo dipolo. O campo reativo paralelo e oposto a direo do dipolo e proporcional magnitude do momento de dipolo: R= 2 f a3 (Eq. 12)
Nessa equao, f a polarizabilidade do solvente e a raio da cavidade. A polarizabilidade do solvente o resultado da mobilidade dos eltrons no solvente e do momento de dipolo das molculas de solvente. Cada um desses componentes tem uma diferente dependncia no tempo. A reorientao dos eltrons no solvente essencialmente instantnea. A polarizabilidade de alta-frequncia f(n) uma funo do ndice de refrao: f (n) = n2 1 2n 2 + 1 (Eq. 13)
A constante dieltrica tambm determina a polarizabilidade do solvente e inclui o efeito da orientao molecular das molculas do solvente. Ela dada por: f ( ) =
1 2 + 1
(Eq. 14)
A diferena entre estes dois termos :
1 n2 1 f = 2 2 + 1 2n + 1
que conhecida como polarizabilidade de orientao [76].
(Eq. 15)
A interpretao do espectro de emisso em funo da polaridade do solvente um tpico bastante complexo. Esta complexidade decorre da variedade de interaes que podem resultar em deslocamentos espectrais. Esses deslocamentos ocorrem geralmente quando o fluorforo dissolvido em algum solvente, e independente das propriedades qumicas do fluorforo e do solvente [76]. Dentro de todo esse contexto, vrios sero os fatores que podero interferir no deslocamento espectral. Dentre eles, se destaca a interao soluto-solvente decorrente da formao de ligao de hidrognio [76,86].
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 32 Em adio s interaes especficas solvente-fluorforo, alguns
fluorforos podem formar um estado de transferncia intramolecular de carga (do ingls, ICT) ou um estado de transferncia intramolecular de carga torcido (do ingls, TICT). At o momento, supe-se que o fluorforo contm em sua estrutura, um grupo doador e um grupo aceptor de eltrons. Os mais comuns so os grupos amino e carbonlicos, respectivamente, mas outros grupos j so conhecidos [76]. Entretanto, esses modelos mostram-se muito especficos, e em muitos casos podem ser equivocadamente utilizados, visto que em alguns sistemas a natureza dos substituintes impede a participao dos estados de transferncia de carga. A definio do parmetro f permite ento relacionar os solventes em uma escala relativamente simples. Entretanto, como termos complexos, relacionados s interaes especficas, so negligenciados, necessrio muitas vezes a utilizao de outras escalas de polaridade.
1.2.3.4 Outras Escalas de Polaridade.
As limitaes inerentes ao parmetro f levaram ao desenvolvimento de novas correlaes de polaridade. Em geral, as melhores correlaes a serem utilizadas na descrio dos efeitos do solvente sobre certo cromforo so obtidas a partir do uso de parmetros empricos [92]. Esses parmetros, em geral, partem de dados obtidos de compostos altamente solvatocrmicos, geralmente corantes. A primeira escala nessa premissa foi sugerida por Kosower [93], baseada nos resultados obtidos utilizando o iodeto de 1-etil-4-metoxicarbonilpiridnio,
CO2CH3
-
+ N C2H5
Figura 22 Estrutura do iodeto de 1-etil-4-metoxicarbonilpiridnio.
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 33 A escala de polaridade, proposta por Kosower, comumente chamada de escala Z, foi baseada no solvatocromismo negativo desse composto, devido ocorrncia de transferncia intramolecular de carga [93]. Kosower definiu seu parmetro de polaridade de acordo com a energia de transio molar, ET, expressa em kcal.mol-1, para o mximo de absoro de transferncia de carga do corante,
~
1 ET /(kcal.mol ) = h.c. .N A = 28591/ (nm) Z
(Eq. 16)
onde h a constante de Planck, c a velocidade da luz, o nmero de onda do fton que produz a excitao eletrnica, e NA o nmero de Avogadro [93]. No entanto, a escala Z, apresenta limitaes prticas, principalmente em termos das interaes especficas soluto/solvente, forando a utilizao de outros corantes como padro [94]. Dentre as escalas sugeridas, destaca-se a escala ET(30) de Reichardt, baseada no solvatocromismo negativo do corante 2,6-difenil-4(2,4,6)-trifenilpiridniofenolato [92b].
+ N
Figura 23 Estrutura do corante de Reichardt, utilizado como padro de polaridade.
O termo ET(30) refere-se energia de transio da betana n 30, de acordo com Dimroth e Reichardt [93]. As principais aplicaes desse corante esto relacionadas com caractersticas peculiares. Por exemplo, devido ao seu elevado momento dipolar seu uso mais adequado para o estudo de interaes dipolo-dipolo e dipolo induzido [94]. Seu sistema eletrnico favorece o estudo de interaes dispersivas, enquanto que o tomo de oxignio do fenxido exibe um par de eltrons de carter altamente bsico, adequado s interaes com cidos de
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 34 Bronsted (ligao de hidrognio) e com cidos de Lewis (aceptor de par eletrnico) [94]. Os valores de ET(30) so estimados a partir da equao,
(30) = 28591
mx
(nm)
(Eq. 17)
onde mx o valor do comprimento de onda do mximo de absoro da banda de transferncia de carga do corante. Valores calculados para alguns corantes encontram-se dispostos na tabela, pagina 122. Devido s recomendaes do SI, os valores de ET(30) tm sido reportados em uma escala adimensional, atravs da normalizao dos resultados, usando-se gua e tetrametilsilano (TMS) como solventes nos limites extremos da escala,
N T
E (solvente) E (TMS ) = E E (gua) E (TMS )

T T T T
( solvente) 30,7 32,4
(Eq.18)
A grande limitao da escala decorre da insolubilidade do corante de Reichardt em solventes apolares, como hidrocarbonetos alifticos. A sada obtida foi obter, a partir do corante, um derivado mais lipoflico, como aquele representado na figura 24. Este derivado permitiu obter os valores das energias de transio nos solventes onde o corante de Reichardt no era solvel [94].
H3 C H3 C
CH3
+ N H 3C H 3C H3C H 3C CH3 CH 3 O
-
CH3 H 3C CH3
CH 3 H 3C CH 3
Figura 24 Derivado do corante de Reichardt utilizado para estudos em solventes de baixa polaridade.
importante ressaltar que, para qualquer sonda utilizada, so levados em conta parmetros empricos que caracterizam o comportamento da mesma no
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 35 meio. Assim, de acordo com o interesse do estudo a ser realizado, diferentes parmetros podem ser considerados, visto que os efeitos do solvente, principalmente sobre o espectro de emisso, so resultado de vrias interaes que dependem no apenas da constante dieltrica e do ndice de refrao [89], mas, tambm, das interaes especficas entre o solvente e o fluorforo. importante mencionar que muito tem sido feito no sentido de se obter diferentes parmetros que possibilitem relacionar propriedades fsico-qumicas com a natureza do solvente [94-96]. A escala *, por exemplo, relaciona a habilidade do solvente em estabilizar uma carga ou um dipolo em funo do seu efeito dieltrico [94a,b,c]. Os valores de * para solventes no-clorados aprticos alifticos com uma simples interao de dipolo dominante tm mostrado ser proporcionais aos momentos de dipolo [94c]. A escala uma escala que relaciona o carter doador (de hidrognio) em ligaes de hidrognio envolvendo o solvente [94a,95a,b], enquanto que a escala relaciona o carter aceptor do solvente, em ligaes de hidrognio [94a,96a]. Esses parmetros solvatocrmicos foram obtidos experimentalmente, utilizando-se diferentes indicadores. As escalas foram propostas atravs da linearizao dos resultados obtidos. Por exemplo, uma relao linear para os valores de * pode ser observada para o deslocamento do mximo de absoro da N,N-dietil-4-nitroanilina, pelo aumento da polaridade do meio, considerando solventes incapazes de formar ligaes de hidrognio [96b]. O mesmo comportamento pode ser observado para o corante de Reichardt, separando os solventes em diferentes classes (alifticos no-clorados, alifticos policlorados, aromticos) [96b]. Os resultados foram extendidos aos solventes capazes de formar ligaes de hidrognio, considerando-se os valores de e [96b]. Quando todos esses parmetros so considerados, juntamente com o parmetro de solubilidade de Hildebrand (H), possvel obter as chamadas relaes lineares de energia de solvatao [96b]. Essas relaes permitem avaliar o comportamento de vrias propriedades fsico-qumicas e parmetros de reatividade. Contudo, o tratamento dos resultados experimentais para outros indicadores deve ser realizado cuidadosamente, visto que nem sempre os modelos existentes conseguem expressar todas as possveis formas de interaes que podem ocorrer entre soluto e solvente [76, 96].
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 36 1.2.4 Cintica dos processos fotofsicos
1.2.4.1 Tempos de vida radiativos.
Considerando-se os processos radiativos isoladamente, pode-se imaginar a situao onde a concentrao de molculas eletronicamente excitadas, [M*], decai a zero com o tempo devido emisso espontnea da radiao:
M * M + h '
(Eq. 19)
onde h' uma energia menor comparada absorvida pela molcula no estado fundamental. A emisso espontnea um processo ao acaso, no mesmo sentido do decaimento radiativo. Assim, a cintica do decaimento ser de primeira ordem:
que resulta em,
d [M *] = k 0 [M *] r dt
(Eq. 20)
[M *] = [M *]0 ek t
0 r
(Eq. 21)
A partir da, pode-se aplicar mais conceitos cinticos, dentre eles, o conceito de tempo de vida natural, r0, que definido como o recproco da constante de velocidade radiativa:
r0 =
1 k0 r
(Eq. 22)
O ndice r indica a natureza radiativa do processo. Esse ndice ser alterado para f ou p quando se referir especificamente aos processos de fluorescncia ou fosforescncia, respectivamente. A constante de velocidade para os processos de emisso espontnea tem um significado especial na teoria dos processos fotofsicos. Ela tambm associada ao coeficiente de Einstein para processos espontneos de emisso, usualmente representado por Amn onde os subscritos n e m representam o mais
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 37 alto e mais baixo nveis de transio, respectivamente. Isso possibilita o uso da teoria para derivar uma relao entre o coeficiente de Einstein e o coeficiente de absoro integrado, A:
~
k r0 = Anm = 2,881x10 9 ( nm )2 n 2 A
(Eq. 23)
onde
nm
o nmero de onda para a transio em cm-1, n o ndice de
refrao do solvente, e A tem como unidade dm3mol-1cm-2. A equao 24 permite uma estimativa terica do tempo de vida radiativo,
r0
1 = = Anm
3,471x108
mx n 2 A
(Eq. 24)
Se assumirmos o perfil de uma absoro Lorentziana (figura 25), relacionada com a simetria de Franck-Condon, podemos aproximar A como sendo
mx/2, onde mx o coeficiente de extino molar no mximo de absoro e

a largura da banda a 1/2 mx.
mx
~ ()
1/2 mx
A = 1/2 mx
~
Figura 25 Perfil bsico de uma curva de absoro Lorentziana.
Assim, o tempo de vida radiativo pode ser expresso como,

0 r
2,210 x108 ~
2 2 mx
(Eq. 25)
n mx
que sugere uma relao inversa entre o tempo de vida radiativo e mx . Assim, medida que outros nveis de energia, tais como S2, S3, etc., sejam considerados, a relao acima aumentar devido, proporcionalidade, com o fator S2, S3, etc so inviveis de ocorrer, o que justifica a predominncia de desativao por meio de mecanismos no-radiativos a partir desses estados at atingirem S1 [75]. importante ressaltar que, para muitas molculas orgnicas, a utilizao de uma absoro Lorentziana poder vir a ser inadequada. Uma alternativa, ento para a estimativa de A a integrao dos espectros experimentais de cada molcula , A = d .
1 ~ 2 . Desse modo, torna-se evidente que os processos radiativos a partir de mx
1.2.4.2 Medidas de tempo de vida.
Consideremos a fluorescncia para o estado S1 de M estando em competio direta com os mecanismos de converso interna e cruzamento entre sistemas, como ilustrado na figura 26, S1 fluorescncia kf IC k IC ISC k ISC T1
S0
Figura 26 Diagrama de Jablonski modificado, mostrando a competio entre fluorescncia, converso interna e cruzamento entre sistemas.
A velocidade para o decaimento de [M*] dada por:
d [ M *] = k f [ M *] + k ISC [ M *] + k IC [ M *] dt
(Eq. 26)
O decaimento de [M*] obedece a uma cintica de primeira ordem. Assim, [M*] decai exponencialmente para zero, com uma constante de velocidade kexp, dependente no apenas do decaimento fluorescente, mas de todos os processos que levem desativao do estado M*, [ M *] = [ M *]0 e Ou seja, kexp = ki Logo, a medida do tempo de vida experimental dada por
k exp t
kexp = k f + k ISC + k IC
(Eq. 27)
exp =
1 1 = kexp ki
(Eq. 28)
Sob certas circunstncias, onde fotoprocessos adicionais competem efetivamente com a fluorescncia, a medida do tempo de vida ser menor quando 0 comparada ao tempo de vida natural radiativo, r = 1 k 0 [75]. r Por outro lado, possvel estimar os valores dos tempos de vida de fluorescncia a partir de relaes matemticas aproximadas [69,81,98]. Se usarmos argumentos derivados da teoria de absoro de luz, veremos que a intensidade da absoro est associada com uma fora de oscilador. Para absores prximas a 400 nm, por exemplo, um valor limite de aproximadamente 105 esperado para [69]. A correspondente constante radiativa aproximadamente da magnitude de 109 seg-1. Os limites para a absoro e emisso so ento dados respectivamente por:
mx 105 cm 2 M 1
k f 109 sec 1
o que permite relacionar a constante radiativa com o :

k f = 104
(Eq. 29)
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 40 Obviamente, nesses casos, a participao dos demais fotoprocessos descartada. Para se determinar a participao desses processos necessria a realizao de experimentos especficos para cada processo. Experimentalmente os processos radiativos so estudados por duas tcnicas distintas: single photon counting para medidas de tempo de vida de fluorescncia, e flash photolysis, que permite determinar o tempo de vida de estados triplete. Muitas vezes a diferena entre o tempo de vida natural e tempo de vida de fluorescncia so distintos. Nesse caso, a investigao dos processos noradiativos deve ser avaliada. Muitas das informaes experimentais sobre os processos no-radiativos so obtidas atravs da comparao dos resultados de estudos dos processos radiativos com dados de rendimento quntico. Como j foi mencionada, uma considerao da cintica dos processos primrios passa por uma molcula M*, o que nos leva a deduzir que certas relaes entre quantidades mensurveis permitem estimar a magnitude das quantidades no-mensurveis [75]. Ou seja, informaes acerca de processos de desativao no-radiativos podem muitas vezes ser obtidas por meio da estimativa dos processos radiativos, variando simplesmente as condies experimentais, como ocorre, por exemplo, em estudos de supresso de fluorescncia. Em casos mais especficos, como reaes qumicas a partir dos estados excitados, h uma significativa competio com os processos radiativos. A determinao da constante relativa a esse tipo de desativao pode ser determinada pelos mtodos cinticos envolvidos no estudo das reaes qumicas, monitorados nesse caso, por medidas fluorimtricas, por exemplo [69,75]. Em outros casos, a ocorrncia de processos intra e intermolecular de transferncia de energia tambm contribuem na desativao do estado excitado. Os mais comuns so os processos intermoleculares, e o mecanismo envolve um processo bimolecular, podendo ocorrer por duas diferentes rotas: Radiativa: processo trivial, onde a emisso da espcie reabsorvida pelo supressor; No-radiativa: onde h interao entre a espcie e o supressor, sendo a transferncia eletrnica promovida por interaes coulmbicas (dipolo-dipolo) ou por contato entre as molculas envolvidas.

1.2.4.3 Rendimentos Qunticos.
Para uma converso fotoqumica geral,

A + h B
podemos definir o rendimento quntico para a produo de B como,
B =
n de molculas de B formadas por unidade de tempo por unidade de volume n de quanta absorvidos por unidade de tempo por unidade de volume
A converso A B requer que a molcula A absorva um quantum de
radiao [75]. Se a cada fton absorvido houver a converso AB, ento, B ser igual unidade, e a eficincia de converso ser de 100%. Para os processos fotofsicos, os rendimentos qunticos seguem o mesmo padro. Para o rendimento quntico de fluorescncia, por exemplo,
f =
n de molculas fluorescentes por unidade de tempo por unidade de volume n de quanta absorvidos por unidade de tempo por unidade de volume
Se os nmeros de ftons absorvidos ou emitidos so relacionados com suas intensidade, escrevemos:
f =
If I abs
(Eq. 30)
A definio de rendimento quntico de fluorescncia especifica o nmero de molculas que emitem como funo do tempo e volume, com relao ao nmero de quanta absorvida no mesmo tempo e volume. Assim, f pode tambm ser definido como sendo:
d [n e ] dt f = d [n a ] dt
(Eq. 31)
onde ne representa os ftons emitidos por fluorescncia e na representa os ftons absorvidos. As velocidades de absoro e emisso so respectivamente:
d [n a ] = k abs [M ][n a ] dt
(Eq. 32)
Levando a:
d [na ] = k f [ M *] dt
k f [ M *] kabs [ M ][na ]
(Eq. 33)
f =
(Eq. 34)
Essa expresso no muito usual, uma vez que no fcil determinar a concentrao de molculas excitadas ou ftons. Em funo disso, o rendimento quntico de fluorescncia estimado por medidas em estado estacionrio para as intensidades de radiao absorvida e emitida [75]. Assim:
d [ M *] = k f [ M *] + k i [ M *] k abs [ M ][h ] dt
(Eq. 35)
Que ao aplicar o princpio do estado estacionrio, -d[M*]/dt = 0 :
[ M *] =
k abs [ M ][h ] k f + k i
(Eq. 36)
Substituindo [M*] na equao 35, teremos:
f =
kf k f + k i
(Eq. 37)
O denominador na equao 37 a soma das constantes de velocidade referentes a todos os possveis caminhos de desexcitao avaliados para M*. Desse modo,
f =
exp f
(Eq. 38)
O rendimento quntico de fosforescncia pode ser equacionado nas mesmas bases matemticas utilizadas na descrio acima. No entanto, deve-se lembrar que estados triplete geralmente esto sendo envolvidos nos processos, o
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 43 que leva a equao de velocidade a depender tambm da constante de cruzamento entre sistemas, kISC [75]. Contudo, esse tratamento matemtico no suficiente para descrever todos os mecanismos envolvidos na desativao do estado excitado S1. At mesmo quando os espectros de fluorescncia e fosforescncia so medidos a 77 K, os rendimentos totais para emisso (f + p) so geralmente menores que 1,00 [69,75]. Evidentemente, processos no-radiativos ocorrem, mesmo a 77 K:
f + p + nr 1
(Eq. 39)
onde nr a soma dos rendimentos qunticos para os processos no-radiativos a partir de S1 e T1. De maneira geral, os rendimentos qunticos de emisso so dados por (Eq. 40)
r = * k r0 (k r0 + k i )1 = * k r0
onde * a eficincia de formao para os estados emitidos, k r0 a constante de velocidade para a emisso. Dados obtidos a partir dos espectros de fluorescncia e fosforescncia so bem interpretados em termos da equao a seguir, levando-se em considerao que kr = kf e ki = kST, o que leva * 1,
f = k f (k f + k ST ) 1 = k f S
(Eq. 41)
onde (kf+kST)-1. Tal equao tem duas situaes limites: (a) kf >> kST, no caso em que f 1,00, e (b) kST >> kf, no caso de f kf/kST. Em termos dos limites, nota-se que f 1,00 quando kf for muito grande ou se kST for muito pequeno. Tambm f 0 quando kf for muito pequeno ou kST for muito grande. Dos limites de mx para S0 S1 (absoro), os limites para a constante de fluorescncia para molculas orgnicas sero,
109 seg 1 > kf > 105 seg 1

~ ~
e para kST: 1011 seg 1 > kST > 105 seg 1

~ ~
1.2.4.3.1
Medidas experimentais de rendimento quntico de fluorescncia.
A medida do rendimento quntico de fluorescncia requer a correo prvia do espectro de emisso do material ou o uso de um padro fluorescente cujas propriedades do espectro de emisso estejam intimamente relacionadas com a espcie desconhecida, ou seja, o espectro de emisso da espcie de interesse deve estar dentro da faixa de emisso do padro [98]. Um nmero considervel de interferentes pode estar presente no meio sob estudo. Dentre eles pode-se destacar:
Efeito de filtro interior (reabsoro); Possveis efeitos de comprimentos de onda (grandes diferenas entre o comprimento de onda de absoro e o comprimento de onda de excitao); ndices de refrao; Efeitos de polarizao; Efeitos da temperatura; Efeitos de impurezas; Estabilidade fotoqumica; Espalhamento Raman. Duas classes de mtodos so comumente usadas: Dentre os mtodos denominados primrios, incluem-se o uso de superfcies espalhadoras ou solues para calibrar absolutamente o sistema detetor/excitao. A segunda classe de mtodos, inclui o do padro secundrio, que o mais preferido por sua simplicidade de operao, pois envolve o uso de espcies cujo f j conhecido, e conta com a comparao das reas integradas abaixo dos espectros de emisso
Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 45 do padro e da amostra [98]. A relao matemtica entre padro e amostra dada pela equao, ApFn 2 = AF n 2 p p p (Eq. 42)
onde o subscrito p refere-se ao padro, A e Ap so respectivamente as absores da amostra e do padro nos respectivos comprimentos de onda de excitao, F a rea sob a curva de emisso e n ndice de refrao do solvente onde se encontra a amostra (np ndice de refrao do solvente onde se encontra o padro) [99]. As absorvncias das espcies so mantidas em torno de 0,100 para que se evite o problema de efeito filtro. A escolha do padro segue geralmente a anlise da regio onde a espcie em estudo emite [99]. Alguns padres comumente usados so apresentados a seguir,
Tabela 3 Caractersticas dos principais padres utilizados na determinao de rendimentos qunticos de fluorescncia [99].
Regio 270 300 nm 300 380 nm 300 400 nm 315 480 nm 360 480 nm 400 500 nm 400 600 nm 600 650 nm 600 650 nm
Composto Benzeno Triptofano Naftaleno 2-aminopiridnio Antraceno 9,10-difenilantraceno Bissulfato de quinino Rodamina 101 Violeta cresila
Solvente Ciclohexano H2O (pH 7,2) Ciclohexano H2SO4 1N Etanol Ciclohexano H2SO4 1N Etanol Metanol
f
0,05 0,02 0,14 0,02 0,23 0,02 0,6 0,05 0,27 0,03 0,9 0,02 0,546 1,0 0,02 0,54 0,03
Introduo-A fotofsica de cumarinas 46
1.3
A fotofsica de cumarinas
As propriedades espectroscpicas da cumarina e seus derivados tm sido bastante estudadas, principalmente, devido sua aplicao nos campos da fsica, dos novos materiais, da medicina e biologia [80,83-85,113-116,121-125]. Considervel ateno tem sido dada na preparao de derivados luminescentes da cumarina e nos estudos de suas propriedades em diferentes meios [80-85,100125]. Um dos aspectos importantes a serem explorados diz respeito natureza do estado S1. Em geral, cumarinas tendem a apresentar um estado com natureza n,* e um estado de mais alta energia ,* prximo ao estado S1. Seixas de Melo e colaboradores evidenciaram atravs de clculos tericos, que a natureza e o grau de substituio nos derivados de cumarinas so de grande importncia para definir a natureza do estado excitado. Essas caractersticas fazem com que haja uma aproximao dos nveis de energia entre os estados S1 (n,*) e S2 (,*), levando a uma mistura dos estados ou a inverso para um estado S1(,*) [100]. Essa inverso pode ainda ser favorecida pelas caractersticas do solvente [100]. importante ressaltar que a contribuio dos nveis relacionados transio n,* tende a favorecer a ocorrncia de cruzamento entre sistemas e, consequentemente, o processo radiativo de fosforescncia pode vir a participar do mecanismo de desativao de S1, quando for faovorecido ISC entre os estado S1 e T1 [101]. Tal contribuio est geralmente relacionada com a polaridade do solvente utilizado, ou seja, dependendo do solvente, os nveis de energia se tornam mais prximos, favorecendo uma mistura de seus estados vibracionais [100], aproximando o estado S1 dos estados triplete. Na maioria das vezes, resultados explorando a participao do processo de fosforescncia na rota de desativao do estado S1 esto em sua grande parte relacionados aos psoralenos [102,103]. Chou e colaboradores relacionaram os resultados obtidos para trs cumarinas (cumarina, 7-hidroxi-4-metilcumarina e 7-dietilamino-4metilcumarina) com o mecanismo proposto para a incorporao do cruzamento entre sistemas T(n,*)S(,*) [101]. Becker e colaboradores estudaram a fotofsica e a fotoqumica de cumarinas, psoralenos e outras classes de corantes, com relao s suas caractersticas fotosensitizadoras [102]. Os resultados
Introduo-A fotofsica de cumarinas 47 mostram a tendncia dos psoralenos virem a atuar como bons fotosensitizadores, enquanto que as cumarinas, estudadas por eles, tendem a apresentar como principal caracterstica os elevados rendimentos qunticos de fluorescncia [102]. Specht e colaboradores estudaram vrias 3-cetocumarinas com eficiente capacidade de transferir energia via sensitizao triplete-triplete [103]. Em vrios casos, a eficincia de cruzamento entre sistemas se aproxima da unidade, contudo, em alguns derivados, os processos de desativao no-radiativa competem com o cruzamento entre sistemas. Isso pode ser eficientemente controlado em matrizes polimricas [103]. As caractersticas fotofsicas das cumarinas podem ser alteradas atravs da incluso de centros substituintes no anel cumarnico. Por exemplo, utilizao de um substituinte retirador de eltrons na posio 3 intensifica o carter fluorescente [104-106]. O efeito pode ser intensificado quando se utiliza um substituinte doador de eltrons na posio 7. Em geral, a utilizao desses substituintes na posio 7 permitem, tambm, deslocar batocromicamente o mximo de absoro do composto, potencializando a aplicao em sistemas de laser de corante [107].
5 6 4 3 2 7 8
O
1
Figura 27 Estrutura bsica das cumarinas.
A presena do substituinte hidroxila na posio 7 do anel cumarnico, bem como na posio 4, por exemplo, tm recebido a ateno de vrios pesquisadores, devido principalmente aos elevados rendimentos qunticos de fluorescncia e a sua sensibilidade a variaes do pH do meio. De modo geral, tmse buscado elucidar a fotofsica desses compostos, em termos da existncia de trs espcies: a neutra, a aninica e um tautmero [108]. Machado e colaboradores tm utilizado uma combinao de clculos tericos e resultados experimentais, na tentativa de compreender a natureza dos estados envolvidos nas transies eletrnicas de cumarinas e psoralenos. Em um de seus trabalhos, estudando uma 7hidroxicumarina, atribuda transio um carter predominantemente ,* [109]. Entretanto, os clculos tericos mostraram que ao ser desprotonada a
Introduo-A fotofsica de cumarinas 48 hidroxila, a transio passa a apresentar uma componente perturbacional n,* proveniente da nova carbonila gerada. Essa contribuio faz com que as caractersticas da espcie desprotonada sejam distintas da espcie neutra [109]. Alm dos estudos relativos ao efeito do substituinte, alguns trabalhos tm permitido a elucidao dos efeitos decorrentes das interaes entre o composto e o meio [107,110,111]. Kalholek, por exemplo, estudou a influncia causada pela viscosidade do meio sobre a luminescncia de cumarinas em matriz polimrica [110]. Ismail e colaboradores, estudando as caractersticas da fluorescncia de cumarinas substitudas na posio 2, em termos de variaes na viscosidade e polaridade do solvente, observaram que a fluorescncia desses compostos dependente da viscosidade, explicados facilmente pela teoria do volume livre da viscosidade [111]. Estudos da fotofsica das cumarinas e sua dependncia com a polaridade do solvente tm recebido grande ateno [112-116]. Dentre as vrias relaes de polaridades de solventes utilizadas nesses estudos, a relao de Lippert-Mataga e ETN so as mais utilizadas, visto que se tratam de mtodos solvatocrmicos simples, que fornecem boas informaes sobre as variaes da fotofsica em termos da polaridade do meio. Essas relaes permitem estimativas aproximadas do momento de dipolo do estado excitado de inmeras cumarinas, importantes, principalmente, para o estudo dos mecanismos de transferncia de carga, propostos em inmeros trabalhos [80-85]. Apesar de existirem trabalhos propondo a existncia desses mecanismos para hidroxicumarinas [117], as estruturas de transferncia de carga so geralmente propostas para aminocumarinas [80,81,83,85,118-121]. Modelos tratando de estados de transferncia de carga torcido (TICT), ou a simples mudana da configurao do nitrognio em um movimento semelhante ao abre-fecha de um guarda-chuva (ULM), buscam explicar o aumento da participao dos processos de desativao no-radiativos na fotofsica das cumarinas pelo o aumento da polaridade do solvente, ou ainda, pelas interaes por ligao de hidrognio em solventes prticos [85,118-121]. A fotofsica desses compostos tambm sensvel a variaes de temperatura [80,122,123,125] e de presso [124]. Em geral, os estudos relativos variao da temperatura evidenciam alteraes na posio do mximo de emisso e supresso da fluorescncia, com o aumento da temperatura [80,122]. Kumar e colaboradores observaram significativas variaes na intensidade de fluorescncia
Introduo-A fotofsica de cumarinas 49 em alguns casos, interpretados atravs da variao da energia cintica do sistema [123]. Para explicar tais observaes utilizada a relao com a natureza do substituinte, o efeito da polaridade do solvente e resultados que exploram as alteraes na localizao dos estados ,*(singlete) e n,* (triplete) [123,125].
Introduo-Objetivos 50
1.4
Objetivos
As estruturas qumicas dos trs derivados de cumarina estudados sugerem a possibilidade de aplicao desses compostos em sistemas de laser de corante. Desse modo, buscou-se estudar a fotofsica dos derivados de cumarina (3benzoxazol-2-il-cromen-2-ona; 3-benzoxazol-2-il-7-dietilamino-cromen-2-ona; 3benzoxazol-2-il-7-hidroxil-cromen-2-ona), definindo as rotas de desativao dos estados excitados, e o efeito do solvente sobre essas rotas.
N O O O
CUMARINA 1(3-benzoxazol-2-il-cromen-2-ona)
N O Et Et N O O O
N O HO O .
CUMARINA 2 (3-benzoxazol-2-il-7-dietilamino-cromen-2-ona) CUMARINA 3 (3-benzoxazol-2-il-7-hidroxi-cromen-2-ona)
Figura 28 Derivados de cumarina estudados.
Investigar interaes especficas soluto/solvente, principalmente ligaes de hidrognio para a aminocumarina e a desprotonao promovida pela basicidade do meio para a hidroxicumarina, permitindo avaliar a possibilidade de aplicaes futuras desses compostos como sondas de fluorescncia. Avaliar o efeito provocado sobre o equilbrio das espcies geradas pela variao do pH do meio para os dois ltimos derivados. Estimar a capacidade de gerao de oxignio singlete atravs da medida da eficincia quntica de gerao dessa espcie. Os experimentos sero realizados em regime de estado estacionrio ( temperatura ambiente e a 77K) e resolvidos no tempo.
Experimental 51
Experimental
2.1
Materiais e reagentes
Reagente Procedncia
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII XIV XV XVI XVII XVIII XIX XX XXI XXII XXIII XXIV
Acetato de etila Acetonitrila cido clordrico Argnio Ciclohexano Clorofrmio 9,10-difenilantraceno Diisopropilamina Dimetilsulfxido 1,4-dioxano Etanol Etilenoglicol Fenalenona Hidrxido de sdio 2-butanol 2-propanol Metanol Metilciclohexano N,N-dimetilformamida Piridina Propanona Tetracloreto de carbono Tetrahidrofurano Tolueno
ALDRICH VETEC SYNTH WHITE MARTINS VETEC J. T. BAKER ALDRICH ALDRICH SYNTH VETEC VETEC VETEC ALDRICH MERCK MERCK VETEC VETEC ACROS ORGANICS VETEC REAGEN NUCLEAR SYNTH VETEC CARLO ERBA
Experimental 52 As cumarinas em estudo foram gentilmente cedidas pela Prof. Dra. Ana Maria Ferreira Oliveira-Campos, da Universidade do Minho, Braga/Portugal. Os solventes utilizados foram em sua maioria de grau espectroscpico, sem purificao prvia. Os espectros de absoro foram obtidos utilizando-se um espectrofotmetro HACH DR-4000U. Os espectros de fluorescncia temperatura ambiente e baixa temperatura foram obtidos empregando-se um espectrofluormetro HITACHI F-4500. Ambos equipamentos disponveis no Laboratrio de Fotoqumica do IQ-UFU. As medidas de rendimento quntico de fluorescncia foram realizadas, utilizando-se 9,10-difenilantraceno em ciclohexano como padro. As medidas com variao de pH foram monitoradas utilizando-se um pHmetro digital PG2000 da GEHAKA, disponvel no Laboratrio do IQ-UFU. As medidas resolvidas no tempo foram feitas com o auxlio de um espectrmetro resolvido no tempo, modelo CD-900 da Edinburgh Analytical Instruments, operando com uma lmpada de hidrognio a uma freqncia de 30 MHz. Todos os tempos de vida obtidos constituem dados tomados a partir de no mnimo 1000 pulsos no canal mximo, e 0,900< 2 <1,300 durante as medidas. As medidas foram feitas usando a cubeta com a amostra na configurao face frontal. Dois equipamentos, com as mesmas configuraes acima, foram disponibilizados pelo Laboratrio de Espectroscopia Resolvida no Tempo do Instituto de Qumica da UFRJ e pelo Laboratrio de Fotoqumica do Instituto de Qumica da USP/So Carlos. Os rendimentos qunticos de gerao de oxignio singlete foram estimados utilizando-se um sistema de Laser Flash Photolysis LP 900 da Edinburgh Analytical Instruments, equipado com um laser Nd-YAG CONTINUM SURELITE II (com sensibilidade de 200 s) com pulso de 5 ns a 355 nm, e um detetor NORTH COAST EO-817 capaz de detectar a emisso de fosforescncia do oxignio singlete a 1270 nm. Tal equipamento foi disponibilizado pelo Laboratrio de Espectroscopia Resolvida no Tempo do Instituto de Qumica da UFRJ. Os valores de f foram calculados atravs da relao apresentada na equao 15, utilizando-se valores obtidos experimentalmente para os ndices de refrao. Os valores de ET(30) foram obtidos da literatura [86]. As propriedades
Experimental 53 fsias e os parmetros solvatocrmicos para os solventes utilizados esto dispostos no apndice, pgs. 121 e 122.
Experimental 54
2.2
Experimental
2.2.1 Medidas temperatura ambiente

2.2.1.1 Efeito do solvente sobre a fotofsica das cumarinas
O efeito do solvente sobre a fotofsica das cumarinas em estudo foi realizado atravs de medidas em estado estacionrio e resolvida no tempo. A princpio, determinaram-se os coeficientes de extino molar nos diferentes solventes atravs do mtodo grfico relacionando a absorvncia das solues com a concentrao [70]. Assim, solues das cumarinas em diferentes concentraes foram preparadas em metanol. Solues da cumarina 3 em metanol em meio alcalino (NaOH, 1 x 10-3 mol.dm-3) foram tambm preparadas em diferentes concentraes. Com base nos resultados obtidos, foram preparadas solues-estoque, em metanol, de modo que: uma alquota de (100 L) fornecesse uma soluo com absorvncia inferior a 0,100 no mximo de excitao. o volume da alquota no ultrapassasse 1 % do volume total da nova soluo preparada. Desse modo, foram preparadas solues (~ 10-6 mol.dm-3) nos diferentes solventes, diluindo-se uma alquota da soluo-estoque no solvente de interesse. Os coeficientes de extino molar foram obtidos mediante clculo direto, utilizando-se da equao 05 (pg. 17). Os espectros de absoro e emisso foram obtidos para as solues e os rendimentos qunticos de fluorescncia foram estimados, utilizando-se uma soluo de 9,10-difenilantraceno em ciclohexano, com absorvncia a 354 nm inferior a 0,100, como padro. Ao final dos experimentos, as amostras foram transferidas para ampolas de quartzo, desaeradas e seladas. Com as solues assim confinadas, foram medidos os tempos de vida experimentais, empregando a tcnica de single photon counting.
Experimental 55
2.2.1.2 Comportamento fotofsico das cumarinas 2 e 3 frente a variaes no pH do meio
Para a aminocumarina (cumarina 2) e a hidroxicumarina (cumarina 3) em estudo, foram avaliadas suas propriedades fotofsicas em funo da variao do pH do meio. A partir de alquotas das solues-estoque, foram preparadas solues (misturas metanol/gua 1:99 v/v para a aminocumarina, e misturas 1:4 e 1:99 v/v para a hidroxicumarina) a diferentes valores de pH, ajustados atravs da adio de pequenas quantidades de NaOH ou HCl. Em seguida, os espectros de absoro foram obtidos e o comportamento das bandas foi acompanhado. Os rendimentos qunticos de fluorescncia foram estimados utilizando-se a tcnica descrita no item anterior e propriedades fotofsicas foram estimadas a partir dos dados obtidos. Trs solues (pH cido, neutro e bsico) de cada uma das cumarinas foram transferidas para ampolas de quartzo. A partir da, o decaimento do estado excitado foi monitorado por single photon counting.
2.2.1.3 Comportamento fotofsico da cumarina 2 em diferentes misturas dioxano/gua
Solues (~ 10-6 mol.dm-3), contendo diferentes misturas dioxano:gua, foram preparadas a partir de alquotas da soluo-estoque da cumarina 2, de modo a estudar o efeito provocado pela formao das ligaes de hidrognio entre o solvente e a cumarina sobre suas caractersticas fotofsicas. As propores variaram de 0 a 100% considerando-se o volume de gua utilizado. Em seguida, os espectros de absoro foram obtidos e o comportamento das bandas foi acompanhado. Os rendimentos qunticos de fluorescncia foram estimados como descrito no item 2.2.1.1, e propriedades fotofsicas foram estimadas a partir dos dados obtidos nessas duas medidas.
Experimental 56
2.2.1.4 Comportamento fotofsico da cumarina 3 em diferentes misturas metanol/DMF: Efeito do carter nucleoflico dos solventes orgnicos
Solues (~ 10-6 mol.dm-3) contendo diferentes misturas de metanol e DMF, variando de 0 a 100% a proporo de DMF, foram preparadas a partir de alquotas da soluo-estoque. Em seguida, os espectros de absoro foram obtidos e o comportamento das bandas foi acompanhado. Os rendimentos qunticos de fluorescncia foram estimados como no item 2.2.1.1 e propriedades fotofsicas estimadas a partir dos dados obtidos.
2.2.2 Medidas fotofsicas a baixa temperatura
Foram preparadas solues das trs cumarinas e do padro, 9,10difenilantraceno, utilizando-se metilciclohexano como solvente. A cumarina 3 foi previamente cumarina 3 solubilizada foi ainda em uma pequena em uma quantidade mistura de 8:2 2-butanol (v/v) de (correspondente a cerca de 1% do volume total da soluo). Uma outra soluo da preparada metilciclohexano/piridina, de modo a se obter informaes com respeito espcie desprotonada. As solues foram transferidas para ampolas especficas para esse tipo de medida, adaptveis ao equipamento utilizado. As mesmas foram vedadas e desaeradas com borbulhamento de argnio por cerca de cinco minutos. Em seguida, as solues foram congeladas em nitrognio lquido e efetuadas as medidas de interesse. O procedimento utilizado na estimativa das propriedades fotofsicas foi o mesmo descrito no item 2.2.1.1.
2.2.3 Eficincia quntica de gerao de oxignio singlete
O processo mais comum de gerao de oxignio singlete conhecido como fotosensitizao [69]. Uma das tcnicas de deteco baseia-se em medidas resolvidas no tempo, que levam em considerao os seguintes princpios fundamentais:
Experimental 57
Oxignio singlete emite um sinal de fosforescncia, cuja banda tem um mximo em torno de 1270 nm, onde as anlises so realizadas. A intensidade desse sinal, no tempo zero, diretamente proporcional quantidade de oxignio singlete gerado e potncia do laser.
Os clculos de rendimento quntico so feitos com base no mtodo de comparao das intensidades dos sinais de oxignio singlete gerados pelo padro Ip e pela amostra Ia cujo rendimento desconhecido. Assim, conhecendo-se p, mede-se Ia e Ip, e calcula-se a atravs da relao de Schmidt [126].
a = I a
I p p
(Eq. 43)
As excitaes do padro e da amostra pelo laser so feitas a diferentes potncias, para se certificar que h uma relao direta entre a intensidade do sinal e a potncia do laser. Assim, o grfico da intensidade do sinal em funo da potncia do laser fornece, atravs das inclinaes das retas obtidas, os valores de Ia e Ip. Quantificou-se a eficincia quntica de gerao de 1O2 para as trs
cumarinas, em clorofrmio (previamente tratado com slica ativada por 12 h a 180 C). As solues possuam a mesma intensidade de absoro a 355 nm (Abs = 0,300). Uma soluo de fenalenona, com as mesmas caractersticas das solues que continham as amostras, foi utilizada como padro. A emisso do 1O2 foi medida a 1270 nm, empregando-se o sistema resolvido no tempo (E.A.I. LP 900, pulsado com um laser Nd:YAG, a 355 nm, descrito anteriormente). A potncia do laser foi variada de 0 a 8 mJ. Em seguida, eficincias qunticas de gerao de oxignio singlete foram obtidas graficamente.
Resultados e Discusso 58
3
3.1
Resultados e Discusso
Absortividade molar das cumarinas estudadas.
A figura 29 apresenta os espectros de absoro dos trs derivados cumarnicos estudados.

0,20
N
0,15
O R O O
Absorvncia
(R = H)
(R = OH)
(R = NEt2)
0,10
0,05
0,00 200
250
300
350
400
450
500
Comprimento de Onda, nm
Figura 29 Espectros de absoro em metanol das cumarinas estudadas. R = H (cumarina 1); R = NEt2 (cumarina 2); R = OH (cumarina 3).
Tomando-se como referncia o espectro da cumarina 1, nota-se que os grupos substituintes da posio 7, deslocam o mximo de absoro para diferentes regies do espectro, sem que haja alterao significativa quanto forma da banda de absoro. Isso j era esperado, uma vez que substituintes doadores de eltrons na posio 7 do anel, alteram somente a energia do estado S1, mantendo a natureza do estado eletrnico [101]. O mximo de absoro deslocado de acordo com a seguinte seqncia energtica: H > OH > NEt2. Essa seqncia obedece a ordem do carter nucleoflico dos substituintes envolvidos, ou seja, como o N possui um maior carter doador de eltrons, a estabilizao do estado S1 mais favorecida na aminocumarina, deslocando o mximo de absoro para regies de menor energia. Tomando-se agora como ponto de referncia, o substituinte benzoxazol-2-il na posio 3 do anel cumarnico, e comparando os resultados obtidos com os valores
Resultados e Discusso 59 existentes na literatura para a cumarina [100], conclui-se que a participao desse grupo na estrutura eletrnica do composto extremamente importante. Seixas de Melo e colaboradores definiram um mximo de absoro a 320 nm para a cumarina, com um coeficiente de extino molar de 5700 mol-1dm3cm-1, caracterstico de um estado S1(n,*) [100]. Alm disso, clculos tericos, a nvel semi-emprico, indicaram um estado S2(,*), prximo ao estado S1 [100]. Para os trs derivados em estudo foram estimados coeficientes de extino molar da ordem de 104 mol-1dm3cm-1, caractersticos de transies do tipo ,*. Esses resultados indicam que a incluso do grupo benzoxazol na posio 3 do anel cumarnico resultou na inverso dos estados S1 (n,*) e S2 (,*), caractersticos da cumarina. Essa inverso de estados decorrente do efeito do substituinte tambm proposta por Seixas de Melo e colaboradores para explicar a natureza dos estados excitados da cumarina e alguns de seus derivados [100]. Os trs derivados estudados possuem como caracterstica um estado S1(,*) e, em virtude da proximidade entre os estados ,* e n,* e de interaes possibilitadas pelo solvente, uma mistura de estados deve ser esperada. Isso est de acordo com algumas concluses obtidas a partir da interpretao de resultados de clculos ab initio realizados para esses compostos [109,128]. Os coeficientes de extino molar, estimados em diferentes solventes, so apresentados na tabela a seguir.
Tabela 4 Valores estimados para os coeficientes de extino molar* em diferentes solventes, obtidos para as cumarinas estudadas.
Solvente Metilciclohexano Tetracloreto de carbono Tolueno 1,4-dioxano Diisopropilamina Clorofrmio Acetato de etila Tetrahidrofurano Dimetilsulfxido lcool 2-butlico N,N-dimetilformamida Etilenoglicol lcool 2-proplico Propanona lcool etlico Acetonitrila lcool metlico gua
* Valores expressos como log .
f 0,0002
0,0117 0,0133 0,0222 0,0714 0,1475 0,1979 0,2115 0,2633 0,2642 0,2759 0,2761 0,2770 0,2848 0,2985 0,3030 0,3066 0,3190
Cumarina 1 4,36 4,32 4,23 4,29 4,29 4,17 4,31 4,27 4,29 4,29 4,34 4,29 4,18 4,30 4,33 2 4,64 4,66 4,62 4,64 4,72 4,71 4,62 4,66 4,66 4,65 4,67 4,69 4,68 4,66 4,70 4,66 4,70 4,61 3 4,40 4,38 4,32 4,34 4,34 4,42 4,36 4,43 4,74 4,42 4,62 4,38 4,41 4,42 4,33 4,41 3 Ionizada 4,78 4,54 4,75 4,77 4,67 4,74 4,48 4,62 4,59 4,74 4,55 4,56 -
A tabela apresenta os solventes dispostos em ordem de polaridade crescente, expressa em termos do parmetro polarizabilidade de orientao (f). Como pode ser observado, a ordem de grandeza dos valores do coeficiente de extino molar mantida, preservando a natureza da transio. Os valores estimados para a cumarina 1 situam-se entre 14000 e 23000 mol-1dm3cm-1, para a cumarina 2 entre 41000 e 54000 mol-1dm3cm-1 e entre 21000 e 27000 mol-1dm3cm-1 para a cumarina 3. Algumas variaes podem ser observadas, decorrentes principalmente de interaes especficas entre soluto e solvente, e sero tratadas separadamente. Desse modo, pode-se
Resultados e Discusso 61 concluir que o favorecimento da transio eletrnica S0S1 est intimamente ligado ao carter indutor de eltrons dos substituintes (NEt2 e OH) na posio 7 do anel cumarnico. Tais substituintes favorecem uma transferncia intramolecular de carga para o anel aromtico. O resultado mais significativo para a aminocumarina, onde o par de eltrons no-ligante (n) do nitrognio possui um carter ressonante mais acentuado. Clculos tericos tm permitido visualizar tal comportamento atravs da distribuio de cargas sobre os tomos da molcula e pela magnitude do comprimento da ligao entre o nitrognio e o anel aromtico [128]. J para a cumarina 3, o efeito indutor de eltrons proveniente da hidroxila inferior ao observado para o substituinte dietilamino, fazendo com que os valores estejam entre os obtidos para as cumarinas 1 e 2. Um outro fator a ser considerado diz respeito protonao do grupo dietilamino, na cumarina 2, e desprotonao da hidroxila, na cumarina 3, provocando algumas singularidades quanto magnitude dos coeficientes de extino molar. O esquema do equilbrio cido-base, da cumarina 2 apresentado na figura a seguir.
N O Et2N O O
H+
O + Et2N H O O
Figura 30 Esquema do equilbrio cido-base proposto para a cumarina 2.
O equilbrio acima controlado pela variao da concentrao de H3O+ no meio. Considerando experimentos a partir de misturas gua/metanol (99:1), foram estimados coeficientes de extino molar de aproximadamente 34300 mol-1dm3cm-1 para a espcie protonada em meio cido (pH 2), de 44500 mol-1dm3cm-1 para a espcie em meio bsico (pH 9), mantendo a natureza ,* da transio S0S1. A diminuio do valor do coeficiente de extino molar em meio cido est principalmente ligada ao fato de que aps a protonao do nitrognio, a transferncia
Resultados e Discusso 62 intramolecular de carga desfavorecida, fazendo com que a contribuio n,* seja enfraquecida. J para a cumarina 3, o equilbrio cido-base esquematizado na figura a seguir.
N O HO O O
-
N O O O O + H+
Figura 31 Esquema do equilbrio cido-base proposto para a cumarina 3.
A desprotonao da cumarina 3 tambm provoca significativas variaes nos coeficientes de extino molar. Foram estimados valores de 30500 mol-1dm3cm-1 para a espcie em meio cido (pH 4) e 40600 mol-1dm3cm-1 para a espcie em meio bsico (pH 8), ambos em misturas gua/metanol (99:1). A desprotonao da cumarina 3 ainda observada em solventes de carter nucleoflico elevado, como DMF e DMSO, onde foram estimados coeficientes de extino molar de 41700 mol1
dm3cm-1 e 55000 mol-1dm3cm-1 , respectivamente. Levando-se em considerao alguns resultados obtidos por meio de clculo
terico, possvel concluir que o aumento da magnitude do coeficiente de extino molar provocado sobretudo pela transferncia intramolecular de carga proveniente da nova carbonila formada na posio 7 aps a desprotonao da hidroxila. Assim como para a cumarina 2 neutra, a transferncia intramolecular de carga favorece a transio S0S1, fazendo com que a transio seja de carter ,* com uma contribuio perturbacional n,*. Na tabela 4 foram tambm apresentados os coeficientes de extino molar estimados para a cumarina 3 ionizada. Esses resultados referem-se s medidas realizadas a partir de solues em diferentes solventes, contendo NaOH dissolvido em metanol (aproximadamente 1% do volume total). Os coeficientes de extino molar variam de 30200 a 60300 mol-1dm3cm-1 aproximadamente. Os valores estimados indicam um decrscimo do coeficiente de extino molar com o aumento
Resultados e Discusso 63 da polaridade do solvente. Isso porque, o aumento da polaridade da espcie aps a desprotonao, favorece as interaes soluto/solvente.
3.2 A Natureza do Estado S1
A seguir so apresentados alguns espectros de absoro e emisso de fluorescncia tpicos para as cumarinas estudadas. Os demais se encontram no
(a)
(b)
200
250
Comprimento de onda, nm
300
350
400
450
500
550
600
200 250 300 350 400 450 500 550 600 650
(c)
(d)
200
250
300
350
400
450
500
550
600
250
300
350
400
450
500
550
600
apndice, s pgs 125 a 128.

Figura 32 Espectros tpicos de absoro e emisso de fluorescncia para as cumarinas estudadas: (a) cumarina 1 em metanol (exc = 352 nm); (b) cumarina 2 em metanol (exc = 442 nm); (c) cumarina 3 em metanol (exc = 381 nm); (d) cumarina 3 em DMF, onde favorecida a desprotonao do substituinte OH da posio 7 do anel cumarnico (exc = 468 nm).
Resultados e Discusso 64 A figura 32 mostra que os espectros de absoro so aproximadamente a imagem especular dos espectros de emisso de fluorescncia para as cumarinas estudadas. O comportamento observado tende a ocorrer para quase todos os diferentes solventes estudados, e pode ser visto como uma indicao de que a geometria do estado S1 bastante similar do estado S0, o que foi confirmado por meio de clculos tericos [109,128]. No caso da cumarina 3 (c), nota-se a presena de uma pequena banda de absoro a 450 nm. Isso sugere que o espectro de absoro, apresentado na figura acima, corresponde coexistncia de duas espcies em equilbrio cido-base. Quando predomina a espcie desprotonada, a simetria especular entre os espectros de emisso de fluorescncia e absoro mantida, como pode ser visualizado em (d), j que a DMF possui um forte carter nucleoflico. Os dados fornecidos por clculos ab initio para a cumarina 3 e sua forma desprotonada no mostram substanciais mudanas da geometria para o estado S1, quando comparado ao estado fundamental, a no ser um aumento na rigidez estrutural para a forma desprotonada, e mudanas no tamanho da molcula [109]. Para a molcula neutra, o ngulo diedro entre os anis cumarnico e benzoxazol mudou de 0,049 para 0,017 com a excitao. A maior planaridade do estado excitado pode ser acompanhada pela comparao das ordens de ligao para a ligao entre os tomos de carbono que unem os anis. Um aumento de 15,5 % verificado para a forma neutra e resultado da redistribuio das cargas atmicas, com influncia direta no aumento da conjugao sobre a molcula, ocorrida aps a excitao. Para a forma desprotonada, a estrutura no estado fundamental apresenta um ngulo diedro de 0,038 entre os anis, enquanto que para o estado excitado S1 0,006. Do mesmo modo que ocorre para a forma neutra, a redistribuio de cargas aumenta a deslocalizao do sistema , o que pode ser visto pelo acrscimo de 10,5 % sofrido na ordem de ligao entre os dois anis [109]. A presena de duas espcies em equilbrio cido-base observada para os demais lcoois estudados e tambm para solventes como acetonitrila e acetona. A seguir, so apresentados os espectros de absoro da cumarina 3 em acetona.
1,2
(b)
(c)
0,9
Absorvncia
0,6
(a)
0,3
0,0 350 400 450 500
Figura 33 Espectros de absoro da cumarina 3 em acetona, (a) em acetona pura (abs = 374 nm e 460 nm) ; (b) ----- em acetona e cido clordrico (abs = 372 nm); (c) em acetona e NaOH (abs = 456 nm).
Duas bandas na faixa entre 300 e 500 nm so observadas. A banda de absoro com comprimento de onda mximo a 374 nm corresponde espcie neutra, enquanto que a banda a 460 nm corresponde espcie proveniente da desprotonao do substituinte OH. Ao adicionar HCl, ou NaOH ao meio, obteve-se espectros distintos, referentes s espcies neutra e desprotonada, respectivamente. Como os mximos de absoro das duas espcies em equilbrio so distintos, foi possvel observar a emisso de fluorescncia de cada espcie. A seguir so apresentados os espectros de emisso de fluorescncia da cumarina 3, utilizando-se acetona como solvente.
(a'')
160
120
(b) (c)
80
(a')
40
0 400 450 500 550 600 650
Figura 34 - Espectros de emisso de fluorescncia da cumarina 3 em acetona, (a) em acetona pura, excitao a 374 nm; (a) em acetona pura, excitao a 460 nm; (b) em acetona e cido clordrico, excitao a 372 nm; (c) em acetona e NaOH , excitao a 456 nm.
A soluo em acetona, contendo HCl, foi excitada a 460 nm, e no indicou a presena da espcie desprotonada. Do mesmo modo, a soluo contendo NaOH foi excitada a 374 nm, e a presena da espcie neutra no foi detectada. Comportamento similar foi observado para misturas metanol/gua a diferentes concentraes de H3O+. Os experimentos foram realizados considerando-se misturas metanol/gua nas propores de 1:4 v/v e 1:99 v/v. A figura a seguir apresenta os resultados observados.
0,10
(a)
0,08
1,0
pH = 10,54
0,06
Abs a 430 nm
pH = 2,67
250 300 350 400 450 500 550
0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 2 4 6 8 10 12
Absorvncia
0,04
0,02
0,00 200
0,15 0,12
pH
1,0
(b)
Abs a 426 nm
550
pH = 9,38
0,8 0,6 0,4 0,2
Absorvncia
0,09 0,06 0,03 0,00 200

pH = 1,21
0,0 2 4 6 8 10
250
300
350
400
450
500
C om prim ento de onda, nm
pH
Figura 35 Bandas de absoro e curvas de monitoramento da absorvncia do mximo de absoro da espcie desprotonada da cumarina 3 a diferentes valores de pH em mistura metanol/gua: (a) mistura (1:4 v/v); (b) mistura (1:99 v/v).
Resultados e Discusso 68 O equilbrio de dissociao para a cumarina 3 foi avaliado, considerando o deslocamento batocrmico da banda S0 S1, devido ao aumento do pH. Quando o pH do meio aumentado, a desprotonao da cumarina 3 fica evidenciada com o surgimento de uma banda com mximo a 430 nm para a mistura 1:4 v/v e a 426 nm para a mistura 1:99 v/v. O pKa, estimado atravs da segunda derivada da curva Abs vs pH para solues metanol/gua (1:4 v/v), 6,33 0,03, e para solues metanol/gua (1:99 v/v) de 6,20 0,02. Os espectros de emisso de fluorescncia foram obtidos a partir da excitao nos comprimentos de onda de absoro mximos e so apresentados a seguir.
300
(a)
pH = 10,54
200
I
100
pH = 2,67 pH = 6,08
pH = 6,70
0 400 450 500 550 600
400
pH = 10,54
(b)
300
pH = 1,21 pH = 2,66 pH = 6,95
I
200
100 pH = 6,81
0 400 450 500 550 600
Figura 36 Comportamento das bandas de emisso de fluorescncia da cumarina 3 a diferentes valores de pH em mistura metanol/gua: (a)mistura (1:4 v/v); (b) mistura (1:99 v/v).
O comportamento observado para as duas diferentes misturas de solventes similar. Entretanto, para a mistura metanol/gua (1:99 v/v) a pH inferior a 2, possvel observar uma banda adicional, visualizada pelas curvas em destaque. Essa nova banda refere-se espcie obtida aps a protonao do substituinte OH [108].
Resultados e Discusso 70 Desse modo, devem ser consideradas trs espcies, de acordo com o pH do meio. Como no foram observadas diferenas nas bandas de absoro em meio fortemente cido, acredita-se que a protonao do substituinte seja favorecida no estado excitado.
N O
+
N O H+ H O O O OH -
N O O O O
H O H
Figura 37 Espcies geradas pela protonao e desprotonao do substituinte OH.
O pKa referente protonao no foi estimado, contudo, pode-se sugerir que est prximo de um pH2. A diferena entre os valores de pKa estimados para a desprotonao da cumarina 3 nas duas diferentes misturas metanol/gua est relacionada s caractersticas do meio. Levando-se em conta que o conceito de pH est relacionado a sistemas aquosos, deve-se considerar que a mistura contendo 1% de metanol est mais prxima da condio real. Desse modo, o pKa, correspondente desprotonao da cumarina 3 6,20. Um comportamento similar ao efeito de desprotonao do substituinte hidroxila da cumarina 3 pelo aumento do pH do meio pode ser observado para solues metanlicas contendo diferentes concentraes de dimetilformamida. A figura a seguir mostra o comportamento das bandas de absoro e emisso de fluorescncia da cumarina 3, em diferentes misturas de metanol/dimetilformamida.
0,10
(a)
100 % DMF
0,08
Absorvncia
0,06
0,04
0,02
0 % DMF
0,00 300 350 400 450 500 550 600
300 250 200
(b)
0 % DMF
100 % DMF
150 100 50 0 350
85 % DMF 65 % DMF
400
450
500
550
600
650
Figura 38 Espectros de absoro (a) e emisso de fluorescncia (b) para a cumarina 3 a diferentes propores na mistura metanol/DMF.
Como pode ser visualizado, o aumento na proporo de DMF provoca o deslocamento batocrmico da banda de absoro, semelhante ao comportamento observado com a variao do pH do meio. A desprotonao da espcie nessa mistura de solventes foi acompanhada atravs da reduo da absorvncia a 382 nm, correspondente ao mximo de absoro da espcie neutra, e atravs dos espectros de emisso de fluorescncia da espcie desprotonada, como pode ser visto nas figuras a seguir.
400
100 % 95 % 90 % 80 % 60 %
(a)
300
I
200
100
0%
0 450 500 550 600
0,14 0,12
(b)
Abs a 382 nm
0,10 0,08 0,06 0,04 0 20 40 60 80 100
% de DMF, v/v
Figura 39 Espectros de emisso de fluorescncia (a) e monitoramento da variao da absorvncia a 382 nm, ocorrida para a cumarina 3 (b) em diferentes misturas de metanol/DMF.
A desprotonao mais acentuada para propores de DMF superiores a 60 %. O mximo de emisso de fluorescncia sofre um deslocamento batocrmico com o aumento na proporo de DMF, indicando uma melhor estabilizao do estado excitado da espcie desprotonada nesse solvente. Comportamento semelhante ao observado em DMF deve ser esperado para outras amidas, aminas, sulfxidos e solventes de elevado carter nucleoflico.
Resultados e Discusso 73 Um resultado que mostra-se bastante singular quanto ao equilbrio cidobase proposto para a cumarina 3, foi observado em experimentos onde se utilizou diisopropilamina como solvente (figura 40).
300
350
400
450
500
550
600
Figura 40 Espectros de absoro e emisso de fluorescncia da cumarina 3 em diisopropilamina (exc = 384 nm).
Analisando-se o mximo de absoro, nota-se que o mesmo situa-se a 384 nm, prximo ao mximo de absoro observado para a cumarina 3 em metanol, onde predomina a espcie neutra. Por outro lado, o mximo de emisso de fluorescncia est localizado a 469 nm, enquanto o valor esperado para a espcie neutra situa-se prximo a 447 nm. Alm disso, a forma da banda de emisso de fluorescncia bastante similar da espcie desprotonada. Esse comportamento sugere que a desprotonao do substituinte hidroxila deve ocorrer a partir do seu estado excitado. Uma vez que a diisopropilamina atua como uma base fraca, em virtude do impedimento estrico provocado pelos grupos isopropila, a desprotonao da hidroxila deve ser desfavorecida no estado fundamental. Assim como para a cumarina 3, as variaes na concentrao de H3O+ no meio provocam alteraes quanto ao comportamento das bandas de absoro e emisso de fluorescncia da cumarina 2. Nesse caso, a protonao do substituinte dietilamino foi monitorada atravs de experimentos empregando solues metanol/gua (1:99 v/v), contendo diferentes concentraes de H3O+ (figura 41).
0,15
(a)
pH = 9,31
0,12
Absorvncia
0,09
0,06
0,03
pH = 1,67
0,00 225 300 375 450 525 600
0,12
(b)
Absorvncia
0,09 0,06 0,03 0,00 0 2 4 6 8 10
pH
Figura 41 Bandas de absoro (a) e curvas de monitoramento da absorvncia do mximo de absoro ( = 452 nm) da espcie protonada da cumarina 2 (b) a diferentes valores de pH em mistura metanol/gua (1:99 v/v)
A reduo no pH do meio provoca o deslocamento batocrmico da banda de absoro da cumarina 2. O deslocamento da banda indica a existncia de duas espcies, uma neutra e outra formada aps a protonao do nitrognio do substituinte dietilamino. A segunda derivada obtida a partir da curva Abs vs pH (b) permitiu estimar um pKa 2,36 0,02 para a cumarina 2.
Resultados e Discusso 75 A seguir, so apresentados os espectros de emisso de fluorescncia da cumarina 2 frente variao do pH do meio.
30 25 20 15 10
pH = 9,31
(a)
pH = 1,67
5 0 500 550 600 650
30 25 20
(b)
I497 nm
15 10 5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
pH
Figura 42 - Comportamento das bandas de emisso de fluorescncia (a) e monitoramento da intensidade de fluorescncia a 497 nm (b) da cumarina 2 a diferentes valores de pH em mistura metanol/gua (1:99).
A figura 42a mostra que a banda de emisso de fluorescncia da cumarina 2 sofre um deslocamento batocrmico com a diminuio do pH do meio, acompanhada de diminuio na intensidade de fluorescncia, diferentemente do comportamento observado para a cumarina 3, onde so obtidas bandas de emisso de fluorescncia distintas para as duas espcies do equilbrio cido-base. A
Resultados e Discusso 76 relao direta entre a intensidade de fluorescncia da cumarina 2 e o pH, permite estimar o pKa, ou seja, o pKa da espcie no estado excitado. A estimativa foi feita atravs da segunda derivada da curva I497 nm vs pH. Foi estimado um valor de 2,15, indicando que o estado excitado da cumarina 2 possui um carter mais cido que o estado fundamental. Jones e colaboradores estudaram as propriedades cido-base de amino cumarinas substitudas por heterociclos na posio 3, as quais so apresentadas a seguir [130].
N X Et N Et O O I) X = N H II ) X = N C H 3 II I) X = S
Figura 43 Cumarinas estudadas por Jones e colaboradores [129].
Foram estimados os pKa das espcies I, II, III como sendo 5,0, 4,6 e 0,92, respectivamente [130]. As mudanas observadas foram atribudas protonao do nitrognio do grupo azol com a subseqente formao de um diction associado com o nitrognio do grupo dietilamino em solues mais cidas [130]. No entanto, para a aminocumarina (cumarina 2), estudada nesse trabalho, atribuiu-se as mudanas observadas protonao do grupo dietilamino, uma vez que experimentos prvios, realizados com a cumarina 1 a diferentes pH no indicaram alteraes na fotofsica do composto, descartando desse modo a protonao do nitrognio do substituinte benzoxazol. A seguir so apresentados os espectros de absoro e emisso de fluorescncia da cumarina 2 a diferentes pH, em misturas metanol/gua 1:99 v/v.
0,10
0,10
(a)
0,08
0,08
(b)
0,06
0,06
I
0,04
I
0,04
0,02
0,02
0,00 225 300 375 450 525 600
0,00 225 300 375 450 525 600
0,10
(c)
0,08
0,06
I
0,04
0,02
0,00 225 300 375 450 525 600
Figura 44 - Espectros de absoro e emisso de fluorescncia para a cumarina 2 a diferentes pH em mistura metanol/gua (1:99): (a) cumarina 2 a pH = 1,67 (exc = 495 nm); (b) cumarina 2 a pH = 5,65 (exc = 452 nm); (c) cumarina 2 a pH = 9,31 (exc = 452 nm).
Resultados e Discusso 78 Os espectros visualizados na figura acima sugerem que, para as trs condies consideradas, a geometria do estado fundamental deve ser similar do estado excitado. Esses resultados foram confirmados de clculos tericos [128].
3.3
Efeito do Solvente Sobre a Transio S1 S0
Para compreender melhor a influncia das interaes especficas solutosolvente sobre a fotofsica das cumarinas estudadas, os resultados obtidos sero tratados separadamente. A seguir, so apresentados dados fotofsicos obtidos para a cumarina 1. Os solventes foram dispostos em ordem crescente de polaridade, seguindo a escala de polarizabilidade de orientao (f), sendo tambm considerado o carter prtico e aprtico do meio.
Tabela 5 Mximos de absoro e emisso de fluorescncia, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos da cumarina 1.
Solvente Metilciclohexano Tetracloreto de carbono Tolueno 1,4-dioxano Clorofrmio Acetato de etila Tetrahidrofurano Dimetilsulfxido N,N-dimetilformamida Propanona Acetonitrila lcool 2-butlico Etilenoglicol lcool 2-proplico lcool etlico lcool metlico
(*)
abs, nm em , nm
356 360 360 357 356 352 354 354 352 352 352 353 354 354 352 352 438 444 445 443 443 443 444 453 445 444 443 445 447 444 440 440
, cm
-1
f
0,94 0,92 0,83 0,84 0,87 0,86 0,77 0,77 0,72 0,76 0,72 0,80 0,68 0,76 0,72 0,67
kr0, s-1(*) 3,67 x 108 3,05 x 108 2,09 x 108 2,89 x 10 2,79 x 10
8 8
r0 , ns(*)
2,72 3,28 4,78 3,46 3,58 4,12 2,82 3,26 3,30 5,62 3,07 3,26 2,86 3,26 2,84 2,97
exp, ns
3,17 3,78 3,47
f, ns
3,45 5,56 5,18
kf, s-1 1,80 x 10 1,93 x 10

8 8
knr, s-1 8,47 x 10 9,51 x 10

7 7
kf/ knr 2,13 2,03
f/r0
1,05 1,94 1,74
5259 5256 5306 5438 5517 5836 5726 6174 5937 5887 5836 5857 5877 5726 5682 5682
2,90 x 108 2,52 x 107 11,51
2,43 x 108 3,55 x 108 3,07 x 10 3,03 x 10

8 8
1,78 x 108 3,26 x 108 3,07 x 10 3,50 x 10

8 8
3,07 x 108 3,52 x 108 3,37 x 10

8
estimados a partir dos espectros de absoro.
Os comprimentos de onda de absoro exibem um ligeiro deslocamento hipsocrmico com o aumento da polaridade do solvente, o que indica que o estado fundamental tende a ser melhor solvatado por solventes apolares. Os comprimentos de onda de emisso de fluorescncia no apresentam um padro. Duas diferentes tendncias podem ser consideradas para a variao do deslocamento de Stokes ao separar os solventes quanto ao carter prtico ou aprtico. Em solventes aprticos, por exemplo, h uma relao direta entre o deslocamento de Stokes e a polaridade do solvente, o que pode ser visualizado na figura 45.
6300
(h) (i) (j) (k) (g) (d) (e) ~ = 2115.34 f + 5289.05 R = 0.96
0,1 0,2 0,3
6000
-1 ~ , cm
(f)
5700
5400
(c) (a) (b)
5100 0,0
f
Figura 45 Deslocamento de Stokes em funo da polarizabilidade de orientao (f) para a cumarina 1 em solventes aprticos. (a) metilciclohexano; (b) tetracloreto de carbono; (c) tolueno; (d) dioxano; (e) clorofrmio; (f) acetato de etila; (g) THF; (h) DMSO; (i) DMF; (j) acetona; (k) acetonitrila.
Os valores foram representados graficamente utilizando-se o parmetro f, o que permite estimar, a partir da equao 10, um de 5,26 Debye entre os momentos de dipolo dos estados fundamental e excitado. O raio de Onsager foi estimado de acordo com a proposta de Lippert para molculas planares, onde o raio poderia ser considerado como sendo 40 % do comprimento longitudinal da molcula [114]. Desse modo, um valor de 4,04 foi obtido a partir de estimativas do comprimento da molcula, feitas por meio de clculo terico [128]. Machado e
Resultados e Discusso 81 colaboradores estimaram para a molcula isolada, por meio de clculos ab initio, um = 0,219 Debye [128]. Empregando-se um conjunto de funes de bases mdio, esse valor aumentou para = 0,868 Debye. Empregando-se a escala ETN (figura 46), mais adequada para descrever interaes polares [ 87, 93], o valor estimado para igual a 2,07 Debye . Desse modo, podemos considerar que o momento de dipolo do estado S1 se situa entre 0,9 e 2,0 Debye. A figura a seguir apresenta a aplicao dessa escala para a estimativa desse parmetro,
6300
(i)
6000
(e)
5700
-1 ~ , cm
(g)
(h)
(d) (f) (a) (c) (b)

0,1 0,2
N ~ = 2161.94ET + 5143.59 R = 0.93
5400
5100 0,0
0,3
0,4
0,5
ET
Figura 46 Deslocamento de Stokes em funo do parmetro de polaridade ETN para a cumarina 1 em solventes aprticos. (a) tetracloreto de carbono;(b) tolueno;(c) dioxano; (d) THF; (e) acetato de etila; (f) clorofrmio; (g) acetona; (h) DMF; (i) DMSO.
Os resultados obtidos em solventes prticos evidenciam uma relao inversa entre o deslocamento de Stokes e a polaridade do meio. Para esses solventes, deve-se levar em considerao a capacidade de formao de ligao de hidrognio. O melhor parmetro que relaciona os solventes prticos quanto
S0 = 2,4830 Debye (utilizando o mtodo de Hartree-Fock com base STO-3G) e S1 = 2,7018 Debye (utilizando Configuraction Interaction-Singles com base STO-3G). valor calculado de acordo com a relao: inclinao = 11307,60[(/B)2.(aB/a)3]; onde B = 9 Debye e aB = 6,2, valores referentes ao corante de Reichardt.
Resultados e Discusso 82 capacidade de formao de ligao de hidrognio o parmetro [95,96]. A figura 47 relaciona o deslocamento de Stokes com esse parmetro.
5880
(e) (a)
5820
, cm
-1
5760
5700
(b) (c) (d)

0,85 0,90 0,95
5640 0,65
0,70
0,75
0,80
Figura 47 Deslocamento de Stokes em funo do parmetro do solvente prtico para a cumarina 1. (a) 2-butanol; (b) 2-propanol; (c) etanol; (d) metanol; (e) etilenoglicol.
O parmetro , nesse caso, permite obter somente informaes qualitativas sobre o efeito das ligaes de hidrognio soluto/solvente. A ausncia de linearidade entre os resultados obtidos pode estar relacionada principalmente a caractersticas especficas dos lcoois utilizados. Dentre os solventes prticos utilizados para o estudo da fotofsica das cumarinas, h dois lcoois secundrios (2-propanol e 2-butanol), um lcool dihidroxlico (etilenoglicol) e dois lcoois primrios (etanol e metanol). Nos dois primeiros h um impedimento estrico sobre a hidroxila do lcool, provocado pelos substituintes alqulicos, o que dificulta a formao de ligao de hidrognio. J no caso do etilenoglicol, h uma maior capacidade de formao de ligaes de hidrognio, somada alta viscosidade do solvente, o que deve conferir maior rigidez ao meio, e favorecer a interao soluto/solvente. Essas diferentes tendncias fazem com que no seja obtida uma linearidade para os valores estimados. Os locais mais provveis para a formao de ligaes de hidrognio soluto/solvente nessa cumarina so os tomos de oxignio e nitrognio do grupo benzoxazol. Tal afirmao est baseada nos resultados existentes na literatura para a cumarina e alguns de seus derivados com substituintes na posio 3, que no sofrem a interferncia da natureza prtica do solvente [100]. Isso nos leva a descartar a possibilidade de ser a carbonila do anel
Resultados e Discusso 83 cumarnico, a regio de formao da ligao de hidrognio, responsvel pela alterao nas propriedades fotofsicas, como sugerido por alguns autores [85]. Interaes provocadas tanto pelo efeito da polaridade do solvente quanto pelas ligaes de hidrognio causam alteraes significativas nos rendimentos qunticos de fluorescncia (figura 48). Pelos valores dispostos na tabela 5, possvel observar que h uma tendncia de desfavorecimento dos processos radiativos de desativao do estado S1 da cumarina 1 com o aumento da polaridade do meio. A figura a seguir, apresenta a tendncia observada.
(a) (b)
0,91
(e) (d) (c)
(f)
0,84
0,77
(h) (g) (i)
(j) (k)
0,70
0,00
0,07
0,14
0,21
0,28
0,35
Figura 48 Relao entre o rendimento quntico de fluorescncia da cumarina 1 e a polarizabilidade de orientao (f) do solvente utilizado. Pontos fechados ( ): (a) metilciclohexano;(b) tetracloreto de carbono;(c) tolueno; (d) dioxano; (e) clorofrmio; (f) acetato de etila; (g) THF; (h) DMSO; (i) DMF; (j) acetona; (k) acetonitrila. Pontos abertos (): solventes prticos.
De modo geral, essa tendncia a mesma, tanto para solventes prticos quanto aprticos. Embora essa tendncia seja mais acentuada para os solventes prticos, em virtude de formao de ligaes de hidrognio com o grupo benzoxazol, pode-se generalizar, com base na figura acima, que interaes polares entre o grupo benzoxazol so responsveis pela desativao no-radiativa observada. De forma particular, o comportamento observado para os solventes
Resultados e Discusso 84 prticos est mostrado na figura 49, onde se relaciona o rendimento quntico de fluorescncia com o parmetro ,
0,80
(a)
0,76
(b)
0,72
(c) (d)
0,75 0,80 0,85 0,90
0,68
(e)
0,70
0,95
Figura 49 Relao entre o rendimento quntico de fluorescncia da cumarina 1 e o parmetro para solventes prticos. (a) 2-butanol; (b) 2-propanol; (c) etanol; (d) etilenoglicol; (e) metanol.
Esses resultados concordam com a proposio de que os solventes prticos tendem a formar ligaes de hidrognio com o grupo benzoxazol, viabilizando a participao de mecanismos no-radiativos de desativao. Seixas de Melo e colaboradores propuseram que o aumento da polaridade do solvente, prtico ou aprtico, tende a aumentar o rendimento quntico de fluorescncia de certas cumarinas em funo da inverso de estados [100]. Nossos resultados, mostram um comportamento oposto. No entanto, os derivados de cumarina estudados possuem um estado S1 preponderantemente ,*, graas ao do grupo benzoxazol, ao contrrio das cumarinas estudadas por Seixas de Melo e colaboradores, cujo estado S1 n,*. No nosso caso, interaes polares intensas com o grupo benzoxazol devem aumentar o carter perturbacional de um estado n,* mais alto, embora, mesmo assim, esse efeito no seja suficiente para inviabilizar uma eficiente emisso fluorescente por parte desses compostos. Uma das possveis causas para o surgimento de uma rota no-radiativa para a desativao do estado S1 pode ser a mudana no ngulo diedro entre os
Resultados e Discusso 85 anis cumarnico e benzoxazol, em funo das interaes com o solvente, alterando a planaridade da molcula. Esse aumento no ngulo diedro faz com que o carter ressonante do sistema seja diminudo, reduzindo o carter ,* da transio, o que pode ser avaliado a partir de resultados de clculos tericos. Gao e colaboradores sugeriram que a toro do substituinte na posio 3, causada por interaes com o solvente, tende a provocar um efeito significativo sobre a desativao do estado singlete excitado de cetocumarinas [129]. Os valores obtidos para os r0 e kr0, estimados a partir dos espectros de absoro da cumarina 1, esto de acordo com a natureza ,* da transio. Entretanto, esses valores no mostram nenhuma tendncia, ao contrrio do que se observa para os rendimentos qunticos de fluorescncia. No entanto, a razo entre o tempo de vida de fluorescncia e o tempo de vida natural mostra que a emisso de fluorescncia nos solventes apolares ocorre de um estado solvatado totalmente distinto daquele em solventes polares. Em tetracloreto de carbono, por exemplo, a relao f/r0 se aproxima da unidade, sugerindo que a emisso de fluorescncia nesse solvente est ocorrendo a partir de um nvel relaxado bem prximo ao nvel de Franck-Condon. Em solventes apolares, o principal mecanismo de desativao do estado S1 atravs da fluorescncia. Isso pode ser visualizado atravs da relao entre as constantes relativas fluorescncia e aos processos no-radiativos de desativao (kf/knr). medida que a polaridade do solvente aumenta, h um favorecimento dos processos no-radiativos de desativao. Os resultados esto diretamente relacionados com os rendimentos qunticos de fluorescncia, estimados nos experimentos em regime de estado estacionrio. Todos esses efeitos, provocados pela natureza do solvente sobre a fotofsica da cumarina 1 servem como base inicial para a interpretao da fotofsica dos demais derivados em estudo. Entretanto, os resultados sugerem que os efeitos do solvente tendem a se pronunciar mais efetivamente sobre os substituintes da posio 7. No caso do substituinte NEt2, vrias propostas mecansticas visando explicar a desativao de S1 tm sido propostas [81,83,85,121,129,130]. A incluso do grupo benzoxazol na posio 3 faz com que a cumarina 2 apresente certas singularidades no seu comportamento fotofsico, quando comparada com
Resultados e Discusso 86 outras aminocumarinas. Os resultados obtidos para a cumarina 2 foram dispostos na tabela 6. Assim como para a cumarina 1, os solventes foram separados em duas classes, de modo a facilitar a interpretao dos resultados.
Tabela 6 Mximos de absoro e emisso de fluorescncia, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos para a cumarina 2.
Solvente Metilciclohexano Tetracloreto de carbono Tolueno 1,4-dioxano Clorofrmio Acetato de etila Tetrahidrofurano Dimetilsulfxido N,N-dimetilformamida Propanona Acetonitrila Diisopropilamina lcool 2-butlico Etilenoglicol lcool 2-proplico lcool etlico lcool metlico gua
(*)
abs, nm
426 433 434 428 440 430 435 444 441 434 438 426 438 448 438 441 442 452
em , nm
478 479 479 476 480 480 482 497 493 487 490 474 487 497 488 489 490 497
, cm
-1
kr0, s-1(*)
r0 , ns(*)
4,61 3,91 4,35 3,79 3,79 4,46 3,62 3,95 3,97 4,03 3,62 3,52 4,15 3,83 3,73 3,60 3,77 5,78
exp, ns
2,23 2,33 2,31 2,37 1,80 1,94 1,87 2,37 1,68 2,32 1,85 1,49 0,71
f, ns
3,49 3,07 2,91 2,88 3,89 3,33 3,08 3,02 3,65 3,06 3,25 3,53 6,45
kf, s-1 2,86 x 108 3,26 x 108 3,44 x 10 2,57 x 10 3,25 x 10 3,31 x 108 2,74 x 108 3,27 x 10 3,10 x 10
8 8 8 8 8
knr, s-1 1,61 x 108 1,03 x 108 0,91 x 10 3,00 x 10 2,16 x 10 1,03 x 108 3,21 x 108 2,32 x 10 2,09 x 10
8 8 8 8 8
kf/ knr 1,77 3,16 3,78 4,57 0,86 3,57 1,39 3,16 0,85 1,33 1,56 0,73 0,12
f/r0
0,76 0,79 0,77 0,76 0,98 0,84 0,85 0,73 0,95 0,82 0,90 0,94 1,12
2554 2218 2165 2356 1894 2423 2242 2402 2393 2508 2423 2377 2297 2201 2339 2226 2216 2003
0,64 2,17 x 108 0,76 2,56 x 108 0,79 2,30 x 10 0,79 2,64 x 10
8 8
0,82 2,64 x 108 0,81 2,24 x 108 0,78 2,76 x 10 0,46 2,53 x 10
8 8
3,47 x 108
0,76 x 108
0,58 2,52 x 108 0,76 2,48 x 108 0,61 2,76 x 10 0,52 2,84 x 10
8 8
3,01 x 108
0,93 x 108
0,78 2,41 x 108 0,46 2,61 x 108 0,76 2,68 x 10 0,57 2,78 x 10 0,11
8 8
0,42 2,65 x 108 1,73 x108
2,84 x 108
3,89 x 108
1,55 x 108 12,54 x 108
calculados a partir dos espectros de absoro.
Resultados e Discusso 88 Os resultados mostram que o mximo de absoro segue uma tendncia de aumento com a polaridade do meio, tanto para solventes prticos quanto para os aprticos. O mesmo comportamento observado para o mximo de emisso de fluorescncia. A relao entre o deslocamento de Stokes e o parmetro de polaridade f no apresenta regularidade para todos os solventes da srie. Em clorofrmio, por exemplo, h uma diminuio significativa do deslocamento de Stokes, provocada, sobretudo, pela melhor solvatao da espcie no estado fundamental. Mesmo separando os solventes, a estimativa da variao do momento de dipolo da espcie obtida com uma baixa correlao, como pode ser visualizado na figura 50.
2600
(f) (d) (h) (e) (g)
2400
-1 ~ , cm
(b) (a)
(c)
2200
2000
~ = 856.12 f + 2192.08 R = 0.91

0,0 0,1 0,2 0,3
f
Figura 50 Deslocamento de Stokes em funo da polarizabilidade de orientao para a cumarina 2 em solventes aprticos. (a) tetracloreto de carbono, (b) tolueno, (c) dioxano, (d) acetato de etila, (e) DMSO, (f) DMF, (g) propanona, (h) acetonitrila.
Essa baixa correlao em geral atribuda formao de um estado ICT mais polar, em equilbrio com o estado S1 [76]. A partir da anlise dos resultados, baseada na aplicao da equao de Lippert [89], chega-se informao de que o momento de dipolo do estado excitado deve ser aproximadamente 6,48 Debye maior que o do estado fundamental. Por meio de clculo terico (HF/3-21G e CIS/3-21G), = 2,02
Resultados e Discusso 89 Debye [128]. possvel que o elevado valor obtido experimentalmente esteja relacionado formao de um estado ICT bastante polar a partir do estado S1. O valor E (S1, S2) em torno de 58 kJ.mol-1, calculado para a molcula isolada, condiz com essa possibilidade [140]. Considerando-se que est 27% majorado com relao aos dados experimentais [128]. Diferentemente do que ocorre para compostos anlogos, no se observou para essa cumarina emisso dual de fluorescncia, para a maioria dos solventes estudados, o que pode ser uma indicao de que a proporo de espcies excitadas no estado ICT altamente polar seja extremamente elevada. Isso tem uma certa lgica ao se analisar as estruturas obtidas para os estados S0 e S1 [128]. Mesmo no estado S0 se observa a ocorrncia de transferncia intramolecular de carga, que ampliada com a excitao: com a redistribuio de cargas que ocorre no estado S1, a deslocalizao do sistema se estende para toda a molcula [128]. Como a diferena E (S1, S2) favorvel j para a molcula isolada, provvel que uma variao, mesmo que pequena, na polaridade do solvente, possa resultar na formao desse estado mais polar. Isso concorda com os resultados obtidos. Quando se analisa os espectros de fluorescncia da cumarina 2 em solventes pouco polares, como por exemplo tolueno e clorofrmio, ou mesmo em certos solventes prticos, como o caso da diisopropilamina, pode-se observar o comportamento tpico de emisso dual de fluorescncia,
Teoricamente, o estado S1 possui um = 9,348 Debye, enquanto que o S0 possui um = 7,326 Debye.
0,12 0,10 0,08
(a) (b) (c)
0,06 0,04 0,02 0,00 450 500 550 600
Figura 51 - Espectros de emisso de fluorescncia da cumarina 2 em (a) diisopropilamina, (b) clorofrmio e (c) metanol. Dois mximos de emisso de fluorescncia podem ser visualizados: o primeiro, a 473 nm relativo ao estado LE, e a 490 nm relativo ao ICT.
Pode-se observar que nos solventes acima citados, h dois mximos na emisso de fluorescncia. O primeiro, de maior energia, atribudo ao estado S1 conhecido como Locally Excited [140], e o segundo atribudo ao estado ICT mais polar. Nota-se pelos espectros de emisso de fluorescncia que nos solventes prticos, e nos solventes mais polares, apenas o estado ICT polar pode ser visto. Nos solventes prticos, o deslocamento de Stokes tende a diminuir com aumento da eficincia de formao de ligao de hidrognio do solvente. O efeito provocado principalmente pelas interaes soluto/solvente no estado fundamental, o que resulta em um deslocamento batocrmico da banda de absoro para esses solventes. A polaridade do solvente e sobretudo a capacidade de formao de ligao de hidrognio provocam efeitos significativos sobre o processo de desativao do estado S1. Em solventes aprticos, por exemplo, dois comportamentos distintos podem ser observados com o aumento da polaridade do meio: ocorre uma ligeira tendncia de aumento do rendimento quntico de fluorescncia para solventes de baixa polaridade, enquanto que nos solventes de polaridade intermediria, h uma
Resultados e Discusso 91 diminuio do rendimento quntico de fluorescncia com o aumento da polaridade do meio. Tal comportamento pode ser atribudo ao fato do estado excitado ser melhor solvatado por solventes polares, em virtude do seu elevado momento de dipolo. A figura 52 ilustra a tendncia observada em termos do parmetro polarizabilidade de orientao, f, para solventes de polaridade intermediria a alta.
0,9
(b)
0,8
(a) (c)
(e)
0,7
f
0,6
(d)
(g)
0,5
(f)
0,4 0,15 0,20 0,25 0,30
f
Figura 52 - Comportamento do rendimento quntico de fluorescncia da cumarina 2 em solventes aprticos de polaridade intermediria a alta: (a) clorofrmio, (b) acetato de etila, (c) THF, (d) acetona, (e) acetonitrila, (f) DMF, (g) DMSO.
Esses resultados sugerem que o substituinte dietilamino deve tambm favorecer o estabelecimento de interaes polares com o solvente, o que resulta na viabilizao dos mecanismos no-radiativos na desativao do estado S1. O efeito bastante pronunciado em solventes de elevada polaridade, tais como DMSO e DMF. O desfavorecimento da fluorescncia bastante significativo nos solventes prticos. Os resultados so apresentados graficamente na figura 53, relacionados em termos do parmetro do solvente, onde a tendncia apresenta boa correlao linear.
0,8
(a)
(b) (c) (d) (e)
0,6
f
0,4
0,2
(f)
0,0 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2
Figura 53 Comportamento do rendimento quntico de fluorescncia da cumarina 2 em funo do parmetro do solvente: (a) 2-butanol, (b) 2-propanol, (c) etanol, (d) etilenoglicol, (e) metanol, (f) gua.
Na figura acima, no foi includo o valor estimado em diisopropilamina, uma vez que nesse solvente, a formao de ligao de hidrognio desfavorecida pelo impedimento estrico dos substituintes isopropil. Alm disso, inexiste uma estimativa para o parmetro para a diisopropilamina. No entanto, se levarmos em considerao que a diisopropilamina segue uma tendncia similar observada para os lcoois, pode-se estimar, a partir da equao da reta acima, um valor de 0,88 para o em relao a esse solvente. De qualquer forma, uma interpretao melhor sobre as caractersticas das interaes entre a cumarina 2 e a diisopropilamina deve ser avaliada com mais cuidado, visto que os nicos estudos, envolvendo cumarinas e aminas, esto relacionados com processos de transferncia fotoinduzida de eltrons, utilizando fenilaminas como doadores de eltrons [131]. Quando so analisadas as constantes de desativao dos mecanismos noradiativos possvel observar a relao direta com a polaridade do solvente, indicando que as interaes soluto/solvente aumentam a probabilidade da desativao por mecanismos no-radiativos. Especificamente para os solventes prticos (figura 54) a tendncia de favorecimento das rotas no-radiativas de
Resultados e Discusso 93 desativao mais visvel. O valor estimado utilizando-se gua como solvente, difere significativamente dos valores obtidos para os lcoois e est relacionada
(f)
12
knr
(b) (a)
0,8
(d) (c)
0,9
(e)
1,0
1,1
eficincia da gua em formar ligaes de hidrognio com o grupo dietilamino.

Figura 54 Relao entre a constante de desativao no-radiativa para a cumarina 2 em funo do parmetro do solvente: (a) 2-butanol, (b) 2-propanol, (c) etanol, (d) etilenoglicol, (e) metanol, (f) gua.
A relao entre os tempos de vida radiativo e natural, f/r0, sugere que a emisso de fluorescncia a partir de um nvel relaxado prximo ao nvel de Franck-Condon favorecida nos solventes polares. Para as medidas realizadas em meio aquoso, nota-se que o rendimento quntico de fluorescncia sofre um significativo decrscimo, sobretudo pela eficiente capacidade de formao de ligao de hidrognio. Alguns autores propem que, alm das interaes soluto/solvente, h a possibilidade de formao de microagregados, principalmente para aminocumarinas disubstitudas [85,132,133]. No caso da cumarina 2, os resultados sugerem que, se h formao desses microagregados, isso no deve estar influenciando significativamente nos resultados obtidos. O emprego de metanol na preparao das solues pode estar inviabilizando a formao dos microagregados.
Resultados e Discusso 94 A figura 55, mostra o efeito da proporo de gua em uma mistura dioxano/gua sobre o espectro de absoro da cumarina 2.
0,12
Absorvncia
0,09
0,06
0,03
0,00 300 350 400 450 500
Figura 55 - Espectros de absoro da cumarina 2 a diferentes propores de gua em dioxano. () 0 % gua; () 5 % gua; () 25 % gua; (--------) 50 % gua; () 75 % gua; (*****) 100 % gua.
Os espectros mostram que o aumento da concentrao de gua provoca um deslocamento batocrmico do mximo de absoro da cumarina 2, sugerindo que a estabilizao dessa espcie no meio favorecida com o aumento da eficincia de formao de ligaes de hidrognio. J nos espectros de emisso de fluorescncia, nota-se que o aumento da concentrao de gua provoca uma diminuio no sinal da banda de emisso de fluorescncia, visualizada na figura a seguir.
0 % H2 O
80
50 % H2O
60
I
40
75 % H2O
20
100 % H2O
0 450 500 550 600
Figura 56 - Espectros de emisso de fluorescncia da cumarina 2 em diferentes concentraes de gua, para misturas gua dioxano.
Pelos espectros, nota-se a ocorrncia de supresso da fluorescncia devida formao de ligaes de hidrognio. A supresso acompanhada pelo deslocamento batocrmico do mximo de emisso de fluorescncia. A formao de ligaes de hidrognio afeta consideravelmente a fotofsica da cumarina 2. Os resultados esto dispostos na tabela a seguir.
Tabela 7 Comprimentos de onda nos mximos de absoro e emisso de fluorescncia, deslocamentos de Stokes e rendimentos qunticos de fluorescncia para a cumarina 2 em diferentes composies dioxano/gua
% gua
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100
abs, nm
428 432 435 438 440 442 443 445 445 448 448 451 451 451 452 452 452 452 452 452 452
em, nm
478 486 488 490 491 492 493 494 495 495 497 497 498 498 498 498 498 498 498 497 497
, cm
-1
f
0,79 0,74 0,71 0,66 0,63 0,57 0,58 0,48 0,50 0,44 0,37 0,36 0,34 0,31 0,25 0,24 0,20 0,19 0,16 0,13 0,11
2444 2572 2497 2423 2361 2299 2289 2229 2270 2119 2201 2052 2093 2093 2044 2044 2044 2044 2044 2003 2003
Os resultados mostram uma relao inversa entre o deslocamento de Stokes e a proporo de gua na mistura. Essa relao apresentada na figura 57.
2600
2400
~ -1 , cm
2200
2000 0 20 40 60 80 100
% de gua (v/v)
Figura 57 - Deslocamento de Stokes da cumarina 2 para diferentes misturas de dioxano/gua.
A variao do rendimento quntico de fluorescncia em termos do aumento da proporo de gua na mistura dioxano/gua apresentada na figura 58.
0,8
0,6
0,4
0,2
20
40
60
80
100
% de gua (v/v)
Figura 58 - Rendimento quntico de fluorescncia para diferentes misturas dioxano/gua.
Esse tipo de comportamento pode ser tratado em termos do efeito da supresso de fluorescncia pelo solvente. A relao de Stern-Volmer a seguir,
Resultados e Discusso 98 mostra que a interao soluto/solvente, que resulta na formao de ligao de hidrognio, induz a ocorrncia de um processo de transferncia de carga,
8
1,8
7 6 5
0/
1,6 1,4 1,2 1,0 0,8
0/
(b)
0 3 6 9 12 15 18 21 24 27
-3
4 3 2 1 0
[gua], mol.dm
(a)
10 20 30 40
-3
50
60
[gua], mol.dm
Figura 59 - Relao de Stern-Volmer para a supresso da fluorescncia da cumarina 2 em misturas dioxano/gua. (a) variao entre 0 e 55,56 mol.dm-3 de gua; (b) variao entre 0 e 25 mol.dm-3 de gua.
Considerando-se um tempo de vida de fluorescncia de 6,45 ns para a espcie excitada em meio aquoso, chega-se para o intervalo entre 0 e 25 mol.dm-3 de gua, um valor igual a 4,74 x 106 mol-1dm3s-1 para a constante de supresso. A grandeza desse valor tpica de processos de transferncia de carga [69]. Nas outras faixas de linearidade dessa curva, as constantes de supresso estimadas encontram-se dentro dessa mesma magnitude (1,69 x 107 mol-1dm3s-1 para o intervalo entre 30,6 a 41,7 mol.dm-3 e 4,24 x 107 mol-1dm3s-1 para o intervalo entre 41,7 a 55,5 mol.dm-3). A possibilidade de protonao do nitrognio do grupo dietilamino faz com que essa cumarina venha a apresentar algumas peculiaridades nas suas caractersticas espectroscpicas na presena de prtons. A tabela 8 mostra, para a mistura metanol/gua (1:99, v/v), o efeito de concentraes crescentes de H3O+ sobre o deslocamento de Stokes e sobre o rendimento quntico de fluorescncia.
Tabela 8 Mximos de absoro e emisso de fluorescncia, deslocamentos de Stokes e rendimentos qunticos de fluorescncia da cumarina 2 para diferentes [H3O+], em metanol/gua (1:99, v/v).
pH
1,67 2,06 2,15 2,36 2,84 3,52 4,60 5,10 5,65 6,50 9,31
abs, nm
495 493 466 460 450 450 451 453 452 452 452
em, nm
496 511 503 500 498 497 497 497 497 497 497
, cm
-1
f
0,02 0,05 0,06 0,07 0,09 0,09 0,09 0,10 0,11 0,10 0,11
41 715 1579 1739 2142 2102 2052 1954 2003 2003 2003
Os resultados mostram um deslocamento batocrmico tanto para os comprimentos de onda de absoro quanto para os de emisso de fluorescncia. Entretanto, as variaes observadas para os comprimentos de onda de absoro so mais significativas, o que faz com que o deslocamento de Stokes observado para a espcie sofra um intenso decrscimo em pH cido. O pequeno valor observado para o deslocamento de Stokes da cumarina 2 protonada a pH 1,67 sugere ainda, que o momento de dipolo da espcie observada no estado fundamental no deve variar aps a excitao. Isso foi confirmado atravs de clculos tericos, onde foram observados momentos de dipolo de 21,80 Debye para a espcie no estado fundamental e 21,86 Debye para a espcie no estado S1 [128]. A figura 60, mostra a dependncia do deslocamento de Stokes e do rendimento quntico de fluorescncia com relao ao pH do meio.
Resultados e Discusso100
1,00
(c) (b)
Valor relativo
0,75 0,50 0,25
(a)
0,00 2 4 6 8 10
pH
Figura 60 Valores relativos de absorvncia no mximo de absoro (a), deslocamento de Stokes(b) e rendimento quntico de fluorescncia (c) para a cumarina 2 em funo do pH do meio.
O principal efeito que chama a ateno diz respeito supresso da fluorescncia com a protonao. Um grfico de Stern-Volmer para a adio de cido apresentado a seguir.
6 5 4
5 4
0 /
3 2 0,01 0,02
(b)
[H 3 O ], m ol.dm
+ -3
0/
3 2 1 0,000
(a)
0,005 0,010
+
0,015
-3
0,020
0,025
[H 3O ], mol.dm
Figura 61 Relao de Stern-Volmer para a cumarina 2 utilizando-se H3O+ como supressor. (a) pH variando entre 1,67 e 9,31; (b) pH variando entre 1,67 e 2,15 (abaixo do pKa)..
Resultados e Discusso101 Duas tendncias, relacionadas com o pKa (2,36), podem ser observadas. Em concentraes menores de H3O+, o rendimento quntico de fluorescncia no sofre grandes variaes at atingir o pKa. Em seguida, aps a protonao, o rendimento quntico de fluorescncia suprimido. Desse modo, o efeito da supresso deve ser considerado somente aps a protonao. Considerando-se somente as trs concentraes maiores de cido, obtmse a partir da inclinao do grfico, uma KSV de 257,95 mol-1dm3. A partir de um tempo de vida de fluorescncia em meio aquoso de 6,45 ns, estimou-se uma constante de supresso de 4,00 x 1010 mol-1dm3s-1, indicando ser a supresso da fluorescncia da espcie protonada um processo difusionalmente controlado, ou seja, o processo de supresso independe da interao entre a cumarina excitada e a concentrao de H3O+ no meio. A geometria da molcula protonada no estado excitado lembram muito um estado TICT [85,118-121]. Tanto a geometria do estado fundamental como do S1 foram otimizadas por clculo ab initio [128]. Para a cumarina 3, temos na tabela a seguir, uma srie de dados espectroscpicos, os quais servem para sistematizar a sua fotofsica.
Tabela 9 - Mximos de absoro e emisso de fluorescncia, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos para a cumarina 3.
Solvente Metilciclohexano Tetracloreto de carbono Tolueno 1,4-dioxano Clorofrmio Acetato de etila Tetrahidrofurano Propanona Acetonitrila Dimetilsulfxido N,N-dimetilformamida Diisopropilamina Etilenoglicol lcool 2-butlico lcool 2-proplico lcool metlico gua
(*)
abs, nm
381 382 382 374 382 370 376 372 374 468 466 384 382 380 382 380 376
em , nm
458 457 456 450 448 451 449 449 443 488 485 469 451 451 450 447 465
, cm
-1
f
0,94 0,99 0,86 0,93 0,99 0,97 0,82 0,80 0,98 0,71 0,57 0,51 0,77 0,95 0,88 0,94 0,93
kr0, s-1(*) 2,11 x 108 2,42 x 108 1,92 x 108 2,36 x 10 2,44 x 10
8 8
r0 , n s(*) exp, ns
4,74 4,13 5,21 4,24 4,10 4,98 3,04 3,00 3,37 4,52 4,88 4,26 4,24 3,04 2,91 3,69 2,86 2,57 2,58 2,45 -
f, ns
2,60 4,53 3,18 -
kf, s-1 4,49 x 10 8
knr, s-1 0,89 x 10 8
kf/ knr 4,24 5,04 -
f/r0
0,63 0,93 0,75 -
4413 4296 4248 4516 3857 4854 4324 4610 4165 876 841 4720 4005 4143 3956 3944 5090
3,85 x 108 0,04 x 108 96,25
2,01 x 108 3,29 x 108 3,33 x 10 2,97 x 10

8 8
2,21 x 108 2,05 x 108 2,35 x 10 2,36 x 10

8 8
3,18 x 108 1,76 x 108
3,29 x 108 3,44 x 108 2,71 x 10 3,50 x 10

8 8
Resultados e Discusso103 Esses resultados mostram que os mximos de absoro e emisso de fluorescncia apresentam uma significativa flutuao com o aumento da polaridade do solvente. Os mximos de absoro mais dspares so observados em DMSO e DMF, os quais favorecem fortemente a desprotonao do grupo OH na posio 7 do anel cumarnico. Esses valores, por sinal, correspondem ao mximo de absoro da espcie desprotonada. Para os demais solventes, o mximo de absoro varia entre 370 e 382 nm. Excetuando-se os trs solventes menos polares, onde mx est em torno de 382 nm, podemos, a grosso modo, dividir os demais em aprticos, onde o mx se situa entre 370 e 376 nm, e os prticos, onde o mx se situa entre 380 e 384 nm. Uma exceo entre os aprticos de mdia polaridade o clorofrmio, cujo mx = 382 nm. Dentre os solventes prticos, a gua uma exceo. Temos mostrado anteriormente que os solventes prticos tendem a deslocar o equilbrio entre a forma neutra e a desprotonada (pg.64). Os valores mais altos de mx nos solventes prticos esto justamente relacionados a uma melhor relaxao da molcula em virtude da formao de ligaes de hidrognio. Comparando-se os solventes aprticos de polaridade mdia com os prticos, v-se que h uma tendncia de deslocamento batocrmico do mx com a polaridade. Os valores estimados para os deslocamentos de Stokes nos diferentes solventes no permitem uma estimativa segura do momento de dipolo do estado excitado. Entretanto, resultados tericos indicam haver uma tendncia de aumento no momento de dipolo do estado excitado para a cumarina 3 em sua forma neutra [109]. Em gua, a espcie apresenta um deslocamento de Stokes maior que nos demais solventes. Alguns autores tm atribudo esse aumento ao fato de no estado fundamental as hidroxicumarinas atuarem como doadores de prtons enquanto que no estado excitado elas atuariam como aceptoras de prtons [117]. Esse efeito somente pode ser verificado em faixas de pH < 2, para misturas metanol/gua (1:99 v/v), onde a protonao da hidroxila foi observada no estado excitado. No entanto, os espectros de absoro e emisso de fluorescncia no mostraram se tratar da espcie desprotonada.
200
300
400
500
600
Figura 62 Espectros de absoro e emisso de fluorescncia para a cumarina 3 em gua a pH 5,45.
possvel notar que o mximo de absoro da cumarina 3 em gua caracterstico da espcie neutra, enquanto que o mximo de emisso de fluorescncia se aproxima do valor estimado para a espcie desprotonada. Alguns autores prevem a possibilidade de se tratar de um tautmero, correspondente coexistncia das duas espcies [134-136]. Contudo, para a cumarina 3, em questo, os espectros de absoro da forma neutra e da forma desprotonada, so bastante distintos, o que no permite afirmar que estejam sendo excitadas ambas as espcies. Alm disso, os decaimentos nas medidas de tempo de vida evidenciaram uma tendncia monoexponencial. Por fim, o espectro de emisso de fluorescncia aparentemente no apresenta diferenas quanto forma, quando comparado ao espectro de absoro, diferentemente do que foi observado para experimentos utilizando diisopropilamina como solvente, onde a desprotonao da espcie favorecida somente no estado excitado, levando a diferenas quanto forma das bandas de absoro e emisso de fluorescncia. Como nos lcoois e em solventes nucleoflicos foi possvel observar a presena da espcie desprotonada, necessrio considerar o comportamento fotofsico da cumarina 3 desprotonada. Os resultados foram dispostos na tabela a seguir. Alguns solventes no foram considerados, devido ao fato de ser impossvel manter a estabilidade da espcie desprotonada no meio.
Tabela 10 Mximos de absoro e emisso de fluorescncia, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural e tempo de vida natural para a cumarina 3 desprotonada.
Solvente Metilciclohexano Clorofrmio Acetato de etila Tetrahidrofurano Dimetilsulfxido N,N-dimetilformamida Diisopropilamina Etilenoglicol lcool 2-butlico lcool etlico lcool metlico
(*)
abs, nm
444 444 448 458 468 466 442 438 448 442 436
em , nm
474 475 475 481 488 485 480 475 472 474 472
, cm-1
1425 1470 1269 1044 876 841 1791 1778 1135 1527 1749
f
0,63 0,78 0,63 0,45 0,45 0,57 0,80 0,76 0,44 0,85 0,82
kr0, s-1 (*) 3,02 x 108 2,24 x 108 3,42 x 10 2,14 x 10

8 8
r0 , ns (*)
3,31 4,46 2,92 4,67 4,52 4,88 5,38 4,61 5,56 5,52 5,03
2,21 x 108 2,05 x 108 1,86 x 10 2,17 x 10

8 8
1,80 x 108 1,81 x 108 1,99 x 10

8
Nota-se haver uma ligeira tendncia de aumento no mximo de absoro com o aumento da polaridade em solventes aprticos, enquanto que o mximo de emisso de fluorescncia no apresenta um padro de variao com o solvente utilizado. Para os solventes prticos, particularmente os lcoois, tanto o mximo de absoro quanto o de emisso de fluorescncia sofrem um decrscimo com o aumento da polaridade do meio. Os solventes foram divididos em trs classes, o que permite observar aspectos importantes quanto ao deslocamento de Stokes da espcie desprotonada. Nos solventes aprticos h uma tendncia de diminuio do deslocamento de Stokes com o aumento da polaridade do meio. O mesmo efeito pode ser observado nos solventes de carter bsico. Esse comportamento indica que o momento de dipolo do estado excitado menor que o do estado fundamental. Essa observao foi confirmada por resultados obtidos a partir de clculos tericos [109]. Os deslocamentos de Stokes nesses solventes esto dispostos na figura a seguir,
(a)
1400
(b)
1200
~ , cm
-1
1000
(c) ~ = -5019,66 f + 2200,23 R = 0.97

0,15 0,20
800
(d)
0,25
(e)
0,30
f
Figura 63 Deslocamento de Stokes em funo da polarizabilidade de orientao para a cumarina 3 desprotonada em solventes aprticos. (a) clorofrmio, (b) acetato de etila, (c) THF, (d) DMSO, (e) DMF.
Nesses solventes, ocorre uma diminuio de aproximadamente 5,75 Debye no momento de dipolo do estado excitado com relao ao estado fundamental. Os resultados tericos indicaram momentos de dipolo de 9,374 e 8,590 Debye para a espcie desprotonada no estado fundamental e excitado, respectivamente [109]. Essas estimativas foram, entretanto, feitas com um conjunto de bases mnimo, o que pode ter resultado em valores menores que o esperado. De qualquer forma, esses resultados, a um nvel semi-quantitativo, evidenciaram a tendncia esperada. Tambm, como observado para a cumarina 1, quando se empregou a escala ETN para estimar o , possvel que o resultado obstido pela aplicao da equao de Lippert [89] esteja sobrevalorizado. No caso dos lcoois, o efeito oposto, o que indica haver uma melhor estabilizao da espcie no estado excitado. Tal comportamento pode ser associado ao fato de que com o aumento da carga eletrnica sobre o oxignio da carbonila gerada aps a desprotonao, h o favorecimento da formao de ligaes de hidrognio, estabilizando a espcie no meio. Pela tabela 9 possvel observar ainda que os rendimentos qunticos de fluorescncia no sofrem uma significativa variao com a polaridade do meio.
Resultados e Discusso107 As maiores variaes so provocadas pelos solventes de carter nucleoflico. Em DMSO, DMF e diisopropilamina, os rendimentos qunticos de fluorescncia mostram-se menores que o observado para os demais solventes. Nesses solventes, os valores estimados referem-se espcie desprotonada. Esse decrscimo est relacionado principalmente ao efeito provocado pelas interaes entre a espcie desprotonada e contra-ons presentes no meio, favorecendo os processos de desativao no-radiativos, principalmente, converso interna [109]. Os resultados indicam ainda que o efeito provocado pela formao de ligaes de hidrognio no afeta os mecanismos radiativos de desativao do estado S1, diferentemente do que se observa, parcialmente para a aminocumarina estudada. O nico resultado que se mostra significativamente distinto observado em etilenoglicol. Se forem comparados os efeitos provocados pelas ligaes de hidrognio entre a cumarina 3 e o solvente, com os resultados obtidos para a cumarina 2, possvel concluir que a nucleofilicidade do cromforo extremamente importante para a fotofsica desses derivados de cumarina. Apesar do impedimento estrico sobre o tomo de nitrognio do substituinte dietilamino ser maior que no tomo de oxignio do substituinte hidrxi, o carter bsico do nitrognio favorece a ocorrncia da interao [85]. Mesmo quando utilizada gua como solvente, o rendimento quntico de fluorescncia se mantm prximo unidade para a cumarina 3. Os resultados obtidos nos experimentos resolvidos no tempo mostram que ocorre o favorecimento de processos no-radiativos nos solventes onde h interaes por ligao de hidrognio e em solventes bsicos, uma vez que podem estar presentes as duas espcies do equilbrio cido-base. A relao entre os tempos de vida indica que a probabilidade da emisso de fluorescncia ocorrer a partir de um nvel relaxado prximo ao nvel de FranckCondon favorecida somente em etilenoglicol, sugerindo que para a cumarina 3, h possivelmente uma dependncia em relao viscosidade do solvente. Os resultados em DMF sugerem que a ocorrncia de transferncia intramolecular de carga para a espcie desprotonada desfavorece os mecanismos radiativos de desativao. Quando so avaliados, por exemplo, os dados fotofsicos estimados para as misturas metanol/DMF, algumas particularidades podem ser observadas, como pode ser visto na tabela a seguir.
Tabela 11 Efeito da composio da mistura metanol/DMF sobre a fotofsica da cumarina 3.
Solv., % DMF 0 20 40 60 80 85 90 95 100
abs, nm
380 382 382 382 382 382 454 458 466
e, nm
447 446 448 449 451 453 482 484 486
, cm
-1
f
0,94 0,92 0,91 0,91 0,92 0,89 0,87 0,83 0,57
3944 3756 3857 3906 4005 4103 1280 1173 883
Os dados estimados para as misturas com propores inferiores a 85% de DMF correspondem cumarina 3 na forma neutra. Acima de 90 % de DMF nas misturas, os dados so referentes espcie desprotonada. A estimativa desses dados levou em considerao a espcie predominante no meio, em termos da maior intensidade de absoro observada. Entretanto, possvel notar que para a espcie neutra, o aumento da proporo de DMF na mistura, favorece a estabilizao do estado excitado, que pode ser notado pelo aumento do deslocamento de Stokes. Por outro lado, o deslocamento de Stokes para a espcie desprotonada diminui com o aumento da proporo de DMF, uma vez que o momento de dipolo do estado excitado dessa espcie menor que o do estado fundamental. Observaes similares foram obtidas nos estudos envolvendo a variao do pH do meio. Alguns dados fotofsicos foram estimados para a cumarina 3 a diferentes valores de pH, em misturas metanol/gua, foram dispostos nas tabelas a seguir,
Tabela 12 Mximos de absoro e emisso de fluorescncia, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos para a cumarina 3 em mistura metanol/gua (1:4 v/v) a diferentes pH.
pH 2,67 3,48 4,41 5,21 5,54 6,08 6,70 8,57 10,54
abs, nm
376 376 376 376 380 381 430 430 430
em, nm
471 463 463 464 467 467 469 468 469
, cm
-1
f
0,68 0,89 0,88 0,87 0,85 0,82 0,97 0,67 0,53
exp, ns
2,77 2,86 2,74
f, ns
3,93 3,29 5,17
kf, s-1 2,54 x 108 3,04 x 108 1,93 x 10

8
knr, s-1 1,16 x 108 0,45 x 108 1,72 x 10

8
f/r0
1,93 1,41 1,00
5364 4997 4997 5044 4903 4833 1934 1888 1934
Tabela 13 Mximos de absoro e emisso de fluorescncia, deslocamentos de Stokes, rendimentos qunticos de fluorescncia, constante de desativao natural, tempo de vida natural, tempo de vida experimental, tempo de vida de fluorescncia, constante de fluorescncia, constante dos processos no radiativos para a cumarina 3 em mistura metanol/gua (1:99 v/v) a diferentes pH.
pH 1,21 2,02 2,66 3,41 3,93 5,38 5,45 6,02 6,81 6,95 7,58 8,98 9,38
abs, nm
382 378 378 376 376 376 376 386 424 426 426 426 426
e, nm
460 461 467 464 462 466 465 468 468 468 468 468 468
, cm
-1
f
0,91 0,90 0,95 0,96 0,93 0,87 0,93 0,87 0,89 0,66 0,76 0,86 0,83
exp, ns
2,29
f, ns
2,52
kf, s-1
3,97 x 108
knr, s-1
0,39 x 108
f/r0
0,88
4439 4763 5042 5044 4951 5137 5090 4539 2217 2107 2107 2107 2107
2,96
3,38 x 108
0,25 x 108
1,07
2,75
2,76
3,21
3,12 x 10
8
0,51 x 10
8
0,76
Para ambas as misturas metanol/gua, (1:4 v/v) e (1:99 v/v) so observadas variaes significativas nos mximos de absoro e emisso de fluorescncia, similares ao efeito observado para as misturas DMF/metanol. Para a mistura metanol/gua (1:99 v/v), os mximos de absoro so distintos para as trs espcies presentes no meio (protonada, neutra, desprotonada). O deslocamento de Stokes varia na seqncia: espcie neutra > protonada > desprotonada, ou seja, tanto na desprotonao quanto na protonao do substituinte hidrxi, deve-se esperar uma diminuio do momento de dipolo do estado excitado em relao ao estado fundamental. O rendimento quntico de fluorescncia da espcie desprotonada, em ambas misturas de solventes, tende a ser menor que o da espcie neutra e est relacionado ao aumento das interaes entre pares inicos presentes no meio (espcie desprotonada e seu contra-on), potencializando assim, a converso interna como rota de desativao no-radiativa. Alm disso, a relao entre os tempos de vida indica que a emisso de fluorescncia na mistura metanol/gua (1:4 v/v) ocorre de um estado solvatado distinto daquele em metanol/gua (1:99 v/v). Em pH bsico para a mistura (1:4 v/v), a relao f/r0 igual a 1, sugerindo que a emisso de fluorescncia nesse solvente est ocorrendo de um nvel relaxado bem prximo ao nvel de FranckCondon, enquanto que para a mistura (1:99 v/v), o valor que mais se aproxima da unidade observado em pH 5,45.
3.4 Energias de singlete e a capacidade de gerao de oxignio singlete para as cumarinas estudadas
Para nenhuma das cumarinas estudadas foi detectada fosforescncia como rota de desativao do estado S1. Os espectros de emisso de fluorescncia a baixa temperatura para as cumarinas estudadas so apresentados na figura 64.
(a)
60
120
(b)
(396)
90
I
30
I 60
30
(460)
0 400 450 500 550
0 450 500 550 600
Comprimento de onda, nm (c)

90 120
Comprimento de onda, nm (d) (464)
(418)
90
60
I
30
I 60
30
0 400
450
500
550
0 450
500
550
600
Figura 64 Espectros de emisso de fluorescncia a 77 K em metilciclohexano para as cumarinas estudadas: (a) cumarina 1; (b) cumarina 2; (c) cumarina 3; (d) cumarina 3 desprotonada (soluo contendo 20 % de piridina).
A partir desses espectros, foram estimados os valores correspondentes energia de singlete e o rendimento quntico de fluorescncia a 77 K para cada cumarina. Os resultados so apresentados na tabela 14.
Tabela 14 Energias de singlete e rendimentos qunticos de fluorescncia para as trs cumarinas estudadas.
Cumarina 1 E(S1), kJ.mol-1 302,63 0,97 0,94 2 260,04 0,90 0,64 3 286,08 0,94 0,94 3 Ionizada 257,91 0,79 0,63
f f , 25C
H uma tendncia de aumento nos valores estimados para os rendimentos qunticos de fluorescncia, quando comparados aos resultados obtidos temperatura ambiente. No caso da cumarina 2, o aumento superior a 40 %. Essa diferena uma indicao de que a temperatura tem um efeito significativo sobre o estado de transferncia intramolecular de carga. Um aumento do rendimento quntico de fluorescncia tambm observado para a cumarina 3 desprotonada, podendo tambm estar relacionado ao efeito provocado pela temperatura sobre um possvel estado ICT excitado dessa espcie. No caso da cumarina 2, especificamente, foi avaliado o efeito da polaridade do solvente sobre a fotofsica a 77 K. Os espectros de emisso de fluorescncia so apresentados a seguir.
80
(472 nm)
(a)
80
(474 nm)
(b)
60
40
I
40
20
0 440
480
520
560
600
0
480 520 560 600
Figura 65 Espectros de emisso de fluorescncia a 77 K para a cumarina 2 em: (a) acetato de etila; (b) etanol 99,8 %.
As energias de singlete estimadas de 253,20 e 252,13 kJ.mol-1 para a cumarina 2 em acetato de etila e etanol, respectivamente, indicam que o aumento da polaridade do meio tende a diminuir a energia de singlete da espcie. Isso est de acordo com o esperado, considerando-se que a formao do estado ICT
Resultados e Discusso114 favorecida pelo aumento da polaridade do solvente [140]. Entretanto, o principal efeito da polaridade do meio est relacionado banda prxima a 510 nm para os dois espectros de emisso de fluorescncia obtidos. A princpio, essa banda sugere a coexistncia do estado ICT com o LE (excitao localizada). Contudo, uma anlise mais detalhada do sistema deve ser realizada, na tentativa de se elucidar melhor as caractersticas do mesmo. A ausncia de fosforescncia pode ainda estar relacionada estrutura dos estados excitados das cumarinas estudadas. Considerando-se uma natureza * para o estado S1, uma provvel seqncia para os nveis de energia das cumarinas 3n* < 3* < 1* < 1n*. Essa seqncia viabilizada pelos substituintes benzoxazol, na posio 3 do anel cumarnico, e do substituinte doador de eltrons na posio 7. Medidas da gerao de oxignio singlete a partir da excitao das cumarinas estudadas, na presena de oxignio, foram feitas de modo a verificar, indiretamente, a participao de estados triplete na fotofsica dos derivados de cumarina estudados. Curvas de decaimentos tpicas para a emisso do oxignio singlete a 1270 nm podem ser visualizadas na figura 66.
0,012
0,012
(a)
0,009
(b)
0,009
Volts
0,006
Volts
0,006 0,003
0 200 400 600
-6
0,003
0,000 800 1000
100
200
300
-6
400
Tempo, 10 s
Tempo, 10 s
Figura 66 - Decaimento do 1O2,, com emisso a 1270 nm, gerado por fotosensitizao pela: (a) cumarina 1; (b) cumarina 3.
Os resultados obtidos foram dispostos graficamente, em relao ao padro fenalenona (P).
12
12
(P )
9 9
(P )
(1 )
(3 ) (2 )
0 0 3 6 9
0 0 5 10 15 20 25
P o t n c ia , m J
P o t n c ia , m J
Figura 67 Curvas para a determinao da eficincia de gerao de oxignio singlete para as cumarinas. (P) fenalenona; (1) cumarina 1; (2) cumarina 2; (3) cumarina 3.
A partir dos grficos, foram determinadas as eficincias de gerao de oxignio singlete das trs cumarinas. Os resultados indicam uma eficincia de 15 % para a cumarina 1 e 6 % para as cumarinas 2 e 3. Esses resultados indicam que a presena de substituintes doadores de eltron na posio 7 do anel cumarnico deve dificultar ainda mais a ocorrncia de cruzamento entre sistemas. Em geral, a
Resultados e Discusso116 ocorrncia de cruzamento entre sistemas para aminocumarinas, por exmplo, tem sido apontada como sendo muito pequena [139]. Como o valor estimado para o rendimento quntico de fluorescncia em metilciclohexano a 77 K para a cumarina 1 no difere muito do valor estimado temperatura ambiente, possvel que o ISC possa ser favorecido em solventes mais polares como o caso do clorofrmio, onde os experimentos de fotosensitizao foram feitos. Outros solventes devero ser avaliados para uma concluso a respeito das caractersticas fotosensitizadoras dessa cumarina, e para uma melhor viso da sua fotofsica.
Concluses117
Concluses
A fotofsica dos trs derivados de cumarina estudados est relacionada
com um estado S1 de natureza ,*. A natureza ,* est relacionada, sobretudo, com o carter aceptor de eltrons do grupo benzoxazol na posio 3 do anel cumarnico. Os valores estimados para a absortividade molar para a cumarina 1 situam-se entre 14000 e 23000 mol-1dm3cm-1, para a cumarina 2 entre 41000 e 54000 mol-1dm3cm-1 e entre 21000 e 27000 mol-1dm3cm-1 para a cumarina 3. As principais singularidades so observadas para as cumarinas 2 e 3, sendo, sobretudo, relacionadas aos efeitos provocados pelos substituintes dietilamino e hidroxila, respectivamente. Os maiores valores para o coeficiente de extino molar so observados para a cumarina 2 e devem-se ocorrncia de transferncia intramolecular de carga. A protonao do substituinte dietilamino leva formao de uma nova espcie com coeficiente de extino molar igual a 34300 mol-1dm3cm-1, a pH 2, em metanol/gua (1:99 v/v). A transferncia intramolecular de carga inviabilizada pela protonao do grupo dietilamino. O pKa associado protonao est por volta de 2,36. A espcie gerada pela desprotonao do OH da cumarina 3 apresenta um coeficiente de extino molar de 40600 mol-1dm3cm-1, estimado em misturas metanol/gua (1:99 v/v) a pH 9,38. O pKa para a desprotonao do OH foi estimado como sendo 6,20 em mistura metanol/gua (99:1 v/v). A formao dessa espcie desprotonada d-se em solventes prticos, mas mais eficientemente em solventes bsicos. Esse parmetro fotofsico chega a 55000 mol-1dm3cm-1 em DMSO (solvente bsico), onde a espcie melhor estabilizada. Do mesmo modo que para a aminocumarina estudada, h a formao de um estado ICT para o estado excitado da cumarina 3 desprotonada, proveniente, nesse caso, da interao entre a carbonila gerada pela desprotonao do substituinte OH e o restante da molcula. O rendimento quntico de fluorescncia da espcie desprotonada menor que o da neutra em virtude da interao entre essa espcie aninica e contra-ons em soluo. H indcios da existncia de uma espcie catinica, resultado da protonao do grupo OH. No entanto, o pKa para o equilbrio no foi
Concluses118 avaliado. Os resultados sugerem que a protonao dessa cumarina favorecida no estado excitado. A simetria observada para os espectros de absoro e emisso de fluorescncia dessas molculas sugere que a geometria do estado excitado deve ser similar do estado fundamental. Avaliaes feitas por clculo ab initio confirmam isso. O nico resultado que se mostra singular a essa tendncia observado para a cumarina 3 em diisopropilamina. Nesse solvente, o espectro de absoro indica a presena da espcie neutra, enquanto que, o espectro de emisso de fluorescncia similar ao da espcie desprotonada, indicando que a desprotonao favorecida no estado excitado. Uma das possveis causas para esse comportamento refere-se ao fato de a diisopropilamina atuar como um fraco solvente nucleoflico, devido principalmente ao efeito estrico pronunciado pelos substituintes isopropil. Os resultados obtidos para os deslocamentos de Stokes para as trs cumarinas estudadas sugerem que os momentos de dipolo do estado excitado maior que o estado fundamental. Estimativas feitas com base na equao de Lippert mostram que o de pelo menos, 5,26 Debye para a cumarina 1 e 6,48 Debye para a cumarina 2. Para a cumarina 3 desprotonada, os resultados indicam uma diminuio do momento de dipolo com a excitao da molcula. Esse resultado confirmado por clculo terico. A variao do momento de dipolo maior para a aminocumarina, e est relacionada, sobretudo, com a formao do estado ICT. J para a espcie protonada dessa cumarina, o momento de dipolo do estado fundamental de 21,80 Debye, enquanto que no estado excitado, foi estimado como sendo igual a 21,86 Debye, utilizando clculo terico. Esse resultado sugere que a protonao do grupo dietilamino desfavorece a transferncia intramolecular de carga, mas se assemelha ao comportamento esperado para um estado TICT. Todos os trs derivados possuem elevados rendimentos qunticos de fluorescncia. Entretanto, a fotofsica desses compostos fortemente dependente da natureza do substituinte na posio 7 do anel cumarnico e do solvente utilizado. Tanto a polaridade, quanto a natureza prtica do solvente utilizado, interferem nos processos de desativao dos trs derivados. Esse efeito menos eficiente para a cumarina 1, em funo do fato de que para essa cumarina, as
Concluses119 interaes tipo ligao de hidrognio entre a cumarina e o solvente, so formadas somente entre o substituinte benzoxazol e o solvente. Para a cumarina 2, os resultados mostram que a interao do estado ICT excitado com solventes prticos, favorece parcialmente processos de desativao no-radiativos, ao contrrio do reportado para outras aminocumarinas. Uma estimativa da supresso da fluorescncia dessa aminocumarina em virtude da formao de ligao de hidrognio entre o estado ICT excitado e o solvente resultou em uma constante de supresso igual a 3,72 x 106 mol-1.dm3.s-1, indicando ser esse um processo de transferncia de carga. A fotofsica das cumarinas 2 e 3 desprotonada sofre um significativo efeito da temperatura. Os experimentos realizados a 77 K sugerem que o estado ICT excitado proposto para essas duas espcies dependente da temperatura. No foi detectada fosforescncia para nenhuma das cumarinas estudadas. Entretanto, a existncia de estados triplete povoados foi observada atravs de experimentos de gerao de oxignio singlete. A cumarina 1 apresenta um rendimento quntico de gerao de oxignio singlete de 15%, o que torna possvel suas propriedades como fotosensitizador. Para os demais derivados, os resultados indicam uma baixa eficincia de gerao de 1O2, em torno de 6 %.
Sugestes para trabalhos futuros120
Sugestes para trabalhos futuros
Avaliar a capacidade de gerao de oxignio singlete por parte da cumarina 1 em diferentes solventes, assim como parmetros cinticos relativos sua ao como fotosensitizador;
Avaliar a possibilidade da cumarina 2 atuar como sonda de fluorescncia para o estudo de microambientes; Avaliar o efeito da supresso da cumarina 2 frente presena de compostos capazes de realizar ligaes de hidrognio, de modo a esclarecer melhor os mecanismos envolvidos nos processos;
Estudar com detalhes, o processo de transferncia intramolecular de carga que ocorre na cumarina 2, elucidando o mecanismo; Avaliar de maneira mais aprofundada a fotofsica da cumarina 3 em termos do pH do meio, estudando detalhadamente as espcies presentes, realizando inclusive estudos com -ciclodextrina. A cavidade interna desse oligosacardeo tem uma excelente habilidade para incorporar molculas aromticas hidrofbicas em soluo aquosa, o que permite avaliar de modo mais detalhado a espectroscopia da molcula de interesse;
Estimar os parmetros fotofsicos da cumarina 3 protonada em misturas metanol/gua; Avaliar a possibilidade de ocorrncia de processos de transferncia intramolecular de prton no estado excitado para a cumarina 3, especialmente nos solventes de elevada polaridade;
Elucidar o papel do grupo benzoxazol, atravs de clculo terico, sobre as caractersticas observadas nos derivados estudados. Estudar a fotofsica das cumarinas a 77 K em outros solventes, avaliando o efeito da polaridade do meio, sobretudo para os sistemas que apresentam ICT;
Estudar o efeito da temperatura e da viscosidade do meio sobre as propriedades fotofsicas desses compostos.
Apndice121
Apndice
Tabela 15 Propriedades fsicas dos solventes utilizados.
Solvente Metilciclohexano (MCH) Tetracloreto de carbono (TCC) Tolueno 1,4-Dioxano (Diox) Diisopropilamina Clorofrmio (CHCl3) Acetato de etila (Ac.Etila) Tetrahidrofurano (THF) Dimetilsulfxido (DMSO) lcool BuOH) N,N-dimetilformamida (DMF) Etilenoglicol lcool PrOH) Propanona (acetona) lcool etlico (EtOH) Acetonitrila (ACN) lcool metlico (MeOH) 2-proplico (22-butlico (2-
Viscosidade a 25C, mPa.s 0,679 0,908 0,560 1,177 0,393 0,537 0,423 0,456 1,987 3,096 0,794 16,10 2,038 0,306 1,074 0,369 0,544
s
2,024 2,238 2,379 2,219 2,923 4,807 6,081 7,520 47,24 17,26 38,25 41,40 20,18 21,01 36,64 33,00 25,30
n a 25C 1,4220 1,4580 1,4965 1,4200 1,4429 1,4481 1,3802 1,3995 1,4791 1,3955 1,4282 1,4320 1,3764 1,3587 1,3615 1,3435 1,3170
Apndice122
Tabela 16 Dados solvatocrmicos dos solventes utilizados
Solvente Metilciclohexano Tetracloreto de carbono Tolueno 1,4-Dioxano Diisopropilamina Clorofrmio Acetato de etila Tetrahidrofurano Dimetilsulfxido lcool 2-butlico N,N-dimetilformamida Etilenoglicol lcool 2-proplico Propanona lcool etlico Acetonitrila lcool metlico gua
ET(30), kcal.mol-1
ETN
0,0002 0,0117 0,0133 0,0222 / 0,198 0,0714 0,1475 0,1979 0,2115 0,2633 0,2642 0,2759 0,2761 0,2770 0,2848 0,2985 0,3030 0,3066 0,3190
32,4 33,9 36,0 39,1 38,1 37,4 45,1 47,1 43,8 54,9 48,4 42,2 45,6 55,4 51,9 63,1
0,052 0,099 0,164 0,259 0,228 0,207 0,444 0,506 0,404 0,747 0,546 0,355 0,460 0,762 0,654 1,000
0,00 0,00 0,37 0,00 0,45 0,55 0,76 1,01 0,69 0,52 0,95 0,48 0,77 0,31 0,62 0,18
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,81 0,00 0,90 0,76 0,08 0,83 0,19 0,93 1,17
* o valor de f para o 1,4-dioxano assume dois valores, devido ao fato desse solvente possuir uma constante dieltrica dinmica, variando entre 5 e 7. Para uma constante de 7, o valor correspondente de f de 0,198.
Apndice/Espectros 123
0.18
0.12 0.10
0.15
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02
Intensidade
0.12 0.09 0.06 0.03 0.00
0.00 250 300 350 400 450 500 550 600
225
300
375
450
525
600
C1 em 2-BuOH (a=353 nm, e=445 nm).

0.21 0.18
C1 em MeOH (a=352 nm, e=440 nm).

0.10 0.08
intensidade
Intensidade
0.15 0.12 0.09 0.06 0.03 0.00 250 300 350 400 450 500 550 600
0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
C1 em ACN (a=352 nm, e=443 nm).

140 120
C1 em TCC (a=360 nm, e=444 nm).

0.10 0.08
Intensidade
Intensidade
100 80 60 40 20 0 300 375 450 525 600
0.06 0.04 0.02 300 375 450 525 600
C1 em Diox (a=357 nm, e=443 nm).

0.10
C1 em THF (a=354 nm, e=444 nm).

0.10
0.08
Intensidade
0.08
Intensidade
300 375 450 525 600
0.06 0.04 0.02 0.00
0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
C1 em DMF (a=352 nm, e=445 nm).

0.18 0.16 0.14 0.12 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 225 300 375 450 525 600
C1 em DMSO (a=354 nm, e=453 nm).

0.10 0.08
Intensidade
Intensidade
0.06 0.04 0.02 300 375 450 525 600
C1 em 2-PrOH (a=354 nm, e=444 nm).
C1 em tolueno (a=360 nm, e=445 nm) .
0.12 0.10
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 300 375 450 525 600
C1 em CHCl3 (a=356 nm, e=443 nm).

0.12 0.10
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 300 375 450 525 600
C1 em Ac. Etila (a=352 nm, e=443 nm).

0.12 0.10
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
C1 em acetona (a=352 nm, e=444 nm).
Os espectros de emisso foram obtidos com fendas de excitao e emisso de1,0 nm.
0.10 0.08
0.12 0.10
Intensidade
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 200 250 300 350 400 450 500 550 600
0.06 0.04 0.02 0.00 225
300
375
450
525
600
C2 em 2-ButOH (a=438 nm, e=487 nm)

200 150 100 50 0 225 300 375 450 525 600

0.12 0.10
Intensidade
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
Com prim ento de Onda, nm
C2 em ACN (a=438 nm, e=490 nm).

0.12 0.10
C2 em TCC (a=433 nm, e=479 nm).

0.12 0.10
Intensidade
0.08
Intensidade
300 350 400 450 500 550 600
0.06 0.04 0.02 0.00 250
0.08 0.06 0.04 0.02
0.00 300 375 450 525 600
C2 em Diox (a=428 nm, e=476 nm).

0.12 0.10

0.12 0.10
Intensidade
0.08
Intensidade
300 375 450 525 600
0.06 0.04 0.02 0.00
0.08 0.06 0.04 0.02
0.00 375 450 525 600
C2 em DMF (a=441 nm, e=493 nm).

0.12 0.10
C2 em tolueno (a=434 nm, e=479 nm).

0,12 0,10
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 200
Intensidade
250 300 350 400 450 500 550 600
0,08 0,06 0,04 0,02 0,00 375 450 525 600
C2 em 2-PropOH (a=438 nm, e=488 nm).
C2 em CHCl3 (a=440 nm, e=480 nm).
0.12 0.10
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 375 450 525 600

0.12 0.10
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 375 450 525 600

0.12 0.10
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 375 450 525 600
C2 em diisopropilamina (a=426 nm, e=474 nm).
0.12
0.12
0.10
0.10
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 225 300 375 450 525 600
C3 em 2-BuOH(a=380 nm, e=451 nm)..

0.12 0.10

0.12 0.10
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
C3 em ACN (a=374 nm, e=443 nm).

0.12 0.10
C3 em TCC (a=382 nm, e=457 nm).

0.10 0.08
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
Intensidade
0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
C3 em Diox(a=374 nm, e=450 nm).

0.12 0.10

0.10
Intensidade
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 300
375
450
525
600
C3 em DMF (a=466 nm, e=485 nm).

0.12 0.10
C3 em tolueno (a=382 nm, e=456 nm).

0.10 0.08
Intensidade
0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 225 300 375 450 525 600
Intensidade
0.06 0.04 0.02 0.00 375 450 525 600
C3 em 2-PrOH (a=382 nm, e=450 nm).
C3 em CHCl3 (a=382 nm, e=448 nm).
0.10 0.08
Intensidade
0.06 0.04 0.02 0.00 375 450 525 600

0.10 0.08
Intensidade
0.06 0.04 0.02 0.00 300 375 450 525 600

0.10 0.08
Intensidade
0.06 0.04 0.02 0.00 300
375
450
525
600
C3 em diisopropilamina (a=384 nm, e=469 nm).
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Produo Bibliogrfica (2000-2001)141
Produo Bibliogrfica (2000-2001)
8.1
Trabalhos em Eventos
1. MACHADO, A.E.H., GUILARDI, S., FRANCA, E.F., MIRANDA, J.A. Previso de Propriedades Espectroscpicas do Composto 3-benzoxazol-2-ilcromen-2-ona, Empregando Clculo Semi-emprico. In: XV SIMPSIO BRASILEIRO DE QUMICA TERICA, 2001, Caxambu. Livro de Resumos do Simpsio Brasileiro de Qumica Terica. 2001. 2. MACHADO, A.E.H., DUARTE, E.T.F.M., ALBUQUERQUE, Y.D.T., FERREIRA, L.F., MIRANDA, J.A., RUGGIERO, R., SATTLER, C., OLIVEIRA, L., Estudo da Degradao do Efluente de Uma Indstria de Papel e Celulose, Induzida Por Fotocatlise Mediada Por Dixido de Titnio. In: 1 ENCONTRO SOBRE APLICAES AMBIENTAIS DE PROCESSOS OXIDATIVOS AVANADOS, 2001, guas de So Pedro, Livro de Resumos do 1 Encontro Sobre Aplicaes Ambientais de Processos Oxidativos Avanados. 2001. V. nico. 3. CRISTVAN, F.H., MACHADO, A.E.H., MIRANDA, J.A., VELANI, V. Efeito do Ambiente Micelar Sobre a Fluorescncia da Ftalocianina de Zinco. In: XIII ENCONTRO REGIONAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE QUMICA, 2000, Araraquara. Livro de Resumos do XIV Encontro Regional da Sociedade Brasileira de Qumica. 2001. V.nico 4. MIRANDA, J.A., MACHADO, A.E.H. Avaliao das Propriedades Fotofsicas de um Derivado de Cumarina. In: XXIV REUNIO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE QUMICA, 2001, Poos de Caldas. Livro de Resumos da XXIV Reunio Anual da Sociedade Brasileira de Qumica. 2001. V.nico. p. FT001.
Produo Bibliogrfica (2000-2001)142 5. MIRANDA, J.A., MACHADO, A.E.H. Charge-transfer effects on the photophysical 2001, of 3-benzoxazol-2-il-7-diethylamino-chromen-2-one. Crdoba, Argentina. Twelfth In: TWELFTH INTER-AMERICAN PHOTOCHEMICAL CONFERENCE, Ascochinga, Inter-American Photochemical. 2001. V.nico. 6. MIRANDA, J.A., MACHADO, A.E.H., CRISTVAN, F.H. Eficincia da FtZn Como Mediadora em Reaes do Tipo II em suspenses Contendo Clulas Tumorais: Medida da Atividade Fotodinmica. In: XXIV REUNIO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE QUMICA, 2001, Poos de Caldas. Livro de Resumos da XXIV Reunio Anual da Sociedade Brasileira de Qumica. 2001. V.nico. p. FT002. 7. MIRANDA J.A., MACHADO, A.E.H., BARTASSON, M.C., OLIVEIRACAMPOS, A.M.F., OLIVEIRA, A.M.A.G. A Photophysical/Quantum Mechanical Comparative Study of Some Properties of 3-benzoxazol-2-il-7hydroxy-cromen-2-one. In: PHOTOPHYSICS AND PHOTOCHEMISTRY 2000, Costa do Estoril, Portugal. Photophysics and Photochemistry 2000.
2000. V.nico. p. 93.
8. MIRANDA J.A., MACHADO, A.E.H., OLIVEIRA, C.A., OLIVEIRA NETO, A.D., LOOSE, A. Avaliao Citotxica da Ftalocianina de Zinco e Comparao de sua Ao Fotodinmica com a do Azul de Metileno. In: XXIII REUNIO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE QUMICA, , 2000, Poos de Caldas. Livro de Resumos da XXIII Reunio Anual da Sociedade Brasileira de Qumica. 2000. V.3. p. MD29. 9. MIRANDA J.A., MACHADO, A.E.H., OLIVEIRA, C.A., OLIVEIRA NETO, A.D., FURTADO, S.T.F., STEIN, C.G., OLIVEIRA, O.V. Comportamento de Dois Corantes Alimentcios Quando Expostos a Clulas de um Tumor Asctico. In: XIV ENCONTRO REGIONAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE QUMICA, 2000, Uberlndia. Livro de Resumos do XIV Encontro Regional da Sociedade Brasileira de Qumica. 2000. V.nico.
Produo Bibliogrfica (2000-2001)143 10. MIRANDA, J.A., MACHADO, A.E.H., OLIVEIRA-CAMPOS, A.M.F., OLIVEIRA, A.M.A.G., SEVERINO, D., NICODEM, D.E. Determinao da eficincia Quntica de Gerao de Oxignio Singlete de Cumarinas. In: XIV ENCONTRO REGIONAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE QUMICA, 2000, Uberlndia. Livro de Resumos do XIV Encontro Regional da Sociedade Brasileira de Qumica. 2000. V.nico. 11. MIRANDA, J.A., MACHADO, A.E.H., OLIVEIRA-CAMPOS, A.M.F., OLIVEIRA, A.M.A.G., RAPOSO, M., SEVERINO, D., NICODEM, D.E. Fotofsica de Anlogos de Psoralenos: Medida da Capacidade de Gerao de Oxignio Singlete. In: XIV ENCONTRO REGIONAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE QUMICA, 2000, Uberlndia. Livro de Resumos do XIV Encontro Regional da Sociedade Brasileira de Qumica. 2000. V.nico.
8.2
Artigos Publicados em Peridicos
1. MACHADO, A.E.H., MIRANDA, J.A. Photophysical/Quantum Mechanical Characterization of the Compound 3-benzoxazol-2-il-7-hydroxy-cromen-2one. J. Photochem. Photobiol. 2001, 141(A), 109. 2. MACHADO, A.E.H., MIRANDA, J.A, SEVERINO, D., NICODEM, D.E., OLIVEIRA-CAMPOS, A.M.F. Photophysical Properties of Two New Psoralen Analogues. J. Photochem. Photobiol. 2001, 146(A), 72. 3. MIRANDA, J.A., MACHADO, A.E.H., OLIVEIRA, C.A. Comparison of The Photodynamic Action of Methylene Blue and Zinc Phthalocyanine on TG-180 Tumoral Cells. J. Porphyrins and Phthalocyanines. 2001. (no prelo)
Produo Bibliogrfica (2000-2001)144

8.3 Artigos em Redao
1. MACHADO, A.E.H., MIRANDA, J.A., MATOS, M.S. Spectral Properties of The Compound 3-benzoxazol-2-il-7-diethylamine-cromen-2-one. 2. MACHADO, A.E.H., MIRANDA, J.A., GUILARDI, S., NICODEM, D.E., SEVERINO, D. Structure and Photophysics of The Compound 3-benzoxazol2-il -cromen-2-one. 3. MACHADO, A.E.H., ALBUQUERQUE, Y.D.T., MIRANDA, J.A.,
RUGGIERO, R., SATTLER, C., OLIVEIRA, L., MELO, E.I., VELANI, V. Development of Technologies For Water Detoxification Using Photocatalysis and Solar Energy: I. Detoxification of The Effluent From a Celulose and Paper Industry.

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLNDIA INSTITUTO DE QUMICA PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM QUMICA

CARACTERIZAO FOTOFSICA DE DERIVADOS DE CUMARINAS

Jacques Antonio de Miranda

Orientador: Prof. Dr. Antonio Eduardo da Hora Machado

Para que s os que tm responsabilidade de entender que entendam disse

Dedico este trabalho minha famlia

ndice das Tabelas

ndice de Termos Adotados

Figura 1 - Cumarina e cromona.

Figura 2 Rota biosinttica da cumarina.

Figura 3 Formas cis e trans do cido cinmico.

Figura 4 Estruturas cis e trans glicosiladas.

Figura 5 - Umbeliferona, a 7-hidroxicumarina.

Umbeliferona, esculetina e scopoletina so as cumarinas mais comuns na natureza.

Figura 6 Cumarinas comumente encontradas na natureza.

Figura 7 Cumarina e compostos similares.

Cumarinas como agentes anticncer

Atividade mutagnica de cumarinas

Introduo-As cumarinas 7 1.1.3 Atividade anti-HIV de cumarinas

Figura 8 Cumarinas isoladas da Calophyllum Linn. Inophyllum.

Me O Pr (I) R = OH; R 1 = H (II) R = H; R 1 = OH

Figura 9 Cumarinas isoladas da Calophyllum lanigerum.

Atividade das cumarinas sobre o sangue e seus componentes

Me Me2C=CHCHCH2C=CH2O R OMe I, R = H II, R=OAc O O

Figura 11 Cumarina isolada da Peucedanum japonicium.

Interaes de cumarinas com espcies ativas de oxignio

4-hidroxicumarina 7-hidroxicumarina 7-metilcumarina 7-metoxicumarina 7-hidroxi-4metilcumarina 7-metoxi-4metilcumarina 7,8-dihidroxi-6metoxicumarina 6,7-dihidroxicumarina

2,3 3,1 U/mL

5,8 33,9 82,0 10,6 8,5 11,1 U/mL

Superxido (70 U/mL)

(-) no testados; * Referncia

Cumarinas em sistemas de laser de corante

CH3 cumarina 4 H5C2HN H3C CH3 cumarina 2 ou 450 (H5C2)2N O O (H C ) N 5 2 2 O O (H C ) N 5 2 2

CH3 cumarina 120 ou 440 O O (H C ) N 5 2 2

N CF3 cumarina 152A, 481 ou 35 CH3

C cumarina 47 ou 460 O cumarina 334 ou 521

Figura 12 Algumas cumarinas comumente utilizadas em laseres de corante [47].

Cumarinas como sondas de fluorescncia

Figura 14 Dendrmero contendo vrios substituintes constitudos de cumarinas [50].

O O OMe (a) O O O OMe O O

(b) Figura 16 Exemplos de psoralenos utilizados em fotoquimioterapia [68].

Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 16

Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico.

Espectroscopia no Visvel e UV-prximo.

1.2.1.1 A Lei da Absoro.

Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 17

o termo absorvncia neperiana definido como,

Assim, a equao 03, ento, pode ser escrita como:

Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 18

~ onde n o ndice de refrao do solvente e d a diferencial do nmero de onda.

Fotofsica Molecular: Diagrama de Jablonski e Princpio de FranckCondon.

(e, v, r ) = E(e )N(v, r )

(e, v, r ) = E (e)N (v, r )

refere-se ao emsimo estado vibracional do estado eletrnico l, enquanto a equao

(e,v, r ) = E (e)N (v, r )

4' 3' (a) S0 0' 1'

4' 3' (b) S0

Todas estas observaes fazem parte do princpio de Franck-Condon.

Deslocamento de Stokes e o efeito dos solventes

1.2.3.1 Efeitos do solvente no espectro de absoro

Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 24

Tipo de transio ,* ,* ,* ,* ,* ,* ,* n,* n,* n,* n,* ,*

Teoria do efeito do solvente sobre o espectro de absoro no UV-Visvel.

Introduo-Aspectos Tericos Para Um Estudo Fotofsico e Fotoqumico. 27