Crecimiento de biomasa probitica en sustratos naturales

M. en C. Romn Jimnez Vera M. en C. Nicols Gonzlez Corts M. A. E. S. Arturo Magaa Contreras Est. IA. Cristina Leonor Chab Garca Est. IA. Zabdy Kristel Zetina Moreno Resumen Los probiticos son usados en una gran variedad de productos, su efecto benfico en salud humana y animal, as como en la inocuidad alimentaria est confirmado. Hay una gran variedad de sustratos agroindustriales no diversificados, con usos muy tradicionales. En este trabajo se evalu el crecimiento de Lactobacillus casei Shirota (LcS) y Lactobacillus jonhsonii (La1) en jugo de caa de azcar, agua de coco, jugo de naranja, suero de queso. Se incubaron a 37 C durante 24 h, sin agitacin. Las bacterias probiticas se aislaron de productos lcteos fermentados comerciales: Yakult y Chamyto. La concentracin microbiana se cuantific en agar MRS a 37 durante 48 h en anaerobiosis. Los sustratos donde hubo mayor crecimiento C de ambos probiticos fueron suero de queso y jugo de naranja. La mayor concentracin (Log 9.39 UFC/mL) se obtuvo con La1 en jugo de naranja a las seis horas de cultivo. La produccin de biomasa a partir de sustratos naturales es una alternativa para el aprovechamiento de recursos naturales, ya que se contribuye a la diversificacin y se proporciona valor agregado a los recursos agroindustriales de la regin. Introduccin Los probiticos son usados en una gran variedad de productos, incluyendo farmacuticos, alimentos para humanos y animales, as tambin como promotores de la salud y la inocuidad alimentaria. Aunque el empleo de los probiticos es muy diverso, solamente existen medios comerciales de cultivo orientados a su aislamiento e identificacin, como MRS, Rogosa y LAMVAB para lactobacilos; as como NPNL, Berens y MW para bifidobacterias. Son escasos los estudios sobre el aprovechamiento de fuentes naturales para la obtencin de biomasa bacteriana. Las fuentes naturales slo han sido aprovechadas en la formulacin de medios para el aislamiento de hongos; Urcia & Guevara (2002) reportaron el uso de medios naturales como

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pltano, avena, leche y jugo V8 para el crecimiento e identificacin de hongos de inters mdico y evaluaron el uso de diferentes variedades de papa en el cultivo de Trichophyton rubrum. Barrera et al (2002) emplearon tomate en la formulacin del medio para el aislamiento de Helminthosporiun solani. Por otra parte, hay fuentes naturales como la caa de azcar, que tradicionalmente se ha empleado para la extraccin de sacarosa. Esta fuente es abundante y disponible en la regin, representando un sustrato de fcil obtencin y a bajo costo en la produccin de biomasa probitica. El jugo de caa de azcar contiene sacarosa que puede ser una buena fuente de carbono para el crecimiento de bacterias probiticas. De igual manera, el jugo de naranja es otro sustrato que hasta ahora, se ha comercializado congelado, principalmente. Tambin hay fuentes naturales como el suero de queso y el agua de coco, que constituyen desechos contaminantes de la elaboracin de quesos y la extraccin de aceite. Estas fuentes son abundantes y disponibles en la regin, lo que proporciona un sustrato de fcil obtencin y a bajo costo en la produccin de biomasa probitica; adems, su uso dara valor agregado a los desechos y se contribuira a disminuir la contaminacin provocada por el suero de queso y el agua de coco. Objetivos y Metas Objetivo. Evaluar el crecimiento de bacterias probiticas en sustratos agroindustriales en cultivo sumergido por lote. Metas. Obtener biomasa probitica empleando sustratos agroindustriales como medios de cultivo en sistema por lote. Materiales y mtodos Se utiliz jugo de caa de azcar obtenido por molienda en trapiche, jugo de naranja dulce, agua de coco y suero de queso fresco. Todos los sustratos se mantuvieron en refrigeracin hasta el momento de ser utilizado. Las cepas probiticas se obtuvieron de productos comerciales: Lactobacillus casei Shirota (Yakult) y Lactobacillus jonhsonii (Chamyto). Se aislaron utilizando agar MRS incubado a 37 durante 48 h en bolsa anaerobia (Rosenblatt & C Stewart, 1975). Para su propagacin se utiliz caldo MRS incubado a 37 durante 24 h. El C

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cultivo se realiz en frascos de fermentacin de 250 ml. Se incub a 37 sin agitacin, para C, evitar la aireacin, debido a que son microorganismos microaeroflicos. La respuesta a evaluar fue la concentracin bacteriana (UFC/mL). El crecimiento bacteriano se cuantific por el mtodo de cultivo en superficie modificado (Corona & Jimnez, 2004) utilizando agar MRS incubado a 37 durante 48 h en anaerobiosis. C Resultados La Figura 1 muestra el crecimiento de Lactobacillus casei Shirota en sustratos naturales. El suero de queso obtuvo la mayor concentracin durante las 24 h de cultivo, seguido del jugo de naranja. Probablemente, este crecimiento pudo estar asociado a la concentracin de protenas presentes en el suero, ya que tanto el jugo de caa, como el jugo de naranja y el agua de coco, contienen concentraciones muy bajas de protenas. Lo anterior sugiere evaluar la adicin de fuentes proteicas para mejorar el crecimiento bacteriano.

10 Concentracin (Log UFC/mL)

2 0 3 6 Tiempo (h)
Agua de Coco Jugo de Caa Jugo de Naranja Suero de Queso

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Figura 1. Crecimiento de Lactobacillus casei Shirota en sustratos naturales.

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La Figura 2 muestra el crecimiento de Lactobacillus jonhsonii. La mayor concentracin se present en jugo de naranja, seguido por suero de queso. En agua de coco, el mayor crecimiento se present a las tres horas, sin embargo a partir de este tiempo, la concentracin disminuy hasta ser el sustrato con menor crecimiento de probitico.
10

Concentracin (Log UFC/mL)

2 0 3 6 Tiempo (h) Agua de Coco Jugo de Caa Jugo de Naranja Suero de Queso 9 24

Figura 2. Crecimiento de Lactobacillus jonhsonii en sustratos agroindustriales. Discusin Los microorganismos hetertrofos utilizan como fuente de carbono muchas molculas orgnicas diferentes; sin embargo, la glucosa es una de las fuentes comnmente utilizadas (Ingraham & Ingraham, 1998). La grfica de crecimiento de LcS muestra un rpido aprovechamiento de la sacarosa presentes en la caa, para finalmente, agotarse el sustrato y disminuir el crecimiento. Esto demuestra que, adems de la glucosa, las bacterias lcticas pueden utilizar otros carbohidratos como fuente de carbono, en este caso, la sacarosa del jugo de caa.

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Aunque se obtuvo buen crecimiento de ambos probiticos en suero de queso y jugo de naranja, los valores obtenidos se encuentran por debajo de los valores obtenidos con un medio de cultivo comercial, como MRS, lo que sugiere la adicin de alguna fuente proteica para mejorar el crecimiento de este tipo de microorganismos con exigencia de nutrientes especiales para su cultivo. La mayor concentracin de probitico se obtuvo a las seis h de cultivo, lo que demuestra que los tiempos de recuperacin de biomasa probitica son cortos y su cultivo puede resultar ventajoso ya que al disminuir el tiempo de incubacin se reducen costos de funcionamiento del fermentador. El jugo de naranja y suero de queso constituyes sustratos adecuados para el crecimiento de biomasa probitica. En jugo de caa y agua de coco se sugiere la evaluacin de sustancias que complementen el metabolismo de lactobacilos para mejorar su crecimiento. Estos resultados contribuirn a diversificar el uso de sustratos naturales como sustrato para la produccin de biomasa a bajo costo. Conclusiones La obtencin de biomasa probitica es posible utilizando sustratos agroindustriales. Los sustratos con mayor potencial para la produccin de biomasa fueron el suero de queso y el jugo de naranja. El menor tiempo de incubacin en el cual se obtuvo la mayor concentracin de probiticos fue de seis horas. La produccin de biomasa diversificar el uso de recursos agrcolas. Referencias Barrera S, Salas C y Ciampi L (2002) Aislamiento y esporulacin de Helminthosporiun solani DUR & MONT. En XII Congreso Nacional de Fitopatologa. Puerto Varas X Regin. Chile. p 34. Corona A. & Jimnez R (2004) Comparacin de dos mtodos de siembra para el recuento de microorganismos en muestras con alta concentracin microbiana. Revista de la Facultad de Ingeniera Qumica. (40):3-7

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Ingraham & Ingraham, 1998. Introduccin a la Microbiologa. Ed. Revert. Zaragoza, Espaa. Vol. 1 y 2. p 210. Rosenblatt J & Stewards P (1975) Anaerobic bag culture method. Journal of Clinical Microbiology. 1(6):527:530. Urcia F y Guevara M (2002) Eficacia de medios de cultivo con infusiones de variedades de papa en la identificacin del Trichophyton rubrum. Rev Peru Med Exp Salud Pblica. 19 (4):206-208.

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